专利名称：脱色酵母细胞壁组分的制作方法
技术领域：
本发明涉及经脱色·脱臭、且具有改良的特性的脱色酵母细胞壁组分、其制备方法、以及该脱色酵母细胞壁组分作为包被剂的用途。
背景技术：
很久以来，关于酵母细胞壁组分的利用，人们一直尝试要从酵母中开发薄膜材料。例如日本特公昭56-19971号公报中公开了由脱核酸酵母中除去酵母细胞膜成分，获得以水可溶性蛋白质为主要成分的可食性蛋白质薄膜；日本特开昭53-45385号公报中公开了一种薄膜的制备方法将酵母等微生物细胞用热碱处理后，加入酸，实施等电沉淀处理，将生成沉淀的pH调节为6-8，在所得的凝胶形成性微生物细胞中混合增塑剂，将所得组合物成膜。
另外，日本特许第3349677号公报(日本特开2000-44878号公报)中公开了一种以酵母细胞壁组分为主要成分的包被剂，其中所述酵母细胞壁含有从经酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分的细胞残渣；还公开了使用该包被剂和添加了增塑剂的包被剂，作为包被剂或者薄膜衣的使用情况。作为该包被剂优异的特性，其具有以下功能即使是100％水分散介质也可以进行包被，虽然有粘性但加工中不会产生粘附，包被后颗粒之间不会粘附，并且可控制溶出时间；另外，由该包被剂形成的薄膜在干燥条件下显示具有透氧系数极低的特性。
但是，如上所述，日本特许第3349677号公报中记载的包被剂虽然具有极优异的薄膜特性，但使用该专利公报中记载的薄膜衣时，呈黄褐色-褐色，因此与内包物相比，包被物、压片的外观形状变差，有可能被误认为变质(例如误认为霉变，把着色误以为劣化等)并有可能因此耽误发现真正的变质。
另外，该特许公报记载的包被剂中，酵母细胞壁组分本身中含有较多蛋白质(重量比为21％)、脂质(重量比为8.0％)，因此有可能在保存中因脂质的氧化等而产生着色。
并且，酵母细胞壁组分本身多少具有一些来自酵母的气味(以下成分酵母臭)，因此以香气成分作为对象进行包被时，要保持目标香气成分，另一方面由于酵母细胞壁组分自身所具有的酵母臭的原因有使所需的香气成分被遮盖或者受损失的危险性，需要将该组分的添加量控制在低水平，结果还存在有无法充分发挥其作用的问题。
另外，作为薄膜本身的机械特性，在柔韧性(可塑性)方面差，比较脆，有时与内包物组合时，因外界湿度等环境的变化，会出现薄膜容易破裂的倾向。
另一方面，已经知道在利用酵母细胞壁组分时，需要对酵母细胞壁组分进行脱色·脱臭后再使用。日本特开平4-248968号公报中公开了将酵母提取物残渣用碱和酸处理，然后用臭氧脱色，同时在该臭氧处理前后用乙醇进行处理的方法；日本特表平6-504191号公报中公开了将酵母碎片用碱、过氧化氢等处理后，对酸化的酵母碎片进行处理的方法和处理物；日本特许第3407125号公报(日本特开平9-103266号公报)中公开了在用乙醇悬浮下，对酵母自溶的不溶物进行碱处理的方法。
但是，这些以往方法中，为了脱色·脱臭而进行的处理使得被处理物发生变质，失去其特性，原有的细胞形态和结构遭到破坏，因此出现丧失成膜性、薄膜崩解性的问题；如果在保持成膜性、薄膜崩解性状态下直接进行脱色，则有无法脱色至目标颜色水平的问题，在其利用上存在各种限制。
即，关于酵母提取物的提取残渣等的脱色·脱臭，人们一直进行着尝试，在以往进行的脱色的方法、例如日本特开平4-248968号公报(酵母提取物的提取残渣的脱色·脱臭方法)、日本特开平6-70751号公报(酵母碎片产物)、日本特表平6-504191号公报(酵母碎片的处理以及结果所得产物)等中可以见到在高碱性条件下进行加热处理(也包括回流煮沸等)和在高酸性条件下进行加热处理(也包括回流煮沸等)，除去可溶性成分等，然后用过氧化氢等化学试剂进行处理、或使臭氧等与其反应、或者使次氯酸等漂白剂与其反应。如果将这些方法直接用于酵母细胞壁组分的脱色处理，则所得脱色酵母细胞壁组分中，则存在着所述酵母细胞壁组分的优异的性质受到损害的问题。
另一方面，药物中，很少将药效成分直接以化合物的形式施用，而是针对目的，为使药效成分溶出，配合药用添加剂制成制剂施用。有种种药用添加剂，这里列举一例。
例如，作为药用的水性包被剂使用的Eudragit(丙烯酸树脂)LS30-D55为非天然产物、有气密性低、如果增加包被量则薄膜的崩解性变差等问题。因此，人们期待着水性、气密性高、具有防止香气成分或气味等挥发的效果、具有足够的崩解性、来自天然产物的包被剂。另外，日本特许3349677号公报记载的酵母细胞壁组分为水性、来自天然产物，气密性高、具有成膜性、薄膜崩解性良好，但由于具有来自酵母的颜色、气味，希望有一种无色、无臭的酵母细胞壁组分。并且，粘合剂中使用的HPC或HPMC，如果其添加量增多，则出现粒状物崩解延迟的问题。若酵母细胞壁组分干燥，则显示牢固的粘合力，但在水中则显示较快的崩解性，由此可知这是具有粘合性的崩解剂，不过由于它呈黄褐色-褐色，所以制造出的粒状物呈黄褐色-褐色，人们希望是无色的。
作为胶囊的囊材，已知有明胶、水溶性高分子(羟甲基乙基纤维素)、普鲁蓝、聚乙烯醇(PVA)等，但它们都因为难以进行溶出控制、对氧的气密性低而具有药剂变质、原料的安全性(BSE和合成化合物)等的问题。
作为解决这些问题的方法，人们尝试利用酵母细胞壁组分作为胶囊囊材，有该项记载的文献有日本特开2002-38133号公报、日本特开2003-70428号公报。但是，这些方法中，酵母细胞壁组分呈黄褐色-褐色，因此制造的胶囊颜色呈黄褐色-褐色，酵母细胞壁组分中蛋白质、脂质多，因此存在有酵母细胞壁组分本身着色等的问题。
本发明的课题在于提供经脱色·脱臭，使来自酵母细胞壁组分的颜色和气味等被除去，且具有优异的成膜性、进一步优选具有保持或改进薄膜崩解性以及所形成的薄膜的优异的气密性等得到保持或改良的物性的脱色酵母细胞壁组分、其制备方法、以及该脱色酵母细胞壁组分在包被剂中的用途、还提供用该包被剂处理的包被处理物等。
含有从酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分的细胞残渣的酵母细胞壁组分(Yeast Cell WallYCW)，或者含有进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液成分的细胞残渣的酸处理酵母细胞壁组分(Acid-treated Yeast Cell WallAYC)等的酵母细胞壁组分(以下如无特别规定，将上述酵母细胞壁组分YCW和酸处理酵母细胞壁组分AYC二者总称为酵母细胞壁组分)，其成膜性优异，并且由这些组分形成的薄膜具有优异的气密性等，它们是具有优异物性的物质。但，由于有来自酵母的褐色-黄色的着色以及特有的气味等，在应用于药品或食品等中时，这些着色、气味等可能成为阻碍。
本发明人为解决上述课题进行了深入的研究，结果发现通过对从酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣，或者进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液成分得到的细胞残渣这样的对酵母细胞壁组分进行脱色处理的方法，可以无损酵母细胞壁组分所具有的成膜性以及形成的薄膜的气密性等优异的物性，获得除去了来自酵母细胞壁组分的颜色和气味，液体YI(黄度指数)低(13或以下)、具有成膜性，进一步优选具有薄膜崩解性的脱色酵母细胞壁组分；并且通过该处理，可获得在使用该脱色酵母细胞壁组分作为包被剂时能防止被包被物变质等的脱色酵母细胞壁组分，从而完成了本发明。
本发明的脱色酵母细胞壁组分可用作优异的包被剂，例如在药物制剂领域，当制剂中含有挥发性或升华性物质，并作为“发生晶须”出现时，本发明的组分还可作为一种防止挥发或升华的添加剂而发挥作用的性质。这里所述晶须是指固体制剂中的挥发·升华性物质挥发，在固体制剂表层析出针状晶体的现象，由于发生该现象，会提出固体制剂的流动性降低或被误认为发霉等问题。
发明内容
本发明包括脱色酵母细胞壁组分(权利要求1)，其特征在于脱色酵母细胞壁组分用通过日本电色(株)SE-2000进行的反射方法(光源C、视角2度)测定的液体YI(黄度指数)为13或以下；根据权利要求1的脱色酵母细胞壁组分(权利要求2)，其特征在于在使用烘干涂料器(baker applicator)将5％(重量比)脱色酵母细胞壁组分的浆液在取向聚丙烯薄膜セネシPOP(ダイセル化学工业(株)、薄膜厚0.02mm)上流延，在60℃的烘箱中干燥45分钟，制作流延薄膜(薄膜厚约0.015mm)时，脱色酵母细胞壁组分具有可以形成连续薄膜的性质该连续薄膜在60％RH湿度的透氧率为250ml/m2·d·MPa或其以下的；权利要求1或2中所述的脱色酵母细胞壁组分(权利要求3)，其特征在于在将5％(重量比)脱色酵母细胞壁组分的浆液用60mm直径的圆形容器、在60℃下干燥2小时，制作流延薄膜时(薄膜厚约0.1mm)，该薄膜在纯水中的崩解时间在60分钟以内；权利要求1-3任一项中的脱色酵母细胞壁组分(权利要求4)，其特征在于该脱色酵母细胞壁组分是对从酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣，或者进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的细胞残渣进行脱色处理而制备的。
本发明还包括权利要求1-4任一项中的脱色酵母细胞壁组分的制备方法(权利要求5)，其特征在于对从酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣，或者进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的残渣用脱色剂进行脱色处理；权利要求5的脱色酵母细胞壁组分的制备方法(权利要求6)，其特征在于通过脱色剂进行的脱色处理是通过过氧化氢和臭氧进行的脱色处理。
