一种鉴别桔小实蝇辐照与否的技术方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种鉴别桔小实蝇辐照与否的方法，属于植物虫害检测领域，具体涉 及检验检疫技术。
【背景技术】
[0002] 辐照检疫技术通过辐照杀死害虫或使检疫害虫的卵或幼虫不羽化来达到检疫的 目的。新鲜水果和蔬菜在辐照之前很可能被卵期或幼虫期的害虫所侵染。在推荐的检疫 剂量下辐照可以满足新鲜水果或蔬菜的检疫要求，但不能立即杀死检疫害虫（卵或幼虫形 式），因此很可能在辐照检疫处理的产品中发现无繁殖能力活检疫幼虫。20世纪90年代以 来，人们一直在开发鉴定辐照产品中幼虫确实经过辐照处理的方法，确保辐照检疫技术的 效果和避免检疫害虫对当地农业杀虫的危害。Nation等（1995)建议用辐照后的加勒比海 实蝇多酚氧化酶活性的降低作为鉴定辐照的一种方法。他们发现20Gy辐照晚期的卵或幼 龄的幼虫，可以很明显的减少3龄幼虫体内酚氧化酶的活性。Mansour等（1996)也观察到 辐照对地中海实蝇也有类似的影响，肯定了 40Gy辐照地中海实蝇的卵和幼虫可以更多的 减少酚氧化酶在3龄幼虫体内的形成。辐照处理后，根据虫体是否变黑也可作为判断虫体 是否经过福照。福照后幼虫虫体不能变黑。Nation等（1995) ;Mansour等（1996)指出利 用此法可判断加勒比实蝇、地中海实蝇幼虫是否经过了辐照处理。
[0003] 昆虫种类不同，辐照后对酶的反应也不同，因此桔小实蝇辐照后酚氧化酶是否降 低，及虫体是否黑化需经进一步试验验证。昆虫辐照后，由于射线作用使水分子产生自由基 H0 ?，H0 ?再作用于DNA，使其产生损伤。由于超氧化物歧化酶（SOD)为生物体的保护酶， 对消除昆虫体内过量的氧自由基，对抵御低温、光活化毒素等逆境因子起主要作用。昆虫 辐照后抑制它的发育，乙酰胆碱酯酶（AChE)参与细胞的发育和成熟，能促进神经元发育和 再生。同时辐照对昆虫超氧化物歧化酶（SOD)、乙酰胆碱酯酶（AChE)的影响还未见过相关 的研宄报道。本发明方法通过测定这三种酶活性，能够明确桔小实蝇是否经过辐照，及辐照 时处于的虫期。由于我省等南方地区是桔小实蝇疫区，因此果蔬外销受到检疫限制，因此解 决此问题具有重要意义。
【发明内容】
[0004] 辐照是应用于水果和蔬菜的一种新的检疫处理方法，但辐照不能阻止桔小实蝇卵 或者幼虫发育到蛹阶段。因此本发明提供一种方法鉴别进口水果中发现活的幼虫是否能继 续发育到具有繁殖能力的成虫，该方法通过测定酚氧化酶、超氧化物歧化酶（SOD)或/和 乙酰胆碱酯酶（AChE)这三种酶活性，能够明确桔小实蝇是否经过辐照，及辐照时处于的虫 期，该方法非常灵敏可靠，针对进口水果截获虫量少的特点，鉴定时只需一条虫。
[0005] 本发明提供的技术方案是：一种辐照处理桔小实蝇的方法，该方法以40 - 160Gy 剂量的6°CoY射线辐照桔小实蝇卵、1龄、2龄幼虫；或者用160Gy以上剂量的6°CoY射线 辐照桔小实蝇3龄幼虫。
[0006] 进一步地，所述的方法，以80 - 160Gy剂量的6°Co y射线辐照桔小实蝇卵、1龄、2 龄幼虫；或者用160Gy以上剂量的6°Co Y射线辐照桔小实蝇3龄幼虫；或者用160Gy以上 剂量的6°C〇y射线辐照桔小实蝇卵、1龄、2龄、3龄幼虫。
