一种人工栽培猪苓的菌种驯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于菌种选育技术领域，具体涉及一种人工栽培猪苓的菌种驯化方法。
【背景技术】
[0002] 中药渣指中药材经过一定溶媒提取后所剩的残渣。含水量较高，且含有一定营养 成分和药效，极易腐败，会对环境造成严重的污染。中药渣处理的方式主要包括填埋、焚烧、 定区堆放等，不仅耗去大量的资金，而且造成了资源的浪费和严重的环境污染。中药大多由 植物的根、茎、叶、花、果实、它含有丰富的有机物和无机物，提取有效成分后的药渣中常含 有一定量的活性成分和大量的粗纤维、木质素、粗脂肪、淀粉、粗多糖、粗蛋白、氨基酸、生物 碱等营养成分及各种微量元素。药渣不同，药渣的主要化学成分也有差异。
[0003] 猪苳[Polyponus umbellatus Fr.]属担子菌纲真菌，主要以其菌核入药，集绿色、 安全、预防、保健、治疗于一体的我国珍稀濒危真菌药材。有效成份是猪苓多糖，麦角甾醇， 多聚糖等，其药性为味甘、性平；归脾、肾、膀胱经；有除湿利尿，抗衰老、抗肿瘤等功效。现 代医学研宄表明猪苓具有提高人体免疫力、抗癌作用。随着人类生活质量的提高，药食同 源，药食共享，猪苓的需求量不断增加，野生采挖和半人工种植，远远不能满足国内外制药 企业的需求。猪苓生长奇特，一般猪苓的营养是由共生菌-蜜环菌提供，猪苓菌丝在生长过 程中，为了抵抗不良环境或受外界刺激而形成菌核。半人工栽培是以大量的栎木为原料，同 时接种蜜环菌和猪苓的栎木菌材，3~4年收获，也就是说猪苓半人工栽培是以破坏大量森 林为代价，效益也较低。
[0004] 每年中药废渣和农作物秸杆产生量相当之大。我国是中药加工利用的发祥地，其 产业也是我国经济发展的支柱产业，中药加工过程中每年有大量的药渣产生，作为废弃物， 易影响环境，加大生产成本和处理成本，且造成资源浪费。中药渣仅在天水岐黄药业公司， 每年的产生量在1500吨以上。
[0005] 用这些废弃物全人工栽培珍稀大型药用真菌-猪苓，减少因猪苓栽培对森林的破 坏，可以带来巨大的经济效益。但是用这些废弃物栽培猪苓十分困难。
【发明内容】
[0006] 为了克服以上缺点，本发明提供一种人工栽培猪苓的菌种驯化方法。
[0007] 本发明所采用的技术方案是，一种人工栽培猪苓的菌种驯化方法，具体按照以下 步骤实施：
[0008] 步骤1、猪苓母种用加富PDA培养基驯化；用加富PDA培养基扩繁母种，以柴胡药 渣营养液代替PDA培养基制作过程中的自来水，灭菌，制成的斜面培养基叫加富PDA培养 基，无菌下接入购买的猪苓母种，置25~26°C培养40天；
[0009] 步骤2、原种驯化，
[0010] 猪苓原种培养基是以玉米粒和柴胡药渣粉碎物配制而成；用玉米粒在水中浸泡 24小时，淋去水，将中药渣粉拌入装入菌种瓶中，121°C灭菌1小时，无菌条件下接种已驯化 的母种，置22~24°C培养40天，得到已驯化的原种；
[0011] 步骤3、一级栽培种驯化，用柴胡药渣培养基驯化已驯化的原种，无菌下在柴胡药 渣培养基中接入已驯化的原种，置22~24°C培养40天，得到一级栽培种；
[0012] 步骤4、二级栽培种驯化，用柴胡药渣培养基驯化一级栽培种，无菌条件下在柴胡 药渣培养基中接入一级栽培种，置22~24°C培养40天，得到二级栽培种；