本发明还包括包被剂(权利要求7)，其特征在于所述包被剂以权利要求1-4任一项中的脱色酵母细胞壁组分为主要成分；包被处理物，所述包被处理物是使用以权利要求7的脱色酵母细胞壁组分作为主要成分的包被剂实施包被处理而得到的；权利要求8的包被处理物，其特征在于包被处理物为微粒、颗粒或片剂；权利要求8或9的包被处理物，其特征在于包被处理物为药物制剂或食品。
附图简述
图1是表示本发明的实施例中，用脱色酵母细胞壁组分进行薄膜成型性试验结果的照片。A表示比较例制品4的成型形试验结果(薄膜成型性)，B表示实施例制品1的薄膜成型性试验结果(薄膜成型性)。
图2是表示本实施例制品1、3与比较例品1、3的细胞壁形态保持性不同的扫描电子显微镜SEM的照片。
实施发明的最佳方案本发明包括脱色酵母细胞壁组分，所述脱色酵母细胞壁组分经脱色·脱臭，液体的YI(黄度指数)低(13或以下)，具有成膜性、进一步优选在薄膜崩解性，形成薄膜的气密性及其它物性方面，具有优异的性质，通过如下方法制备将含有从酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣的酵母细胞壁组分，或者含有进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的细胞残渣的酵母细胞壁组分，用脱色剂进行脱色处理而制备。本发明的脱色酵母细胞壁组分作为包被剂使用时具有特别优异的性质。
本发明的脱色酵母细胞壁组分具有以下性质。
(黄色度YI黄度指数)本发明脱色酵母细胞壁组分的脱色程度是用YI值进行确定的。本发明中，YI值用“通过日本电色(株)SE-2000进行的反射方法(光源C、视角2度)测定液体的YI(黄度指数)”进行定义。
即，酵母细胞壁组分呈现来自酵母的黄褐色-褐色，因此如JIS K7103所规定，脱色I为由无色或白色向黄色偏离的程度，以正量表示。YI越低，则白色度越高(黄色度越低)。例如在脱色酵母细胞壁组分的固体组分为5％的液体(5g)中，YI显示为负值的物质，表明其脱色度高，黄色度低，因此将YI规定为0。本发明中，用日本电色工业(株)的分光式色差仪SE-2000的反射测定法、通过光源C、视角2度，对固体组分为5％的液体色调进行测定，以测定三次的平均值表示。本发明的脱色酵母细胞壁组分的液体YI为13或以下。优选6或6以下，更优选1或以下。液体YI比13高的脱色酵母细胞壁组分呈黄色，应用于制剂时，与药物和其它赋型剂产生色差，因而不优选。
与现有包被剂的黄色度进行比较时，也可以制成片剂状态(包被量换算成片剂的重量为10％的片剂)和薄膜状态(厚度约0.1mm)，分别通过片剂YI、薄膜YI进行比较。
因此，即使通过这些片剂YI、薄膜YI也可以对片剂和薄膜本身的脱色程度进行评价、定义。
(细胞壁形态保持性)通过使用扫描电子显微镜(SEM)对脱色酵母细胞壁组分进行观察，对10-100个酵母细胞壁组分中是否大致保持了酵母细胞的原型(7成或以上)进行判断。通过这种方法，将保持了原型的组分定义为具有细胞壁形态保持性。
使用粒度分布仪(例如HORIBA制的激光粒度分布仪LA-920)，按照常规方法测定粒度分布。相对反射率采用χ2值为0.3或以下的值，为防止颗粒聚集，在超声波照射下进行测定，通过测定粒度分布模径是否向微小方向位移，来判断细胞壁形状的破坏情况。
优选在以下所示的各种加工品(薄膜)中具有所希望的性质。各种物性的测定方法、定义如下所述。
(成膜性)使用烘干涂料器(baker applicator)(ヨシミツ精机(株))将5％(重量比)的酵母细胞壁组分的浆液在取向聚丙烯薄膜セネシPOP(ダイセル化学工业(株)、薄膜厚0.02mm、产品目录给出的透氧率为304ml/m2·d·MPa)上流延后，在60℃的烘箱干燥45分钟，制备薄膜(薄膜厚约0.015mm)。
使用MOCON(modern Controls公司)的OX-TRAN100，在温度20℃、湿度60％RH、试验面积5cm2、氧浓度100％的条件下进行上述流延薄膜的透氧率测试。这里，透氧率表示薄膜厚度已确定(厚度约0.015mm、薄膜整体膜厚约0.035mm)的情况下，单位薄膜面积、单位时间、单位压力下的氧透过率。取向聚丙烯薄膜上流延脱色酵母细胞壁组分得到的薄膜的透氧率小于250ml/m2·d·MPa(60％RH)时，可以形成连续的薄膜，定义为具有成膜性。
本发明的制品至少只要满足上述液体YI和与成膜性相关的要件即可，进一步优选满足以薄膜的崩解性为首的各性质。
(薄膜分解性)优选本发明的脱色酵母细胞壁组分还优选具有优异的薄膜崩解性。本发明的脱色酵母细胞壁组分的薄膜崩解性通过以下方法进行确定“在把5％(重量比)脱色酵母细胞壁组分的浆液用60mm直径的圆形容器、在60℃下干燥2小时，制作流延薄膜时(薄膜厚约0.1mm)，该薄膜在纯水中的崩解时间”。
即，“具有薄膜崩解性(水分散性)”的意义是指“把5％(重量比)脱色酵母细胞壁组分的浆液用60mm直径的圆形容器、在60℃下干燥2小时，制备的流延薄膜(薄膜厚约0.1mm)，对该薄膜的面积为4cm2的脱色酵母细胞壁组分采用在第十四修订日本药局方中记载的崩解试验法所用的装置、使用37℃纯水的情况下，薄膜在60分钟内分散于水中，玻璃管内的2.0mm筛孔上未残留有薄膜”。本发明的脱色酵母细胞壁组分在60分钟内崩解，显示了良好的薄膜崩解性(水分散性)。本发明的脱色酵母细胞壁组分具有良好的薄膜崩解性，因此，在药剂等制剂中将其用作包被剂时，可有效地进行药剂的溶出。
(薄膜成型性)本发明的薄膜成型性是指将7-10g 5±1％的脱色酵母细胞壁组分的浆液在70-100mm直径的圆形容器中、在120℃下干燥30分钟，制作流延薄膜(薄膜厚100μm或其以下)，所述流延薄膜形成3个或3个以下连续薄膜片(薄膜平面上的龟裂数少，结果连续的面积比较大，因龟裂而互相分离的连续薄膜面为3个或以下)；相反，薄膜非成型性是指在相同条件下，薄膜成为4个或以上的封闭平面(薄膜平面上的龟裂数多，结果连续的面积比较小，因龟裂而互相分离的连续薄膜面为4个或4个以上)。
本发明的脱色酵母细胞组分具有优异的薄膜成型性。因此，作为制剂的包被剂使用时，可将连续的薄膜制成一定形状，有效地抑制有效成分的溶出以及掩盖气味。
(薄膜机械特性)添加换算成干燥物重量为10％的甘油作为增塑剂，制备脱色酵母细胞壁组分的铸膜(薄膜厚50-100μm)。使用上述薄膜进行拉伸试验，测定拉伸强度(MPa)和断裂伸长率(％)，进一步测定刺破强度(N)、压入量(mm)。拉伸强度的测定如下根据JIS Z1702制备试验片，按照JIS K7161、K7162，采用(株)インテスコ公司制造的精密万能材料试验仪2005型，以500mm/分钟的拉伸速度进行试验，测定拉伸强度、伸长率，以此作为拉伸强度、伸长率。刺破强度以厚度50-100μm的薄膜形状进行试验，使用(株)インテスコ公司制造的精密万能材料试验仪2005型，以200mm/分钟的试验速度，通过端部形状为1/4英寸的捣槌进行试验，分别将刺破薄膜时的负荷(单位N)和捣槌的压入量(单位mm)作为刺破强度(单位N)。拉伸试验为n＝5，刺破试验以n＝3分别测定刺破强度、压入量，采用平均值。
例如在以往的酵母细胞壁组分和脱色酵母细胞壁组分中分别加入10％增塑剂时，后者的各机械特性与前者对应比较，可以期待该负荷(N)提高1-20倍、压入量(mm)提高1-20倍、刺破强度(N)提高1-20倍。另外，还可以期待拉伸强度(MPa)提高1-20倍、伸长率提高1-20倍。
(气密性)本发明的脱色酵母细胞壁组分具有优异的气密性。本发明脱色酵母细胞壁组分的气密性以“在使用烘干涂料器(baker applicator)将5％(重量比)的脱色酵母细胞壁组分的浆在取向聚丙烯薄膜セネシPOP(ダイセル化学工业(株)、薄膜厚0.02mm)上流延，在60℃的烘箱干燥45分钟，制备流延薄膜(薄膜厚约0.015mm)时，在60％RH湿度下的透氧率”来进行确定。
即，本发明中，关于气密性，是在使用烘干涂料器(baker applicator)将5％(重量比)脱色酵母细胞壁组分的浆在取向聚丙烯薄膜セネシPOP(ダイセル化学工业(株)、薄膜厚0.02mm、产品目录给出的透氧率为304ml/m2·d·MPa)上流延，在60℃的烘箱干燥45分钟，制备流延薄膜(薄膜厚约0.015mm)时，形成在60％RH湿度下的透氧率显示为250ml/m2·d·MPa或其以下的连续薄膜。这里，如果不形成连续薄膜时，则在对制剂等进行包被时，由于欠缺延展性，对片剂刻印部位或边缘的包被不足，有时会产生龟裂，不能形成作为包被剂对内容物进行保护的作用。
(薄膜的着色性)优选本发明的脱色酵母壁细胞组分未见薄膜的着色性。将5％(重量比)脱色酵母细胞壁组分的浆在60℃干燥2小时，制成薄膜(薄膜厚约0.10mm)，以该薄膜的YI作为初始YI时，将上述薄膜在40℃、75R.H.％下保持1个月后的YI作为现时YI。由现时YI减去初始YI，增加的YI为5或以上，则薄膜着色为茶褐色，将其作为具有着色性。YI超过5时，因对片剂等包被的酵母细胞壁的着色而使得制剂着色，因而不优选。
本发明包括脱色酵母细胞壁组分，所述脱色酵母细胞壁组分是对含有从酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣的酵母细胞壁组分，或者含有将该细胞残渣进一步用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的细胞残渣的酵母细胞壁组分进行脱色处理而制备的。本发明特别是由以下的脱色酵母细胞壁组分组成的对由用乙酸乙酯、甲苯、己烷、丙酮、醚、石油醚、各种醇(甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇等)等的有机溶剂或它们的混合物或pH为2-12的水与它们的混合物(例如pH为2-12的水与乙醇的混合物)对可溶性细胞内成分进行洗涤处理、从酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣组成的酵母细胞壁组分，或者是由将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的细胞残渣组成的酵母细胞壁组分进行脱色处理，不损坏脱色处理前酵母细胞壁组分所具有的优异性质，还可以在其物性方面附加优异的性质。上述有机溶剂中，优选己烷、丙酮、各种醇(甲醇、乙醇、丙醇等)，进一步优选使用乙醇。本发明中使用的从酵母中除去可溶性细胞内成分所得的细胞残渣是按照如下方法进行制备的。
