专利名称：一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，属应用微生物检测方法技术领域。
背景技术：
目前，在科研和生产实际工作中，常常需要对微生物数量进行测定。对水体、空气、土壤等环境中的微生物测定可以监测和评价其污染程度；对饮用水中的微生物测定可以评价其是否达标；对油田污水注水中微生物数量的测定则可以监测和评价污水注水的水质。在稠油微生物开采过程中常常需要测定采油菌剂和地层水中稠油降粘菌菌数，稠油降粘菌的存在与否及其数量多少，很大程度上决定着稠油微生物开采的效果。
传统的微生物测定方法十分烦琐、费时，工作效率极低且不准确可靠。如平板菌落计数法是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计，取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数及稀释倍数，计算出培养物中的活菌数。而绝迹稀释法是将待测定的水样逐级注入到试管中进行接种稀释，直到最后一个试管中无菌生长为止，然后根据细菌生长情况和稀释倍数，计算出水样中细菌的数目。
在油气勘探开发、尤其是稠油微生物开采中，存在着大量的微生物菌数测试工作，经常需要测定地层水和采油菌剂等中的稠油降粘菌菌数，现有的传统测试技术和测试手段远不能满足实际生产的要求。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，使所生产的测试瓶能够快速准确地测定稠油降粘菌菌数，用于油气勘探开发、尤其是稠油微生物开采中稠油降粘菌数量的测定。
本发明是通过如下技术方案来实现上述目的的。
在常温下分别取氯化钠(NaCl)0.5％、磷酸二氢钾(KH2PO4)0.1％、硝酸钾(KNO3)0.06％、磷酸三钠(Na3PO4)0.15％、蒸馏水(H2O)99.19％，然后依次用蒸馏水(H2O)将其溶解，并加入到容器中混合、充分摇匀，用酸液或碱液将溶液的pH值调节到7.5，配制成培养液；将7ml模制西林瓶清洗干净、干燥，用液体分装器将所配制的培养液按每瓶4.5ml装入瓶中，再向瓶中加入0.2ml的黑色稠油，然后加盖、封口；将经加盖封口的测试瓶用高温蒸汽灭菌锅在121℃、0.105Mpa条件下进行高温灭菌15分钟，冷却后即制成稠油降粘菌菌数测试瓶。
本发明与现有的技术相比具有如下有益效果1、本发明所述的一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，生产过程简单，可靠性强，经济实用。
2、本发明所生产的稠油降粘菌菌数测试瓶能够快速准确地测定稠油降粘菌的菌数，使用操作简单、结果直接准确，可用于油田采油菌剂及地层水中稠油降粘菌菌数的测定。
3、本发明所生产的稠油降粘菌菌数测试瓶中只有稠油为微生物生长的唯一碳源，所培养出的微生物只是以稠油为唯一碳源的稠油降粘菌，测试工作不会受到其它微生物的干扰。
具体实施例方式
在常温下(以配制1L培养液为例，以此类推)，分别称取氯化钠(NaCl)5.0g、磷酸二氢钾(KH2PO4)1.0g、硝酸钾(KNO3)0.6g、磷酸三钠(Na3PO4)1.5g，然后依次用蒸馏水(H2O)将其溶解，并加入到1L容量瓶中混合、再用蒸馏水(H2O)定容到1L刻度线，充分摇匀，用酸液或碱液将溶液的pH值调节到7.5，即配制成稠油降粘菌菌数测试瓶所需的培养液。将7ml模制西林瓶清洗干净、干燥，用液体分装器将所配制的培养液按每瓶4.5ml装入瓶中，再向瓶中加入0.2ml的黑色稠油，然后用A-13型药用胶塞加盖，用普通抗生素玻璃瓶铝盖经专用封口器封口，最后用高温蒸汽灭菌锅在121℃、0.105MPa条件下将测试瓶集中进行高温灭菌15分钟，冷却后即制成稠油降粘菌菌数测试瓶。
采用稠油降粘菌菌数测试瓶测定待测水样中稠油降粘菌的菌数时，可采用绝迹稀释法原理，将待测水样用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌的数目。可采用以下的方法和步骤(1)准备数支相同的1ml医用注射器，用蒸馏水(H2O)清洗干净后高温灭菌(高压蒸汽灭菌锅121℃、0.105MPa下灭菌15分钟)，冷却备用。
(2)根据待测水样中稠油降粘菌的大致多少，将一组数个相同的上述稠油降粘菌菌数测试瓶排成一排，并依次编上序号1、2、3、4……。
(3)用上述灭菌后的无菌注射器取0.5mL待测水样并注入到1号稠油降粘菌菌数测试瓶内，充分震荡10秒。
(4)另取一支无菌注射器从摇匀后的1号稠油降粘菌菌数测试瓶内取出0.5mL液体注入到2号稠油降粘菌菌数测试瓶内，充分震荡10秒。
(5)再另取一支无菌注射器从摇匀后的2号稠油降粘菌菌数测试瓶内取出0.5mL液体注入到3号稠油降粘菌菌数测试瓶内，充分震荡10秒。
(6)依次重复上述操作程序，一直到最后一瓶为止。
(7)把上述加入待测水样后的一组稠油降粘菌菌数测试瓶放在30℃或现场温度培养箱内培养，经过7天后观察测试瓶内的变化，判断细菌的生长情况。
(8)判断标准无菌存在的稠油降粘菌菌数测试瓶内培养液和稠油均无变化，而有菌存在的稠油降粘菌菌数测试瓶内的培养液经轻摇后会变黑，稠油出现明显的分散乳化现象。因此，稠油降粘菌菌数测试瓶中的培养液经轻摇后变黑、稠油出现明显的分散乳化现象的，表示有稠油降粘菌生长。
(9)根据稠油降粘菌菌数测试瓶内指示细菌生长的情况和有菌生长的测试瓶的瓶数，查表1可计算出待测水样中的稠油降粘菌菌数。
表1 单管细菌最大可能值
权利要求
1.一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，其特征在于在瓶内加入由蒸馏水(H2O)、氯化钠(NaCl)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、硝酸钾(KNO3)、磷酸三钠(Na3PO4)等组成的培养液和黑色稠油，经加盖封口、高温蒸汽灭菌完成。
2.根据权利要求1所述的一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，其特征在于在常温下分别取氯化钠(NaCl)0.5％、磷酸二氢钾(KH2PO4)0.1％、硝酸钾(KNO3)0.06％、磷酸三钠(Na3PO4)0.15％、蒸馏水(H2O)99.19％，然后依次用蒸馏水(H2O)将其溶解，并加入到容器中混合、充分摇匀，用酸液或碱液将溶液的pH值调节到7.5，即配制成所需的培养液。
3.根据权利要求2所述的一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，其特征在于将7ml模制西林瓶清洗干净、干燥，用液体分装器将所配制的培养液按每瓶4.5ml分装，再向瓶中加入0.2ml的黑色稠油，然后加盖、封口。
4.根据权利要求3所述的一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，其特征在于将经加盖封口的测试瓶用高温蒸汽灭菌锅在121℃、0.105Mpa条件下进行高温灭菌15分钟。
全文摘要
本发明涉及一种稠油降粘菌菌数测试瓶的生产方法，属应用微生物检测方法技术领域，其特征在于在常温下分别取氯化钠(NaCl)0.5％、磷酸二氢钾(KH
文档编号C12Q1/06GK101063082SQ20061007812
公开日2007年10月31日 申请日期2006年4月26日 优先权日2006年4月26日
发明者易绍金, 邓勇 申请人:长江大学