抗体和趋化因子构建物及其在自身免疫疾病治疗中的用途的制作方法

专利名称：抗体和趋化因子构建物及其在自身免疫疾病治疗中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及针对趋化因子受体表达细胞，特别是针对表达趋化因子受体CCR5的单核细胞/巨噬细胞，和CCR5+T-细胞的抗体和趋化因子构建物。另外，本发明还涉及用抗体和趋化因子构建物摧毁表达趋化因子受体的细胞，治疗自身免疫疾病和过敏性疾病，尤其是治疗慢性炎症性关节疾病。本发明的抗体和趋化因子构建物能定向排除趋化因子受体表达细胞，并因此能定向免疫抑制治疗自身免疫疾病。
在德国，约1％的人口患有类风湿性关节炎。另外，还有许多其它类风湿性疾病也导致关节炎。目前，三组药物-非甾体抗风湿病药、可的松制剂和二线药物-以及TNFα封闭剂被用于治疗炎症性关节疾病。迄今为止，治疗的焦点是局部注射可的松制剂，联合全身性施用消炎药或二线药物。
非-甾体抗风湿病药具有轻微的麻醉和消炎作用，但是当经常应用时，它们具有许多副作用(如胃溃疡、肾病)。然而，高剂量的可的松制剂具有强减充血剂和麻醉作用，导致在治疗中断后迅速复发。另外，可的松制剂不能停止关节疾病的破坏过程。用可的松长期治疗常常伴有严重的副作用(感染、库欣现象、骨质疏松、萎缩样皮肤、代谢和激素异常)。可的松的局部注射也具有本质缺点，即迁移白血细胞的活性仅被减弱但未被摧毁，因此导致在中断治疗后迅速复发。如上所述，全身性给药也导致相同结果。由于在注射可地松后可地松晶体加剧了刺激性作用而引起的炎症很少。可地松注射作用的持续时间急剧变化，从基本无效到作用持续几周。
在风湿病学中，采用二线药物来达到对炎症的长期抑制和减少可地松制剂。由于毒性相当大(过敏、感染、恶性疾病、肾机能不全、血压危象、肺部疾病)，需要医学专家密切注意病人。在治疗开始后，开始三个月可能没有明显的疗效。目前，先单独一次性使用4或5种这样的二线药物，如果治疗无效，再联合使用。基本上对于二线药物的作用机制几乎完全不了解，也不完全清楚应用二线药物能否消除关节的破坏。近年来，已在类风湿性关节炎的治疗中引入了一组新的物质，它们是基于用单克隆抗体或可溶性受体构建物封闭细胞信号物质(特别是TNFα)。
另外，经常有病人对现行的治疗没有反应。在其它情况下，由于不可忍受的副作用，常规治疗不得不停止。
因此，对治疗慢性炎症关节疾病或通常所说的类风湿疾病和其它自身免疫疾病需要一种新的治疗概念。
因此，本发明要克服的技术问题是要提供新的治疗剂，用于治疗炎症性关节疾病和其它自身免疫疾病，以及过敏性疾病，这样克服现有技术的缺点。
独立的权利要求中所确定的特征是为了解决该问题。
各从属权利要求中确定了优选例。
通过提供能与靶细胞表面的趋化因子受体结合的抗体或趋化因子构建物解决了该问题，其中构建物与趋化因子受体的结合导致靶细胞被破坏。本发明的抗体和趋化因子构建物能导致表达趋化因子受体的细胞，特别是白细胞被选择性破坏。本发明的构建物包括双特异性抗体、抗体构建物、趋化因子构建物、小鼠、嵌合性或人源化抗体，并且或能同时与表达趋化因子受体的靶细胞和效应细胞表面的抗原，特别是CD3抗原结合，或含有毒素。效应细胞优选是白细胞，尤其是单核细胞/巨噬细胞或T-细胞或树突状细胞。
在40多个患有不同关节疾病病人的研究中，发现在发炎的关节中表达趋化因子受体CCR5的单核细胞/巨噬细胞和T-淋巴细胞浓度非常高。在该关节中，90％的单核细胞和T-淋巴细胞表达趋化因子受体CCR5，而在血液中仅有10％或20％表达。由于这种表达模式，趋化因子受体CCR5或一般的趋化因子受体是细胞排除治疗非常合适的目标。因此，在关节中几乎所有的单核细胞和T-淋巴细胞都将受到CCR5排除影响，而在血流中仅极少数的这些细胞会被排除。就慢性关节炎而言，单核细胞和T-淋巴细胞是主要的细胞类型，而单核细胞是关节破坏的主要原因。