(原料酵母)作为本发明的包被剂原料的酵母，只要是在分类学上属于酵母的即可，可以使用任意的酵母，例如有啤酒酵母、葡萄酒酵母、面包酵母、产朊假丝酵母等，更具体地说，可例举属于啤酒酵母、面包酵母的酵母菌属的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或巴斯德氏糖酵母(Saccharomyces pastorianus)、其它还有鲁氏酵母(Saccharomycesrouxii)、卡氏酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、裂殖酵母(Saccharomyces pombe)，还有产甲醇酵母—念珠菌属的产朊假丝酵母(Candida utilis)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、解脂假丝酵母(Candida lipolytica)、(Candida flaveri)、博伊丁假丝酵母(Candidaboidinii)等，还有微小红酵母(Rhodotrura minuta)等。
(所用酵母的性状)这些酵母可以单独或组合使用。酵母优选使用鲜酵母，即使使用干酵母等鲜酵母以外形态的酵母时，例如可以悬浮于水中等，与鲜酵母同样地处理。并且，所使用的酵母的形状、大小并没有特别限定，优选形状尽量接近于球形的酵母，其大小优选范围为1-20μm。
(可溶性细胞内成分的除去)酵母中存在可溶解于水或极性溶剂的细胞内成分、例如蛋白质、氨基酸、糖、核酸、有机酸等成分，这些细胞内成分易溶于水，优选使用除去了这些可溶性细胞内成分后的酵母细胞壁组分。如果在可溶性细胞内成分存在的状态下直接使用，则成膜性降低(薄膜变脆)，是不理想的。
为了从酵母中除去这些可溶性细胞内成分，获得酵母细胞壁组分，需要通过酶处理将这些细胞内成分溶解，排除到细胞外。作为酶处理，只要是制备酵母细胞内成分作为酵母提取物时使用的方法即可，可以使用任意的酶处理法、将醇等添加物与酶组合的处理方法，其中所述制备酵母细胞内成分作为酵母提取物时使用的方法有使用酵母细胞内的酶的所谓自溶法；由外部添加蛋白酶、核酸酶、β-葡聚糖酶、酯酶、脂肪酶、磷酸酶等酶的酶添加法；以及将它们联合使用的方法等。由此可见，可以有效利用已知的酵母提取物制备中的酵母提取物提取残渣作为本发明的酵母细胞壁组分。
为了快速进行酶处理，在酶处理之前或酶处理中，可以进行高压匀浆处理(优选在10-150MPa下进行少于6次的处理)、或者超声波处理(使用20KHz、最大振幅50μm、输出2KW的超声波振子，以50-100％的输出，照射0.01-100分钟，优选以70％或70％以上的输出照射0.01-45分钟)，为了提高脱色效率，优选配合使用这两种方法进行处理。关于前处理次数，只要对组分的特性(YI黄色度或收率等)没有不良影响，则没有特别限定，优选小于10次，进一步优选少于6次，特别优选小于2次。进行10次或以上处理时，则可以观察到薄膜收缩，成膜性变差，因而不优选。
酶处理结束后的酵母通过用乙酸乙酯、甲苯、己烷、丙酮、醚、石油醚、各种醇(甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇等)等的有机溶剂或它们的混合物或者是pH为2-12的水与它们的混合物(例如pH 2-12的水与乙醇的混合物)进行清洗(洗涤处理)，例如将酶处理液加水稀释后实施离心分离等除去可溶性细胞内成分的处理，就可以作为该细胞残渣，得到酵母细胞壁组分。在酶反应后，通过同时采用上述记载的匀浆、超声波处理等分散处理，有助于除去细胞内的不必要成分(着色成分·脂质·气味成分·蛋白质等)。
如上所述，无需特别实施化学处理，所得酵母细胞壁组分由在物理和化学方面具有耐性的皮膜组成，其中所述皮膜中含有葡聚糖、甘露聚糖、甲壳质层，因此可以不损坏对内包物质的保护功能，并且能够填充更多量的物质，可作为优异的包被剂使用，根据需要，也可以配合酵母的洗涤处理、pH·温度·压力的调解处理等，制备酵母细胞壁组分。
(酸性水溶液处理和可溶解于该水溶液的成分的除去)接着，优选对通过除去可溶性细胞内成分而得到的上述酵母细胞壁组分进行酸性水溶液处理。用0.01-2N，优选用0.1-0.5N的例如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸等或者乙酸、柠檬酸等有机酸类的酸进行处理，然后将该悬浮液通过离心等分离为上清和酵母细胞残渣，通过收集该酵母细胞残渣来制备上述酵母细胞壁组分。另外，酸处理时，优选加热至60℃-80℃左右。通常酸浓度或反应温度过高，则成膜性变差，因而不优选。
(脱色处理)对上述酵母细胞壁组分进行脱色(或漂白)处理，处理前酵母细胞壁组分所具有的特有的黄褐色-褐色系的颜色脱落，变成白色。作为脱色(或漂白)处理，可以使用次氯酸系漂白剂、过氧化氢、臭氧、二氧化氯、过碳酸、过乙酸等的氧化系脱色处理，亚硫酸还原等的还原系脱色处理等众所周知的脱色(或漂白)剂进行。由这样的脱色(或漂白)剂进行的处理可以单独进行，也可以适当将多种方法组合进行。该多种方法中，从所用试剂残留的危险性、除去残留物质的难易程度、气味残留等方面考虑，优选臭氧处理或过氧化氢处理。可以将这些方法单独或组合使用。这些脱色处理的次数或顺序并没有特别限定，作为上述脱色处理，当分别采用臭氧和过氧化氢二者进行处理时，首先用臭氧进行处理，然后用过氧化氢进行处理，这样所得的产物或产物加工品的YI黄色度良好，在将该脱色酵母细胞壁组分作为包被剂使用时的成膜性、还有薄膜崩解性方面特别理想，故而优选先进行臭氧处理、然后进行过氧化氢处理。另外，可以将两种处理在碱条件下进行，还可以在两种脱色处理之间，单独进行全部或部分碱处理，例如按照(1)臭氧处理、碱处理、过氧化氢处理，(2)臭氧处理、碱处理、碱条件下的过氧化氢处理，(3)碱条件下的臭氧处理、碱处理、过氧化氢处理，(4)碱条件下的臭氧处理、碱处理、碱条件下的过氧化氢处理，的顺序进行处理。先进行过氧化氢处理时，可以按照(5)过氧化氢处理、碱处理、臭氧处理，(6)过氧化氢处理、碱处理、碱条件下的臭氧处理，(7)碱条件下的过氧化氢处理、碱处理、臭氧处理，(8)碱条件下的过氧化氢处理、碱处理、碱条件下的臭氧处理的顺序进行处理。
臭氧处理，例如在用臭氧发生器产生的1000-100000ppm浓度的臭氧混合气体对0.1-10％浓度的酵母细胞壁组分的浆进行处理时，优选以1000-100000ppm、以微细气泡形式进行接触反应。更具体地说，优选以0.01-10g臭氧/(g脱色对象·小时)的吹入量，以1-24小时的反应时间进行处理。该臭氧反应条件的臭氧浓度最高值随所用臭氧发生装置的能力而进行规定，臭氧纯度提高，则反应效率更提高，因此，本来没有规定最高浓度，但如果浓度为0.1％或其以下，则YI高，是不理想的。由臭氧处理得到的脱色酵母细胞壁组分会发生重新变为红褐色的回色现象，因此优选进行碱处理(通过氢氧化钠等碱溶液将脱色反应后的浆调节至pH 7-13)，并进行离心分离(4200rpm、10分钟)，水洗。为了分解残留臭氧，优选一面用过氧化物检测片(例如Merckoquant Peroxide-Test等)等进行残留臭氧的确认，一面调节还原剂的添加量。
过氧化氢处理优选将该浆浓度调节为0.1-10％，在温度为20-120℃，碱条件下(pH为7.0-13.0)反应0.1-30小时，进一步优选将过氧化氢浓度调节为0.5-5％，在温度为40-80℃，pH为8.5-11.5的条件下反应1-20小时。浓度为0.1％或其以下时，YI高，不优选。为了除去残留的过氧化氢，优选进行适当过氧化氢酶(例如ナガセケムテツクス(株)制造レオネツトFプラス)处理(处理条件pH 3.0-8.5、温度10-50℃)，以及根据需要降低pH(pH 2或以下)，再通过热处理进行该酶的失活处理或亚硫酸等的还原处理。残留过氧化氢的检测优选一面通过过氧化物检测片(例如Merekoquant Peroxide-Test等)等确认过程，一面随时添加还原剂、过氧化氢酶。
为了除去酵母细胞壁组分的脂质以及在脱色反应中生成的过氧化脂质，优选脱色处理后通过离心分离进行水洗。进一步优选通过有机溶剂(乙酸乙酯、甲苯、己烷、丙酮、醚、石油醚、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等)进行洗涤。通过该有机溶剂的洗涤，也可以降低酵母细胞壁组分本身的反应性以及与被包被的药物的反应性，因而优选。
用有机溶剂(乙酸乙酯、甲苯、己烷、丙酮、醚、石油醚、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等)取代水分散的浆状酵母细胞壁组分的水，制成用有机溶剂或者水-有机溶剂混合的溶液，由此可以使酵母细胞壁组分的浆凝聚，提高该组分的固体组分浓度，同时使浆的蒸汽压降低，容易使水成分蒸发，这样，无需施加在直接由水分散浆进行干燥时所必需的高温(100℃或以上)，在短时间内即可干燥，可以减少受热过程。
(脱色酵母细胞壁组分的使用形态)本发明的脱色酵母细胞壁组分通常为浆形态，也可以使用干燥的形态。例如，通过公知的喷雾干燥法或冷冻干燥法等干燥方法，将脱色酵母细胞壁组分的水分散体制成粉末，可得到脱色酵母细胞壁组分的粉末或干燥物。
(以脱色酵母细胞壁组分为主要成分的药用或食品用添加剂)本发明的脱色酵母细胞壁组分颜色洁白，无臭，干燥时显示牢固的粘合性，但其在水中崩解，因此可作为药用或食品用添加剂广泛应用。作为应用例可以列举包被剂、胶囊囊材、吸附剂、稳定剂、乳膏剂等的保湿剂、制粒助剂、悬浮剂、提高流动性的添加剂、粘合剂、通过与结晶纤维素的混合·干燥而粒状物同时具有成型性和崩解性的新型赋型剂、同时与其它包被剂配合使用。
