种。
[0024] (2)二级菌种培养：
[0025]制备菌种培养液：称取马铃薯200克、生石灰4克、核酸0. 5克、和草木灰4克，先 将土豆煮以沸水20分钟过滤，将生石灰和草木灰以沸水冲开，定容至1000 ml后高压灭菌30 分钟，冷却后即为菌种培养液。
[0026] 用500ml三角瓶装上述制备好的菌种培养液400ml，将一级菌种2克接种到菌种 培养液中，在温度30°C，二氧化碳补偿点是55mg/LC02 (30°C，光照Iklx左右），相对湿度 60%的环境培养箱中培养20天，看到培养液由白变为红色，即得到二级菌种。
[0027] ⑶子实体培养：
[0028]制备生长栽培培养基：分别称取马铃薯600克、生石灰200克、甘蔗粉100克、牛肉 细粉1〇〇克、大米1000克、合计2000克为1份，分为40份装瓶，即每瓶装生长栽培培养基 50克。
[0029] 将二级菌种滴入生长栽培培养基中心每瓶滴入液体0. 3ml，在培养室中培养60 天，即可获得圆形牛樟芝子实体。子实体培养条件为：温度26°C，相对湿度90%以上，每天9 小时光照，二氧化碳补偿点是55mg/LC0 2 (26°C，光照Iklx左右），每天开门1小时通风。培 养30天后进行开瓶盖培养，每天一次向空间喷雾状水以保证相对湿度。
[0030] 本实施例所栽培得到的牛樟芝子实体呈片状、圆形，鲜活时为砖红色，每片约7克 重，冻干后红褐色。每片约0.6克重，鲜品持水量86%。质量为明显菇肉状，有韧性、有樟香 味、品尝时味觉明显、辛、苦。
[0031] (4)菌种检测和鉴定
[0032] 经上海市食品安全工程技术研宄中心检测，上述制备得到的菌种子实体，其樟芝 三萜含量为2.08g/100g，樟芝多糖（中国药典2010版）含量为10.43g/100g，含有各种营 养成份（如下表1所示），显示与野生牛樟芝的相关含量一致。
[0033] 此外，经上海交通大学和派森诺生物科技有限公司进行基因图谱测定，上述制备 得到的菌种子实体与已知牛樟芝菌种的同源性达到99%~100%，根据分子学鉴定同源性 分析，同源性在96%以上可以认为是同一种属，因此鉴定结果显示实验菌株为樟芝。
[0034] 表1营养成分检测结果
[0035]
【主权项】
1. 一种牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 一级菌种培养：取牛樟芝野生子实体或染有牛樟芝菌的牛樟木，除杂菌后放入培 养箱中，在无菌状态下以温度为26°C、相对湿度为60 %~90 %的条件恢复培养15~20天， 得到一级菌种； (2) 二级菌种培养：将上述一级菌种接种到培养液中，以光照强度为lklx、温度为 30°C、相对湿度为60%的条件培养20天，培养液由白色变为红色，得到二级菌种； (3) 子实体培养：将上述二级菌种滴入生长栽培培养基中心，以光照强度为lklx、温度 为26°C、相对湿度为90%以上的条件培养60天，即得到牛樟芝子实体。
2. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，步骤（2)中所述的菌 种培养液采用以下方法制备： 分别称取下述质量份的马铃薯、生石灰、核酸和草木灰：马铃薯400份、生石灰8份、核 酸1份和草木灰8份；将马铃薯以沸水煮20分钟、将生石灰和草木灰以沸水冲开；混合并以 水定容至每IL混合液中分别含有马铃薯200克、生石灰4克、核酸0. 5克和草木灰4克，然 后冷却，即得到所述的菌种培养液。
3. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤（2)中进行 二级菌种培养时，在规格为500ml的三角玻璃瓶中进行，且每个三角玻璃瓶内装有菌种培 养液400ml。
4. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，步骤（3)中所述的生 长栽培培养基采用以下方法制备： 分别称取下述质量份的马铃薯、生石灰、甘蔗粉、牛肉细粉和大米：马铃薯6份、生石灰 2份、甘蔗粉1份、牛肉细粉1份和大米10份，混合均匀，即得到所述生长栽培培养基。
5. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤（3)中进行 子实体培养时，将二级菌种滴入生长栽培培养基时的配比为：每50克所述生长栽培培养基 上滴入0. 3ml所述二级菌种。
6. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤（3)中进行 子实体培养时，在规格为直径9cm、高9cm的圆柱形玻璃瓶中进行培养。
7. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤（3)中进行 子实体培养时，培养期的前30天为密封培养期，后30天为非密封培养期。
8. 根据权利要求7所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，在所述非密封培养 期，每天向栽培所述牛樟芝子实体的空间内喷洒雾状水。
9. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤（3)中进行 子实体培养时，每天通风1小时以上，每天光照时间9小时。
10. 根据权利要求1所述的牛樟芝子实体的栽培方法，其特征在于，所述步骤（2)进行 二级菌种培养时和步骤（3)进行子实体培养时，二氧化碳补偿点均为55mg/LC02。
【专利摘要】本发明属于农业生物技术领域，公开了一种牛樟芝子实体的栽培方法，该方法选取牛樟芝野生子实体或染有牛樟芝菌的牛樟木，除杂菌后首先在培养箱中培养出一级菌种；然后将一级菌种接种到培养液中，以适宜的条件在玻璃瓶中培养出二级菌种；最后将二级菌种滴入生长栽培培养基中心，进一步培养得到牛樟芝子实体。经检测，采用本发明所提供的方法制备得到的牛樟芝子实体的各种理化指标与野生牛樟芝一致。本发明所提供的瓶栽式的牛樟芝子实体培养方法具有成本低、产量高的特点，适合于工厂化生产。
【IPC分类】A01G1-04, C05G3-00
【公开号】CN104756754
【申请号】CN201510056752
【发明人】管荣良, 陈国义, 裘东辉, 周龙, 陈宇, 王伟萍, 王芳, 王静
【申请人】上海勤生缘生物科技有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年2月3日