专利名称：含有多种生物活性物质制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种含有多种生物活性物质制剂的制备方法，更具体地说，本发明涉及通过采用与传统工艺截然不同的创新方法，从鹿茸和鹿血中提取多种生物活性物质，并将其广泛应用于健康、保健、美容、营养产品中的工艺及方法。
发明技术背景鹿茸和鹿血作为中国中医药中著名的传统原料，已经广泛应用有千年历史，其卓著的功效使其作为中国传统医药的滋补圣药得到广泛使用而历久不衰。
现代实验技术对鹿茸成份进行深入研究后发现，鹿茸发挥卓著滋补功效的主要成分是鹿茸中含有的多种生长因子以及其他生物活性物质和含量丰富的氨基酸和微量元素。鹿茸中含有多种人体新陈代谢所必需的多种生长因子，如神经生长因子(NGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，上皮细胞生长因子(EGF)等，同时还含有多种雄性激素、雌性激素、前列腺素、神经髓鞘磷脂、氨基酸等其他生物活性物质。
传统的鹿茸加工方式是将新鲜收割的鹿茸在开水中蒸煮，然后再烘干或晒干后，以干燥的形式存放或运输。在作为药材使用时多用酒精浸泡提取，或与其他药材一起高温煎煮，这种形式的加工方法，由于高温而使各种生物活性物质灭活，最终只能残余微量生长因子或生物活性物质，大幅度减低了鹿茸本应该拥有的更好作用。
鹿血和鹿茸一样，含有多种生物活性物质，传统制备方式是直接浸泡制备药酒，由于寄生虫或微生物等的污染，这种服用方式既不卫生也不安全。
鹿茸和鹿血均含有丰富的生物活性物质，这些生物活性物质大多数是人体代谢所必须，而又是随着年龄增长而分泌减少的生长因子，但目前的加工技术和方法不能将这两种珍贵的药材发挥应有的作用。
发明内容
本发明所需要解决的技术问题是根据鹿茸、鹿血的组成特征，应用现代新技术设计出能最大保存其中生物活性物质，程序简单、安全有效的方法，从鹿茸和鹿血中制备含有多种生物活性物质的制剂，并将这种制剂广泛应用于健康、保健、美容、营养等产品。
本发明解决上述技术问题所提出的技术方案，其特征是，在鹿茸粉碎、浸泡、沉淀、浓缩过程中全部采用低温方式，避免高温对生物活性物质的损害，并通过双层切面交错超滤分离技术提取多数生物活性物质，并通过冷冻干燥方式制备冷冻干燥粉未状物。
本发明解决上述技术问题所提出的技术方案，其特征是，以带有抗凝溶液或经抗凝处理的容器收集鹿血，通过冷冻离心方式，沉淀大部份红细胞及血红蛋白，采用缓冲液稀释血浆成份，用低分子量的超滤膜，并应用双层切面交错超滤装置对血浆成份进行分离和浓缩，提取多数生物活性物质，并通过冷冻干燥方式将浓缩物直接制备冷冻干燥粉状物质。
根据分析鹿茸和鹿血中生物活性成分，发现其主要活性成份是以7,000-60,000分子量的活性多肽形式存在，而其他生物活性物质分子量通常小于80,000，因此，设计分离提取其中生物活性物质方案时可以此作为重要依据。
此外，鹿茸的粉碎物和鹿血都属于粘滞度较高的液体，采用通常的分子筛式超滤装置进行分离，很容易阻塞超滤膜孔，导致分离效率降低，因此采用国际上最新分离技术—切面交错流体超滤分离技术，才能取得比较良好的效果。
另外，为保存生物活性物质采用的浸泡液、稀释液PH值既不能过低＜5，又不能过高＞9，因为酸性或碱性溶液都可能破坏生物活性物质。
