一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种牛樟芝子实体的培育方法，尤其涉及一种以龙脑樟段木为基质培育牛樟芝子实体的方法。
【背景技术】
[0002]牛樟芝(Antrodia camphorata)又名牛樟燕，为中国台湾地区特有真菌，是迄今牛樟树上发现的唯一木腐菌。其宿主专一性较强，仅生长于牛樟树上，而牛樟树为中国台湾地区特有的保育类树种，数量稀少。牛樟芝含有许多的生理活性成分，如多糖体、三萜类化合物、超氧歧化酶、腺苷、蛋白质(含免疫蛋白)、维生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、甾醇类、纤维素、血压稳定物质等。牛樟芝的有效成分中以三萜类化合物为最特别，高达200种以上，是其他菌类无法比拟的，使牛樟芝具有显著的抗癌、保肝等功效。牛樟芝子实体气芳香味辛苦、平，有祛风行气、化淤活血、温中消结、解毒消肿、镇静止痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、提升机体免疫力之效；对于治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、食物中毒、毒蕈中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有独特功能。
[0003]目前关于牛樟芝的人工培育方法，主要有液体深层发酵法、太空包法、皿式培养法及牛樟木段木培育法。以上方法各有其缺点，液体深层发酵法虽然周期短，但是得到的是菌丝体的形式，牛樟芝特有的三萜类化合物不能合成；太空包法及皿式培养法仅有含量极低的三萜类化合物；牛樟芝段木培育法能得到与野生牛樟芝完全一致的子实体，但是需要以牛樟木为基质，存在资源稀少、成本较高的缺点。
[0004]龙脑樟树(Cirmamonun camphora)原产于印尼苏门答腊岛，1988年湖南首次发现有分布，现在已发展龙脑樟林木超过4万亩；随后江西也发展近万亩。
[0005]迄今为止，还未有以龙脑樟段木为基质进行牛樟芝栽培的报道。
【发明内容】
[0006]本发明目的是针对现有技术的不足，提供一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法，本发明扩大了牛樟芝宿主范围，保护了珍稀的牛樟树资源，子实体与野生牛樟芝功效成分一致，三蔽总量不少于80mg/100g，总多糖不少于50mg/100g，促进了牛樟芝产业的发展。
[0007]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:一种利用龙脑樟段木培育牛樟芝子实体的方法，该方法包括以下步骤:
[0008](I)将牛樟芝菌种接种到斜面培养基中，于20_30°C培养10-30d，制得斜面菌种；所述斜面培养基为:龙脑樟提取液10-20mL/L，蔗糖10_30g/L，MgSO4.7H20 0.5_2g/L，K2HPO4.3H20 l_5g/L，维生素Bj-lOmg/L，琼脂15_20g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH为6.0-7.0 ;其中，所述龙脑樟提取液为:龙脑樟木料粉碎，过40目筛，得龙脑樟木料粉，按照龙脑樟木料粉和水的质量比1:200加水，常压煮沸2小时，过滤得龙脑樟提取液；所述马铃薯提取液为:马铃薯100-300g去皮切块，得马铃薯块，按照马铃薯块和水的质量比1-3:10加水，常压煮沸30min，过滤得马铃薯提取液。
[0009](2)用无菌水冲洗步骤I制得的斜面菌种的孢子，制成孢子悬液，并用无菌水将孢子悬液的OD6。。调整为1.5;
[0010](3)将步骤2制成的孢子悬液按5% -10% (v/v)的比例接种到液体菌种培养基，于25-35 °C、100-200r/min条件下，避光培养5_25d，制得液体菌种；所述液体菌种培养基为:龙脑樟提取液 10-20mL/L，蔗糖 10_30g/L，MgSO4.7H200.5_2g/L，K2HPO4.3H20 l_5g/L，维生素Bj-lOmg/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH为6.0-7.0 ;
[0011](4)将龙脑樟木料分解成5X 10X20cm的段木，用水浸泡12_48h，然后121°C灭菌20-60min。冷却后，将步骤3制得的液体菌种接种到龙脑樟段木上。
[0012](5)于25_35°C、湿度70%-90%条件下，避光培养1-12个月。
[0013](6)铲掉龙脑樟木段木表面的牛樟芝菌丝体形成的菌皮，于20-40°C、湿度70% -90%，避光培养12-36个月，即可得到牛樟芝子实体。
[0014]进一步地，采收后的龙脑樟段木，喷水湿润后继续培养，重复步骤(5)和(6)，可再收获1-2次牛樟芝子实体。
[0015]本发明的有益效果是:本发明具有产量高、周期短、功效成分与野生牛樟芝一致、原料来源丰富稳定等特点，其三蔽总量不少于80mg/100g，总多糖不少于50mg/100g ;实现了牛樟芝宿主范围的扩大，既有利于对资源稀少的牛樟树的保护，又促进了牛樟芝产业的发展，能带来良好的生态效应、社会效应及经济效应。
【附图说明】
[0016]图1为正在培养中的牛樟芝子实体的实物图；
[0017]图2为采收后的牛樟芝子实体的实物图。
【具体实施方式】
[0018]下面结合具体实施例，对本发明进行进一步的描述，但本发明所保护的范围并不仅限于此:
[0019]实施例1:牛樟芝子实体培育
[0020]1.配制斜面培养基:龙脑樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4.7H20 0.5g/L，K2HPO4.3H20 lg/L，维生素Bjmg/L，琼脂15g/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH 6.0。龙脑樟提取液为:龙脑樟木料粉碎，过40目筛，得龙脑樟木料粉，按照龙脑樟木料粉和水的质量比1:200加水，常压煮沸2小时，过滤得龙脑樟提取液；马铃薯提取液为:马铃薯100-300g去皮切块，得马铃薯块，按照马铃薯块和水的质量比1-3:10加水，常压煮沸30min，过滤得马铃薯提取液。
[0021]2.将牛樟芝菌种接种到斜面培养基，于20°C避光培养7-20d，制得斜面菌种。
[0022]3.用无菌水洗下斜面菌种上的孢子，用无菌水将孢子悬液的0D_调整为1.5，以5% (v/V)的接种量接入液体种子培养基，于28°C、200r/min条件下，避光培养3d。所述液体种子培养基配方:液体种子培养基:龙脑樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4.7H20 0.5g/L，K2HPO4.3H20 lg/L，维生素Bjmg/L，用马铃薯提取液补足体积至1L，pH 6.0。
[0023]4.龙脑樟木料分解成大小为5 X 10 X 20cm的段木，用水浸泡8h，然后121°C高温灭菌20min。冷却后，将液体菌种接种到龙脑樟段木。
[0024]5.于20°C、湿度70%条件下，避光培养1-12个月。
[0025]6.1产掉龙脑樟木段木表面牛樟芝菌丝体形成的菌皮，于20°C、湿度70%，避光培养12-36个月，可得到牛樟芝子实体。
[0026]7.采收后的龙脑樟段木，喷水湿润后继续培养，重复步骤5和6，可再收获1-2次牛樟芝子实体。
[0027]