Dysidavarone A在制备治疗急性痛风药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物DysidavaroneA的新用途，尤其涉及DysidavaroneA在制备 治疗急性痛风药物中的应用。
【背景技术】
[0002]痛风（gouty)，又称痛风性关节炎（goutyarthritis)，是体内噪呤代谢紊乱所致 的疾病，表现为血中尿酸过多，易于使尿酸盐（MSU)在关节等组织析出结晶。痛风的急性发 作是由于沉积在关节的MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎性反应。
[0003] 本发明涉及的化合物DysidavaroneA是一个2013年发表（BjornSchmalzbauer， etal.,TotalSynthesisandAntibacterialActivityofDysidavaroneA.,Organic Letters，2013, 15(4) :964 - 967.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用 途仅仅涉及抗菌，(BjornSchmalzbauer，etal. ,TotalSynthesisandAntibacterial ActivityofDysidavaroneA.，OrganicLetters，2013, 15 (4) :964 - 967·)，本发明涉及的 DysidavaroneA在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开。
【发明内容】
[0004] 本发明用MSU致人血管内皮细胞（HUVEC)损伤的急性痛风模型评价显示，对MSU 致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，可用于制备治疗急性痛风炎症药物。本 发明的目的在于提供DysidavaroneA在医学中的新用途，具体地说是涉及DysidavaroneA 在制备治疗急性痛风药物中的应用。
[0005] 本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的：
[0006] 本发明提出DysidavaroneA在制备治疗急性痛风药物中的应用。从药理实验看 出，DysidavaroneA有较好的治疗急性痛风的作用。由于本发明首次公开DysidavaroneA 在治疗急性痛风方面的药理作用。
[0007] 所述化合物DysidavaroneA结构如式（I)所示：
[0008]
[0009] 所述DysidavaroneA在治疗急性痛风药物中的应用，DysidavaroneA对ICAM-1 的表达有抑制作用。
[0010]-种治疗急性痛风药物，由DysidavaroneA为活性成分添加辅料制备而成，制备 方法为取5克化合物DysidavaroneA，加入糊精195克，混匀，常规压片机制成1000片。
[0011] -种治疗急性痛风药物，由DysidavaroneA为活性成分添加辅料制备而成，制备 方法为取5克化合物DysidavaroneA，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0012] 研究结果表明，用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，DysidavaroneA可 保护MSU致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风 炎症的活性，DysidavaroneA可用于制备治疗急性痛风炎症药物。
[0013] 本发明涉及的DysidavaroneA在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开， 由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强，具备突出的实质 性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0014] 本发明所涉及化合物DysidavaroneA的制备方法参见文献（Bjorn Schmalzbauer，etal.，TotalSynthesisandAntibacterialActivityofDysidavarone A.，OrganicLetters，2013, 15 (4) :964 - 967.)
[0015] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
[0016] 实施例1 :本发明所涉及化合物DysidavaroneA片剂的制备：
[0017] 取5克化合物DysidavaroneA，加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
[0018] 实施例2 :本发明所涉及化合物DysidavaroneA胶囊剂的制备：
[0019] 取5克化合物DysidavaroneA，加入淀粉195克，混勾，装胶囊制成1000粒。
[0020] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0021] 实验例1:DysidavaroneA抗急性痛风炎症实验：
[0022] 1:方法
[0023] ①溶液配制
[0024] 5g尿酸加1000ml蒸馏水煮沸，加5%NaOH溶液调PH7. 4,搅拌，冷却析晶制成尿 酸钠结晶（MSU)。将制好的MSU10mg高压灭菌，加不含血清的DMEM培养液10ml，研磨配成 lmg/ml的DMEM溶液。实验时，此溶液再加DMEM培养液配成不同浓度DMEM的MSU溶液。
[0025] DysidavaroneA2. 5mg，用二甲基亚砜（DMS0)溶解，DMS0终浓度〈0· 02%，再加无 血清的DMEM培养液，配制成浓度2. 5ug/ml、25ug/ml、250ug/ml。