本发明的技术特征是，从鹿茸制备含有多种生物活性物质的方法是在低温环境下将新鲜鹿茸冷冻干燥，并在低温环境下粉碎，一般在2℃～8℃环境下进行粉碎，最好是在4℃～6℃环境下。在将鹿茸粉碎成细粉后(20目～200目，最好40目～60目)，用无菌缓冲液或无菌去离子水或无菌蒸镏水浸泡，浸泡液的PH值为5～9，最好6.5～7.5。浸泡鹿茸粉碎物的次数从1次～5次，最好是2次～3次，每次浸泡时间一般12～36小时，最好是20～25小时，浸泡液体积最好是鹿茸粉碎物的1倍～9倍，最好是3～5倍，浸泡后采用过滤方法或其他方法收集浸泡液，数次收集的浸泡液合併。浸泡液用冷冻高速离心机离心，转速一般2000～25000转/分，最好14000～18000转/分，沉淀浸泡液中杂质，收集离心上清液，用超滤装置进行分离和浓缩，用于分离的超滤膜一般采用分子量40,000～120,000的超滤膜，任何无毒、医药等级的超滤膜均可以应用。分离超滤膜的分子量最好是90,000～100,000。可以采用任何符合医疗等级标准的超滤分离设备或装置，最好采用切面交错流体超滤(TFF)设备或装置，因为切面交错流体设计可以大幅度减少超滤膜网孔阻塞，提高分离效率，在分离后采用低分子量的超滤膜浓缩，一般采用分子量4000～10,000，最好采用分子量5000～6000超微滤膜，浓缩物直接放入冷冻干燥装置冷冻干燥成粉状物。
本发明的技术特征是，从鹿血中制备含有多种生物活性物质的方法是，用带有抗凝液或经抗凝处理的容器，将收集的经抗凝处理的鹿血放入冷冻离心机中进行离心，离心速度1500～5000转/分，最好2500～3000转/分，离心时间15～45分钟，最好是20～30分钟，收集离心上清液，即血浆成分，加1～5倍量PH值6～8的缓冲液至血浆成分以稀释，稀释后的混合液采用分子量40,000～90,000的超微滤膜进行分离，最好是50,000～80,000分子量超微滤膜，可以采用任何医用等级的超微滤膜装置，最好采用切面交错流体(TFF)装置或设备，分离后的分离液用低分子量超微滤膜浓缩，滤膜分子量4000～7000，浓缩至原血浆容量1/2-3/4。浓缩物直接放入冷冻干燥装置内冷冻干燥成粉状物。
采用上述工艺和方法制备的含有多种生长因子和生物活性物质的制剂内含有丰富的神经生长因子、细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、多种氨基酸、神经髓鞘磷脂、前列腺素、雄雌性激素、胆碱多糖，而且制剂中的神经生长因子(NGF)还天然结合有神经节苷脂，能协同神经生长因子发挥更大作用。
上述的多种生长因子是一类多肽类生物活性物质，具有很强的生物活性，对人体发挥细胞生长分化、调控、修复作用。
多种动物实验证明，这类生物活性物质可以帮助人体恢复和修复各种损伤的组织和器官功能，促进细胞生长，促进新陈代谢，可用于治疗神经系统退行性疾病、脑外伤、贫血、糖尿病。还可以帮助人体强壮机体，延缓衰老。
这类生物活性物质可以广泛应用于各类健康、保健、营养、营养产品中，作为添加剂与上述产品联合应用，以发挥生物活性物质的强大功效。
本发明与已有技术相比，能从鹿茸和鹿血中制备含有多种生物活性物质和多种生长因子的制剂，采用本发明的方法和工艺，不但能避免损害鹿茸和鹿血的生物活性物质，而且采用的是最新技术，工艺简单，效率高，生产制备的产品纯度高，不含其他杂质，能广泛推广和应用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明实施例1鹿茸提取物冷冻干燥粉制备将新鲜的鹿茸提取物冷冻干燥后，在低温下进行粉碎，将粉碎的鹿茸浆加入到相当于鹿茸浆5倍体积的无菌蒸镏水浸泡36小时，用过滤的方式收集过滤液并低温保存(4℃冰箱中保存)，滤渣部份再次用相当于滤渣部份2倍量的无菌蒸镏水浸泡，再次用过滤的方式收集过滤液，两次过滤液合并，用高速离心方法沉淀杂质，离心速度为16000转/分，在4℃低温环境下冷冻离心，收集离心上清液，采用分子量5000的超微滤膜，在交错切面超微过滤设备上浓缩至过滤液体积10％，浓缩物直接放在冷冻干燥机上冷冻干燥成粉未。