以下详细说明。
(脱色酵母细胞壁组分作为包被剂的物性)以本发明的脱色酵母细胞壁组分为主要成分的包被剂与传统的可食性包被剂相比，虽然具有粘性但在加工中不发粘，包被后粒子与粒子之间没有附着，而且还具有作为可以控制溶出开始时间的肠溶性包被剂和苦味掩蔽剂的优异物性。另外，薄膜衣的氧等气体的透过率、透湿度极低，在现有的可食性薄膜中是特别优异的，优选作为晶须防止剂或气味掩盖剂使用。透气率高时，内包的药剂发生变质等问题，因而不优选。
即使增加包被量，本发明的脱色酵母细胞壁组分不会发生崩解延迟，因而优选。以往的包被中，如果进行包被则崩解性变差，因而是不理想的。
将本发明的脱色酵母细胞壁组分作为包被剂使用时，优选固体组分的浓度为0.1-30％。进一步优选1-10％。固体组分的浓度为30％或以上，则包被液粘度高，喷雾不形成很小的雾滴而导致发生凝集等问题，因而不优选。
(通过脱色酵母细胞壁组分进行包被的内包物质)由本发明的包被剂包被的内包物质只要是常温下以固体存在的物质即可，可以是任何物质，例如食品、食品原材料、酶、微生物、药品、种子、农药、肥料、香料、颜料等。上述食品、食品原材料的例子可具体例举淀粉食品、片剂型食品、西式糕点类(糖块、饴糖类、巧克力、口香糖等)、日式糕点类(米饼等)、烘烤糕点类(蛋糕、饼干、椒盐饼干)、软胶囊制剂、油炸小食品(马铃薯等薯片类、袋用小食品类)、将各种酱汁·酱油·豆酱·蛋黄酱·调味汁类制成粉末·固态的食品或食品原材料、将各种饮料(果汁饮料、花蜜饮料、清凉饮料、运动饮料、茶、咖啡、可可、汤类、乙醇饮料类等)制成粉末·固态的食品或食品原材料、各种提取粉末(牛肉·猪肉·鸡等禽畜产、虾·贝类·鱼类·海带等水产品、蔬菜·果树类、植物、酵母等)、将油脂类·香料类(香草、柑桔类、松鱼等)制成粉末·固态的食品或食品原材料、粉末调味品·草药类(辣椒、胡椒、山椒、柚子、罗勒等)、粉末饮料食品(速溶咖啡、速溶红茶、速溶乳、速溶汤·酱汤等)、各种乳制品类(乳酪等)、各种营养·营养辅助食品原材料类(维生素A·B族·C·D·E等维生素类、双岐杆菌·乳酸菌·酪酸菌等有益菌类、小球藻、Ca或Mg等矿物质类、蜂胶等)、调味品、切片食品类、食品上的配饰(味)品类(油炸碎面包片等)、将豆类加工食品(豆腐、豆渣等)制成固态的食品或食品原材料、将生鲜食品·烹调加工(咖喱、炖品类)食品制成固态的食品或食品原材料·冷冻食品(切好的蔬菜、肉类·包被炸品类)、各种加工食品。
当内包物质是微粒、颗粒或片剂等粒状物和种子等内包物质是本身与粒状物类似的形状时，可以有效利用本发明的包被剂。通过用本发明的包被剂对所述内包物质进行包被，可得到本发明的包被处理物。另一方面，如果不内包物质进行包被，使用本发明的包被剂成膜，则可得到透氧系数或透湿系数极低的本发明薄膜衣。(以脱色酵母细胞壁组分为主要成分的包被剂中添加的增塑剂和提高成膜性的添加剂)即使直接使用本发明的脱色酵母细胞壁组分也具有优异的效果，不过，优选加入增塑剂。当用于食品领域时，这些增塑剂可例举以甘油、山梨糖醇、氨基酸类、有机酸类、单酸甘油酯、二酸甘油酯、三酸甘油酯、MCT(中链三酰基甘油)为中心的油脂类等。当用于医药领域时，可例举三醋精、柠檬酸三乙酯、乙酰化单酸甘油酯等允许作为药品添加剂的增塑剂。另外，除增塑剂外或代替增塑剂，可以加入以下的添加剂。
添加剂的例子有增稠多糖类(阿拉伯胶、支链淀粉、角叉菜胶等)、多糖分解产物(甘露聚糖、凝胶多糖、木聚糖、纤维素等的分解物)、低聚糖类(海藻糖、蔗糖、异麦芽酮糖、棉籽糖、低聚糖类等)、糖醇(甘露糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、异麦芽酮糖醇、季戊四醇、阿糖醇、木糖醇、葡萄糖醇、半乳糖醇、核糖醇等)、食物纤维类(pine fibre(难溶性糊精)等)、蛇菊、环糊精、胶凝剂(琼脂、明胶、茱萸烷胶、凝胶多糖等)、盐酸精氨酸、硫酸亚铁、磷酸盐(磷酸钠、磷酸钾)、淀粉水解产物、己二酸二辛酯、硅酸铝、柠檬酸三乙酯、甘油脂肪酸酯、油脂类(芝麻油、液体石蜡、玉米油、大豆油、蓖麻籽油、花生油、棉籽油大豆油混合物等)、二甲基聚硅氧烷·二硅混合物、蔗糖脂肪酸酯、双丙甘醇、碳酸丙烯酯、中链脂肪酸甘油三酯、三醋精、植物甾醇、邻苯而甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二辛酯、邻苯二甲酸二丁酯、丁基邻苯二甲酰基丁基乙二醇酯、丙二醇、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)二醇、聚山梨酸80、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇2000、聚乙二醇、豆蔻酸异丙酯、单硬脂酸甘油酯、亚油酸异丙酯等。
上述所列增塑剂和添加剂可以将两者任意之一的一种或多种，或者两者各一种或多种，或者两者中的一种或多种组合，适当地加入到本发明的脱色酵母细胞壁组分中使用。
(添加到脱色酵母细胞壁组分包被剂中的阻氧性改良剂)与单独的脱色酵母细胞壁组分比较，加入添加剂(阻氧性改良剂)，则阻氧性得到提高，因而优选。所添加的阻氧性改良剂例如有单糖类(例如蔗糖、葡萄糖、甘露糖等)或低聚糖类(例如麦芽糖、海藻糖、果糖、阿糖、黑曲霉低聚糖、乳糖、D-葡糖酸-1，5-内酯等)的短链糖类，吸湿性低的氨基酸类(例如盐酸精氨酸等)，形成多水合物的无机盐类(例如硫酸亚铁、磷酸二氢钠等)，吸湿性低的糖醇类(例如甘露糖醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇等)，维生素类(维生素C等)，现有包被剂(PVA(聚乙烯醇)、Eudragit L30-D55、羟丙基纤维素(HPMC TC-5)等)，增稠多糖类(阿拉伯胶等)、凝胶剂(明胶等)。对于所述阻氧性改良剂并没有特别限定，但是在食品或药物制剂中使用时，优选含有可食性的物质。另外，也可以添加氧化钛、氧化锌、氧化铝、滑石粉、云母、蒙脱石、膨润土等的微粒(优选纳米级的分散物)等作为无机物。
这些阻氧性改良剂可以使用一种，也可以同时配合使用两种或两种以上的适宜改性剂，进一步优选同时使用上述增塑剂与用于提高成膜性的添加剂等多种添加剂(阻氧性改良剂+增塑剂、或者阻氧性改良剂+阻氧性改良剂以外的添加剂、或者阻氧性改良剂+增塑剂+阻氧性改良剂以外的添加剂)。
(使用挥发或升华防止剂的固体制剂的制造)使用以本发明的脱色酵母细胞壁组分为主要成分的挥发或升华防止剂制造固体制剂时，只要是挥发性或升华性的物质基本上被本发明的挥发或升华防止剂覆盖，与外部形成阻隔即可，对其并没有特别限定，可使用混合、覆盖(包被)等通常在该领域中使用的适当的固体制剂的制剂化方法。例如，使用本发明的挥发或升华防止剂制造药物制剂等固体制剂时，与挥发性或升华性有效成分、各种赋型剂、添加剂、润滑剂等一起配合本发明的挥发或升华防止剂，将其用湿法或干法制粒法或者直接对粉末进行压制的造粒法等制粒法等进行制粒，可以成型为颗粒或片剂这样的固体制剂。包覆本发明的挥发或升华防止剂，使其形成制剂时，可在有效成分中配合赋型剂或其它配合剂进行制粒的颗粒和片剂上，通过本领域通常采用的包被方法包被晶须发生防止剂，制成制剂。
(通过包被本发明的挥发或升华防止剂形成制剂时的物性)使用由本发明的脱色酵母细胞壁组分组成的挥发或升华防止剂，通过包被制成制剂的方法对于防止晶须等的发生特别有效。
使用本发明的挥发或升华防止剂的包被与以往的可食性包被相比，虽有粘性但在加工中不发粘，包被后颗粒之间不粘附，并且即使作用能控制溶出开始时间的肠溶性包被或苦味掩蔽剂使用也具有优异的物性。由本发明的包被剂制成的衣层(薄膜)，氧等气体的透过率、透湿度极低，在现有的可食性薄膜中是特别优异的，可适用于食品、药物、饲料、农药等广泛的领域内。
本发明的晶须发生防止剂即包被剂本身，并不具有特别的药效，因此与混合制酸剂等药效成分的情况不同，不会对所需药效产生影响，无损于通用性。并且，已知以往的包被中，如果进行包被则崩解性变差，但本发明品对崩解性没有影响，也未见因与内包物质的相互反应而引起制剂方面的变性。
(防止挥发或升华的固体制剂内包物质)本发明中，作为防止挥发或升华为目的的固体制剂中的挥发性或升华性物质可以设想为药物制剂、食品、食品原材料、食品添加剂、农药或香料的固体制剂中含有的、在常温下具有挥发或升华性的各种物质，特别作为在防止晶须等的发生中的对象物质可以列举如下。
即，作为在常温下发生升华的物质，例如有咖啡因(1水合物)、无水咖啡因、柠檬酸咖啡因、苯甲酸咖啡碱钠等咖啡因类，水杨酸，乙酰水杨酸，乙酰氨基苯酚，乙水杨胺，顺丁烯二酸氯苯胺，羟苄基苯甲酸替培定，那可丁(镇咳药)，枸橼酸喷托维林，愈疮木酚磺酸钾，作为生药提取物的麻黄、桂皮、地龙、人参、甘草、牛黄等的各种提取物，中成药提取制剂中的葛根汤、小柴胡汤、小青龙汤、柴胡桂枝汤等各种提取物，1-薄荷醇、d-薄荷醇、dl-薄荷醇等薄荷醇类，例如苯甲酸乙酯、苯甲酸苯酯、苯甲酸丙酯、苯甲酸苄基酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸钠等苯甲酸类等。
(由使用脱色酵母细胞壁组分的挥发或升华防止剂对固体制剂的包被)特别是以防止晶须发生为目的、使用本发明挥发或升华防止剂的包被、可通过以下方法进行操作单独使用或配合使用上述内包物质，制备微粒·颗粒或片剂等适宜粒径的颗粒，用前述本发明的挥发或防止剂悬浮于水或溶剂所得的悬浮液包被上述颗粒。
(使用脱色酵母细胞壁组分进行包被的工序)通过本发明的包被剂进行的包被可以对悬浮于水或水与溶剂的混合液中的悬浮液进行包被。具体来说，例如通过使用ドリアコ-タ-((株)パウレツク制)等糖衣机，将本发明的包被剂的悬浮液喷涂到应进行内包的物质上而进行包被，只要是公知的包被方法或公知的包被装置，则可以使用任意方法或装置。
