Foveoeudesmenone在制备治疗急性痛风药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物Foveoeudesmenone的新用途，尤其涉及Foveoeudesmenone在 制备治疗急性痛风药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 痛风（gouty)，又称痛风性关节炎（gouty arthritis)，是体内噪呤代谢紊乱所致 的疾病，表现为血中尿酸过多，易于使尿酸盐（MSU)在关节等组织析出结晶。痛风的急性发 作是由于沉积在关节的MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎性反应。
[0003] 西药在痛风急性发作期选用三种药：秋水仙碱、非留体抗炎药和肾上腺皮质激素。 秋水仙碱的作用机制是与中性粒细胞的微管蛋白结合，从而妨碍粒细胞的活动，抑制粒细 胞浸润。非留体抗炎药如吲哚美辛，抑制环氧酶（C0X)活性而发挥抗炎作用，以及选择性 C0X2抑制药。它们虽然消炎止痛作用快，但毒副作用也相当明显，如秋水仙碱的有效剂量与 产生腹泻等胃肠道症状的剂量相近，非留体抗炎药在有活动性消化性溃疡、胃肠道出血情 况下绝对禁用，而保泰松用药短至3周也可致严重的粒细胞减少症或再生障碍性贫血。
[0004] 本发明涉及的化合物Foveoeudesmenone是一个2013年发表（Pathom Somwong， et al., New sesquiterpenes and phenolic compound from Ficus foveolata. Fitoterapia，85(2013)l -7.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用 途仅仅涉及抗癌作用(Pathom Somwong, et al. , New sesquiterpenes and phenolic compound from Ficus foveolata. Fitoterapia, 85 (2013) 1 - 7.)，对于本发明涉及的 Foveoeudesmenone在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构 类型，而且其对于治疗急性痛风活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的 可能，具备突出的实质性特点，同时用于治疗急性痛风显然具有显著的进步。
【发明内容】
[0005] 本发明用MSU致人血管内皮细胞（HUVEC)损伤的急性痛风模型评价显示，对 MSU致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，可用于制备治疗急性痛风炎症 药物。本发明的目的在于提供Foveoeudesmenone在医学中的新用途，具体地说是涉及 Foveoeudesmenone在制备治疗急性痛风药物中的应用。
[0006] 本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的：
[0007] 现代医学病理研究说明，痛风性关节炎是MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎 性反应，急性痛风产生的本质是中性粒细胞（PMN)-血管内皮细胞（HUVEC)黏连增强 (Terkeltaub R，et al. The murine homolog of the interleukin-8 receptorcxcr-2 is essential for the occurrence of neutrophilic inflammation in air pouch model of acute urate crystal-induced gouty synovitis.Arthritis Rheum, 1998, 41 (5) :900-909.)，HUVEC损伤，其分子生物学基础在于PMN与HUVEC表面黏 附分子的相互作用(FujiwaraY, et al. Interleukin-8 stimulates leukocyte migration across amonolayer of cultured rabbit NF_α，IL-1β，IL-8, and IL-1 rain Monosodium Urate Crystal induced rabbit arthritis. Labinvest, 19998, 78 (5): 559-569·)，其中细 胞间黏附分子-l(ICAM-l)与粘附功能关系最密切，是急性痛风炎症的重要指标之一（张 春，唐怡，刘军，等.痛风灵方对尿酸钠致大鼠模型关节软组织ICAM-1表达的影响，重庆医 学，2002, 31 (12) :1211-1213.)。
[0008] 因此，针对急性痛风MSU致HUVEC损伤，ICAM-1表达增多的病理特征，本发明用 MSU致HUVEC损伤的体外急性痛风模型（杨妍华，尹莲，王明艳，等.尿酸钠诱导HUVEC损伤 的急性痛风模型研究，中华中医药学刊，2010, 28 (3) :592-594.)，评价Foveoeudesmenone 抗急性痛风炎症活性。MSU致人血管内皮细胞（HUVEC)损伤的急性痛风模型评价显示，对 MSU致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达。
[0009] 本发明提出Foveoeudesmenone在制备治疗急性痛风药物中的应用。从药理 实验看出，Foveoeudesmenone有较好的治疗急性痛风的作用。由于本发明首次公开 Foveoeudesmenone在治疗急性痛风方面的药理作用。
[0010] 所述化合物Foveoeudesmenone结构如式（I )所示：
[0012] 研究结果表明，用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，Foveoeudesmenone 可保护MSU致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛 风炎症的活性，Foveoeudesmenone可用于制备治疗急性痛风炎症药物。
[0013] 本发明涉及的Foveoeudesmenone在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公 开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强得意想不到，不 存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防 治显然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0014] 本发明所涉及化合物Foveoeudesmenone的制备方法参见文献（Pathom Somwong， et al., New sesquiterpenes and phenolic compound from Ficus foveolata. Fitoterapia，85 (2013) 1 - 7.)