实施例2鹿血提取物冷冻干燥粉制备用带抗凝液或经抗凝液处理过的注射器从活鹿大静脉抽取300ml鹿血，收集多份鹿血，加入放置有液体抗凝液的容器内，收集的鹿血直接用冷冻离心机进行离心，离心速度3000转/分，离心时间15分钟，以沉淀红细胞及血红蛋白，收集离心机上清液，即血浆部份，将收集的鹿血血浆部份放入交错切面超滤分离设备的容器内，加入相当于血浆容量2倍量的缓冲液，用分子量为5000的超微滤膜滤器，采用交替切面超滤浓缩方式进行浓缩，当浓缩物浓缩至原来血浆容积的一半量时，停止浓缩过程，将浓缩物直接送到冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到冷冻干燥粉。
实施例3对比测试制剂中总氮含量用实施例1中提取的鹿茸提取物冷冻干燥粉测定总含氮量为15％，用市售鹿茸粉采用传统加热浸泡法制备制剂测定总氮含量为6％，本发明制备方法制剂中含氮量增加1倍以上。经活性测定，活性比传统加热浸泡法提高4.5倍以上。
实施例4神经生长因子(NGF)测定用实例1中提取的制剂进行测定，应用280mm的紫外控测仪，该制剂经电泳分析，得到三条带，经对比分别为PH9.15，9.45和9.64，分子量为14500的神经生长因子。
实施例5用鹿茸和鹿血提取物冷冻干燥粉制备口服制剂取用本发明实施例1制备的鹿茸提取物冷冻干燥粉300mg，取用本发明实例2制备的鹿血提取物冷冻干燥粉200mg，直接灌装胶囊，每天空腹服一颗。
实施例6用本发明实施例5制备的胶囊给10名糖尿病周围神经炎患者服用，病人年令52～64岁，均患有II型糖尿病并伴有周围神经炎，患者每天空腹时服一颗，连续服用12周，80％病人周围神经炎症状好转，70％的病人自诉肌肉变有力，体力改善，睡眠状态改善，90％的患者自诉性功能增强，性敏感性提高。
权利要求
1.一种含有多种生物活性物质制剂的制备方法，更具体地说，是一种通过采用与传统工艺截然不同的创新方法，从鹿茸和鹿血中提取多种生物活性物质并保持其生物活性的工艺和方法，其特征是，在鹿茸和/或鹿血粉碎、浸泡、沉淀、浓缩过程中全部采用低温方式，避免高温对生物活性物质的损害，并通过双层切面交错超滤分离技术提取多种生物活性物质，通过冷冻干燥方式制备冷冻干燥粉末状物。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征是，从鹿茸制备含有多种生物活性物质的方法是在低温环境下将新鲜鹿茸冷冻干燥，并在低温环境下粉碎，一般在2℃～8℃环境下进行粉碎，最好是在4℃～6℃环境下。在将鹿茸粉碎成细粉后(20目～200目，最好40目～60目)，用无菌缓冲液或无菌去离子水或无菌蒸镏水浸泡，浸泡液的PH值为5～9，最好6.5～7.5。浸泡鹿茸粉碎物的次数从1次～5次，最好是2次～3次，每次浸泡时间一般12～36小时，最好是20～25小时，浸泡液体积最好是鹿茸粉碎物的1倍～9倍，最好是3～5倍，浸泡后采用过滤方法或其他方法收集浸泡液，数次收集的浸泡液合併。浸泡液用冷冻高速离心机离心，转速一般2000～25000转/分，最好14000～18000转/分，沉淀浸泡液中杂质，收集离心上清液，用超滤装置进行分离和浓缩，用于分离的超滤膜一般采用分子量40,000～120,000的超滤膜，任何无毒、医药等级的超滤膜均可以应用。分离超滤膜的分子量最好是90,000～100,000。可以采用任何符合医疗等级标准的超滤分离设备或装置，最好采用切面交错流体超滤(TFF)设备或装置，因为切面交错流体设计可以大幅度减少超滤膜网孔阻塞，提高分离效率，在分离后采用低分子量的超滤膜浓缩，一般采用分子量4000～10,000，最好采用分子量5000～6000超微滤膜，浓缩物直接放入冷冻干燥装置冷冻干燥成粉状物。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征是，以带有抗凝溶液或经抗凝处理的容器收集鹿血，通过冷冻离心方式，沉淀大部份红细胞及血红蛋白，用缓冲液稀释血浆成份，采用低分子量的超滤膜，最好应用双层切面交错超滤装置对血浆成份进行分离和浓缩，提取多数生物活性物质，并通过冷冻干燥方式将浓缩物直接制备成冷冻干燥粉状物质。