专利名称：玉米超氧化物歧化酶提取方法
技术领域：
本发明涉及的是一种生物酶的制取方法，尤其涉及的是超氧化物歧化酶(SOD)的制取方法。
背景技术：
超氧化物歧化酶，又简称SOD，是一种重要的氧自由基的清除剂，具有很强的抗过氧自由基能力，它广泛应用于保健品、药物和化妆品中。目前的SOD从动物血液中提取的，其提取方法不仅步骤繁琐，而且要消耗大量化工原料，产生大量废气污染空气，同时其废液中含有的氯仿、丙酮、磷酸等都是常效的有机物质，无法回收，其排放、渗入地下将直接造成地下水的酸化、碱化污染，而且血液原料中携带病原微生物，国家在法规条例也加以严格地限制。血液提取SOD分子量大，难以透过细胞膜，还容易被胃蛋白或胰蛋白水解，应用中存在活性较弱的缺陷，通常只能在0-4℃温度环境下存活，否则失活。现有技术中虽也公开有以玉米为原料提取SOD的方法，但其方法各异，也存在化工原料消耗量大的弊病。中国专利CN99112607、名称为“玉米超氧化物歧化酶(SOD)复合酶大规模制造方法”，其方法是利用玉米，经发芽、加磷酸盐、打浆、加纤维素酶、打浆、加氯化钙、过渡、加炉化酶、硅藻土过滤、离心、超滤、加维生素C、维生素E、山梨酸钾、冷冻、融解离心一系列过程制取超氧化物歧化酶，该技术方案同样存在工艺复杂、工业原料用量大的技术弊病，仍存在难以大规模生产的技术缺陷。
发明内容
为改变现有仍单纯依赖血液为原料提取超氧化物起化酶提取途径的技术现状，而现有以玉米为原料提取超氧化物起化酶又存在产生大量污染废物的技术缺陷，本发明专利申请提供了一种以玉米为原料提取超氧化物歧化酶的提取方法的技术方案，本技术方案的主要技术内容是①玉米籽粒消毒、发芽调整室温、水温、PH值、湿度、氧气供给量、光照、培养基等至适合玉米籽粒出芽的一个良好的基础及环境；②打浆、压汁按发芽籽粒重量加入一倍重量比的无杂质PH值为6-7的去离子水，打浆，然后压榨取浆汁，沉淀、滤去其粗渣；③沉淀后离心去渣；向压取的浆汁中加入其体积百分比15％的缓冲剂，搅拌，使细渣和淀粉静置沉淀，取其上清液经离心后，提取清液送入超滤；④滤液超滤将清液进行超滤，其清液送入提取塔；⑤提取活性峰清液加入促进剂，促使其加速沉淀，送入提取塔，经若干级扩散后，回收沉淀物；⑥、浓缩升华冻干将沉淀物浓缩，将浓缩后的提取物装入冻干盘中冷冻；其第③步中的缓冲剂为占去离子水体积量35％的柠檬酸溶液和占稀释水体积量35％的柠檬酸钠溶液混合制成；其第⑤步中的促进剂为丙酮和95％乙醇分别按体积百分比85％∶15％加入以上清液中。
本发明专利申请提供的以玉米为原料提取超氧化物歧化酶的整套提取方法，其原料来源丰富，提取方法简单，更适于大工业生产，而且本方法提取的SOD其分子量仅为血液SOD分子量的1/2，克服了血液SOD分子量大、不易透过细胞膜并容易被胃蛋白、胰蛋白水解的缺陷。该方法所提取的SOD不仅是SOD酵素酶的一种，同时它还存在谷光苷肽、过氧化氢酶、过氧化物酶，它是一种多酶种的复合酶，能够较长地保持SOD的活性，能抵制胃蛋白、胰蛋白酶的水解。由于它产自植物糖线型细胞，所以它含有VE、VB、VC等多种维生素及铜、铁、锌、锰、硒等多种微量元素，而这些元素及维生素又都是人体内不可缺少的物质及营养。它的产成品呈乳白色，少带有粉色。经检测认定，玉米SOD在清除人体内自由基方面，是目前最完全、最彻底的一种酵素酶，是无可替代的。该酶族属于偏酸性蛋白酶族，活性稳定，有耐热性，能够在15-25℃的温度环境下保持其活性，尤其在PH7.6～9<p>
4、滤液超滤在超滤装置中经微分筛分液，其分液后经超滤，其超滤清液再送提取塔；5、提取活性峰液向清液中加入促进剂，其促进剂为丙酮和95％乙醇分别按体积百分比85％∶15％加入以上清液中，送入提取塔，该提取塔设为四级，扩散去液，回收沉淀物，并将沉淀物送入浓缩罐浓缩。各级提取后放出的清液中所含的丙酮、乙醇均可回收再利用。
6、浓缩升华冻干将沉淀物送入浓缩罐进行浓缩处理，浓缩后的半流体装入冻干盘中升华、冻干，得到SOD粗品。
第6步之后的各步骤是为了要制取医疗用SOD精品，所要进行的工艺步骤是7、将浓缩后的SOD粗品用去离子水稀释，用水浴和透析将透析液送入离心机离心除液，回收其沉淀物，将沉淀物再浓缩冻干，即得到精品SOD，其冻干包装与SOD粗品是一致的。
权利要求
1.一种玉米超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于其提取方法为①玉米籽粒消毒、发芽调整室温、水温、PH值、湿度、氧气供给量、光照、培养基等至适合玉米籽粒出芽的一个良好的基础及环境；②打浆、压汁按发芽籽粒重量加入一倍重量比的无杂质PH值为6-7的去离子水，打浆，然后压榨取浆汁，沉淀、滤去其粗渣；③沉淀后离心去渣向压取的浆汁中加入其体积百分比15％的缓冲剂，搅拌，使细渣和淀粉静置沉淀，取其上清液经离心后，提取清液送入超滤④滤液超滤将清液进行超滤，其清液送入提取塔；⑤提取活性峰液清液加入促进剂，促使其加速沉淀，送入提取塔，经若干级扩散后，回收沉淀物；⑥、浓缩升华冻干；将沉淀物浓缩，将浓缩后的提取物装入冻干盘升华、冻干；其第③步中的缓冲剂为占去离子水体积量65％的柠檬酸溶液和占去离子水体积量35％的柠檬酸钠溶液混合制成；其第⑤步中的促进剂为丙酮和95％乙醇分别按体积百分比85％∶15％加入以上清液中。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的第②步用去离子水的PH值为6-6.5。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于其第④步其清液先经微分筛分液，再进行超滤。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于为得到精品SOD，第⑥步后将浓缩后的SOD粗品用去离子水稀释，用水浴和透析将透析液送入离心机离心除液，回收其沉淀物，将沉淀物再浓缩冻干、包装。
全文摘要
本发明涉及的是以玉米为原料来提取超氧化物歧化酶的一种新型提取方法，该方法提取的超氧化物歧化酶是一种多酶种的复合酶，不仅易于透过细胞膜，而且能抵制胃、胰等多蛋白酶水解作用，其活性稳定，具有耐热性。其提取方法包括玉米籽粒消毒、发芽、打浆、压汁、沉淀离心去渣、滤液超滤、提取活性峰、浓缩升华冻干包装。用本方法提取的SOD其活性高，蛋白含量少，温度适应性广。
文档编号C12N9/02GK1626654SQ200310119109
公开日2005年6月15日 申请日期2003年12月11日 优先权日2003年12月11日
发明者张明 申请人:张明