令人惊讶的是，现在已能显示可用新开发的抗体和趋化因子构建物有目的的破坏表达趋化因子受体，特别是CCR5的白细胞。
目前的治疗策略基本上代表了一种对症性治疗，仅能在有限程度上影响关节疾病的进程和关节的破坏，而且例如二线药物仅能在几个月后起作用，和所用的其它药物一样，当长期应用时具有相当大的毒性，而本发明的构建物能够仅在几小时内就引起表达趋化因子受体，特别是CCR5+的单核细胞/巨噬细胞，和关节中的淋巴细胞完全被排除。这些细胞类型是引起慢性炎症和关节破坏的原因。由于排除，可实现长期持续的作用。由于非常有效的去除了单核细胞，使用本发明的抗体可能以积极的方式影响关节破坏。怀疑用已建立的二线药物和TNFα-封闭剂非选择性的抑制免疫系统会增加感染和肿瘤形成的倾向。相反，由于趋化因子受体表达细胞，特别是表达CCR5的白细胞的分布，可在极大程度上消除参与炎症过程的白细胞，而不显著影响免疫防御。总而言之，本发明的抗体实现了一种治疗可能性，它的副作用范围小，能同时改善关节疾病的进程并防止关节破坏。
在一个优选例中，该构建物是双特异性抗体，它的一种特异性针对趋化因子受体，优选针对人趋化因子受体，最优选针对人趋化因子受体CCR5，另一种特异性针对效应细胞表面的抗原，优选针对T-细胞表面的CD3。本发明还包括具有相同或相似表位特异性的抗体构建物。
在具体的优选例中，双特异性抗体是一种单链抗体。
在另一个优选例中，该抗体构建物是双特异性抗体，其一种特异性针对趋化因子受体，优选针对人趋化因子受体和最优选针对人趋化因子受体5(CCR5)，而另一种特异性针对某种毒素。就此而言，在一个优选例中双特异性抗体是单链抗体。
在本发明的另一种优选例中，该构建物是趋化因子构建物，其形式是将修饰或未修饰的趋化因子与修饰或未修饰的毒素融合得到的一种趋化因子毒素。与CCR5结合的趋化因子，如与MIP1β、MIP1α、MCP-2、MCP-3和RANTES结合的构建物是特别优选的。
关于本发明的趋化因子构建物，趋化因子可与一种毒素共价结合，然而趋化因子与毒素之间的结合可以不同方式发生。通过多聚合(multimerisation)功能域，趋化因子还可与一抗体结合，该抗体除了具有一个相容性多聚合功能域外，还具有针对效应细胞表面某种抗原，优选针对T-细胞表面的CD3的特异性，和/或针对某种毒素的特异性。也可能通过一个多聚合功能域将趋化因子与具有相容性多聚合功能域的一种毒素结合。另外，趋化因子可与对效应细胞表面某种抗原，优选针对T-细胞表面的CD3，和/或针对某种毒素的特异性的抗体结合。另外，趋化因子通过一个多聚合功能域，能通过与某种毒素连接的相容性多聚合功能域与该毒素结合。可在体外或体内进行与该多聚合功能域的结合。
在本发明的另一个实施例中，抗体构建物是一种针对趋化因子受体，优选针对CCR5的抗体，它与一毒素共价结合。为此，这些构建物被称为免疫毒素。
合适的毒素包括截短的假单胞菌毒素、截短的白喉毒素和类似毒素。
本发明还包括抗体构建物，它是针对趋化因子受体，优选针对CCR5的抗体，该抗体通过在同二聚体/异二聚体中的多聚合功能域，可在体外和/或体内与针对效应细胞上的某抗原，优选CD3，和/或针对某毒素的第二抗体结合。
另外，本发明还包括抗体构建物，其中针对趋化因子受体，优选针对CCR5的抗体在体外和/或体内通过多聚合功能域与具有相容性多聚合功能域的毒素结合。
总的说，根据本发明，抗体构建物、趋化因子构建物和小鼠、嵌合性或人源化抗体是能破坏趋化因子受体表达细胞，尤其是白细胞的物质，用该选择性破坏治疗炎症性疾病(自身免疫病、过敏性疾病等)。
联系本发明，术语抗体或抗体构建物也包括具有抗体或抗体构建物特异性的抗体片段，即所谓的活性片段。
