专利名称：蜜环菌酒生产方法
技术领域：
本发明涉及一类蜜环菌制剂，确切地说是蜜环菌酒及蜜环菌胞外多糖发酵液的生产方法。
背景技术：
蜜环菌(Armillaria mellea)是天麻的共生菌，其菌丝体在暗处能够发荧光，其中含有胞内多糖、萜类化合物、酯类化合物、氨基酸等多种营养物质，具有定惊、熄风、健脑、增强人体免疫力、抗肿瘤等多种药理活性，可作为天麻的替代品。蜜环菌发酵液的生产主要是进行菌种的筛选与分离、菌种种子培养、液体种子培养及发酵，或者将发酵液加工成其它产品，樊美珍等公开了一种蜜环菌面条及蜜环菌菌株工业液体发酵生产工艺(CN1109509C)，在蜜环菌液体进行深层发酵，种子培养基为比例不同的麸皮汁、白砂糖、蚕蛹粉、KH2PO4、MgSO4、维生素B1及水，发酵液体培养基配方为不同比例的白砂糖、可溶性淀粉、酵母粉、KH2PO4、MgSO4及水，并将蜜环菌液体发酵物加入面粉中制成面条。杨孟君公开了一种纳米天麻蜜环菌制剂药物及其制备方法，这种技术应用现代高科技纳米材料为技术目标，将蜜环菌粉通过加溶剂并导入微波萃取，减压浓缩、超音速射流喷雾干燥等步骤中药饮片，这种药片生物利用度高，治疗效果显著；在蜜环菌胞内多糖(菌丝体多糖，不包括分泌到发酵液中的多糖)的研究方面(沈业寿等，中国食用菌，1999，18(1)38-40)，主要注重于菌丝体多糖的分离纯化及性质的研究，没有进行液体发酵研究；在蜜环菌深层发酵或胞外多糖深层发酵研究方面，邵伟等(中国食用菌，2004，23(3)50-51)进行过深层发酵研究；谭周进等(微生物学通报，2002，29(3)33-36；食品与机械，2001，(5)18-19)、李立恒等(湖南农业大学学报(自然科学版)，2003，29(5)428-430)进行了蜜环菌胞外多糖的发酵研究。这些方法一是没有将大米粉、红薯粉、豆饼粉进行优化组合作为发酵培养基的主要原料，因为单纯的应用红薯粉作为原料，含量过高会导致产品中甲醇含量高(红薯中高含量果胶甲酯的分解)；二是应用蛋白胨作为培养基原料，价格太贵，在生产中会提高成本，价格太高，难以实施。本发明应用现代发酵技术，将大米粉、红薯粉、豆饼粉、酵母粉等优化组合作为培养基主料，一方面可以利用红薯粉与酵母粉中的特殊成分，促进蜜环菌的生长，同时利用了大米粉与豆饼粉中的碳或氮，满足了蜜环菌的营养要求；二是利用了取材容易、价格较低的农副产品原料，可以降低成本，适应于大规模生产，同时生产的蜜环菌酒更适合于人们的饮用习惯，蜜环菌酒可做为天麻酒的替代品，解决天麻栽培周期长，野生天麻难得的问题，满足人们的需求；三是产品中利用了蜜环菌菌丝体及发酵液中的全部有效成分，并且富含蜜环菌多糖。天麻酒是传统保健酒，蜜环菌酒具有天麻的类似功能，并兼具多糖的功能。目前，国内外尚未见蜜环菌酒的报道。在蜜环菌发酵液生产工艺中，采用了一种新的培养基，.这种培养基直接使用了大米粉、红薯粉、豆饼粉等廉价的原料作为主要原料，降低了生产成本。
发明内容
本发明的目的在于提供一种原料廉价、质量稳定、生产效率高、周期短的蜜环菌酒及其生产工艺。
本发明的另一目的是提供蜜环菌胞外多糖液体发酵的培养基。
具体技术解决方案如下本发明中蜜环菌酒的生产方法将大米粉经过糖化后，在糖化后的液体中直接加入酵母菌进行酒精发酵，再加入蜜环菌胞外多糖发酵液，或在糖化后的液体中先加入蜜环菌发酵液后，再加入酵母菌进行酒精发酵，其生产工艺按本领域所属专业技术人员所知的黄酒的生产方法进行。
一种方法是在水中加入重量比为15-30％的大米粉，调成粥状后，煮熟，加入重量比为0.3％-1.0％的糖化酶，在65-75℃温度下糖化1-3h后，在100℃煮沸20min，然后冷却至20-40℃，在糖化后的液体中按重量比30-60％的比例加入蜜环菌胞外多糖发酵液，接种酵母菌进行酒精发酵，酵母菌的接种量为重量比1-5％，在20-26℃进行酒精发酵3-7天，发酵液基本停止冒气泡时，用食用酒精调酒精度到7-10度，然后在4℃左右进行后发酵，发酵时间为15-30天，压榨，澄清，用食用酒精、白砂糖等调兑至酒精度为1220度；另一种方法是在水中加入重量比为15-30％的大米粉，调成粥状后，煮熟，加入重量比0.3％-1.0％的糖化酶，在65-75℃糖化1-3h后，然后冷却至20-40℃，接种酵母菌进行酒精发酵，酵母菌的接种量为重量比1-5％，在20-26℃进行酒精发酵3-7天，发酵液基本停止冒气泡时，发酵完毕，按重量比30-60％的比例加入蜜环菌胞外多糖液体发酵物，用食用酒精调酒精度到7-10度，然后在4℃的温度条件下左右进行后发酵，发酵时间为15-30天，压榨，澄清，用食用酒精、白砂糖等调兑；调兑后发酵液酒精度为12～20度。
