，试验结果见表2。
[0051] 表2动员后大鼠外周血单个核细胞
[0052]
[0053] 注：★表示实验组与对照组比较，P<0. 05。
[0054] 由表2得到，注射动员剂组合物后，实验组和对照组相比，P<0. 05,具有统计学意 义，即是本发明动员剂组合物能有效地动员造血干细胞至外周血中。 阳化日]实施例3造血干细胞动员试验
[0056] (AMD3100+G-CSF+CTX)组合与（G-CSF+CTX)组合对比实验：
[0057]W每组10只雌雄混淆70只大鼠（购买于广东省医学实验动物中屯、），体重均在 200g左右为实验对象，随机分成屯组，一组为对照组，六组为实验组。其中，S组实验组用 AMD3100+G-CSF+CTX动员外周血造血干细胞，另外S组实验组用G-CSF+CTX动员外周血造 血干细胞：
[0058] (AMD3100+G-CSF+CTX)组：AMD3100W总量为2mg/kg/d的剂量，CTXW总量为2mg/ kg/d的剂量，G-SCFW总量为2yg/kg/d的剂量混合，分S次静脉注射；
[0059] (G-CSF+CT讶组：CTXW总量为4mg/kg/d的剂量，G-SCFW总量为4g/kg/d的剂量 混合，分=次静脉注射。
[0060]=次静脉注射的方式为：第一次注射W总量的二分之一注射，间隔=小时进行第 二次注射，第二注射W剩余量的二分之一注射，间隔四小时再进行第=次注射，第=次注射 完所有剩余量的动员剂。
[0061] 对照组则W等同的体积生理盐水注射。
[0062] 注射完动员剂之后间隔S小时进行采集大鼠外周血5mU用percoll细胞分离液 进行分离单个核细胞，吸取白膜层，PBS清洗=次后计数；WCD34+为表面抗体标志进行流 式细胞术检测，得到CD34+的百分比，即是外周血PBMCXCD34 +的百分比。试验结果如下：
[0063] 表3动员后大鼠外周血单个核细胞
[0064]
阳0化]注：▲表示实验组与对照组比较，P<0. 05。
[0066] 由表3得到，两组实验组相比，（AMD3100+G-CSF+CT讶组较（G-CSF+CT讶组得到的 PBMC更多，CD34+表达率更高，即是（AMD3100+G-CSF+CT讶组更有效地动员出外周血造血干 细胞。 阳067] 实施例4造血干细胞动员试验
[0068] (AMD3100+G-CSF+CTX)组合与（AMD3100)组对比实验：
[0069] W每组10只雌雄混淆70只大鼠（购买于广东省医学实验动物中屯、），体重均在 200g左右为实验对象，随机分成屯组，一组为对照组，六组为实验组。其中，S组实验组用 AMD3100+G-CSF+CTX动员外周血造血干细胞，另外S组实验组用AMD3100单独动员外周血 造血干细胞：
[0070] (AMD3100+G-CSF+CTX)组：AMD3100W总量为2mg/kg/d的剂量，CTXW总量为2mg/ kg/d的剂量，G-SCFW总量为2yg/kg/d的剂量混合，分S次静脉注射；
[0071] (AMD3100)组：AMD3100w总量为8mg/kg/d的剂量，分S次静脉注射；
[0072]=次静脉注射方式为：第一次注射W总量的二分之一注射，间隔=小时进行第二 次注射，第二注射W剩余量的二分之一注射，间隔四小时再进行第=次注射，第=次注射完 所有剩余量的动员剂；
[0073] 对照组则W等同的体积生理盐水注射。 阳074] 注射完动员剂之后间隔S小时进行采集大鼠外周血5mL，用percoll细胞分离液 进行分离单个核细胞，吸取白膜层，PBS清洗=次后计数；WCD34+为表面抗体标志进行流 式细胞术检测，得到CD34+的百分比，即是外周血PBMCXCD34 +的百分比。试验结果如下：
[0075] 表4动员后大鼠外周血单个核细胞
[0076]
[0077] 注：*表示实验组与对照组比较，P<0. 05。
[0078] 由表4得到，两组实验组相比，（AMD3100+G-CSF+CT讶组较（AMD3100)组得到的 PBMC更多，CD34+表达率更高，即是（AMD3100+G-CSF+CT讶组更有效地动员出外周血造血干 细胞。 阳0巧]实施例5造血干细胞动员试验
[0080] 采血时间确定方案：
[0081] W雌雄各20只大鼠（同购买于广东省医学实验动物中屯、），体重均在200g左右为 实验对象，随机分成四组，每组10只，一组为对照组，=组为实验组，正常条件下饲养一周。 阳0間实验组大鼠W:AMD3100W总量为2mg/kg/d的剂量，CTXW总量为2mg/kg/d的 剂量，G-SCFW总量为2yg/kg/d的剂量混合，分S次静脉注射，第一次注射W总量的二分 之一注射，间隔=小时进行第二次注射，第二注射W剩余量的二分之一注射，间隔四小时再 进行第=次注射，第=次注射完所有剩余量的动员剂；对照组则W等同的体积生理盐水注 射。注射完动员剂之后，分别W间隔0.化、1.Oh、化、3h、4h、5h、化、7h、化进行采集大鼠外周 血5mU用percoll细胞分离液进行分离单个核细胞，吸取白膜层，PBS清洗=次后计数，W CD34+为表面抗体标志进行流式细胞术检测，得到CD34 +的百分比，即是外周血PBMCXCD34 + 的百分比。试验结果见下表：
[0083] 表5采血时间优化实验
[0084]
[0085] 由上表绘制的图表，如图1所示。
