泰瑞米特钠在制备治疗自身免疫病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有低肝脏毒性的来氟米特活性代谢物钠盐一泰瑞米特钠在制 备治疗自身免疫病药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 来氟米特（leflunomide，LEF)是一种小分子免疫抑制剂，该产品于1999年获得国 家食品药品监督管理局批准上市，适应症为成人类风湿关节炎。来氟米特的疗效稳定，但是 该药的起效时间相对较慢，个体差异性较大；在临床应用过程中，特别是与甲氨蝶呤联合使 用时，胃肠道反应、肝功能异常、脱发等药物不良反应较为常见。其中，肝脏毒性是制约来氟 米特临床应用最重要的原因。
[0003] 泰瑞米特（Teriflunomide，TER)是Sanofi-Aventis公司研制的产品。该产品于 2012年获FDA批准上市。泰瑞米特钠是来氟米特（Leflunomide)的有效活性成分，其药理作 用包括：抑制嘧啶的从头合成途径；抑制酪氨酸激酶的活性，阻断细胞炎症信号传导过程； 抑制NF-κB的活化及所调控基因的表达，如IL-1、TNF-α的表达；抑制淋巴细胞增殖及抗 体产生；抑制细胞黏附分子的表达及外周血单核细胞的跨内皮游走；抑制树突细胞（DC)的 功能；抑制病毒复制等。目前泰瑞米特于2012年获FDA批准上市，临床适应症为多发性硬 化症，尚没有泰瑞米特钠用于治疗系统性红斑狼疮等自身免疫病的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种泰瑞米特钠的新用途。
[0005] 本发明的第一方面，提供一种泰瑞米特钠的应用，用于制备预防和/或治疗自身 免疫病的药物。
[0006] 在另一优选例中，所述自身免疫疾病为系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病 关节炎或多发性硬化症。
[0007] 在另一优选例中，所述自身免疫疾病为系统性红斑狼疮。
[0008] 在另一优选例中，所述泰瑞米特钠或所述药物通过口服或非经肠道给予对象。
[0009] 在另一优选例中，所述泰瑞米特钠或所述药物给予对象1-3次/天，10-100mg/天。 [0010] 在另一优选例中，所述药物的制剂形式为片剂、胶囊、丸剂、锭剂、颗粒剂、微颗粒 剂、悬浮液、粉末、糖锭、酏剂、注射剂、液剂、油膏剂、栓剂或贴膏剂。
[0011] 在另一优选例中，所述药物的制剂形式为片剂、胶囊、丸剂、锭剂、悬浮液、粉末、糖 锭或酏剂。
[0012] 在另一优选例中，所述泰瑞米特钠的给药剂量在不超过200mg/d的情况下，在人 体不会产生肝脏毒性或仅产生较低的肝脏毒性，所述产生较低的肝脏毒性是指肝转氨酶 (ALT和/或AST)升高不超过正常值上限的1. 5倍。
[0013]药物的肝脏毒性是指药物作用于肝脏细胞，若引起肝脏细胞损伤，临床可以观察 到肝功能异常一转氨酶升高超过正常值上限。较低的肝脏毒性是指ALT和/或AST升高不 超过正常值上限的1. 5倍；低肝毒性（轻度肝功能异常）：ALT和/或AST升高不超过正常 值上限2倍；中度肝毒性（中度肝功能异常）：ALT和/或AST升高不超过正常值上限2-3 倍；高度肝毒性（重度肝功能异常）：ALT和/或AST升高不超过正常值上限3倍。
[0014] 本发明的第二方面，提供一种药物组合物的用途，所述药物组合物包含泰瑞米特 钠和药学上可接受的载体，用于预防和/或治疗自身免疫病的药物。