[0013] 步骤5、收获，将二级栽培种接种与培养，猪苓菌核大量形成，初始为白色，中期是 褐色，后期是黑色，停止生长，进行收获，摘掉猪苓，太阳下晒干，为成品猪苓。
[0014] 本发明的特点还在于，
[0015] 加富PDA培养基为马铃薯200克、白糖20克、琼脂20克、柴胡药渣营养液1000毫 升。
[0016] 柴胡药渣营养液通过下述方式制得：称取40克干基柴胡药渣，煮制20分钟，过滤， 定容至1000毫升，得到柴胡药渣营养液。
[0017] 步骤2中柴胡药渣粉与浸泡后的玉米粒的质量比为1:5。
[0018] 步骤3和4中的柴胡药渣培养基通过下述方式制得：按照质量比为4:6称取柴胡 药渣与栎木木肩，将拌匀中药渣与栎木木肩，加水至含水量50%，装入菌种瓶中，121 °C灭菌 1小时，制备得到柴胡药渣培养基。
[0019] 本发明的有益效果是：本发明对猪苓母种进行营养物驯化，使之适合于药渣代料 上生长，生长速度快，质量好，可以全人工栽培。这种驯化方法，可以节省了大量的栎木木 料，减少了因猪苓栽培带来的对森林的破坏，又能减少环境的污染，能够带来较大的经济效 益、生态效益。
[0020] 本发明主要研宄利用猪苓栽培的代料对猪苓菌种进行营养驯化，代料营养源的处 理、代料营养源的添加比例、代料营养源对菌种的驯化代数等，通过猪苓菌种的代料营养源 驯化，使其适宜于新的栽培料，获得快速、高产、优质，提高猪苓栽培的经济效益。在栽培代 料、代料处理、栽培条件相同时，利用驯化的猪苓菌种全人工栽培的生长速度比半人工栽培 可以提高2倍以上，产量提高3倍以上。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0022] 本发明提供一种人工栽培猪苓的菌种驯化方法，具体按照以下步骤实施：
[0023] 步骤1、猪苓母种用加富PDA培养基驯化；用加富PDA培养基（马铃薯200克、白糖 20克、琼脂20克、柴胡药渣营养液1000毫升）扩繁母种，其中，称取40克干基柴胡药渣，煮 制20分钟，过滤，定容至1000毫升，以柴胡药渣营养液代替PDA培养基制作过程中的自来 水，灭菌，制成的斜面培养基叫加富PDA培养基，无菌下接入购买的猪苓母种，置25~26°C 培养40天；
[0024] 步骤2、原种驯化；猪苓原种培养基是以玉米粒和柴胡药渣粉碎物配制而成；用玉 米粒在水中浸泡24小时，淋去水，将柴胡药渣粉拌入装入菌种瓶中，121 °C灭菌1小时，无菌 条件下接种已驯化的母种，置22~24°C培养40天；其中，中药渣粉与浸泡后的玉米粒的质 量比为1:5,得到已驯化的原种；
[0025] 步骤3、一级栽培种驯化，用柴胡药渣培养基驯化已驯化的原种，制备柴胡药渣培 养基，按照质量比为4:6称取柴胡药渣与栎木木肩，将拌匀中药渣与栎木木肩，加水至含水 量50%，装入菌种瓶中，121 °C灭菌1小时，无菌下接入已驯化的原种，置22~24°C培养40 天，得到一级栽培种；
[0026] 步骤4、二级栽培种驯化，用柴胡药渣培养基驯化一级栽培种，制备柴胡药渣培养 基，按照质量比为4:6称取柴胡药渣与栎木木肩，将拌匀中药渣与栎木木肩，加水至含水量 50%，装入菌种瓶中，121°C灭菌1小时，无菌下接入一级栽培种，置22~24°C培养40天，得 到二级栽培种；
[0027] 步骤5、收获，将二级栽培种接种与培养，猪苓菌核大量形成，初始为白色，中期是 褐色，后期是黑色，停止生长，进行收获，摘掉猪苓，太阳下晒干，为成品猪苓。
