/m*100(m:未加入任何物质时的藻溶液0D_的值；η= 加入溶藻生物制剂后藻溶液〇D6S。的值）进行计算。
[0046] l)500ml的铜绿微囊藻905藻溶液，在藻浓度为l*107cell/ml (0D6S。=0. 57)时，按 照10mg/L的比例加入实施例1中制备的溶藻生物制剂，每个12小时监测一次。72小时后， 铜绿微囊藻藻细胞〇D_由0. 57剧减为0. 07,去除率：87. 72%(图1)。去除率=(m-n)/ m*100 (m :未加入任何物质时的藻溶液0D_的值；η=加入溶藻生物制剂后藻溶液0D6S。的 值）
[0047] 2) 500ml的铜绿微囊藻905藻溶液，在藻浓度为l*107cell/ml (0D6S。=0. 57)时， 按照l〇mg/L的比例加入实施例2中制备的溶藻生物制剂，每个12小时监测一次。72小时 后，铜绿微囊藻藻细胞〇D_由0. 57剧减为0. 05,去除率：91. 23%。其效果如图2,去除率 =(m-n)/m*100(m :未加入任何物质时的藻溶液0D6S。的值；η=加入溶藻生物制剂后藻溶液 〇D6S。的值）。
[0048] 3) 500ml的铜绿微囊藻905藻溶液，在藻浓度为l*107cell/ml (0D6S。=0. 57)时， 按照l〇mg/L的比例加入实施例3中制备的溶藻生物制剂，每个12小时监测一次。72小时 后，铜绿微囊藻藻细胞〇D_由0. 57剧减为0. 09,去除率：84. 21%(图3)去除率=(m-n)/ m*100 (m :未加入任何物质时的藻溶液0D_的值；η=加入溶藻生物制剂后藻溶液0D6S。的 值）
[0049] 4)500ml的铜绿微囊藻905藻溶液，在藻浓度为l*107cell/ml(0D6S。= 0· 57)时，按 照10mg/L的比例加入实施例4中制备的溶藻生物制剂，每个12小时监测一次。72小时后， 铜绿微囊藻藻细胞〇D_由0. 57剧减为0. 02,去除率：94. 49% (图4)。去除率=(m-n)/ m*100(m:未加入任何物质时的藻溶液0D_的值；η=加入溶藻生物制剂后藻溶液0D6S。的 值）
[0050] 实施例6 :
[0051] -种溶藻生物制剂的应用，其应用过程是：
[0052] 按照实施例1的比例依次称取粉状微生物菌剂、维生素和乳糖，将混合而成的粉 剂溶藻组合物质按〇. 〇lg/L比例取适量，投入铜绿微囊藻溶液，其原液0D_ = 0. 58,每隔12 小时测水体藻细胞吸光度值，共处理监测72个小时。
[0053] 实施例2、3、4具体制备和应用过程如实施例1。
[0054] 实施例7 :
[0055] -种溶藻生物制剂在去除铜绿微囊藻的应用，其过程如下：
[0056] 一个处理组，一个对照组，对照组不做任何处理，处理组做了 3个平行。
[0057] 在5L的玻璃缸中加入3L铜绿微囊藻905藻溶液藻细胞浓度为l*107cell/ml共4 个缸，在其中3个玻璃缸中按照10mg/L的比例加入以实施例4配方制得的溶藻生物制剂， 剩余1玻璃缸为对照组不做任何处理。每隔12小时监测一次，共检测72小时。分别检测 试验组和对照组水体中的叶绿素a含量（yg/L)、溶氧量（D0)、MCs含量、藻细胞浓度。
[0058] 叶绿素a含量（μg/L)与吸光度（0D_) -样都作为微囊藻种群密度指标，数据增 大代表藻类生长良好，数据下降代表藻类死亡。其测定使用甲醇萃取法，其步骤：取50ml藻 液，3500r/min，离心15min，弃上清液；等体积加入90%甲醇倒入离心管中，摇动后置于黑 暗低温处4°C，6-8小时；4000r/min下离心15min,以90%甲醇作参比，在665nm波长处 测定吸光度。
[0059] 并用以下公式计算出叶绿素a含量：C(yg/L) = 0D665*13. 9*1000
[0060] 铜绿微囊藻细胞叶绿素a含量的变化与藻细胞密度（0D_)的变化基本上一致。随 着时间的推移，对照组的叶绿素a含量逐渐增加，而处理组叶绿素a的含量较对照组有明 显的下降，结果见附图5。处理组的叶绿素a含量由由1172μg/L剧减为47. 65μg/L，去除 率：95. 93%。去除率=(m-n)/m*100(m:未加入任何物质时的藻溶液0D665的值；η=加入溶 藻生物制剂后藻溶液〇D665的值）。叶绿素a含量（μg/L)与吸光度（0D_) -样都作为微 囊藻种群密度指标，数据增大代表藻类生长良好，数据下降代表藻类死亡。