(使用脱色酵母细胞壁组分包被工序的干燥温度及包被量)包被工序中的干燥温度、即用本发明包被剂的悬浮液对内包物质进行包被后的干燥温度并没有特别限定，通常优选在60-90℃的温度下进行干燥，还可以根据内包物质的温度稳定性来设定干燥温度。如果在90℃或其以上进行干燥，则成膜性变差，不优选。通过包被结束后进行补充干燥，能提高薄膜的稳定性，可获得稳定控制包被处理物的溶出效果。包被量优选根据所用内包物质的量、所需要的用途等进行适当设定。
(可与脱色酵母细胞壁组分组合的物质)将本发明的脱色酵母细胞壁组分应用于上述例举的药物或食品用途时，优选与以下物质组合使用。具体有稳定剂(例如海藻糖、甘露糖醇、富马酸等)、赋型剂(例如结晶纤维素、玉米淀粉、马铃薯淀粉、大米淀粉、乳糖、糖粉等)、粘合剂(例如羟丙甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、支链淀粉等)、薄膜衣剂(例如羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙甲基纤维素、乙酰琥珀酸羟丙甲基纤维素、羧甲基乙基纤维素、乙基纤维素、乙基纤维素水分散液、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物E、甲基丙烯酸共聚物L、甲基丙烯酸共聚物S、甲基丙烯酸共聚物LD、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物RS等)、表面活性剂(例如蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚山梨酸酯、月桂基硫酸钠、糖等)、崩解剂(例如低取代羟丙基纤维素、羧甲纤维素钙、交联羧甲纤维素钠、部分α化淀粉等)、无机物(例如滑石粉、硬脂酸镁、轻质硅酸酐、合成硅酸铝、氧化钛等)、增塑剂(例如阿拉伯树胶、支链淀粉、角叉菜胶等)、多糖分解产物(例如甘露聚糖、凝胶多糖、木聚糖、纤维素等的分解物)、低聚糖类(例如蔗糖、异麦芽酮糖、棉籽糖、低聚糖类等)、糖醇(例如山梨糖醇、麦芽糖醇、异麦芽酮糖醇、季戊四醇、阿糖醇、木糖醇、葡萄糖醇、半乳糖醇、核糖醇等)、食物纤维类(pine fibre(难溶性糊精)等)、蛇菊、环糊精、胶凝剂(例如琼脂、明胶、茱萸烷胶、凝胶多糖等)、氨基酸类(例如盐酸精氨酸等)、形成多水合物的无机盐类(例如硫酸亚铁等)、磷酸盐(例如磷酸钠、盐酸钾、磷酸二氢钠等)、淀粉水解产物、己二酸二辛酯、硅酸铝、柠檬酸三乙酯、甘油脂肪酸酯、油脂类(例如芝麻油、液体石蜡、玉米油、大豆油、蓖麻籽油、花生油、棉籽油·大豆油混合物等)、二甲基聚硅氧烷·二硅混合物、双丙甘醇、碳酸丙烯酯、中链脂肪酸甘油三酯、三醋精、植物甾醇、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二辛酯、邻苯二甲酸二丁酯、丁基邻苯二甲酰基丁基乙二醇酯、丙二醇、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)二醇、聚山梨酸酯80、聚丙二醇2000、聚乙二醇、豆蔻酸异丙酯、单硬脂酸甘油酯、亚油酸异丙酯等)。以上为代表例，可以与第14改正日本药局方和1996年发行的医药品添加物规格中记载的所有的物质组合使用。
本发明品作为食品·保健食品的用途中，在上述用途中使用时，可以与食品添加剂表上记载的物质组合使用。
以下通过实施例更具体地说明本发明的情况，但本发明不受这些 本实施例、比较例中上述物性以外的各物性的测定方法如下所示。实施例中所示的脱色酵母细胞壁组分重量全部为实际状态下的重量(干重)。
使用本发明品制成片剂时的各性质按如下方法进行测定。
(片剂的崩解性)根据第十四修订日本药局方中记载的片剂崩解试验法，使用崩解试验仪NT-40HS(富山产业(株))实施。试验液使用37℃纯水，通过6片片剂的平均崩解时间表示。
(片剂硬度)使用shuroin凝胶硬度仪6D型(フロイント产业(株))，求出10片片剂的平均硬度。
(气味感官试验)用片剂的重量进行换算把进行了10％包被的20片片剂装入玻璃瓶密封。在室温下放置一夜，然后由三位评审人员评定开封时是否有药物气味。三名评审人员均回答没有药物气味的，则气味掩盖良好；回答有药物气味，则表示未能掩盖气味。
(离心水洗法)以下，使用离心分离机(日立制作所himac CR7)，在4200rpm·10分钟的条件下对反应液进行离心分离，得到沉淀组分。向该沉淀组分中加入3倍重量左右的水，使其再分散，然后进行离心分离，得到沉淀组分，把以上操作定义为离心水清洗1次。对从上述加水阶段到进行离心的操作重复N次时，表述为离心水清洗N次，以下统一采用该表述。该表述不仅对于上述间歇式处理的离心分离机，对于使用连续排出式离心分离机时也是。
实施例1根据日本特许第3349677号记载的方法，用蛋白酶(NOVO公司制造，使用中性酶、碱性酶，在45-60℃、pH 7.5下反应15小时)溶解细胞内成分，通过离心分离(4200rpm 10分钟)除去可溶性细胞内成分，对所得酵母细胞壁组分(液体YI45)，以5％浓度的酵母细胞壁组分浓度，在0.5N的盐酸酸性条件下、在80℃处理10分钟，通过离心分离除去酸溶性细胞内成分，然后进行水洗，制成酸处理酵母细胞壁组分。对该酸处理的酵母细胞壁组分(液体YI49)，以5％浓度的酵母细胞壁组分浓度，以浓度为1.5％的过氧化氢、pH为10、温度60℃，在pH一定的条件下反应3小时，对5％浓度的酸处理酵母细胞壁组分进行脱色处理，反应结束后，通过离心分离(4200rpm、10分钟)进行充分水洗。将水洗物再次在上述反应条件下反应15小时，通过离心分离(4200rpm、10分钟)进行水洗。
该水洗物(实施例品1)的液体YI为12，具有成膜性(11ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(28分钟)。
实施例2将实施例1的离心分离沉淀分散于3倍量的99.5％乙醇中，搅拌30分钟后，通过离心分离除去上清部分的乙醇，再通过离心分离进行充分水洗。该水洗物(实施例品2)的液体YI为12，具有成膜性(13ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(29分钟)。
实施例3以3g/小时的比例向600g实施例1中所述的5％浓度酸处理酵母细胞壁组分浆中吹入15小时10000ppm的臭氧气体，进行脱色。臭氧处理后只进行水洗然后放置时，因处理而变白的脱色物再次着色为红褐色，产生回色现象，因此通过氢氧化钠调节至pH为11，使回色物质溶解，进行离心分离(4200rpm、10分钟)水洗，再对水洗物进行2小时与上述同样的吹入臭氧的处理。将该臭氧处理物的残留臭氧用亚硫酸钠还原分解，然后用氢氧化钠调节至pH为11，进行离心分离(4200rpm、10分钟)，再次进行充分水洗，将产生回色的物质洗净除去。该水洗物(实施例品3)的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，没有薄膜崩解性(超过60分钟)。
实施例4在pH 1.2的条件下，使200g有效氯浓度为12％的次氯酸钠与600g实施例1中所述的5％浓度酸处理酵母细胞壁组分的浆进行反应。反应2小时后，进行离心分离(4200rpm、10分钟)水洗，该水洗物(实施例品4)的液体YI为11，具有成膜性(11ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(30分钟)。
实施例5将酵母细胞壁组分调整为10％的浆，通过高压匀浆器以50MPa压力处理12次，对酵母细胞壁组分进行破碎，将破碎物用0.1N的盐酸在80℃处理10分钟，通过离心分离(4200rpm、10分钟)进行水洗。将该水洗得到的酸处理的酵母细胞壁组分制成5％的浆，添加1％次氯酸钠溶液(氯有效浓度为12％)，在盐酸酸性下(pH 1-2)的条件下进行脱色。该脱色物(实施例品5)为高度白色。该实施例品5的液体YI为1，具有成膜性(13ml/m2·d·MPa)，没有薄膜崩解性(超过60分钟)。
实施例6在3％浓度的过氧化氢、pH 10、温度60℃、pH一定的条件下对实施例1中5％浓度酵母细胞壁组分的浆进行反应，反应结束后，通过离心分离(4200rpm、10分钟)进行充分的水洗。用4N盐酸将该浆调至为pH 7-7.5，添0.05-0.1％过氧化氢酶(ナガセケムテツクスレオネツトFプラス)，搅拌30分钟，使残存过氧化氢分解除去，然后实施2次离心水洗，得到沉淀组分。用4N盐酸将该沉淀组分调至为pH 4，制成1.5L 3％的浆，在0.1MPa压力·10℃液体温度的条件下吹入臭氧，进行1小时的臭氧处理。臭氧气体，是通过由氧气瓶供给氧，用市售的放电式臭氧发生器产生氧·臭氧混合气体，使用该气体，在0.11MPa压力、2L/分钟流量、4.5％(w/w)臭氧浓度的条件下吹入，使臭氧气体形成微小气泡，进行气液反应。通过亚硫酸钠对臭氧处理物的残留臭氧进行还原分解，然后用氢氧化钠调节为pH 11，进行离心分离(4200rpm、10分钟)，再进行充分水洗，得到沉淀组分。将该沉淀组分分散于等量的99.5％乙醇中，搅拌30分钟，然后通过离心分离除去上清部分的乙醇，再通过离心分离进行充分水洗，得到该实施例品6。该实施例品6的液体YI为0，具有成膜性(16ml/m2·d·MPa)，没有薄膜崩解性(超过60分钟)。
实施例7在3.0％浓度过氧化氢、pH 10、温度60℃、pH一定的条件下。对与实施例1同样地制备的5％浓度酸处理的酵母细胞壁组分进行3小时的脱色处理反应，反应结束后，通过离心分离(4200rpm、10分钟)进行充分的水洗。将水洗物再次在上述反应条件下反应15小时，通过离心分离(4200rpm、10分钟)进行水洗，将所得作为实施例品7。
该实施例品的液体YI为1，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(28分钟)。