[0015] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
[0016] 实施例1 :本发明所涉及化合物Foveoeudesmenone片剂的制备：
[0017] 取20克化合物Foveoeudesmenone，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压 片机制成1000片。
[0018] 实施例2 :本发明所涉及化合物Foveoeudesmenone胶囊剂的制备：
[0019] 取20克化合物Foveoeudesmenone，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混 匀，装胶囊制成1〇〇〇粒。
[0020] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0021] 实验例1 :Foveoeudesmenone抗急性痛风炎症实验：
[0022] 1:方法
[0023] ①溶液配制
[0024] 5g尿酸加1000ml蒸馏水煮沸，加5% NaOH溶液调PH 7. 4,搅拌，冷却析晶制成尿 酸钠结晶（MSU)。将制好的MSU 10mg高压灭菌，加不含血清的DMEM培养液10ml，研磨配成 lmg/ml的DMEM溶液。实验时，此溶液再加 DMEM培养液配成不同浓度DMEM的MSU溶液。
[0025] Foveoeudesmenone 2. 5mg，用二甲基亚讽（DMS0)溶解，DMS0 终浓度〈0· 02%，再加 无血清的DMEM培养液，配制成浓度2. 5ug/ml、25ug/ml、250ug/ml。
[0026] 阳性药吲噪美辛2. Omg，方法同Foveoeudesmenone，配制浓度20ug/ml〇
[0027] ②血管内皮细胞的体外培养
[0028] 人脐静脉血管内皮细胞HUVEC株，由南京中医药大学基础医学院提供，细胞经支 原体检测，无支原体污染，细胞经0. 25%胰蛋白酶消化，含10%小牛血清的DMEM培养液中 和，离心（1000r/minX6min)，去上清液，加含10%小牛血清的DMEM培养液，移入细胞培养 瓶中，放37 °C、5 % C02培养箱中传代培养。
[0029] ③对MSU刺激HUVEC活力的影响
[0030] HUVEC在培养瓶中培养，待生长至70%~80%融合时，以0. 25%胰蛋白酶消化、 离心，10 %小牛血清DMEM培养液洗涤3次，用10 %小牛血清DMEM培养液调成4X 104/ml 细胞悬液，植入96孔板（每孔200ul)，培养24小时后轻吸出原培养液，进行以下实验，每 组各8孔，具体分组及加液如下：对照组（200ulDMEM培养液）、模型组（100ug/ml MSU溶 液）、干预 A 组（100ug/ml MSU 溶液 +2. 5ug/ml Foveoeudesmenone)、干预 B 组（100ug/ ml MSU 溶液 +25ug/ml Foveoeudesmenone)、干预 C 组（100ug/ml MSU 溶液 +250ug/ml Foveoeudesmenone)，加液后继续放37°C、5% C02培养箱中培养24小时，收集上清液，剩余 的HUVEC用于测定细胞活性，每孔再加5mg/ml MTT液20ul，继续放37°C、5% 0)2培养箱中 培养4小时后，弃MTT液，加入二甲基亚砜200ul溶解，震荡，于酶标仪读取吸光度值，波长 490nm〇
[0031] 阳性药组加液（100ug/ml MSU溶液+20ug/ml吲哚美辛），其他方法同上。
[0032] 数据统计学处理，细胞活力（％)=实验组吸光度值/对照组吸光度值X 100%， 结果见表1。
[0033] 与对照组相比，模型组细胞活力显著减小（P〈0. 01，P〈0. 05)，阳性药吲哚美辛 及Foveoeudesmenone干预后细胞活力显著提高（P〈0. 01，P〈0. 05)，并强于对照组，其中， Foveoeudesmenone各浓度组的细胞活力强于阳性药Π 引噪美辛。
[0034] 表1 Foveoeudesmenone对MSU刺激的血管内皮细胞活力的影响（X土 s)
[0035]
[0036] 与模型组比较，#Ρ〈0· 01 *Ρ〈0· 05,与对照组比较，##Ρ〈0· 01 #Ρ〈0· 05
[0037] ④对I CAM-1表达影响
[0038] 将处于对数生长期的HUVEC用0. 25%的胰蛋白酶消化，轻轻吹打，制成细胞悬液， 调整细胞密度为5 X 109/L，接种于细胞培养瓶中。待细胞长满后（约24h)，弃去上清液，分 为下列组：对照组、模型组（l〇〇ug/ml MSU 溶液）、Foveoeudesmenone 组（100ug/ml MSU 溶 液+25ug/ml Foveoeudesmenone)，继续培养24小时，PBS收集细胞，离心去上清，加入0)54 单克隆抗体，30min后，PBS洗涤，重悬细胞，应用流式细胞仪检测其阳性细胞百分率（η = 10000)，重复3次，结果见表2。
[0039] 表2 Foveoeudesmenone对MSU刺激的血管内皮细胞ICAM-1表达的影响（X土 s)
[0041] 与模型组比较，#P〈0. 01 *P〈0. 05,与对照组比较，##P〈0. 01 #P〈0. 05
[0042] 2、结果结果显示，空白组HUVEC几乎无 ICAM-1表达，模型组ICAM-1的表达最高， 与模型组相比，Foveoeudesmenone对ICAM-1的表达有较强的抑制作用。
[0043] 结论：用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，Foveoeudesmenone可保护 MSU致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风炎症的 活性，Foveoeudesmenone可用于制备治疗急性痛风炎症药物。
【主权项】
1.Foveoeudesmenone在治疗急性痛风药物中的应用，所述化合物Foveoeudesmenone 结构如式（I)所示：
【专利摘要】本发明提供Foveoeudesmenone在医学中的新用途，具体地说是Foveoeudesmenone在制备治疗急性痛风药物中的应用。经实验研究结果表明Foveoeudesmenone对尿酸盐致人血管内皮细胞损伤的急性痛风模型具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，因此，Foveoeudesmenone可用于制备治疗急性痛风炎症药物。本发明涉及的Foveoeudesmenone在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61P19/06, A61K31/122
【公开号】CN105287451
【申请号】CN201510799815
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月19日