间为14h/d，增殖培养结束后，将中透艺春兰根状茎放 入装有培养基的培养瓶中，并于培养室内进行分化培养，培养基为3/4MS+6-BA1.0mg · L一b IBA 1 .Omg · L-MOmL · L-1椰乳，培养室温度为27°C，相对湿度为80%，光照强度为3000Lx， 光照时间为l〇h/d，分化培养结束后，将中透艺春兰根状茎放入装有培养基的培养瓶中进行 生根培养，培养基为l/2MS+6-BA1.0mg · L-klBA l.Omg · L-kNAA l.Omg · L-k2g · L-lC+ 5g · L-^VP，培养室温度为27°C，相对湿度为80%，光照强度为3000Lx，光照时间为14h/d。生 根培养结束，即完成中透艺春兰的组培。
[0022] 实施例4-8
[0023] 本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，在增殖培养时的培养基不同，具体 见下表：
[0024]
[0025]由上表可见，3/4MS培养基上的根状茎直径较为粗状，长势最好，明显要优于其它5 种培养基，故选取3/4MS培养基较为适宜。需要说明的是，B5培养基增殖较快，但试验观察， 随着培养时间的增长，植株长势变弱，褐化明显。
[0026] 实施例9-13
[0027] 本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，在增殖培养时的激素浓度及组合不 同，具体见下表：
[0028]
[0029] 由上表可以看出，单独添加 Μ和TDZ均对根状茎的增殖有明显促进作用，但TDZ的 增殖倍数要比BA略高一点。同样的，在相同浓度BA时，添加 TDZ比添加 NAA更能促进根状茎的 生长和增殖。在NAA或者TDZ浓度相同时，低浓度的BA更能促进根状茎的增殖和生长，且根状 茎都为嫩黄或深绿色，而高浓度BA反而使根状茎生长受阻，并出现褐化现象。TDZ 0.5mg · L-1+6-BA l.Omg · L-1 和6-BAl.Omg · L-1+NAA 0.3mg · L-1 组合对根状莖的增殖效果最明 显，且生长状况最好，故宜选用这两个培养基中的其中一个队中透艺春兰根状茎进行培养。
[0030] 实施例14-21
[0031] 本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，在分化培养时的激素浓度不同，具 体见下表：
[0033]由上表可见，随着培养时间的增长，根状茎出芽数和成苗数都呈上升趋势，其中 19-21三个组合的根状茎和分化出的幼苗有褐化现象。添加6-BA和NAA都能使根状茎发芽并 成苗，而随着6-BA和IBA浓度上升，出芽数和成苗数反而下降，这说明高浓度的6-BA和IBA不 利于根状茎的分化，抑制了生长。6-BA l.Omg · L-l +IBA1.0mg · L-1的组合芽分化率达到 97.5%，成苗数为336苗。
[0034] 实施例22-23
[0035] 本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，光照强度不同，具体如下表所示：
[0036]
[0037]由上表可知，相比于lOOOlux和30001ux，20001ux的光照下，根状茎的出苗率和出 艺率都是最好的，过低和过高的光照强度，均不利于中透艺春兰的走向。当光照过低时，或 许因为其需要大量的叶绿素保证生长，导致叶上的黄艺退化。而当光照过高时，小苗生长受 阻。
[0038] 实施例24-25
[0039] 本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，根状茎选材不同，具体如下表所示：
[0040]
[0041] 由上表可以看出，不同根状茎材料对中透艺春兰的艺向走向影响非常大，当选取 整条淡黄色根状茎时，出艺率高达89.8%，而整条为绿色的根状茎的出艺率则为零，这说明 根状茎没有艺，分化出的小苗也很难出现艺。在黄绿兼有的根状茎分化出的小苗中，带艺的 基本为根状茎材料只带稍许绿色的。
[0042] 本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领 域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替 代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
【主权项】
1. 一种中透艺春兰的组培方法，其特征在于，包括以下步骤： A、 选材，在实验室培养中获得的整条都为淡黄色的中透艺春兰根状茎作为组培材料， B、 增殖培养，用含有MS、TDZ、6-BA和椰乳的培养基对中透艺春兰根状茎在培养室进行 增殖培养， C、 分化培养，用含有MS、6-BA、IBA和椰乳的培养基对中透艺春兰根状茎在培养室进行 分化培养， D、 生根培养，用含有13、6-84、184、财4^(：和?￥?的培养基对中透艺春兰根状茎在培养 室进行生根培养。2. 根据权利要求1所述的中透艺春兰的组培方法，其特征在于，在步骤B中，所述的培养 基为3/4MS+TDZ 0.5mg · L-he-BA l.Omg · L-kSOmL · L-1椰乳，在步骤C中，所述的培养基为 3/4MS+6-BA1.0mg · L-klBA l.Omg · L-hSOniL · L-1 椰乳，在步骤D中，所述的培养基为 1/2MS +6-BA1 .Omg · L-hlBA 1 .Omg · L-kNAA 1 .Omg · L-k2g · L-IC+Sg · L-.VP。3. 根据权利要求1或2所述的中透艺春兰的组培方法，其特征在于，所述的培养室温度 为25°C ± 2°C，相对湿度为60%-80%，光照强度为1000-3000LX，光照时间为10-14h/d。4. 根据权利要求3所述的中透艺春兰的组培方法，其特征在于，所述的培养室温度为25 °C，相对湿度为70%，光照强度为2000Lx，光照时间为12h/d。
【专利摘要】本发明属于植物组培领域，涉及一种中透艺春兰的组培方法。包括以下步骤：A、选材，在实验室培养中获得的整条都为淡黄色的中透艺春兰根状茎作为组培材料，B、增殖培养，用含有MS、TDZ、6-BA和椰乳的培养基对中透艺春兰根状茎在培养室进行增殖培养，C、分化培养，用含有MS、6-BA、IBA和椰乳的培养基对中透艺春兰根状茎在培养室进行分化培养，D、生根培养，用含有MS、6-BA、IBA、NAA、AC和PVP的培养基对中透艺春兰根状茎在培养室进行生根培养。本发明组培得到的中透艺春兰，艺向稳定，为中透艺春兰的培育及工厂化提供了可靠的方法。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105613301
【申请号】CN201610135692
【发明人】孙叶芳, 郑琪, 邢海, 赵虎
【申请人】绍兴市农业科学研究院
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年3月10日