实施例8用4N盐酸将实施例1中所述的5％酸处理的酵母细胞壁组分的浆调节为pH 4，在0.1MPa压力·10℃液温的条件下向1L上述浆中吹入臭氧，进行1小时的臭氧处理。臭氧气体，是通过由氧气瓶供给氧，用市售的放电式臭氧发生器产生氧·臭氧混合气体，使用该混合气体，在0.11MPa的压力、2L/分钟流量、4.5％(w/w)臭氧浓度的条件下吹入，使臭氧气体形成微小气泡，进行气液反应。臭氧处理结束后，用25％氢氧化钠溶液将其调节为pH 11，然后以4200rpm·10分钟的条件实施2次离心水洗，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以此作为实施例品8。该实施例品8的液体YI为9，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，不具薄膜崩解性(超过60分钟)。
实施例9对与实施例8同样制备处理(臭氧处理后碱处理)的组分，以2.5％的干燥物浓度、2％浓度过氧化氢、用25％氢氧化钠调节为pH 10的浆，在60℃反应5小时。反应结束后，用4200rpm离心分离10分钟，然后将离心沉淀物用水稀释，制成干燥物重量浓度约为3％的浆。用4N盐酸将该浆调节为pH 7-7.5，添加0.05-0.1％过氧化氢酶(ナガセケムテツクスレオネツトFプラス)，搅拌30分钟，使残存过氧化氢分解除去，然后实施2次离心水洗，得到沉淀组分。将得到的该沉淀组分与等重量的乙醇加到沉淀组分中，搅拌、分散，制成浆的状态后，搅拌30分钟后进行离心，将该乙醇洗涤处理进行3次，然后实施2次离心水洗，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以此组分作为实施例品9。该实施例品9的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具薄膜崩解性(7分钟)。
实施例10对与实施例8同样制备处理(臭氧处理后碱处理)的组分以2.5％的干燥物浓度，2％浓度过氧化氢、用25％氢氧化钠调节为pH 10的浆，在60℃反应2小时。反应结束后，用4200rpm离心分离10分钟，然后将离心沉淀用水稀释，制成干燥物重量浓度约为3％的浆。用4N盐酸将该浆调节为pH 7-7.5，添0.05-0.1％过氧化氢酶(ナガセケムテツクスレオネツトFプラス)，搅拌30分钟，使残存过氧化氢分解除去，然后实施2次离心水洗，得到沉淀组分。将得到的该沉淀组分与等重量的乙醇加到沉淀组分中，搅拌、分散，制成浆的状态后，搅拌30分钟后进行2次离心水洗，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以此作为实施例品10。该实施例品10的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(14分钟)。
实施例11根据日本特许第3349677记载的方法，对作为啤酒厂副产品而得到的鲜菌状态的啤酒鲜酵母浆离心分离(4200rpm 10分钟)，使所得酵母悬浮，使固体组分达到10％重量。将该酵母用100MPa的匀浆器处理，然后通过蛋白酶(NOVO制造，使用中性酶、碱性酶，在45-60℃、pH 7.5下反应15小时)溶解细胞内成分。通过对该浆进行离心分离(4200rpm、10分钟)，除去可溶性细胞内成分，水洗所得细胞残渣，制成酵母细胞壁组分(YCW)。将该YCW以5％干燥重量浓度、1％浓度的过氧化氢、用25％浓度的氢氧化钠调节成pH 10的浆，将所得浆在60℃反应2.5小时。反应结束后，再次添加相当于1％量的过氧化氢，通过25％氢氧化钠再将pH调节为10，然后在60℃反应2.5小时。反应结束后，用4200rpm离心分离10分钟，然后将离心沉淀用水稀释，制成干燥物重量浓度约为3％的浆。用4N盐酸将该浆调节为pH 7-7.5，添加0.5％过氧化氢酶(ナガセケムテツクスレオネツトFプラス)，搅拌30分钟，使残存过氧化氢分解除去，然后实施2次离心水洗。将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以此组分作为实施例品11。该实施例品11的液体YI为13，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(14分钟)。
实施例12对1L用4N盐酸将pH调节为4的5％的YCW浆，在0.1MPa压力·10℃液温的条件下吹入臭氧，进行1小时臭氧处理。臭氧气体是通过由氧气瓶供给氧，用市售的放电式臭氧发生器产生氧·臭氧混合气体，使用该气体，在0.11MPa的压力、2L/分钟流量、4.5％(w/w)臭氧浓度的条件下对YCW浆进行吹入，使臭氧气体形成微小气泡，进行气液反应。臭氧处理结束后，用25％氢氧化钠溶液将YCW浆调节为pH 11，然后以4200rpm·10分钟的条件实施2次离心水洗，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以此组分作为实施例品12。该实施例品12的液体YI为6，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，不具有薄膜崩解性(超过60分钟)。
实施例13在0.1MPa压力·10℃液温的条件下对1L实施例品12的2.5％浆吹入臭氧，进行0.5小时的臭氧处理。臭氧气体，是通过由氧气瓶供给氧，用市售的放电式臭氧发生器产生氧·臭氧混合气体，使用该气体，在0.11MPa压力、2L/分钟流量、7.2％(w/w)臭氧浓度的条件下对YCW浆进行吹入，使臭氧气体形成微小气泡，进行气液反应。臭氧处理结束后，用25％氢氧化钠溶液调节为pH 11，然后以4200rpm·10分钟的条件实施2次离心水洗，将所得沉淀组分调节为pH3.8，以此作为实施例品13。该实施例品13的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，不具有薄膜崩解性(超过60分钟)。
实施例14将实施例13最终调节为pH 3.8之前的沉淀组分与等量的乙醇加到沉淀组分中，搅拌分散，制成浆的状态，然后搅拌30分钟，离心水洗2次，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以该组分作为实施例品14。该实施例品14的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，不具有薄膜崩解性(超过60分钟)。
实施例15将实施例品12以2.5％的干燥物浓度、1％浓度过氧化氢、用25％浓度氢氧化钠调节成pH 10的浆，在60℃反应2小时。反应结束后，用4200rpm离心分离10分钟，然后将离心沉淀物用水稀释，制成干燥物重量浓度约为3％的浆。用4N盐酸将该浆调节为pH 7-7.5，添加0.05-0.1％过氧化氢酶(ナガセケムテツクスレオネツトFプラス)，搅拌30分钟，使残存过氧化氢分解除去，然后实施2次离心水洗，得到沉淀组分。将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以此组分作为实施例品15。该实施例品15的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(19分钟)。
实施例16将实施例15的最终调节为pH 3.8之前的沉淀组分与等量的乙醇加到沉淀组分中，搅拌分散，制成浆的状态，然后搅拌30分钟后，进行离心水洗2次，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以该组分作为实施例品16。该实施例品16的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(9分钟)。
比较例1
将10g干燥的酵母提取物残渣悬浮于500g 0.5N浓度的NaOH溶液中。混合100g 2％的过氧化氢，回流煮沸120分钟，然后通过离心进行水洗，将所得沉淀组分作为比较例品1。该比较例品1的液体YI为7，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例2将20g干燥的酵母提取物残渣悬浮于1000g 0.5N浓度的NaOH溶液，回流煮沸120分钟。通过离心分离进行水洗，将所得沉淀组分悬浮于1000g 0.5N盐酸溶液，回流煮沸120分钟。之后再次通过离心分离(3000rpm、20分钟)进行水洗，将沉淀组分作为比较例品2。该比较例品2的液体YI为30，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例3用1000g 2％过氧化氢溶液将比较例品2回流煮沸，通过离心分离(3000rpm、20分钟)进行水洗，将沉淀组分作为比较例品3。该比较例品3的液体YI为7，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例4将20g干燥的酵母提取物残渣悬浮于1000g 0.5N浓度的NaOH溶液中，回流煮沸120分钟。通过离心分离进行水洗，将沉淀组分悬浮于1000g 0.5N盐酸溶液中，回流煮沸120分钟。之后再次通过离心分离(3000rpm、20分钟)进行水洗，向该沉淀组分中吹入1小时10000ppm的臭氧，通过离心分离进行水洗。加入1000mL99.5％乙醇，通过离心分离除去乙醇，加入水，通过离心分离进行水洗，将所得沉淀组分作为比较例品4。该比较例品4的液体YI为1，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例5