[0015] 在另一优选例中，所述自身免疫疾病为系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病 关节炎或多发性硬化症。
[0016] 在另一优选例中，所述药物组合物通过口服或非经肠道给予对象；和/或
[0017] 所述药物组合物给予对象1-3次/天，10-100mg泰瑞米特钠/天。
[0018] 在另一优选例中，所述药物组合物的制剂形式为片剂、胶囊、丸剂、锭剂、颗粒剂、 微颗粒剂、悬浮液、粉末、糖锭、酏剂、注射剂、液剂、油膏剂、栓剂或贴膏剂。
[0019] 在另一优选例中，所述药物组合物的制剂形式为片剂、胶囊、丸剂、锭剂、悬浮液、 粉末、糖锭或酏剂。
[0020] 泰瑞米特钠对人原代肝细胞活性没有抑制作用，对人原代肝细胞线粒体的损伤作 用低于来氟米特；与来氟米特和泰瑞米特相比，泰瑞米特钠在药物浓度>300μΜ时导致的 LDH释放不会随着药物浓度的增加而增加。相同剂量泰瑞米特钠在哺乳动物体内导致肝转 氨酶升高的风险亦低于来氟米特。因此，泰瑞米特钠在人体内的应用剂量范围高于来氟米 特，与来氟米特相比，泰瑞米特钠的起效剂量低，耐受剂量更高。根据体外研究结果推测，泰 瑞米特钠在人体不产生肝脏毒性或低肝脏毒性的最大剂量约为200mg/d，而来氟米特目前 临床报道的人体最大耐受剂量为40-60mg/d。
[0021] 泰瑞米特钠为水溶性物质，比来氟米特吸收更快，与相同剂量的来氟米特相比，生 物利用度高，其体内暴露量大，因此服用较少剂量泰瑞米特钠就能达到来氟米特相同的治 疗效果；此外，泰瑞米特钠为活性成分，无需肝肠的代谢而直接被吸收利用，个体差异小，避 免了首过效应和体内代谢过程。
[0022] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0023] 图1为人肝细胞毒性（MTT实验）结果图，其中，胺碘酮IC5。= 7. 837μM，来氟米 特IC5。= 769. 6μΜ，泰瑞米特IC5。=ΝΑ，泰瑞米特钠IC5。=ΝΑ，"ΝΑ"表示无法计算。
[0024] 图2为人肝细胞线粒体损伤检测结果图。
[0025] 图3为人肝细胞LDH释放检测结果图。
[0026] 图4为泰瑞米特钠口服干预治疗对MRL/lpr小鼠体重的影响作用图，10-11周龄雌 性MRL/lpr小鼠，口服治疗8周，观察小鼠体重变化情况，每周称重一次。各组小鼠给药过 程体重变化情况比较。
[0027] *，Ρ〈0· 05 ;**，Ρ〈0· 01 ;***，Ρ〈0· 005,与空白对照组比较。
[0028] 图5为泰瑞米特钠口服给药能显著地降低MRL/lpr小鼠蛋白尿水平结果图，其中 (A)为各组小鼠治疗过程蛋白尿水平变化；(B)为治疗过程中泰瑞米特钠三个剂量组与模 型对照组蛋白尿水平变化；（C)为泰瑞米特钠30mg/kg剂量组与来氟米特30mg/kg剂量组 终点蛋白尿检测；(D)为治疗第4、8周各组严重蛋白尿症小鼠比例。
[0029] *，Ρ〈0· 05 ;**，Ρ〈0· 01 ;***，Ρ〈0· 001，与空白对照组比较。
[0030] 图6为泰瑞米特钠口服给药减轻MRL/lpr小鼠皮肤损伤结果图，给药8周，各组小 鼠皮肤损伤情况评分。**，P〈〇. 01，与空白对照组比较。
[0031] 图7为泰瑞米特钠口服给药缓解MRL/lpr小鼠淋巴器官肿大结果图，其中A为各 组小鼠淋巴结肿大评分，B为淋巴结称重，C为各组小鼠脾脏重量，D为各组小鼠外周淋巴结 拍照。