可使用下文所述的方法或已知方法构建双特异性抗体；嵌合性偶联抗体或抗体片段，用杂交-杂交瘤技术构建，作为双特异性单链抗体的构建，二抗体(diabody)和将两个抗体通过多聚合功能域连接的构建仅是几个例子。
双特异性抗体优选是单链抗体。可通过常规方法连接或通过重组DNA技术，如采用为了构建邻接蛋白，而表达编码嵌合性或人源化抗体链的核酸分子的方法作为邻接蛋白构建，将这些抗体的不同部分连接起来(例如Mack等(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92卷7021-7025页)。
在一特定优选例中，它是具有下列Fv片段的一种单链抗体针对趋化因子受体，优选针对CCR5的单克隆抗体的sc-Fv片段，和针对CD3的单克隆抗体的sc-Fv片段。为此，将针对趋化因子受体的Fv片段和针对CD3的Fv片段都可置于N-末端位置。优选将针对CCR5的Fv片段置于N-末端位置。VL-VH抗体结构域的顺序在这两个构建物中都是可变的，优选针对CCR5的Fv片段的顺序是VL-VH，而针对CD3的Fv片段是VH-VL。可变域之间的接头以及两个Fv片段之间的接头由肽接头构成，优选由0-25个氨基酸组成的亲水性的含甘氨酸-和丝氨酸的柔性接头。可用在C-或N-末端位置的6个组氨酸的一条附加组氨酸链简化纯化和检测。
与常规双特异性抗体比较，双特异性单链抗体具有的优点是它们仅由一条蛋白质链构成，因此它们的位置被准确确定。它们通常具有小于60kD的低分子量，并且不难在合适的细胞系，如CHO细胞中用重组技术大批量生产。然而最基本的优点是它们没有抗体的恒定结构域，因此当这些抗体与其靶细胞，即与趋化因子受体表达细胞结合时，仅激活T-淋巴细胞裂解。因此，单链抗体常常比常规双特异性抗体优越，因为它们的临床使用伴随的严重副作用较少或较轻。
另外，本发明涉及真核或原核来源的细胞，它们产生本发明的抗体构建物，特别是本发明的双特异性抗体，或涉及蛋白质产生的体外技术。
可通过化学偶联，从趋化因子和修饰或未修饰的原核或真核毒素产生融合蛋白，和将趋化因子与毒素通过附加的多聚合功能功能域连接，来构建本发明的通过将趋化因子与毒素结合的趋化因子毒素。
在一特定的优选例中，趋化因子毒素是趋化因子(它可与人趋化因子受体CCR5(MIP 1β、MIP 1α、RANTES、MCP-2、MCP-3)结合)和假单胞菌外毒素A(如PE38、PE40)的截短形式重组产生的一种融合蛋白质。此时，趋化因子与假单胞菌毒素通过一短肽接头结合。接头优选由柔性和亲水的氨基酸序列，特别是甘氨酸和丝氨酸构成，长度为0-20个氨基酸。
另外，通过以足够破坏趋化因子受体表达细胞的量提供一种药物组合物和可任选的一种药物学上可接受的载体解决了本发明的技术问题，该药物组合物含有至少一种本发明的抗体或趋化因子构建物，含有至少一种双特异性抗体。
含有本发明双特异性抗体的药物学组合物适合胃肠外给药，即皮下、肌肉内、静脉内、关节内、腹膜内，其中胃肠外给药的组合物常常包括抗体溶液或其混合物，溶于一种可接受的载体，优选水相载体。合适的水相载体是例如水、NaCl溶液和甘氨酸。另外，该组合物可含有常规药物学上可接受的佐剂，如用于调节pH值，作为缓冲物质等。
组合物中双特异性抗体的浓度的变化可以相当大，如从小于约10-7％w/v-1％w/v。优选浓度是10-4％w/v-10-1％w/v之间。在关节内给药情况下，双特异性抗体的剂量应当是1毫克-0.001毫克，具体是约0.02毫克双特异性单链抗体。
因此，对于在膝关节中关节内给药，例如，合适的组合物将含有约20微克本发明的双特异性抗体或趋化因子毒素，溶于约2-5毫升无菌NaCl溶液中，如用磷酸盐或Tris缓冲。静脉内注射也应是一种合适的给药方式。
本发明的另一个目的是提供应用本发明抗体的新可能性。