使啤酒酵母自溶，水洗除去提取物部分，将得到的酵母细胞壁组分制成固体组分浓度为5％(重量比)，制成1L的水分散液，用碳酸氢钠调节为pH 8.5，在常温下搅拌1小时。将该分散溶液以4200rpm·10分钟条件进行离心分离。将沉淀组分悬浮于2.5％氢氧化钠中，调节为pH 12.5，然后通过热水浴保持在65℃，加入30％浓度的过氧化氢，调节至整体为1.5％浓度(过氧化氢浓度)，反应15小时。反应后，用12N浓盐酸调节为pH 7.0，通过离心分离(4200rpm·10分钟)得到沉淀组分后，将其固体组分浓度调节至5％，通过4N盐酸调节为pH 5，以该组分作为比较例品5。该比较例品5的液体YI为36，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例6使啤酒酵母自溶，萃取除去提取物部分，然后按照实施例1记载的方法进行酸处理，将所得的酸处理的酵母细胞壁组分进行与比较例5的脱色方法同样的处理，将所得的组分作为比较例品6。该比较例品6的液体YI为31，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例7根据日本特许3349677号公报公开的制备方法，使YCW的干燥物浓度为5％、盐酸浓度为0.3N的YCW浆保持80℃·10分钟，然后离心水洗2次。将该沉淀组分稀释为5％干燥物浓度的浆，调节为pH 7.5，然后再离心水洗2次。将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以该组分作为比较例品7。该比较例品7的液体YI为49，具有成膜性(5ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(25分钟)。
比较例8制备YCW干燥物浓度约为2％、氢氧化钠浓度为0.5N的浆，回流煮沸120分钟。取反应结束后的浆，离心水洗2次，以所得组分作为比较例品8。该比较例品8的液体YI为49，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例9制备YCW干燥物浓度约为2.5％、氢氧化钠浓度为0.5N、过氧化氢浓度为2％的浆，回流煮沸120分钟。取反应结束后的浆，离心水洗2次，以所得组分作为比较例品9。
比较例10将1000g比较例品8中干燥物浓度约为2.5％的浆在常温常压下进行臭氧处理。臭氧的吹入条件如下由氧气瓶供给氧，用市售的放电式臭氧发生器产生氧·臭氧混合气体。使用该气体，在0.11MPa压力、1L/分钟流量、10000ppm臭氧浓度的条件下向YCW浆中吹入，使臭氧气体形成微小气泡，进行气液反应。取反应结束后的浆，离心水洗2次，将所得组分作为比较例品10。该比较例品10的液体YI为25，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例11加入与比较例品10等重量的乙醇，通过搅拌进行分散，制成浆的状态，然后搅拌30分钟，离心水洗2次。将所得沉淀组分作为比较例品11。该比较例品11的液体YI为23，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
比较例12稀释比较例品8，制备1000g盐酸浓度为0.5N的浆，回流煮沸120分钟。取反应结束后的浆，离心水洗2次，将所得沉淀组分制成1000g浆，在常温常压下进行臭氧处理。臭氧的吹入条件如下由氧气瓶供给氧，用市售的放电式臭氧发生器产生氧·臭氧混合气体。使用该气体，在0.11MPa压力、1L/分钟流量、10000ppm臭氧浓度的条件下向YCW浆中吹入，使臭氧气体形成微小气泡，进行气液反应。取反应结束后的浆，离心水洗2次。向沉淀组分中加入与所得沉淀组分等重量的乙醇，通过搅拌进行分散，制成浆的状态，然后搅拌30分钟，离心水洗2次。将所得沉淀组分作为比较例品12。该比较例品12的液体YI为26，不具有成膜性(超过250ml/m2·d·MPa)，并且不形成连续的薄膜，因此无法测定薄膜崩解性。
实施例17将实施例品1的固体组分和增塑剂分散于水中，制备包被液，其中使作为增塑剂的海藻糖的比率达到上述脱色酸处理酵母细胞壁组分中固体组分的40％重量。各包被液的固体组分中实施例品1占5.8％重量。接着，将结晶纤维素“アゼセル”PH-301(旭化成(株)制造)/甘露糖醇(东和化成工业(株)制造)/L-半胱氨酸(武田药品(株)制造)按照20/50/30的质量比混合，作为内包物质，L-HPC(日本曹达(株)制造)作为粘合液，使用マルチプレツクスMP-01((株)パウレツク公司制造)制成颗粒，将干燥后的颗粒/硬脂酸镁(太平产业(株))按照100/0.5的比例混合，然后使用旋转式压片机(菊水制作所(株)制造)，制成直径8mm、质量200mg、片剂硬度1N的片剂(素片)。包被时，使用フロイント产业制造的糖衣机FREUND MODEL-MINI，装入预先制成的400g素片，在容器转速20rpm、气体温度80℃、排气温度35℃、气体压力0.1MPa的条件下，一面将上述包被溶液以2.5g/分钟进行喷雾，一面进行包被，并使皮膜量换算为片剂重量为10％。接着，在60℃的干燥机中干燥处理一晚，得到包被片剂。将实施例品1的包被片剂作为片剂(a)。包被操作中未见片剂之间的粘连，片剂表面表层完全且均匀地包覆。片剂的YI为25，崩解时间为460秒，气味掩盖良好，片剂硬度为2.1N。
实施例18使用实施例品7，与实施例17同样地制备包被液，使海藻糖为实施例品7的固体组分的40％重量。使用该包被液(固体组分浓度为7.3％重量)进行与实施例17同样的操作，得到包被片剂(b)。包被良好。片剂的YI为11，崩解时间为442秒，气味掩盖良好，片剂硬度为2.1N。
实施例19使用实施例品5，与实施例17同样地制备包被液，使海藻糖为实施例品5的固体组分的40％重量。使用该包被液(固体组分浓度为4.9％重量)进行与实施例17同样的操作，得到包被片剂(c)。包被良好。片剂的YI为18，崩解时间为1800秒或其以上，气味掩盖良好，片剂硬度为2.1N。
实施例20使用实施例品9，与实施例17同样地制备包被液，使甘露糖醇为实施例品9的固体组分的40％重量。使用该包被液(固体组分浓度为7.0％重量)进行与实施例17同样的操作，得到包被片剂(A)。包被良好。片剂的YI为7，崩解时间为347秒，气味掩盖良好，片剂硬度为3.3N。
实施例21使用实施例品16，与实施例17同样地制备包被液，使甘露糖醇为实施例品16的固体组分的40％重量。使用该包被液(固体组分浓度为8.0％重量)进行与实施例9同样的操作，得到包被片剂(B)。包被良好。片剂的YI为7，崩解时间为348秒，气味掩盖良好，片剂硬度为3.3N。
比较例13使用比较例品7，与实施例16同样地制备包被液，使海藻糖为酸处理的酵母细胞壁组分固体组分的40％重量。使用该包被液(固体组分浓度为11.1％重量)，进行与上述同样的操作，得到包被片剂(d)。包被良好。片剂的YI为50，崩解时间为434秒，气味掩盖良好，片剂硬度为2.3N。
比较例14将5％重量HPMC(TC-5、信越化学(株)制造)的包被液进行与实施例16同样的操作，制成包被片剂(e)。与上述同样，包被良好。片剂的YI为12，崩解时间为450秒，未能掩盖气味，片剂硬度为2.1N。
比较例15使用比较例品7，与实施例16同样地制备包被液，使甘露糖醇为酸处理的酵母细胞壁组分固体组分的40％重量。使用该包被液(固体组分浓度为11.1％重量)，进行与实施例17同样的操作，得到包被片剂(C)。包被良好。片剂的YI为55，崩解时间为429秒，气味掩盖良好，片剂硬度为2.1N。
(单一比较例薄膜衣的气密性)比较例16在湿度为60％RH的条件下，比较例品7的透氧率为5ml/m2·d·MPa。
比较例17在湿度为60％RH的条件下，HPMCTC-5(信越化学(株)制造)的透氧率为172ml/m2·d·MPa或其以上。
比较例18在湿度为60％RH的条件下，Eudragit L30-D55((株)木通口商会销售)(Eudragit/PEG2000/TWIN 80＝100/10/3.9重量比混合)的透氧率为49ml/m2·d·MPa。
实施例22(阻氧性改良剂)在实施例品7的固体组分为5％重量的溶液中，用搅拌子对整个溶液进行搅拌、并使其分散，得到均匀的溶液，使阻氧性改良剂为脱色酸处理酵母细胞壁组分中固体组分的10-80重量％。
用涂料机将该包被液在取向聚丙烯薄膜セネシPOP(ダイセル化学工业(株))上流延，在60℃的烘箱干燥45分钟，得到薄膜厚度约0.015mm(整个薄膜厚0.035mm)的流延薄膜。试验装置使用MOCON(modern Controls公司制造)的OX-TRAN100，在温度20℃、湿度60％或85％、试验面积5cm2、氧浓度100％的条件下进行测定，把所得结果作为透氧率(ml/m2·d·MPa)进行计算，如表1和表2所示。由表1和表2可知在本发明的脱色酸处理酵母细胞壁组分中加入阻氧性改良剂，则即使在高湿度条件下也显示良好的阻氧性。
(表1)
(表2)
实施例23
(实施例品和现有类似品(比较例)的酵母细胞壁形状)对实施例品1、3和比较例品1、3拍摄了扫描电子显微镜(SEM)照片(图2)。可知实施例品(1、3)的细胞壁形状实质上完全保留(保持形态)(图2A、B)，但比较例品(1、3)的细胞壁形状则消失(图2C、D)。
实施例24(本发明品和现有类似品(比较品)的酵母细胞壁形状(通过粒度分布变化进行评价))通过堀场制作所制造的激光粒度分布仪LA-920，使相对折射率为200A000I，对实施例品1和3，以及比较例品1、比较例品3、比较例品4分别进行粒度分布测定。
实施例品1和3的模径均在5.5-5.7μm附近，而比较例品1、3、4中，粒径降至3.2-3.7μm附近。比较例品3、4中，3.9μm或其以下的粒径比率分别为39％、52％、54％，均为高比例，而实施例品1和3中分别为16.7％、5.8％，是比较例品的一半或一半以下的低比例。由此可知在比较例品中，细胞壁形状受到破坏，在实施例品中则可保持其形状。
实施例25(成膜性)对实施例品和比较例品的薄膜成型性进行了测定。数据为对各样品测定2次的结果。