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征是，从鹿血中制备含有多种生物活性物质的方法是，用带有抗凝液或经抗凝处理的容器，将收集的经抗凝处理的鹿血放入冷冻离心机中进行离心，离心速度1500～5000转/分，最好2500～3000转/分，离心时间15～45分钟，最好是20～30分钟，收集离心上清液，即血浆成分，加1～5倍量PH值6～8的缓冲液至血浆成分以稀释，稀释后的混合液采用分子量40,000～90,000的超微滤膜进行分离，最好是50,000～80,000分子量超微滤膜，可以采用任何医用等级的超微滤膜装置，最好采用切面交错流体(TFF)装置或设备，分离后的分离液用低分子量超微滤膜浓缩，滤膜分子量4000～7000，浓缩至原血浆容量1/2-3/4。浓缩物直接放入冷冻干燥装置内冷冻干燥成粉状物。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征是，鹿茸和鹿血中生物活性成分，主要是以7000-60,000分子量的活性多肽形式存在，而其他生物活性物质分子量通常小于80,000，在设计分离提取其中生物活性物质方案时采用分子量80,000分子量的超滤膜作为过滤用滤膜，而采用分子量＜7000的超滤膜作为浓缩用滤膜。
6.按照权利要求1所述的方法，其特征是，鹿茸的粉碎物和鹿血都属于粘滞度较高的液体，采用通常的分子筛式超滤装置进行分离，很容易阻塞超滤膜孔，导致分离效率降低，因此采用国际上最新分离技术—双层切面交错流体超滤分离技术，能显著提高分离效率，提高收获率，是优选方法。
7.按照权利要求1所述的方法，其特征是，为保存生物活性物质的生物活性，采用的浸泡液、稀释液的PH值都既不能过低＜5，又不能过高＞9，因为酸性或碱性溶液都可能破坏生物活性物质的活性。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征是，采用上述工艺和方法制备的含有多种生长因子和生物活性物质的制剂内，含有丰富的神经生长因子、细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、多种氨基酸、神经髓鞘磷脂、前列腺素、雄雌性激素、胆碱多糖，而且制剂中的神经生长因子(NGF)还天然结合有神经节苷脂，能协同神经生长因子发挥更大作用。上述的多种生长因子是一类多肽类生物活性物质，具有很强的生物活性，对人体发挥细胞生长分化、调控、修复作用。这类生物活性物质可以帮助人体恢复和修复各种损伤的组织和器官功能，促进细胞生长，促进新陈代谢，可用于治疗神经系统退行性疾病、脑外伤、贫血、糖尿病。还可以帮助人体强壮机体，延缓衰老。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征是，采用本发明方法制备的含有多种生物活性物质的制剂，可以单独制备口服制剂用于与人体健康相关的用途，这类生物活性物质也可以广泛应用于各类健康、保健、营养、营养产品中，作为添加剂与上述产品联合应用，以发挥生物活性物质的强大功效。
全文摘要
一种通过采用与传统工艺截然不同方式从鹿茸和鹿血中提取多种生物活性物质，并保持其生物活性的工艺和方法，其特征是，在鹿茸和/或鹿血粉碎、浸泡、沉淀、浓缩过程中全部采用低温方式，避免高温环境对生物活性物质的损害，并采用双层切面交错超滤分离方式分离、提取生物活性物质，制备的生物活性物质可以广泛应用于与健康相关的领域。
文档编号A23L1/30GK1557341SQ20041001586
公开日2004年12月29日 申请日期2004年1月15日 优先权日2004年1月15日
发明者高春平 申请人:高春平