Geodiamolide A在制备治疗急性痛风药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物GeodiamolideA的新用途，尤其涉及GeodiamolideA在制备 治疗急性痛风药物中的应用。
【背景技术】
[0002]痛风（gouty)，又称痛风性关节炎（goutyarthritis)，是体内噪呤代谢紊乱所致 的疾病，表现为血中尿酸过多，易于使尿酸盐（MSU)在关节等组织析出结晶。痛风的急性发 作是由于沉积在关节的MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎性反应。
[0003] 西药在痛风急性发作期选用三种药：秋水仙碱、非留体抗炎药和肾上腺皮质激素。 秋水仙碱的作用机制是与中性粒细胞的微管蛋白结合，从而妨碍粒细胞的活动，抑制粒细 胞浸润。非留体抗炎药如吲哚美辛，抑制环氧酶（C0X)活性而发挥抗炎作用，以及选择性 C0X2抑制药。它们虽然消炎止痛作用快，但毒副作用也相当明显，如秋水仙碱的有效剂量与 产生腹泻等胃肠道症状的剂量相近，非留体抗炎药在有活动性消化性溃疡、胃肠道出血情 况下绝对禁用，而保泰松用药短至3周也可致严重的粒细胞减少症或再生障碍性贫血。
[0004] 本发明涉及的化合物GeodiamolideA是一个2013年发表（Hiyoung Kim,JungwookChin,HyukjaeChoi,etal.,PhosphoiodynsAandB,Unique Phosphorus-ContainingIodinatedPolyacetylenesfromaKoreanSponge Placospongiasp.OrganicLetters，2013,15 (1):100 - 103.)的新化合物，该化合物拥有 全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及抗真菌活性，（HiyoungKim,JungwookChin,Hyukjae Choi,etal.,PhosphoiodynsAandB,UniquePhosphorus-ContainingIodinated PolyacetylenesfromaKoreanSpongePlacospongiasp.OrganicLetters，2013， 15(1) : 100 - 103.)，对于本发明涉及的GeodiamolideA在制备治疗急性痛风药物中的用途 属于首次公开。
【发明内容】
[0005] 本发明用MSU致人血管内皮细胞（HUVEC)损伤的急性痛风模型评价显示，对MSU 致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，可用于制备治疗急性痛风炎症药物。本 发明的目的在于提供GeodiamolideA在医学中的新用途，具体地说是涉及GeodiamolideA 在制备治疗急性痛风药物中的应用。
[0006] 本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的：
[0007] 现代医学病理研究说明，痛风性关节炎是MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎 性反应，急性痛风产生的本质是中性粒细胞（PMN)-血管内皮细胞（HUVEC)黏连增强 (TerkeltaubR，etal.Themurinehomologoftheinterleukin-8receptorcxcr-2is essentialfortheoccurrenceofneutrophilicinflammationinair pouchmodelofacuteuratecrystal-inducedgoutysynovitis.Arthritis Rheum, 1998, 41 (5) :900-909.)，HUVEC损伤，其分子生物学基础在于PMN与HUVEC表面黏 附分子的相互作用(FujiwaraY,etal.Interleukin-8stimulatesleukocytemigration acrossamonolayerofculturedrabbitNF_a,IL-1β,IL-8,andIL-1rainMonosodium UrateCrystalinducedrabbitarthritis.Labinvest, 19998, 78 (5): 559-569·)，其中细 胞间黏附分子-l(ICAM-l)与粘附功能关系最密切，是急性痛风炎症的重要指标之一（张 春，唐怡，刘军，等.痛风灵方对尿酸钠致大鼠模型关节软组织ICAM-1表达的影响，重庆医 学，2002, 31 (12) :1211-1213.)。
[0008] 因此，针对急性痛风MSU致HUVEC损伤，ICAM-1表达增多的病理特征，本发明用 MSU致HUVEC损伤的体外急性痛风模型（杨妍华，尹莲，王明艳，等.尿酸钠诱导HUVEC损 伤的急性痛风模型研究，中华中医药学刊，2010,28(3):592-594.)，评价66〇虹 &!11〇1丨(16八 抗急性痛风炎症活性。MSU致人血管内皮细胞（HUVEC)损伤的急性痛风模型评价显示， GeodiamolideA对MSU致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达。
[0009] 本发明提出GeodiamolideA在制备治疗急性痛风药物中的应用。从药理实验看 出，GeodiamolideA有较好的治疗急性痛风的作用。由于本发明首次公开GeodiamolideA 在治疗急性痛风方面的药理作用。
[0010] 所述化合物GeodiamolideA结构如式（I)所示：
[0011]
[0012] 式（I)
[0013] 研究结果表明，用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，GeodiamolideA可 保护MSU致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风 炎症的活性，GeodiamolideA可用于制备治疗急性痛风炎症药物。
[0014] 本发明涉及的GeodiamolideA在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开， 由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强得意想不到，不存 在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治 显然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0015] 本发明所涉及化合物GeodiamolideA的制备方法参见文献（Hiyoung Kim,JungwookChin,HyukjaeChoi,etal. ,PhosphoiodynsAandB，Unique Phosphorus-ContainingIodinatedPolyacetylenesfromaKoreanSponge Placospongiasp.OrganicLetters，2013,15 (1):100 - 103.)