可通过使用本发明的至少一种抗体或趋化因子毒素排除趋化因子受体表达细胞实现本发明的该目的。在一优选实施例中，本发明的抗体或本发明的趋化因子毒素被用于制备一种治疗慢性关节炎和其它自身免疫疾病或过敏性疾病的药物组合物。
选择性排除趋化因子受体，特别是排除CCR5，当与原先的免疫抑制治疗(如可地松、氨甲蝶呤、细胞因子封闭)比较时，具有两个基本的优点第一，原先的治疗目标不是排除浸润性白细胞，而仅导致其活性抑制。这致使在中断治疗后迅速复发，并需要永久的免疫抑制。与之相反，排除了关节中引起疾病的白细胞就有希望在一或几次治疗后实现长期的症状缓解。趋化因子受体排除的第二个优点是，由于表达趋化因子受体尤其是CCR5的细胞的分布，仅排除了与炎症过程有关的细胞，而其它细胞仍在很大程度上保持完整。
本发明双特异性抗体作用的模式是其一种特异性针对趋化因子受体，另一种特异性针对T-细胞表面的抗原，如本发明优选例所示的


图1(上部)和图2中的效应细胞。如
图1(上部)所示，一个双特异性抗体通过其两臂与两个不同的抗原结合。在一个优选例中，这些是趋化因子受体CCR5和T-淋巴细胞的表面分子CD3。如图2所示，该双特异性抗体导致T-淋巴细胞与表达CCR5的细胞交联。由于这种交联，激活的T-淋巴细胞裂解，并破坏与之相结合的CCR5+细胞。结果，仅在T-淋巴细胞的存在下发生CCR5+细胞的裂解。这些细胞大量存在于所有形式的慢性关节炎中。用这种方法，特别可能通过将双特异性抗体注射入发炎的关节，有目的地消除引起炎症的细胞。
附
图1-9说明了本发明的其它实施例及其作用模式。
由于可能有目的的排除趋化因子-受体表达细胞，本发明的概念不仅适于慢性关节炎，还适用于风湿病和其它自身免疫病，发现它们具有类似的高浓度的表达趋化因子受体，尤其是CCR5的细胞。
虽然已报道了用双特异性抗体治疗肿瘤的各种可能性(如Kroesen，B.J.等，(1993)Cancer Immunol.Immunother.37400-7；Nitta，T.等(1990)Lancet 335368-71；Bolhuis，R.L.等(1992)Int J Cancer Suppl，778-81；Canevari，S.等(1995)J.Natl.CancerInst.871463-9；De Gast，G.等(1995)J.Hematother.4433-437；Kroesen，B.J.等(1994)Br.J.Cancer，70652-61；Tibben，J.G.等(1993)J.Natl.Cancer Inst.851003-4)，目前还未报道过双特异性抗体在免疫抑制中的应用。
附图描述
图1说明了导致靶细胞交联的本发明抗体和趋化因子构建物，在此是表达CCR5的细胞、效应细胞和表面具有CD3的T-细胞。上图具有针对CCR5和CD3的特异性的双特异性抗体，中图由趋化因子和针对CD3的抗体组成的趋化因子构建物，下图趋化因子构建物，其中具有多聚合功能域的趋化因子可与针对CD3的抗体通过相容性的多聚合功能域结合。
如图2中示意性表示的，交联导致T-细胞激活，而裂解并破坏与之交联的CCR5阳性细胞。
图3显示本发明的抗体和趋化因子构建物，导致靶细胞(在此是表达CCR5的细胞)与毒素之间的连接。上图同时具有针对CCR5和某种毒素的特异性的双特异性抗体，下图由趋化因子和针对毒素的抗体构成的趋化因子构建物。
如图4所示，靶细胞与毒素的交联导致CCR5阳性靶细胞的细胞死亡。
图5显示，类似于图3，抗体和趋化因子构建物导致靶细胞与毒素连接，然而其中毒素不通过针对该毒素的抗体特异性结合，而是与针对趋化因子受体，优选针对CCR5(图5，上部)或趋化因子(图5，中间)的抗体共价结合，或通过多聚合功能域与具有相容性多聚合功能域，针对趋化因子受体的抗体结合(图5，下部)。
