专利名称：一种从植物中提取超氧化物歧化酶的方法
技术领域：
本发明涉及一种从叶状植物中提取超氧化物歧化酶的方法。
目前，国内的超氧化物歧化酶生化制品主要是从动物血液和动物肝脏的红细胞中提取的。从高等植物中提取超氧化物歧化酶于二十世纪九十年代起已开始研究，如中国轻工业出版社出版的《功能性食品》第一卷所介绍的从小白菜叶中提取超氧化物歧化酶，其方法是将植物粉碎打浆过滤后得到的上清液加硫酸铵，静置后离心处理得到的沉淀物再加磷酸钾缓冲液进行梯度洗脱，用离子交换柱或凝胶柱进行提纯经浓缩、冷冻、干燥后得超氧化物歧化酶制品。从植物中提取超氧化物歧化酶，虽然比从血液中提取原料来源广泛，方法比较简单，且成本低，但提取过程中用磷酸钾缓冲液进行梯度洗脱由于时间过长，且硫酸铵对超氧化物歧化酶的活性成份损伤较大，实用性不强，故一直停留在实验室阶段，未能形成工厂化生产的规模。
本发明的目的在于提供一种既能缩短提取时间，又能提高超氧化物歧化酶产品的活性，并且能适应工厂化生产的从植物中提取超氧化物歧化酶的方法。
本发明依据超氧化物歧化酶广泛存在于动植物和微生物的组织细胞中，是一种水溶性蛋白质的属性，根据钠离子与钙离子能使水溶性蛋白质凝固从而与水分离的特点，以及低度酒精具有消毒、杀菌功能的原理，将从植物中提取超氧化物歧化酶的工艺设计为沉淀剂采用硅酸钠(或钨酸钠)和碳酸钙水溶液，洗脱剂采用蒸馏水加低度酒精，梯度洗脱设计成用层析装置进行层析。即将植物粉碎、压汁，在汁液中加酸沉淀，分离植物叶蛋白，得到上清液，将上清液过滤后，再加纳加钙，使上清液中的水溶蛋白质沉淀，将沉淀物离心处理去清水后用低度酒精加蒸馏水进行杀菌与洗脱，得到粗制的超氧化物歧化酶，粗酶经层析装置进行层析和分离，得到精制超氧化物歧化酶乳剂，经冷冻去杂、升华干燥，得到的是超氧化物歧化酶精制成品。
由于采用了上述技术方案，本发明具有工艺简单、成本低、提取率高、对超氧化物歧化酶产品活性损伤程度小、加工时间短、且适合工厂化生产等特点。经测试，用该工艺生产的超氧化物歧化酶产品活性达每毫克4000单位以上，且功能性、稳定性、食用安全性均优于从动物血液和肝脏中提取的超氧化物歧化酶。
下面对本发明作进一步的说明将一种叶状植物粉碎、压汁，在汁液中加酸进行沉淀，分离植物叶蛋白，得上清液；将上清液用活性碳过滤，滤掉部分杂质、色素和无机盐；向过滤后的上清液中加入硅酸钠(或钨酸钠)和碳酸钙的水溶液，使水溶蛋白质沉淀，硅酸钠(或钨酸钠)和碳酸钙的作用是能使上清液中的水溶蛋白质快速凝固沉淀且不损伤水溶蛋白质的活性，与加硫酸铵相比，沉淀时间可缩短2/3左右，且成本降低；将沉淀物静置离心处理去上层的清水后用蒸馏水进行多次漂洗，然后用低度酒精进行洗脱，从而得到粗制的超氧化物歧化酶，蒸馏水漂洗不损伤超氧化物歧化酶产品的活性，低度酒精即可消毒杀菌，又可去杂，缩短洗脱时间，还不损伤超氧化物歧化酶的有效成份，而且用蒸馏水加低度酒精的洗脱方法适合于工厂化生产；将粗酶用层析装置进行层析，得到精制的超氧化物歧化酶乳剂，层析装置既能提纯超氧化物歧化酶产品，还可分离出其中所含的多种蛋白质；将精制的超氧化物歧化酶乳剂进行冷冻去杂，升华干燥，即得超氧化物歧化酶的成品。
实施例利用串叶松香草提取植物叶蛋白后剩余的上清液，用活性碳过滤后加入浓度为1～3％的硅酸钠(或钨酸钠)水溶液进行沉淀，再加浓度为0.8～2％的碳酸钙水溶液静置8～15分钟后去清水，得到的沉淀物先用蒸馏水进行多次漂洗，然后用浓度为3～5％的30度以下的低度酒精进行洗脱，得粗制的超氧化物歧化酶，将粗酶用层析装置进行层析，得精制的超氧化物歧化酶乳剂，经冷冻、去杂、干燥后，得晶体的植物超氧化物歧化酶成品。
权利要求
1.一种从植物中提取超氧化物歧化酶的方法，加工工艺为将叶状植物粉碎打浆过滤得到的上清液加入沉淀剂硫酸铵使其产生沉淀，将沉淀物用离子交换柱(或凝胶柱)进行提纯再加磷酸钾缓冲液进行梯度洗脱得超氧化物歧化酶乳剂，经浓缩、冷冻、干燥后得超氧化物歧化酶成品，其特征在于沉淀剂采用硅酸钠(或钨酸钠)和碳酸钙的水溶液，洗脱液采用蒸馏水加低度酒精，提纯采用层析装置。
2.根据权利要求1所述的从植物中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于在上清液加硅酸钠(或钨酸钠)和碳酸钙的水溶液沉淀之前，用活性碳进行一次过滤。
3.根据权利要求1、2所述的从植物中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于沉淀剂硅酸钠(或钨酸钠)水溶液的浓度为1～3％，碳酸钙水溶液的浓度为0.8～2％。
4.根据权利要求1、2所述的从植物中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于洗脱液低度酒精的酒精度为25～30度，浓度为3～5％。
全文摘要
一种从叶状植物中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于沉淀剂采用硅酸钠(或钨酸钠)加碳酸钙的水溶液，洗脱液采用蒸馏水加低度酒精，提纯采用层析装置，并在上清液沉淀之前增加一道用活性炭过滤的工艺过程，具有工艺简易可行、成本低、提取率高、对产品活性损伤较小，适合于工厂化生产等特点，是一种具有较高推广价值的生产方法。
文档编号C12N9/08GK1477197SQ0212991
公开日2004年2月25日 申请日期2002年8月21日 优先权日2002年8月21日
发明者秦和沅 申请人:秦和沅