实施例品1-16、比较例品7中，YCW显示良好的薄膜成型性，都为完整的薄膜或部分有龟裂的薄膜，但比较例品1-6或8-12全部为零碎的薄膜片，未见薄膜成型性，无法进行以下作为薄膜的物性值的测定。
实施例26(薄膜的机械特性)对于薄膜成型性良好的样品进行薄膜机械性的测定。
要评价的薄膜的制作如下制备添加10％甘油的干燥物浆液，以干燥物换算，浆液中的干燥物浓度为2％左右将换算为干燥物相当于1.0g的浆液倒入100mm×100mm聚苯乙烯制正方形皿中。将该皿干燥约一天，将制成流延薄膜的样品用于以下薄膜物性测定试验。
结果为各值的平均值，表示在表3中。
如以下表3所示，与实施例11中的YCW、比较例品7比较，随着进行脱色处理，薄膜强度提高。特别是实施例品9和实施例品14中，可见到薄膜强度显著提高，拉伸强度提高至YCW薄膜的近5倍，相对于比较例品7薄膜，强度也提高一倍以上。另外，表示薄膜膜厚方向强度的突破强度也为YCW的4.5倍，为比较例7的3倍，可见强度提高的效果。并具在表示薄膜的柔韧性的伸长率或突破的压入量的提高方面也可以看到效果。
(表3)薄膜成型性和薄膜机械特性
→无法评价实施例27
(由干燥酵母制备酵母细胞壁组分(YCW-2))据日本特许第3349677记载的方法，使作为啤酒厂的副产品而得到的死亡菌状态的干燥啤酒酵母悬浮，使固体组分为10％重量。将该酵母用100MPa的匀浆器处理，然后通过蛋白酶(NOVO制造，使用中性酶、碱性酶，在45-60℃、pH 7.5下反应15小时)溶解细胞内成分。通过对该浆进行离心分离(4200rpm、10分钟)，除去可溶性细胞内成分，水洗所得细胞残渣，制成酵母细胞壁组分。此时的pH约为7.0。
以下把Yeast Cell Wall简化，将该酵母细胞壁组分简称为YCW-2(液体YI75)。
(YCW-2的臭氧处理)对1L经使用4N盐酸将pH调节到4的YCW-2的5％浆液，在0.1MPa·10℃液温的条件下吹入臭氧，进行1小时的臭氧处理。臭氧气体是通过由氧气瓶供给氧，用市售的放电式臭氧发生器产生氧·臭氧混合气体，使用该混合气体，在0.11MPa压力、2L/分钟流量、4.5％(w/w)臭氧浓度的条件下对YCW浆吹入，使臭氧气体形成微小气泡，进行气液反应。臭氧处理结束后，用25％氢氧化钠溶液将YCW浆调节为pH 11，然后在4200rpm·10分钟的条件下离心水洗2次，得到沉淀组分。
(YCW-2经臭氧处理后的过氧化氢处理)将该沉淀组分以2.5％的干燥物浓度、1％过氧化氢浓度、25％氢氧化钠调节为pH 10的浆，在60℃反应2小时。反应结束后，用4200rpm离心分离10分钟，然后将离心沉淀物用水稀释，制成干燥物重量浓度约为3％的浆。用4N盐酸将该浆调节为pH 7-7.5，添加0.05-0.1％过氧化氢酶(ナガセケムテツクスレオネツトFプラス)，搅拌30分钟，使残存过氧化氢分解除去，然后实施2次离心水洗，得到沉淀组分。将该沉淀组分调节为pH 3.8，以此组分作为实施例品27。
该实施例品27的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(30分钟以内)。
实施例28(乙醇处理)
将实施例27的最终调节为pH 3.8之前的沉淀组分与乙醇按照1∶1的重量比例混合，搅拌分散，制成浆的状态，然后搅拌30分钟，再离心水洗2次，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以该组分作为实施例品28。该实施例品28的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，不具有薄膜崩解性(30分钟以内)。
实施例29(由干燥酵母制备AYC-2)根据日本特许3349677号公报的制备方法，制成YCW-2干燥物浓度为5％、0.3N盐酸浓度的YCW浆，保持80℃·10分钟，然后离心水洗2次。将该沉淀组分稀释为5％干燥物浓度的浆，调节为pH7.5，然后再离心水洗2次。将所得沉淀组分调节为pH 3.8。
以下将该组分称为AYC-2。液体YI为82。
(AYC-2的臭氧处理)对上述AYC-2进行与实施例26同样的制备处理(臭氧处理后碱处理)，在4200rpm·10分钟的条件下离心水洗2次，得到沉淀组分。
(AYC-2经臭氧处理后的过氧化氢处理)将该沉淀组分以2.5％的干燥物浓度、1％过氧化氢浓度、25％氢氧化钠调节为pH 10的浆，在60℃反应2小时。反应结束后，用4200rpm离心分离10分钟，然后将离心沉淀物用水稀释，制成干燥重量浓度约为3％的浆。用4N盐酸将该浆调节为pH 7-7.5，添加0.05-0.1％过氧化氢酶(ナガセケムテツクスレオネツトFプラス)，搅拌30分钟，使残存过氧化氢分解除去，然后实施2次离心水洗，得到沉淀组分。将该沉淀组分调节为pH 3.8，以此组分作为实施例品29。该实施例品29的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(30分钟以内)。
实施例30(乙醇处理)将实施例29的最终调节为pH 3.8之前的沉淀组分与乙醇按照重量比1∶1的比例混合，搅拌分散，制成浆的状态，然后搅拌30分钟，离心水洗2次，将所得沉淀组分调节为pH 3.8，以该组分作为实施例品30。该实施例品30的液体YI为0，具有成膜性(10ml/m2·d·MPa)，具有薄膜崩解性(30分钟以内)。
实施例31成分组成(通常为3种成分)的测定以下表示各种本实施例品和与本比较例品进行成分比较的比较例(表4)。如表4所示，本实施例品与本比较例品相比较，蛋白质、脂质含量有稍降低的倾向。
(表4)3种成分组成
实施例32糖组成的测定酵母细胞壁(来自酿酒酵母)中含有的糖大部分为葡聚糖·甘露聚糖，出芽痕附近含有微量的甲壳质。为了测定酵母细胞壁的糖组成，对各种本实施例品或本比较例品，将葡聚糖·甘露聚糖水解为结构单糖的葡萄糖·甘露糖，测定其含量。
由于结构单糖为还原糖，因此通过柱后法，按照以下的表5、表6的顺序，使用高效液相色谱法(以下称为HPLC)，以n＝1对各样品进行测定。
(表5)试验溶液的制备方法
(表6)测定条件HPLC条件
如表7所示，糖组成分析的结果表明随着白色度的提高，葡聚糖的比例提高，甘露聚糖的含量降低，但在具有薄膜成型性的样品中，仍残存有甘露聚糖。另一方面不具有薄膜成型性的比较例品8-12中，未检出相当于甘露聚糖的甘露糖。
(表7)糖组成一览
产业实用性本发明的脱色酵母细胞壁组分使以往的酵母细胞壁组分所具有的黄褐色-褐色的颜色脱色，呈现白色(例如液体YI为13或其以下)，且作为包被剂等使用时，虽有粘性但不与被包物粘附，包被后颗粒之间不会粘附，透氧系数极低，可控制溶出时间，即使用有机溶剂(甲醇等)处理，成膜性也不变化等，脱色前的酵母细胞壁组分所具有缺点都得到改善的脱色酵母细胞壁组分。
本发明通过以由本发明制造的具有上述性质的脱色酵母细胞壁组分为主要成分，进一步添加使用增塑剂、阻氧性改良剂等，可作为食品、食品原材料、药物制剂、酶、微生物、种子、农药、肥料、香料或颜料等中的优异包被剂使用。本发明的包被剂对防止内包成分的挥发或升华的作用优异，例如在药物制剂领域，作为“产生晶须”而出现问题的含有挥发性或升华性物质制剂的防止挥发或升华的添加剂而具有可用性的物质。
权利要求
1.脱色酵母细胞壁组分，其特征在于该脱色酵母细胞壁组分通过日本电色(株)SE-2000以反射方法(光源C、视角2度)测定的液体YI(黄度指数)为13或以下。
2.根据权利要求1中所述的脱色酵母细胞壁组分，其特征在于在使用烘干涂料器将5％(重量比)脱色酵母细胞壁组分的浆在取向聚丙烯薄膜Senesi POP(ダイセル化学工业(株)、薄膜厚0.02mm)上流延，在60℃的烘箱内干燥45分钟，制备流延薄膜(薄膜厚约0.015mm)时，脱色酵母细胞壁组分具有形成在60％RH湿度下的透氧率为250ml/m2·d·MPa或以下的连续薄膜的性质。
3.根据权利要求1或2中所述的脱色酵母细胞壁组分，其特征在于在将5％(重量比)的脱色酵母细胞壁组分的浆用60mm直径的圆形容器，在60℃下干燥2小时，制备流延薄膜时(薄膜厚约0.1mm)，该薄膜在纯水中的崩解时间为60分钟以内。
4.根据权利要求1-3任一项中所述的脱色酵母细胞壁组分，其特征在于该脱色酵母细胞壁组分是将从经酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣，或者进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的细胞残渣进行脱色处理而制备的。
5.权利要求1-4任一项中所述的脱色酵母细胞壁组分的制备方法，其特征在于将从经酶处理过的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣，或者进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的残渣用脱色剂进行脱色处理。
6.根据权利要求5中所述的脱色酵母细胞壁组分的制备方法，其特征在于通过脱色剂进行的脱色处理是通过过氧化氢和臭氧进行的脱色处理。
7.包被剂，其特征在于所述包被剂以权利要求1-4任一项中所述的脱色酵母细胞壁组分为主要成分。
全文摘要
用脱色剂将经酶处理的酵母中除去可溶性细胞内成分得到的细胞残渣，或者进一步将该细胞残渣用酸性水溶液处理、除去可溶解于酸性水溶液的成分得到的细胞残渣进行脱色处理，从而获得不影响脱色处理前的酵母细胞壁组分所具有的优异的性质，还可以在该物性中新加入优异的性质的脱色酵母细胞壁组分。本发明的脱色酵母细胞壁组分呈白色，且可以一直保持脱色前的酵母细胞壁组分所具有的、作为包被剂使用时的优点，并且可以新附加使酵母细胞壁组分的机械特性提高、酵母臭等降低等的优异的性质。
文档编号C12N1/16GK1688688SQ0382445
公开日2005年10月26日 申请日期2003年8月21日 优先权日2002年8月21日
发明者江口敬宏, 中村智彦, 五味俊一, 松本理加 申请人:麒麟麦酒株式会社, 旭化成化学株式会社