胰腺癌相关基因cst6和gabrp的制作方法

专利名称：：胰腺癌相关基因cst6和gabrp的制作方法胰腺癌相关基因CST6和GABRP相关申请本申请要求2005年7月27日提交的、流水号为60/703,171的美国临时申请的权益，将其内容完整收入本文作为参考。发明领域本发明涉及胰腺癌的检测和诊断方法，以及治疗和预防胰腺癌的方法。发明背景胰管腺癌(PDAC)是西方世界癌症死亡的第五位原因，而且在恶性肿瘤中显示出最差的死亡率，5年存活率只有4%(DiMagnoEPetal.,Gastroenterology117:1464-84(1999);ZervosEEetal.，CancerControl11:23-31(2004))。美国有大约30，700名患者被诊断有胰腺癌，而且其中几乎30,000人将死于此病(JemalAetal.,CACancerJClin53:5-26(2003))。由于大多数PDAC患者是在晚期得到诊断的，目前没有有效的疗法；只有手术切除术提供了很少的治愈可能，但80-90。/。接受手术的PDAC患者复发并死于此病(DiMagnoEPetal.,Gastroenterology117:1464-84(1999);ZervosEEetal.,CancerControl11:23-31(2004))。手术和化疗的有些方法(包括5-FU或吉西他滨，伴随或不伴随放疗)可提高患者的生活质量(DiMagnoEPetal.,Gastroenterology117:1464-84(1999);ZervosEEetal"CancerControl11:23-31(2004)),但那些处理对PDAC患者长期存活的影响非常有限，因为它本质上极具攻击性且有化疗耐受。因此，大多数患者的管理聚焦于姑息措施(DiMagnoEPetal"Gastroenterology117:1464-84(1999》。为了克服这个可怕情况，现在迫切需要通过鉴定分子靶为PDAC开发新的分子疗法。先前，使用包含大约27,000种基因的基因组范围cDNA微阵列联合激光显微解剖(用于获得纯的癌细胞群供测试之用)生成了PDAC的精确表达序型(NakamuraTetal.，Oncogene23:2385-400(2004》。在PDAC中过表达的基因中，作为此病的新分子靶调查了半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)E/M(CST6)(GenBank编号NM—001323,SEQIDNO:41,编码SEQIDNO:42)和GABA受体兀(GABRP)(GenBank编号NMJ)14211,SEQIDNO:43,编码SEQIDNO:44)。半胱氨酸蛋白酶抑制剂是溶酶体半胱氨酸蛋白酶(诸如组织蛋白酶(cathepsin)B、L、H和S)的特异性抑制剂，而且它们在细胞内和细胞外都发挥功能(BarrettAJ，TrendsBiochemSci12:193-6(1987);KepplerD,CancerLetter2005)。它们通过形成可逆的高亲和力复合物来控制靶蛋白酶的催化功能。半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族分为三个不同亚家族，以半胱氨酸蛋白酶抑制剂A(stefmA)和半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(stefinB)为代表的家族l半胱氨酸蛋白酶抑制剂不糖基化，缺少二硫键，且只在细胞内有功能。家族2半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、D、S、SA、SN、E/M和F主要是分泌型蛋白质，由115-120个氨基酸构成，有两个链间二辟J建。家族3半胱氨酸蛋白酶抑制剂由L-和H-激肽原(kininogen)构成，是具有两个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域和緩激肽(bradykinin)模块的复杂糖基化细胞质蛋白质(BarrettAJ,TrendsBiochemSci12:193-6(1987);KepplerD,CancerLetter2005May10)。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E/M(CST6)属于家族2，是20-22kDa的N-糖基化分泌型蛋白酶，而通过比较原发性与转移性乳腺癌间的差异转录物，CST6被两个小组独立鉴定为在乳腺癌中下调的基因(SotiropoulouGetal.，JBiolChem272:903-10(1997);NiJetal.，JBiolChem272:10853-8(1997》，而且他们认为该分子通过调控细胞基质的蛋白水解或其它机制而抑制乳腺癌的增殖、转移或侵入(ShridharRetal"Oncogene23:2206-15(2004);ZhangJetal.,CancerRes64:6957-64(2004》。GABAA受体是介导中枢神经系统中最快抑制性突触传递的多亚基氯化物通道(MacdonaldRLandOlsenRW,AnnuRevNeurosci17:569-602(1994);OwensDFandKriegsteinAR，NatureRevNeurosci3:715-27(2002))。它主要由a卩y单元组成，迄今为止报导了od-6亚基、pl-3亚基、和丫l-3亚基(MacdonaldRLandOlsenRW，AnnuRevNeurosci17:569-602(1994);OwensDFandKriegsteinAR，NatureRevNeurosci3:715-27(2002))。