一种动员剂组合物及其应用、制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物化学技术领域，特别设及一种动员剂组合物及其应用、制剂。
【背景技术】
[0002] 随着肿瘤新的化疗药物的发现，放化疗技术的改进，杀伤肿瘤细胞的效应也不断 提高，从理论上看，放化疗的剂量与杀伤肿瘤细胞数量、治疗效果等应该成线性关系，可是 放化疗的副作用限制了剂量增加的作用，从而影响患者的预后，造血干细胞移植能在一定 程度上解决运一问题，提高针对血液病和血液系统恶性肿瘤的治疗效果，改善患者预后。
[0003] 造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，是所有造血细胞和免疫细胞的起源，它 不仅可W分化为红细胞、白细胞和血小板，还可跨系统分化为各种组织器官的细胞，具有自 我更新、多向分化和归巢（即定向迁移至造血组织器官）潜能。造血干细胞有两个重要特 征：其一，高度的自我更新或自我复制能力；其二，可分化成所有类型的血细胞。造血干细 胞采用不对称的分裂方式：由一个细胞分裂为两个细胞。在正常情况下，大多数多能干细胞 处于静止状态，当机体发生某些改变而需要时，一部分多能干细胞就会分裂增殖。其中一个 细胞仍然保持干细胞的一切生物特性，从而保持身体内干细胞数量相对稳定，运就是干细 胞自我更新。而另一个则进一步增殖分化为各类血细胞、前体细胞和成熟血细胞，释放到外 周血中，参与调节机体各项循环。
[0004] 造血干细胞根据其来源不同，分为外周血造血干细胞、骨髓造血干细胞、厮血造血 干细胞。厮血移植经常不能成功地运用于成年人，与骨髓移植相比，外周血造血干细胞移植 具有采集方便，对患者损害小、可短时间多次采集的优点。随着血细胞分离机应用于外周血 造血干细胞的采集，外周血造血干细胞动员、分离和采集技术的改良，外周血造血干细胞移 植有逐渐替代骨髓造血干细胞移植的趋势。 阳0化]造血干细胞化SC)移植技术主要包括干细胞的鉴别，活性测定，干细胞的采集，分 离纯化，动员，扩增，干细胞保存，肿瘤细胞的净化，干细胞改造W及干细胞操作专用仪器、 材料和试剂的开发生产等。外周血干细胞（PBSC)是骨髓移植的良好替代物。PBSC动员的 方式有=种，即大剂量化疗、单用造血生长因子（HG巧和二者合用。异体供者单用HGF动员， 肿瘤患者则采用大剂量化疗和（或）HGF。HGF较常用的是G-CSF(粒细胞集落刺激因子） 或GM-CSF(人粒细胞-巨隧细胞集落刺激因子），G-CSF效果优于GM-CSF，后者副作用明显 多于前者。大剂量化疗多采用环憐酷胺（CT讶4~7g/m2静滴，可使外周血CFU-GM提高50 倍W上，化疗与HGF合用可使CFU-GM提高百倍W上，最高可达1000倍左右。临床及实验研 究发现，比-1、比-3、比-6、比-11、化〇、5〔。、？巧￥321、]\0?-1〇虽也有动员作用，但单用效果 不佳。
[0006] AMD3100,商品名为Plerixa化r(普乐沙福），是一系列新颖的小分子CXCR4趋化 因子受体括抗剂，多项早期研究显示可快速有效地增加饥正和MM患者血液循环中的干细胞 数。普乐沙福与粒细胞集落刺激因子（G-CS巧联合用药来促进红细胞生成素干细胞进入非 霍奇金淋己瘤（NHL)和多发性骨髓瘤（MM)患者血流W收集、随后自体移植。
[0007] 造血干细胞移植技术运用前景广阔，但单独应用G-CSF、G-CSF/CTX、AMD3100时， 需要进行多次细胞采集才能获取足够量的干细胞，对于骨髓抑制的病人，由于用药剂量大， 其中的不良反应也相应增加，造血机能恢复缓慢或是无法恢复，致使患者机体调节素乱乃 至死亡。因此需要寻找一种快速动员且不损伤造血机能和人体其他器官的动员剂。
【发明内容】
[0008] 有鉴于此，本发明提供了一种动员剂组合物及其应用、制剂。该动员剂组合物联合 使用后可产生协同增效作用，既可W大大缩短动员剂动员的时间，又可W提高动员后单个 核细胞的活力，大大减少了各组分的临床用量。
[0009] 为了实现上述发明目的，本发明提供W下技术方案：
[0010] 本发明提供了一种动员剂组合物，包括AMD3100、CTX(环憐酷胺）和G-SCF(粒细 胞集落刺激因子）。
[0011] 在本发明中，将AMD3100、CTX与G-SCF联合使用后，可产生协同增效作用，既可W 大大缩短动员剂动员的时间，又可W提高动员后单个核细胞的活力，大大减少了各组分的 临床用量。 阳01引 作为优选，AMD3100、CTX与G-SCF的质量比为（1000~2000) : (1000~3000): (2 ~10)。 阳〇1引 优选地，AMD3100、CTX与G-SCF的质量比为2000 :2000 :2。
[0014]优选地，AMD3100、CTX与G-SCF的质量比为 1000 :3000 :5。 阳01引 优选地，AMD3100、CTX与G-SCF的质量比为1500 :1000 :10。
[0016] 本发明还提供了该动员剂组合物在制备造血干细胞动员剂中的应用；该动员剂组 合物包括AMD3100XTX(环憐酷胺）和G-SCF(粒细胞集落刺激因子）；作为优选，AMD3100、 CTX与G-SCF的质量比为（1000 ~2000) : (1000 ~3000) : (2 ~10);优选地，AMD3100XTX 与G-SCF的质量比为2000 :2000 :2 ;优选地，AMD3100XTX与G-SCF的质量比为1000 :3000 : 5;优选地，AMD3100、CTX与G-SCF的质量比为 1500 :1000 :10。