[0086] 由表5得到，在动员后，前S小时PBMC数量为上升趋势，到S个小时为最峰值，超 过=小时之后开始呈下降的趋势，即是在动员后=小时采血能得到更多的PBMC，从而得到 更多造血干细胞。
[0087] 实施例6造血干细胞动员试验
[0088] W雌雄各60只大鼠（购买于广东省医学实验动物中屯、），体重均在200g左右为实 验对象，随机分成八组，每组10只，四组为对照组，四组为实验组1，四组为实验组2。正常 条件下饲养一周。
[0089] 给药方式：
[0090] 实验组1大鼠W:W实施例1制备的动员剂组合物进行给药，AMD3100W总量为 Img/kg/d的剂量，CTXW总量为3mg/kg/d的剂量，G-SCFW总量为5yg/kg/d的剂量混合， 分=次静脉注射，第一次注射W总量的二分之一注射，间隔=小时进行第二次注射，第二注 射W剩余量的二分之一注射，间隔四小时再进行第=次注射，第=次注射完所有剩余量的 动员剂； 阳0川实验组2大鼠W:W实施例1制备的动员剂组合物进行给药，AMD3100从當量为 1. 5mg/kg/d的剂量，CTXW总量为Img/kg/d的剂量，G-SCFW总量为10yg/kg/d的剂量混 合，分=次静脉注射，第一次注射W总量的二分之一注射，间隔=小时进行第二次注射，第 二注射W剩余量的二分之一注射，间隔四小时再进行第=次注射，第=次注射完所有剩余 量的动员剂；
[0092] 对照组则W等同的体积生理盐水注射。
[0093] 注射完动员剂之后间隔=小时进行采集大鼠外周血，用percoll细胞分离液进行 分离单个核细胞，吸取白膜层，PBS清洗S次后计数及其活力。
[0094] 抽取2X106个细胞，WCD34 +为表面抗体标志进行流式细胞术检测，得到CD34 +的 百分比，外周血PBMCXCD34+的百分比，即是外周血中造血干细胞数，试验结果见表6。
[0095] 表6动员后大鼠外周血单个核细胞
[0096]
[0097] 注：★表示实验组与对照组比较，P<0. 05。
[0098] 由表6得到，注射动员剂组合物后，实验组1、2和对照组相比，P<0. 05,具有统计学 意义，即是本发明动员剂组合物能有效地动员造血干细胞至外周血中。
[0099] W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可W做出若干改进和润饰，运些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种动员剂组合物，其特征在于，包括AMD3100、CTX和G-SCF。2. 根据权利要求1所述的动员剂组合物，其特征在于，所述AMD3100、所述CTX与所述 G-SCF 的质量比为（1000 ~2000) : (1000 ~3000) : (2 ~10)。3. 根据权利要求2所述的动员剂组合物，其特征在于，所述AMD3100、所述CTX与所述 G-SCF 的质量比为 2000 :2000 :2。4. 如权利要求1至3中任一项所述的动员剂组合物在制备造血干细胞动员剂中的应 用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述造血干细胞为外周血造血干细胞。6. -种造血干细胞动员剂，其特征在于，包括如权利要求1至3中任一项所述的动员剂 组合物。7. 根据权利要求4所述的造血干细胞动员剂，其特征在于，其剂型为注射剂。8. -种造血干细胞的动员方法，其特征在于，采用如权利要求1至3中任一项所述的动 员剂组合物，或如权利要求6或7所述的造血干细胞动员剂对造血干细胞进行动员。9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述动员方法为： 以如权利要求1至3中任一项所述的动员剂组合物，或如权利要求6或7所述的造 血干细胞动员剂作为动员剂，分三次进行动员；所述动员剂中，AMD3100的剂量为1000~ 2000 y g/kg/d，CTX 的剂量为 1000 ~3000 y g/kg/d，G-SCF 的剂量为 2 ~10 y g/kg/d ; 第一次动员：施用1/2剂量的动员剂，时间3h ; 第二次动员：施用1/4剂量的动员剂，时间4h ; 第三次动员：施用1/4剂量的动员剂，时间2~5h。10. 根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述第三次动员的时间为3h。
【专利摘要】本发明涉及生物化学技术领域，特别涉及一种动员剂组合物及其应用、制剂。该动员剂组合物包括AMD3100、CTX和G-SCF。本发明的动员剂组合物动员时间短，相比现有技术需要几天的动员时间，更好地保护患者的身体机能的稳定；动员后的单个核细胞活力相比对照组高，且得到表达CD34的细胞要多；本发明的动员剂组合物各组份浓度用量远远比在临床上运用的小，对本身有重大负担的器官、系统减少损害；动员后的外周血造血干细胞能满足供者的治疗需求，且对患者的副作用小，提高患者生活质量，给患者保持良好预后的身体条件。
【IPC分类】A61K31/395, A61P7/00, A61P35/00, A61K38/18, A61K31/675
【公开号】CN105148256
【申请号】CN201510531013
【发明人】陈海佳, 王一飞, 葛啸虎, 黎娟妹, 李平
【申请人】广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月26日