[0026] 阳性药吲噪美辛2.Omg，方法同DysidavaroneA，配制浓度20ug/ml。
[0027] ②血管内皮细胞的体外培养
[0028] 人脐静脉血管内皮细胞HUVEC株，由南京中医药大学基础医学院提供，细胞经支 原体检测，无支原体污染，细胞经0. 25%胰蛋白酶消化，含10%小牛血清的DMEM培养液中 和，离心（1000r/minX6min)，去上清液，加含10%小牛血清的DMEM培养液，移入细胞培养 瓶中，放37°C、5 %C02培养箱中传代培养。
[0029] ③对MSU刺激HUVEC活力的影响
[0030]HUVEC在培养瓶中培养，待生长至70 %~80 %融合时，以0. 25 %胰蛋白酶消化、离 心，10 %小牛血清DMEM培养液洗涤3次，用10 %小牛血清DMEM培养液调成4X104/ml细胞 悬液，植入96孔板（每孔200ul)，培养24小时后轻吸出原培养液，进行以下实验，每组各 8孔，具体分组及加液如下：对照组（200ulDMEM培养液）、模型组（100ug/mlMSU溶液）、干 预A组（lOOug/mlMSU溶液+2.5ug/mlDysidavaroneA)、干预13组（10〇1^/1111MSU溶液 +25ug/mlDysidavaroneA)、干预0组（lOOug/mlMSU溶液+250ug/mlDysidavaroneA)， 加液后继续放37°C、5%C02培养箱中培养24小时，收集上清液，剩余的HUVEC用于测定细 胞活性，每孔再加5mg/mlMTT液20ul，继续放37°C、5%C02培养箱中培养4小时后，弃MTT 液，加入二甲基亚砜200ul溶解，震荡，于酶标仪读取吸光度值，波长490nm。
[0031] 阳性药组加液（100ug/mlMSU溶液+20ug/ml吲哚美辛），其他方法同上。
[0032] 数据统计学处理，细胞活力（％)=实验组吸光度值/对照组吸光度值X100%， 结果见表1。
[0033] 与对照组相比，模型组细胞活力显著减小（P〈0. 01，P〈0. 05)，阳性药吲哚美辛 及DysidavaroneA干预后细胞活力显著提高（Ρ〈0·01，Ρ〈0·05)，并强于对照组，其中， DysidavaroneΑ各浓度组的细胞活力强于阳性药Π引噪美辛。
[0034] 表1DysidavaroneA对MSU刺激的血管内皮细胞活力的影响（X土s)
[0035]
[0037]与模型组比较，#Ρ〈0· 01*Ρ〈0· 05,与对照组比较，##Ρ〈0· 01#Ρ〈0· 05
[0038] ④对ICAM-1表达影响
[0039] 将处于对数生长期的HUVEC用0. 25%的胰蛋白酶消化，轻轻吹打，制成细胞悬液， 调整细胞密度为5X109/L，接种于细胞培养瓶中。待细胞长满后（约24h)，弃去上清液， 分为下列组：对照组、模型组（l〇〇ug/mlMSU溶液）、DysidavaroneA组（100ug/mlMSU溶 液+25ug/mlDysidavaroneA)，继续培养24小时，PBS收集细胞，离心去上清，加入0)54 单克隆抗体，30min后，PBS洗涤，重悬细胞，应用流式细胞仪检测其阳性细胞百分率（η= 10000)，重复3次，结果见表2。
[0040] 表2DysidavaroneΑ对MSU刺激的血管内皮细胞ICAM-1表达的影响（X土s)
[0041]
[0042]与模型组比较，#Ρ〈0· 01*Ρ〈0· 05,与对照组比较，##Ρ〈0· 01#Ρ〈0· 05
[0043] 2、结果结果显示，空白组HUVEC几乎无ICAM-1表达，模型组ICAM-1的表达最高， 与模型组相比，DysidavaroneA对ICAM-1的表达有较强的抑制作用。
[0044] 结论：用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，DysidavaroneA可保护MSU 致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风炎症的活 性，DysidavaroneA可用于制备治疗急性痛风炎症药物。
【主权项】
1. DysidavaroneA在治疗急性痛风药物中的应用，所述化合物DysidavaroneA结构如 式（I)所示：式（I)。2. 如权利要求1所述DysidavaroneA在治疗急性痛风药物中的应用，其特征在于 DysidavaroneA对ICAM-1的表达有抑制作用。3. -种治疗急性痛风药物，其特征在于由权利要求1所述的DysidavaroneA为活性成 分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物DysidavaroneA,加入糊精195克，混匀， 常规压片机制成1000片。4. 一种治疗急性痛风药物，其特征在于由权利要求1所述的DysidavaroneA为活性成 分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物DysidavaroneA，加入淀粉195克，混匀，装 胶囊制成1000粒。
【专利摘要】本发明提供Dysidavarone？A在制备治疗急性痛风药物中的应用。经实验研究结果表明Dysidavarone？A对尿酸盐致人血管内皮细胞损伤的急性痛风模型具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，本发明涉及的Dysidavarone？A在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，而且其对于急性痛风的防治活性强，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61K9/48, A61P19/06, A61K9/20, A61K31/122
【公开号】CN105395529
【申请号】CN201510902385
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月8日