[0061] 其中水体中溶氧量（D0)mg/L的测定使用溶氧仪Dissolvedoxygenmete,处理组 和对照组水体中溶氧量没有变化，这表明本发明所述的溶藻生物制剂在处理水体杀灭铜绿 微囊藻时，并未消耗使水体中的氧结果见附图6,处理组和对照组的水体中溶解氧含量基本 保持不变，均保持在6mg/L左右。因此，在使用产品时无需担心水体缺氧而对养殖造成危 害。
[0062] 水体中MCs含量的测定，采用微囊藻毒素ELISA检测试剂盒（美国Beacon公司， cat. #20-0068)检测。结果见附图7,处理组中MCs含量先升高后降低，由0. 58μg/L先升 高到最高值0.74μg/L，然后最终下降到0.61μg/L。对照组无明显变化。即使藻毒素含量 达到最大值〇.74yg/L时，最终MCs含量也符合世界卫生组织推荐的限量lyg/L)。因 此不需担心微囊藻溶解后藻毒素残留问题。
[0063] 水体中藻细胞浓度的测量与计算如实施例5,结果见附图8。对照组铜绿微囊藻藻 细胞〇D6S。由0. 62到0. 63基本保持不变，而处理组铜绿微囊藻藻细胞0D_由0. 62剧减为 〇· 03,去除率：95· 16%。
[0064] 实施例8 :
[0065] 生物安全性检测
[0066] 产品对鱼幼苗成活率及生长率的影响：
[0067] 一个处理组，一个对照组，对照组不做任何处理，处理组做了 3个平行。
[0068] 利用实施例4所述配方制得的制剂，按0. 01g/L的比例投加到40L的塑料桶鱼缸 中，塑料桶鱼缸中投放1500尾鱼苗。共设置3个鱼缸作为处理组。对照组只投放1500尾 鱼苗，不做任何处理。一周后计算黄颡鱼鱼苗的成活率。使用该产品于黄颡鱼鱼苗的培育， 试验组鱼苗成活率达到34. 67%，对照组的鱼苗成活率为33. 8%。试验组鱼苗与对照组鱼 苗成长规格也相当（详见表1)，结果表明这种溶藻生物制剂在水体中安全、无毒害，对水体 中的养殖生物无影响。
[0069]表1
[0070]
【主权项】
1. 一种溶藻生物制剂，其配方如下： 原料 重量份 枯草芽孢杆菌 〇. 3~4 ; 地衣芽孢杆菌 〇. 5~3 ; 侧孢芽孢杆菌 2~3 ; 粪链球菌 0. 8~2 ; 光合细菌 2~4 ; 鞘氨醇单胞菌 〇. 5~1 维生素C 0.Γ2 维生素E 0.Γ1. 5 ； 乳糖 0. 1~0. 5。2. 根据权利要求1所述的溶藻生物制剂，其特征在于： 原料 重量份 枯草芽孢杆菌 1 ; 地衣芽孢杆菌 1 ; 侧孢芽孢杆菌 2 ; 粪链球菌 1 ; 光合细菌 2 ; 鞘氨醇单胞菌 1 ; 维生素C 0. 5 ； 维生素E 1 ； 乳糖 0.3。3. 根据权利要求1所述的溶藻生物制剂，其特征在于：所述的地衣芽孢杆菌和侧孢芽 孢杆菌菌粉购自湖北绿天地生物科技有限公司，各菌含量300亿/g;鞘氨醇单胞菌、枯草芽 孢杆菌菌粉购自上海勒布生物科技有限公司，菌含量是300亿/g;所述的粪链球菌、光合细 菌菌粉购自湖北天辰生物科技有限公司，菌含量50亿/g。4. 权利要求1所述的溶藻生物制剂在去除蓝藻中的应用。
【专利摘要】本发明公开一种溶藻生物制剂及应用。该菌剂由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、粪链球菌、光合细菌、鞘氨醇单胞菌、维生素C、维生素E和乳糖混合而成。该产品具有良好的稳定性和高效性，施用过程中耗氧极低，迅速降解养殖水体中的微囊藻等污染物，有效改良水体环境。本发明对环境、人畜无毒无害、无残留，能够显著地改良及净化养殖水体环境，有效避免蓝藻水华的爆发，同时还能提高水产动物的免疫力，减少发病率，使整个养殖水体生态系统趋于平衡并向良好方向发展。
【IPC分类】A01P13/00, A01P1/00, C02F3/34, A01N63/00
【公开号】CN105309479
【申请号】CN201410320879
【发明人】张学振, 陈元元, 魏晋, 吴康
【申请人】华中农业大学
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年7月8日