如图6所示，靶细胞与毒素的交联也导致该靶细胞细胞死亡。
图7显示FACS分析的结果(如Mack等(1998)J.Exp.Med.187，1215-1224页所述进行)，解释了患慢性多关节炎的病人发炎的滑膜关节液的CCR5阳性T-细胞和单核细胞，或培养的外周血白细胞(PBMC)的排除。
图8显示了趋化因子毒素Ra-PE38的细胞毒性，或更精确的通过趋化因子毒素Ra-PE38(10纳克/毫升)在24小时培养后破坏表达CCR5的CHO细胞(右下部)。由于RANTES不与CXCR4结合，表达趋化因子受体CXCR4而不是CCR5的CHO细胞不被Ra-PE38摧毁(上图)。与培养液培养不杀死CHO细胞。Ra-PE38-一种RANTES和截短的假单胞菌外毒素的融合蛋白，分子量为38kD1。
因此，图8解释了图5中间所概述的方法。
图9显示滑膜液与CD3-CCR5双特异性抗体的48小时培育。因此，将图9和图7上部联系起来看，存在T-淋巴细胞和单核细胞浓度依赖性排除。在抗体浓度为125纳克/毫升时，单核细胞和T-淋巴细胞分别减少了96％和97.5％。
下列实施例是为了说明本发明，而不限制具体实施例或用途领域。人们可想像许多应用本发明的多种可能性。
实施例实施例1双特异性抗体的构建为了构建双特异性抗体，可使用例如单链技术(Mack等(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，927021-7025；Mack等(1997)J.Immunol.1583965-3970)。就此，如
图1(上部)和3(上部)所示，以特定顺序融合两种不同抗体免疫球蛋白链的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，可任选的额外加上6个His的组氨酸链。融合是在DNA基础上进行的，从而在表达后形成一条具有四个不同可变结构域的蛋白链(比较
图1(上部)和3(上部))。附加的组氨酸链能通过固定化Ni离子简单而有效的一步纯化。
图1(上部)显示该双特异性抗体与效应细胞表面的CD3抗原和作为靶细胞的白细胞表面的人CCR5结合的优选例。
通过RT-PCR方法，扩增产生所需抗体的杂交瘤细胞的抗体可变结构域。将该方法获得的PCR片段克隆入载体并测序。结果，用融合PCR，通过在两个抗体可变结构域之间插入(Gly4Ser1)3接头产生了具有一种特异性的单链抗体。在另一次融合PCR中，将针对CCR5的抗体片段与已公开的针对CD3的抗体片段融合，插入由Gly4Ser1构成的接头(Mark等，见上)。选择了下列结构域顺序VL(1)-VH(1)-VH(2)-VL(2)，(1)的特异性针对CCR5，(2)的特异性针对CD3。
实施例2实施例1的双特异性抗体的表达和纯化为了表达该双特异性抗体，将相应的DNA序列亚克隆入一真核细胞表达载体(如PEF-DHFR，Mack等(1995)PNAS，见上)，并通过电穿孔转染入DHFR-缺陷型CHO细胞。从稳定转染的CHO细胞上清液中，通过Ni-NTA亲和层析纯化得到双特异性抗体，降低pH值洗脱。然后，调节pH，并将该蛋白质调节到合适浓度。
实施例3血液白细胞和发炎关节中的白细胞的体外试验对于体外试验，将关节积液(包括所含细胞)与双特异性抗体一起培育一天或数天。24小时后，CCR5阳性淋巴细胞和单核细胞几乎已完全消失。当在更长培育后控制培养液时，单核细胞已分化成巨噬细胞，可在培养瓶底见到。与双特异性抗体培育合适的时间后，见不到巨噬细胞。
当将培养的PBMC与双特异性抗体一起培育时，可获得相应的结果。此时，CCR5阳性单核细胞完全被排除，CCR5阳性T-淋巴细胞几乎完全被排除。图7显示了CCR5阳性T-细胞和单核细胞的排除情况。