在蜜环菌胞外多糖发酵液加入到大米发酵液前，对蜜环菌胞外多糖发酵液先经过100℃煮沸20-60min；经过上述方法生产的蜜环菌酒，酒中蜜环菌多糖含量为0.1-0.5mg/ml、酒精度为12-20度，甜度根据不同人群而异生产不同类型的蜜环菌酒。
本发明中蜜环菌胞外多糖发酵液的深层发酵工艺1.1菌种分离蜜环菌分离于湖南省怀化市天麻的菌索。
1.2斜面菌种培养将分离纯化的菌株接种于PDA斜面，25-26℃恒温培养至菌索基本达到试管底部，菌索灰白色。
1.3液体种子培养，其种子培养基为按重量比计，1.5-2％白砂糖，1-3％麸皮汁，0.2-0.5％蛋白胨，0.1-0.3％酵母粉，0.075％MgSO4.7H2O，0.15％KH2PO4，加水溶解定容至适量，pH自然。
1.4蜜环菌深层发酵生产，采用三级发酵即一级种子罐生产、二级种子罐生产、三级发酵罐生产，其生产方法按本领域专业技术人员所知的方法进行。蜜环菌种子罐及发酵罐液体培养基为按重量比计，0.5-1.0％红薯粉，1.0-2.0％大米粉，0.1-0.3％酵母粉，0.2-1.0％豆饼粉，0.15％KH2PO4，0.075％MgSO4.7H2O，加水溶解并添加至定量，pH自然。
蜜环菌发酵终点时菌体含量18-25g/L，发酵液中胞外多糖含量为0.2-0.7mg/ml。
本发明采用工业发酵技术生产具天麻药理活性的酒剂，生产周期短、产量高、原料廉价、生产效益高。将蜜环菌发酵物，即菌丝体和发酵液(主要是胞外多糖)同时制成蜜环菌酒剂，兼具菌丝体的天麻相似药理活性和发酵液中胞外多糖抗肿瘤等药理活性，达到增强人体免疫能力、抗肿瘤及治疗心脑血管疾病的效果。
具体实施例方式下面通过实例对本发明做进一步描述。
实施例1蜜环菌酒在水中加入重量比为15-30％的大米粉调成粥状后，煮熟，加入重量比0.3％-1.0％的糖化酶，在65-75℃糖化1-3h后，在100℃煮沸20min，然后冷却至20-40℃，在糖化后的液体中按重量比30-60％的比例加入蜜环菌胞外多糖发酵液(发酵物先经过100℃煮沸20-60min)，接种酵母菌进行酒精发酵，酵母菌的接种量为重量比1-5％，在20-26℃进行酒精发酵3-7天，发酵液基本停止冒气泡时，用食用酒精调酒精度到7-10度，然后在4℃左右的温度条件下进行后发酵，发酵时间为15-30天，压榨，澄清，用食用酒精、白砂糖等调兑，产品中蜜环菌多糖含量达0.1-0.5mg/ml、酒精度为12-20％，甜度适中。
实施例2蜜环菌酒剂在水中加入重量比为15-30％的大米粉，调成粥状后，煮熟，加入重量比0.3％-1.0％的糖化酶，在65-75℃糖化1-3h后，然后冷却至20-40℃，接种酵母菌进行酒精发酵，酵母菌的接种量为重量比1-5％，在20-26℃进行酒精发酵3-7天，发酵液基本停止冒气泡时，发酵完毕，按重量比为30-60％的比例加入蜜环菌胞外多糖液体发酵物(发酵物先经过100℃煮沸20-60min)，用食用酒精调酒精度到7-10度，然后在4℃左右温度条件下进行后发酵，发酵时间为15-30天，压榨，澄清，用食用酒精、白砂糖等调兑，产品中蜜环菌多糖含量达0.1-0.5mg/ml、酒精度为12-20％，甜度适中。