[0016] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
[0017] 实施例1 :本发明所涉及化合物GeodiamolideA片剂的制备：
[0018] 取5克化合物GeodiamolideA，加入糊精195克，混匀，常规压片机制成1000片。
[0019] 实施例2 :本发明所涉及化合物GeodiamolideA胶囊剂的制备：
[0020] 取5克化合物GeodiamolideA，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0021] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0022] 实验例1:GeodiamolideA抗急性痛风炎症实验：
[0023] 1:方法
[0024] ①溶液配制
[0025] 5g尿酸加1000ml蒸馏水煮沸，加5%NaOH溶液调PH7. 4,搅拌，冷却析晶制成尿 酸钠结晶（MSU)。将制好的MSU10mg高压灭菌，加不含血清的DMEM培养液10ml，研磨配成 lmg/ml的DMEM溶液。实验时，此溶液再加DMEM培养液配成不同浓度DMEM的MSU溶液。
[0026] GeodiamolideA2. 5mg，用二甲基亚砜（DMS0)溶解，DMS0 终浓度〈0. 02%，再加无 血清的DMEM培养液，配制成浓度2. 5ug/ml、25ug/ml、250ug/ml。
[0027] 阳性药吲噪美辛2.Omg，方法同GeodiamolideA，配制浓度20ug/ml。
[0028] ②血管内皮细胞的体外培养
[0029] 人脐静脉血管内皮细胞HUVEC株，由南京医科大学基础医学院提供，细胞经支原 体检测，无支原体污染，细胞经0. 25 %胰蛋白酶消化，含10 %小牛血清的DMEM培养液中和， 离心（100()以1^11\61^11)，去上清液，加含1()%小牛血清的01^1培养液，移入细胞培养瓶 中，放37 °C、5 %C02培养箱中传代培养。
[0030] ③对MSU刺激HUVEC活力的影响
[0031] HUVEC在培养瓶中培养，待生长至70%~80%融合时，以0. 25%胰蛋白酶消化、离 心，10 %小牛血清DMEM培养液洗涤3次，用10 %小牛血清DMEM培养液调成4X104/ml细胞 悬液，植入96孔板（每孔200ul)，培养24小时后轻吸出原培养液，进行以下实验，每组各 8孔，具体分组及加液如下：对照组（200ulDMEM培养液）、模型组（100ug/mlMSU溶液）、干 预A组（100ug/mlMSU溶液+2.5ug/mlGeodiamolideA)、干预13组（10〇1^/1111MSU溶液 +25ug/mlGeodiamolideA)、干预0组（100ug/mlMSU溶液+250ug/mlGeodiamolideA)， 加液后继续放37°C、5%C02培养箱中培养24小时，收集上清液，剩余的HUVEC用于测定细 胞活性，每孔再加5mg/mlMTT液20ul，继续放37°C、5%C02培养箱中培养4小时后，弃MTT 液，加入二甲基亚砜200ul溶解，震荡，于酶标仪读取吸光度值，波长490nm。
[0032] 阳性药组加液（100ug/mlMSU溶液+20ug/ml吲哚美辛），其他方法同上。
[0033] 数据统计学处理，细胞活力（％)=实验组吸光度值/对照组吸光度值X100%， 结果见表1。
[0034] 与对照组相比，模型组细胞活力显著减小（P〈0. 01，P〈0. 05)，阳性药吲哚美辛 及GeodiamolideA干预后细胞活力显著提高（P〈0. 01，P〈0. 05)，并强于对照组，其中， GeodiamolideA各浓度组的细胞活力强于阳性药吲哚美辛。
[0035] 表1GeodiamolideA对MSU刺激的血管内皮细胞活力的影响（X土s)
[0036]
[0037]与模型组比较，#Ρ〈0· 01*Ρ〈0· 05,与对照组比较，##Ρ〈0· 01#Ρ〈0· 05
[0038] ④对ICAM-1表达影响
[0039] 将处于对数生长期的HUVEC用0. 25%的胰蛋白酶消化，轻轻吹打，制成细胞悬液， 调整细胞密度为5X109/L，接种于细胞培养瓶中。待细胞长满后（约24h)，弃去上清液， 分为下列组：对照组、模型组（l〇〇ug/mlMSU溶液）、GeodiamolideA组（100ug/mlMSU溶 液+25ug/mlGeodiamolideA)，继续培养24小时，PBS收集细胞，离心去上清，加入⑶54 单克隆抗体，30min后，PBS洗涤，重悬细胞，应用流式细胞仪检测其阳性细胞百分率（η= 10000)，重复3次，结果见表2。
[0040] 表2GeodiamolideΑ对MSU刺激的血管内皮细胞ICAM-1表达的影响（X土s) [0041 ]
[0042]与模型组比较，#Ρ〈0· 01*Ρ〈0· 05,与对照组比较，##Ρ〈0· 01#Ρ〈0· 05
[0043] 2、结果结果显示，空白组HUVEC几乎无ICAM-1表达，模型组ICAM-1的表达最高， 与模型组相比，GeodiamolideA对ICAM-1的表达有较强的抑制作用。
[0044] 结论：用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，GeodiamolideA可保护MSU 致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风炎症的活 性，GeodiamolideA可用于制备治疗急性痛风炎症药物。
【主权项】
1.GeodiamolideA在治疗急性痛风药物中的应用，所述化合物GeodiamolideA结构如 式（I)所示： 式（I)。：
【专利摘要】本发明提供Geodiamolide？A在医学中的新用途，具体地说是Geodiamolide？A在制备治疗急性痛风药物中的应用。经实验研究结果表明Geodiamolide？A对尿酸盐致人血管内皮细胞损伤的急性痛风模型具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，因此，Geodiamolide？A可用于制备治疗急性痛风炎症药物。本发明涉及的Geodiamolide？A在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61P19/06, A61K38/06
【公开号】CN105250991
【申请号】CN201510724063
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年10月29日