[0028] 下面结合具体的人工栽培猪苓的菌种驯化过程来说明本发明的技术效果：
[0029] 试验用当归、黄芪和柴胡的药渣通过四因素四水平正交试验确定驯化方案。四因 素指母种的加富PDA培养基配比（A)、原种培养基配比（B)、一级栽培种培养基配比（C)、二 级栽培种培养基配比（D)，四水平指每种培养基中药渣的添加量水平，如表1。
[0030] 表1四因素四水平
【主权项】
1. 一种人工栽培猪苓的菌种驯化方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施： 步骤1、猪苓母种用加富PDA培养基驯化；用加富PDA培养基扩繁母种，以柴胡药渣营 养液代替PDA培养基制作过程中的自来水，灭菌，制成的斜面培养基叫加富PDA培养基，无 菌下接入购买的猪苓母种，置25~26°C培养40天； 步骤2、原种驯化， 猪苓原种培养基是以玉米粒和柴胡药渣粉碎物配制而成；用玉米粒在水中浸泡24小 时，淋去水，将中药渣粉拌入装入菌种瓶中，121°C灭菌1小时，无菌条件下接种已驯化的母 种，置22~24°C培养40天，得到已驯化的原种； 步骤3、一级栽培种驯化，用柴胡药渣培养基驯化已驯化的原种，无菌下在柴胡药渣培 养基中接入已驯化的原种，置22~24°C培养40天，得到一级栽培种； 步骤4、二级栽培种驯化，用柴胡药渣培养基驯化一级栽培种，无菌条件下在柴胡药渣 培养基中接入一级栽培种，置22~24°C培养40天，得到二级栽培种； 步骤5、收获，将二级栽培种接种与培养，猪苓菌核大量形成，初始为白色，中期是褐色， 后期是黑色，停止生长，进行收获，摘掉猪苓，太阳下晒干，为成品猪苓。
2. 根据权利要求1所述的人工栽培猪苓的菌种驯化方法，其特征在于，所述加富PDA培 养基为马铃薯200克、白糖20克、琼脂20克、柴胡药渣营养液1000毫升。
3. 根据权利要求1或2所述的人工栽培猪苓的菌种驯化方法，其特征在于，所述柴胡药 渣营养液通过下述方式制得：称取40克干基柴胡药渣，煮制20分钟，过滤，定容至1000毫 升，得到柴胡药渣营养液。
4. 根据权利要求1所述的人工栽培猪苓的菌种驯化方法，其特征在于，所述步骤2中柴 胡药渣粉与浸泡后的玉米粒的质量比为1:5。
5. 根据权利要求1所述的人工栽培猪苓的菌种驯化方法，其特征在于，所述步骤3和 4中的柴胡药渣培养基通过下述方式制得：按照质量比为4:6称取柴胡药渣与栎木木肩，将 拌匀中药渣与栎木木肩，加水至含水量50%，装入菌种瓶中，121 °C灭菌1小时，制备得到柴 胡药渣培养基。
【专利摘要】本发明提供一种人工栽培猪苓的菌种驯化方法，具体按照以下步骤实施：猪苓母种用加富PDA培养基驯化；原种驯化；一级栽培种驯化；二级栽培种驯化。本发明对猪苓母种进行营养物驯化，使之适合于药渣代料上生长，生长速度快，质量好，可以全人工栽培。这种驯化方法，可以节省了大量的栎木木料，减少了因猪苓栽培带来的对森林的破坏，又能减少环境的污染，能够带来较大的经济效益、生态效益。
【IPC分类】C12N1-36, A01G1-04, C12R1-645, C12N1-14
【公开号】CN104718983
【申请号】CN201510102436
【发明人】张宗舟, 白玉德, 胥顺堂, 赵良霞
【申请人】甘肃天水岐黄药业有限责任公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年3月7日