[0007] 本发明提供一种鉴别桔小实蝇是否经达标的辐照处理的方法，该方法是采集被检 测植物或水果上的桔小实蝇活虫以检测其酚氧化酶、超氧化物歧化酶或/和乙酰胆碱酯酶 酶活性，如果酚氧化酶酶活性为对照80 %以下，则确定幼虫是经过辐照处理；或者超氧化 物歧化酶酶活性为对照85%以下，则确定幼虫是经过辐照处理；或者乙酰胆碱酯酶酶活性 低于对照，则确定幼虫是经过辐照处理。更优选地，如果酚氧化酶酶活性为对照80%以下、 超氧化物歧化酶酶活性为对照85%以下则确定幼虫是经过辐照处理。再优选地，如果酚氧 化酶酶活性为对照80%以下、超氧化物歧化酶酶活性为对照85%以下，并且乙酰胆碱酯酶 酶活性低于对照，则确定幼虫是经过辐照处理。
[0008] 所述的的方法，进一步检测被检测蔬菜或水果上的桔小实蝇幼虫是否能够黑化， 将发现的活虫放入-18°c冰箱急冻后，确定虫体死亡后，将虫体拿出放入室温下，lh后观 察，如果虫体呈黄白色，如果没有变黑色，可以确定幼虫经过辐照处理；如果黑化表明没有 经辐照处理。
[0009] 本发明具有以下有益效果：
[0010] 由于出口水果要求品质高且没有感染有害生物的水果，才进行辐照除害处理，被 卵和1、2龄幼虫感染的水果不易被发现，但3龄幼虫已引起水果腐烂，在挑选水果时，很易 将其挑出。如果辐照水果剂量高于80Gy，将口岸发现的活虫经冰箱冷冻后或活虫直接进行 研磨提取酶液进行测定酚氧化酶活性，如果酚氧化酶活性为对照80%以下，那么就可以确 定幼虫经过辐照的；将口岸发现的活虫经冰箱冷冻后或活虫直接进行研磨提取酶液进行测 定超氧化物歧化酶活性，如果酶活性为对照85%以下，亦可以确定幼虫经过辐照处理；将 口岸发现的活虫经冰箱冷冻后或活虫直接进行研磨提取酶液进行测定乙酰胆碱酯酶酶活 性，如果酶活性为对照1. 0以下，亦可确定桔小实蝇幼虫经过辐照处理，同时易可确定产品 辐照时桔小实蝇为卵或1龄幼虫；或将口岸发现的活虫放入-18°C冰箱急冻后，确定虫体死 亡后，将幼虫拿出放入室温下，lh后观察，如果虫体黄白色，没有变黑色，亦可以确定幼虫经 过辐照处理。因此，通过测定酚氧化酶活性、超氧化物歧化酶活性、乙酰胆碱酯酶活性或虫 体的黑化情况能鉴定桔小实蝇实蝇幼虫辐照与否，而且该方法非常灵敏可靠，针对进口水 果截获虫量少的特点，鉴定时只需一条虫，不需专业人员，也较适合在实地实用，尤其在水 果检疫现场发现了实蝇科的检疫性有害生物，就可快速鉴定该幼虫是否经过辐照处理，为 了适应快速通关的要求，上述方法非常简单实用。
【附图说明】
[0011] 图1不同剂量辐照桔小实蝇卵培养至3龄末后虫体外观的比较。
【具体实施方式】
[0012] 下面通过【具体实施方式】的详细描述来进一步阐明本发明，但并不是对本发明的限 制，仅仅作示例说明。
[0013] 1.供试昆虫
[0014] 桔小实蝇采自广州郊区的番石榴果园，用人工饲料培养至第4代。
[0015] 早上9 :00至10 :00采卵1小时后，取出放入恒温（27°C )恒湿（相对湿度75% ) 培养箱内培养至辐照的龄期，到华南农业大学辐照中心用6°C〇-y射线辐照，辐照后继续放 入恒温（27°C )恒湿（相对湿度75% )人工气候箱内培养，进一步发育至5日龄3龄幼虫 (即幼虫的第7天）后，均在上午10点，采集对照和处理组的幼虫用于黑化观察和酶液制 备。每组处理每次取1头幼虫，重复10次。
[0016] 因1