实施例3蜜环菌酒在水中加入重量比为15-30％的大米粉调成粥状后，煮熟，加入重量比0.3％-1.0％的糖化酶，在65-75℃糖化1-3h后，在100℃煮沸20min，然后冷却至20-40℃，在糖化后的液体中按重量比30-60％的比例加入蜜环菌胞外多糖发酵液(发酵物先经过100℃煮沸20-60min)，接种酵母菌进行酒精发酵，酵母菌的接种量为重量比1-5％，在20-26℃进行酒精发酵3-7天，发酵液基本停止冒气泡时，用食用酒精调酒精度到7-10度，然后在4℃左右的温度条件下进行后发酵，发酵时间为15-30天，压榨，澄清，用食用酒精、白砂糖等调兑，产品中蜜环菌多糖含量达0.1-0.5mg/ml、酒精度为12-20％，甜度适中。蜜环菌发酵液液体种子培养基配方为按重量比计，1.5-2％白砂糖，1-3％麸皮汁，0.2-0.5％蛋白胨，0.1-0.3％酵母粉，0.075％ MgSO4.7H2O，0.15％KH2PO4，用预定体积的20-50％的水将麸皮煮沸15-30分钟，4层纱布过滤得麸皮汁，然后溶解各个成分，用水定量到定量。pH自然。
蜜环菌种子罐及发酵罐液体培养基配方为按重量比计，0.5-1.0％红薯粉，1.0-2.0％大米粉，0.1-0.3％酵母粉，0.2-1.0％豆饼粉，0.15％KH2PO4，0.075％MgSO4.7H2O，用预定体积的20-50％的热水将红薯粉、大米粉、酵母粉和豆饼粉溶解，调成糊状，然后分别加入其它成分进行溶解，用水定容到预定重量。pH自然。
一级种子罐生产、二级种子罐生产、三级发酵罐生产，其生产方法按本领域专业技术人员所知的方法进行。
权利要求
1.一种蜜环菌酒生产方法，其特征在于将大米粉经过糖化后，直接加入酵母菌进行酒精发酵，再加入蜜环菌胞外多糖发酵液，或先加入蜜环菌发酵液后，再加入酵母菌进行酒精发酵。
2.根据权利要求1所述的蜜环菌酒生产方法，其特征在于在水中加入重量比为15-30％的大米粉调成粥状后，煮熟，加入糖化酶，在65-75℃温度下糖化1-3h后，在100℃煮沸20min，然后冷却至20-40℃，按重量比30-60％的比例加入蜜环菌胞外多糖发酵液，接种酵母菌进行酒精发酵。
3.根据权利要求1所述的蜜环菌酒生产方法，其特征在于在水中加入重量比为15-30％的大米粉调成粥状后，煮熟，加入糖化酶，在65-75℃糖化1-3h后，然后冷却至20-40℃，接种酵母菌进行酒精发酵，发酵完毕后按重量比30-60％的比例加入蜜环菌胞外多糖液体发酵物。
4.根据权利要求1所述的蜜环菌酒生产方法，其特征在于加入大米糖化液或发酵液中的蜜环菌胞外多糖发酵液先经过100℃煮沸20-60min。
5.根据权利要求2或3所述的蜜环菌酒生产方法，其特征在于酒剂中蜜环菌多糖含量0.1-0.5mg/ml、酒精度为12-20度。
6.根据权利要求1所述的蜜环菌酒生产方法，蜜环菌胞外多糖发酵液生产包括菌种分离，斜面菌种培养，液体种子培养，蜜环菌深层发酵，其特征在于所述的菌种培养的种子培养基配方为按重量比计，1.5-2％白砂糖，1-3％麸皮汁，0.2-0.5％蛋白胨，0.1-0.3％酵母粉，0.075％MgSO4.7H2O，0.15％KH2PO4，加水溶解并加水至定量，pH自然；所述的液体种子罐及深层发酵罐液体培养基配方为按重量比计，0.5-1.0％红薯粉，1.0-2.0％大米粉，0.1-0.3％酵母粉，0.2-1.0％豆饼粉，0.15％KH2PO4，0.075％MgSO4.7H2O，加水溶解并添加至定量，pH自然。
全文摘要
本发明涉及一类蜜环菌制剂，确切地说是蜜环菌酒及蜜环菌胞外多糖发酵液生产工艺。其特征在于一、将大米粉用水调成粥状后，经过糖化，加入蜜环菌液体发酵物，接种酵母菌进行酒精发酵，酒剂中蜜环菌多糖含量达0.1－0.5mg/ml、酒精度为12－20％；二、将大米粉用水调成粥状后，经糖化酶糖化，接种酵母菌进行酒精发酵后，再加入蜜环菌液体发酵物制成酒剂，酒剂中蜜环菌多糖含量达0.1－0.5mg/ml、酒精度为12－20％；三、蜜环菌胞外多糖深层发酵工艺分为斜面菌种培养、液体一、二级种子罐、三级发酵罐生产，原料廉价易得。蜜环菌酒剂含多糖，并且兼具天麻的相似药理活性，是天麻制剂的替代品。
文档编号C12G3/02GK1660985SQ20041004703
公开日2005年8月31日 申请日期2004年12月10日 优先权日2004年12月10日
发明者谭周进, 杨海君 申请人:湖南农业大学