结果显示，根据实施例1，本发明的构建物能完全破坏CCR5阳性单核细胞。这可引用于关节吸出物的单核细胞和当分化成巨噬细胞时的表达CCR5的血液单核细胞。单核细胞/巨噬细胞的排除在几小时内发生(小于24小时)。特别是，关节中单核细胞/巨噬细胞的排除在治疗中具有很大的优点，因为是这些细胞主要引起了关节破坏。另外，为了激活T-淋巴细胞，还需要与巨噬细胞的相互作用，从而同时能抑制T-淋巴细胞的功能。
除了单核细胞/巨噬细胞的排除，可观察到CCR5阳性T-细胞数目的相当减少。
权利要求
1.一种能与靶细胞表面的趋化因子受体结合的抗体或趋化因子构建物及所述构建物的活性片段，其特征在于，该构建物与趋化因子受体的结合导致所述靶细胞的破坏。
2.如权利要求1所述的抗体和趋化因子构建物，其特征在于，所述趋化因子受体是人受体。
3.如权利要求1或2所述的抗体或趋化因子构建物，其特征在于，所述趋化因子受体是趋化因子受体5。
4.如上述任一权利要求所述的抗体构建物，其特征在于，所述构建物是一种双特异性抗体，它能与作为第一种抗原的趋化因子受体和作为第二种抗原的效应细胞表面的CD3抗原结合。
5.如权利要求1-3任一项所述的抗体构建物，其特征在于，所述构建物是一种双特异性抗体，它能与作为第一种抗原的趋化因子受体和作为第二种抗原的毒素结合。
6.如权利要求1-3任一项所述的抗体构建物，其特征在于，所述构建物与毒素共价结合。
7.如权利要求1-3任一项所述的抗体构建物，其特征在于，所述抗体构建物能通过多聚合功能域在体外和/或在体内与第二种抗体构建物结合，所述第二种抗体构建物能与效应细胞表面的CD3抗原和/或毒素结合，或通过相容性多聚合功能域与毒素结合。
8.如权利要求1-3任一项所述的趋化因子构建物，其特征在于，所述趋化因子构建物是一种修饰或未修饰趋化因子的和一种修饰或未修饰的毒素的融合构建物。
9.如权利要求1-3任一项所述的趋化因子构建物，其特征在于，所述趋化因子构建物能通过多聚合功能域在体外和/或体内与抗体构建物结合，所述抗体构建物能与效应细胞表面的CD3抗原和/或毒素结合，或通过相容性多聚合功能域与毒素结合。
10.如权利要求1-3任一项所述的趋化因子构建物，其特征在于，所述趋化因子与抗体构建物共价结合，所述抗体构建物能与效应细胞表面的CD3抗原和/或毒素结合。
11.如权利要求4、7、9或10任一项所述的趋化因子或抗体构建物，其特征在于，所述效应细胞是白细胞，特别是单核细胞/巨噬细胞或T-细胞，或树突状细胞。
12.如权利要求1-7或9-11任一项所述的抗体构建物，其特征在于，所述抗体构建物是单链构建物。
13.产生如上面任一项权利要求所述的抗体或趋化因子构建物的真核或原核来源的细胞。
14.药物组合物，其特征在于，该药物组合物含有至少一种如权利要求1-12任一项所述的抗体或趋化因子构建物和可任选的药物学上可接受的载体，所述构建物的量足够破坏表达趋化因子受体的细胞。
15.至少一种如权利要求1-12任一项所述的抗体或趋化因子构建物的用途，其特征在于，用于排除表达趋化因子受体的细胞。
16.至少一种如权利要求1-12任一项所述的抗体或趋化因子构建物的用途，其特征在于，用于治疗慢性关节炎和其它自身免疫疾病和过敏性疾病。
17.至少一种如权利要求1-12任一项所述的抗体或趋化因子构建物的用途，其特征在于，用于制备一种治疗慢性关节炎和其它自身免疫疾病和过敏性疾病的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及针对趋化因子受体表达细胞,尤其是针对表达趋化因子受体CCR5的单核细胞/巨噬细胞,和CCR文档编号C12N1/21GK1345336SQ00804846
公开日2002年4月17日 申请日期2000年3月10日 优先权日1999年3月11日
发明者M·麦克, D·施洛多尔夫 申请人:麦克美特股份公司