[0017] 在本发明提供的一些实施例中，造血干细胞为外周血造血干细胞。但本发明并非 限定于此，本领域技术人员认为可行的造血干细胞的种类均在本发明的保护范围之内。
[0018] 本发明还提供了一种造血干细胞动员剂，包括本发明动员剂组合物；该动员剂组 合物包括AMD3100XTX(环憐酷胺）和G-SCF(粒细胞集落刺激因子）；作为优选，AMD3100、 CTX与G-SCF的质量比为（1000 ~2000) : (1000 ~3000) : (2 ~10);优选地，AMD3100XTX 与G-SCF的质量比为2000 :2000 :2 ;优选地，AMD3100XTX与G-SCF的质量比为1000 :3000 : 5;优选地，AMD3100、CTX与G-SCF的质量比为 1500 :1000 :10。
[0019] 在本发明提供的一些实施例中，造血干细胞动员剂的剂型为注射剂。
[0020] 本发明还提供了一种非诊断目的的造血干细胞的动员方法，采用本发明动员剂组 合物，或本发明造血干细胞动员剂对造血干细胞进行动员。
[0021] 作为优选，动员方法为：
[0022] W本发明动员剂组合物，或本发明造血干细胞动员剂作为动员剂，分=次进行动 员；动员剂中，AMD3100的剂量为1000~2000yg/kg/d，CTX的剂量为1000~3000yg/kg/ d，G-SCF的剂量为 2 ~10yg/kg/d;
[0023] 第一次动员：施用1/2剂量的动员剂，时间化；
[0024] 第二次动员：施用1/4剂量的动员剂，时间4h;
[0025] 第S次动员：施用1/4剂量的动员剂，时间2~化。 阳0%] 作为优选，第S次动员的时间为化。
[0027] 本发明提供了一种动员剂组合物及其应用、制剂。该动员剂组合物包括AMD3100、 CTX和G-SCF。本发明至少具有如下优势之一： 阳02引 1、本发明的动员剂组合物动员时间短，相比现有技术需要几天的动员时间，更好 地保护患者的身体机能的稳定；
[0029] 2、动员后的单个核细胞活力相比对照组高，且得到表达CD34的细胞要多；
[0030]3、本发明的动员剂组合物各组份浓度用量远远比在临床上运用的小，对本身有重 大负担的器官、系统减少损害；
[0031] 4、动员后的外周血造血干细胞能满足供者的治疗需求，且对患者的副作用小，提 高患者生活质量，给患者保持良好预后的身体条件。
【附图说明】
[0032] 图1示采血时间与PBMC数量关系图。
【具体实施方式】
[0033] 本发明公开了一种动员剂组合物及其应用、制剂，本领域技术人员可W借鉴本文 内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人 员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实 施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法 和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0034] 本发明提供的动员剂组合物及其应用、制剂中所用试剂、仪器等均可由市场购得。
[0035] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0036] 实施例1动员剂组合物的配制
[0037] 用DMS0溶解AMD3100(购于Sigma公司），并W生理盐水配制成浓度为：l〇〇yg/ mL的溶液；
[0038] 用生理盐水稀释CTX(购于江苏恒瑞医药股份有限公司）成浓度为：100yg/mL;
[0039] 用生理盐水稀释G-CSF(购于华北制药金坦生物技术股份有限公司）成浓度为： 1y邑/ml;
[0040] 100yg/mL的AMD3100,浓度为 100yg/mL的CTX，浓度为 1yg/mL的G-SCF，作为 动员剂组合物。
[0041] 实施例2造血干细胞动员试验
[0042] W雌雄各40只大鼠（购买于广东省医学实验动物中屯、），体重均在200g左右为实 验对象，随机分成八组，每组10只，四组为对照组，四组为实验组。正常条件下饲养一周，注 射动员剂前，采集大鼠外周血，进行外周血单个核细胞计数和活力检测，确保各组大鼠分组 均匀，如表1所示。
[0043] 表1动员前大鼠外周血单个核细胞计数
[0044]
[0045] 由表1可知，对照组和实验组大鼠在动员前外周血分离到的单个核细胞数W及细 胞活力没有差别，证明各组大鼠分组均匀。
[0046] 给药方式：
[0047] 实验组大鼠W:W实施例1制备的动员剂组合物进行给药，AMD3100W总量为2mg/ kg/d的剂量，CTXW总量为2mg/kg/d的剂量，G-SCFW总量为2yg/kg/d的剂量混合，分S 次静脉注射，第一次注射W总量的二分之一注射，间隔=小时进行第二次注射，第二注射W 剩余量的二分之一注射，间隔四小时再进行第=次注射，第=次注射完所有剩余量的动员 剂；
[0048] 对照组则W等同的体积生理盐水注射。
[0049] 注射完动员剂之后间隔=小时进行采集大鼠外周血，用percoll细胞分离液进行 分离单个核细胞，吸取白膜层，PBS清洗S次后计数及其活力。
[0050] 抽取2X106个细胞，WCD34 +为表面抗体标志进行流式细胞术检测，得到CD34 +的 百分比，外周血PBMCXCD34+的百分比，即是外周血中造血干细胞数