[0032] *，Ρ〈0· 05 ;**，Ρ〈0· 01 ;***，Ρ〈0· 001，与空白对照组比较。
[0033] 图8为泰瑞米特钠口服给药降低MRL/lpr小鼠血清中抗dsDNA抗体和IL-17水平 结果图。*，Ρ〈0·05 ;**，Ρ〈0·01 ;***，Ρ〈0·001，与空白对照组比较。
[0034] 图9为泰瑞米特钠对ConA诱导的细胞因子生成的影响结果图。泰瑞米特钠对ConA 诱导小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ(A)，IL-17(C)，IL-6(E)的抑制作用；来氟米特对ConA 诱导小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ(B)，IL-17(D)，IL-6(F)的抑制作用，试验结果以均值 土标准差表示。*，P〈〇. 05 ;#，P〈0. 01 ;*#，P〈0. 001，与刺激对照相比较。
[0035] 图10为泰瑞米特钠抑制PBMC混合淋巴细胞反应结果图。MLR反应5天。刺激细 胞（Stimulatorcell):经过γ射线照射异源的人PBMC，本试验将三位正常人PBMC细胞按 照1 :1 :1比例混合，经Y射线照射后，作为刺激细胞；反应细胞（RespondingCell):正常 人PBMC。（A)、（C)、（E)泰瑞米特钠抑制混合淋巴细胞反应；(B)、（D)、（F)来氟米特抑制混 合淋巴细胞反应。试验结果以均数土标准差表示。*，P〈〇. 05 ;**，P〈0. 01 ;***，P〈0. 001， 与刺激对照组比较。
[0036] 图11为泰瑞米特钠、来氟米特抑制植物血凝素（PHA)诱导PBMC增殖结果图。（A)、 (C)、（E)泰瑞米特钠抑制PHA诱导的PBMC增殖；(B)、（D)、（F)来氟米特抑制PHA诱导的 PBMC增殖。试验结果以均数土标准差表示。*，P〈0. 05 ;#，P〈0. 01 ;*#，P〈0. 001，与刺激 对照组比较。
[0037] 图12为泰瑞米特钠、来氟米特抑制PHA(植物血凝素）诱导PBMC分泌IFN-γ结 果图。（A)、（C)、（E)泰瑞米特钠抑制PHA诱导PBMC分泌IFN-γ，（B)、（D)、（F)来氟米特 抑制PHA诱导PBMC分泌IFN-γ。试验结果以均数土标准差表示。*，P〈0. 05 ;#，P〈0. 01 ; ***，Ρ〈0· 001，与刺激对照组比较。
【具体实施方式】
[0038] 本申请的发明人经过广泛而深入地研究，首次意外发现泰瑞米特钠的新应用，用 于制备预防和/或治疗自身免疫病的药物，通过口服或非经肠道给予对象，用于自身免疫 病治疗的剂量最高为l〇〇mg/天。与来氟米特相比，泰瑞米特钠的起效剂量低，耐受剂量更 高，泰瑞米特钠在人体不产生肝脏毒性或低肝脏毒性的最大剂量约为200mg/d。在此基础 上，完成了本发明。
[0039] 泰瑞米特钠
[0040] 泰瑞米特钠是来氟米特体内活性代谢物泰瑞米特的钠盐。本试验所使用的泰瑞 米特钠样品通过来氟米特水解开环、酸化，成盐制得泰瑞米特钠粗品，在经精制得到纯度 彡99. 5 %的泰瑞米特钠纯品。
[0041]泰瑞米特钠的化学反应路线如下：
[0042]
[0044] 实验表明，泰瑞米特钠与来氟米特或泰瑞米特相比具有最小肝脏毒性，具体表现 为：泰瑞米特钠对人原代肝细胞活性没有抑制作用，对人原代肝细胞线粒体的损伤作用低 于来氟米特；与来氟米特和泰瑞米特相比，泰瑞米特钠在药物浓度>300μΜ时导致的LDH释 放不会随着药物浓度的增