GABA受体兀(GABRP)亚基可以与这些已知GABAA受体亚基装配，而且将该亚基掺入GABAA受体可改变GABA受体对GABA或调控剂的敏感性(HedblomEandKirknessEF，JBiolChem272:15346-50(1997);NeelandsTRandMacdonaldRL,MolPharmacol56:598-610(1999))。在成熟脑中，GABA主要发挥抑制性神经递质的功能，但它在神经系统发育过程中也发挥营养因子的作用以影响神经细胞及其它的增殖、迁移和分化(MacdonaldRLandOlsenRW，AnnuRevNeurosci17:569-602(1994);FiszmanML,BrainResDevBrainRes115:1-8(1999))。另一方面，GABA和GABA受体在中枢神经系统以外的其它外周组织中表达和发挥功能(MacdonaldRLandOlsenRW，AnnuRevNeurosci17:569-602(1994))，但它们在非神经元细胞中的精确功能和分布目前还不太清扭疋。通过cDNA微阵列分析生成的基因表达序型可以比传统组织病理学方法所能提供的信息提供显著更多的关于个体癌症本质的细节。这种信息的前途在于其有可能改善治疗肿瘤性疾病的临床策略并开发新药(Petricoin，E.F.etal.,NatGenet，32Suppl:474-479,2002.)。为此目的，本发明人通过cDNA微阵列分析了来自各种组织的肿瘤的表达序型(OkabeHetal.,CancerRes61:2129-2137(2001);HasegawaSetal.，CancerRes62:7012-7017(2002);KanetaYetal.,JpnJCancerRes93:849-856(2002);KanetaYetal.,IntJOncol23:681-691(2003);KitaharaOetal.,CancerRes61:3544-3549(2001);LinYMetal.,Oncogene21:4120-4128(2002);NagayamaSetal"CancerRes62:5859-5866(2002);OkutsuJetal"MolCancerTher1:1035-1042(2002);KikuchiTetal.，Oncogene22:2192-2205(2003))。关于胰腺癌中基因表达序型的研究导致了可充当诊断标志物或诊断序型候选物的基因的鉴定。然而，这些主要来自肿瘤块的lt据不能充分反映胰腺癌发生过程中的表达变化，因为胰腺癌细胞作为具有高度炎性反应且包含多种细胞成分的实体块存在。因此，先前发表的微阵列数据有可能反映异质的序型。设计用于揭示癌发生机制的研究促进了某些抗肿瘤剂的分子靶的鉴定。例如，起初被开发用于抑制与Ras有关的生长-信号传导途径、其活化依赖于翻译后法尼基化的法尼基转移酶抑制剂(FTI)已显示出在动物模型中有效治疗Ras依赖性肿瘤(SunJetal.,Oncogene16(11):1467-73(1998Mar))。类似的，使用抗癌药物与抗HER2单克隆抗体trastuzumab的组合对人进行的、以拮抗原癌基因受体HER2/neu为目的的临床试验对乳腺癌患者获得了改善的临床响应和整体存活(O'DwyerME&DrukerBJ,CurrOpinOncol12(6):594-7(2000Nov))。最后，已开发出能选择性灭活bcr-abl融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂STI-571来治疗慢性髓性白血病，在该病中，bcr-abl酪氨酸激酶的组成性活化在白细胞转化中发挥至关重要的作用。此类药剂被设计用于抑制特定基因产物的致癌活性(FangGetal.,Blood96:2246-2253(2000))。因此，在癌性细胞中一般上调的基因产物显然可充当潜在的靶，用于开发新的抗癌药。另外已证明CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别MHCI类分子上呈递的肿瘤相关抗原(TAA)所衍生的表位肽并裂解肿瘤细胞。自从发现MAGE家族是第一例TAA,已使用免疫学方法发现了许多其它TAA(Boon,IntJCancer54:177-80(1993);BoonandvanderBruggen，JExpMed183:725-9(1996);vanderBruggenetal.,Science254:1643-7(1991);Brichardetal"JExpMed178:489-95(1993);Kawakamietal.,JExpMed180:347-52(1994》。有些新发现的丁AA现在正在进行作为免疫疗法靶的临床开发。迄今为止所发现的TAA包括MAGE(vanderBruggenetal.，Science254:1643-7(1991》、gplOO(Kawakamietal.，JExpMed180:347-52(1994》、SART(Shichijoetal.，JExpMed187:277-88(1998))和NY-ESO画l(Chenetal.,ProcNatlAcadSciUSA94:1914-8(1997))。另一方面，已证明在肿瘤细胞中特异性过表达的基因产物已显示出作为诱导细胞免疫应答的靶受到识别。此类基因产物包括p53(Umanoetal.,BritJCancer84:1052-7(2001))、HER2/neu(Tanakaetal"BritJCancer84:94-9(2001))、CEA(Nukayaetal"IntJCancer80:92-7(1999))等。尽管已在与TAA有关的基础和临床研究中取得了显著进步(Rosenbergetal"NatureMed4:321-7(1998);Mukherjietal"ProcNatlAcadSciUSA92:8078-82(1995);Huetal"CancerRes56:2479-83(1996))，目前可用于治疗腺癌，包括结肠直肠癌的候选TAA的数目仍然很有限。在癌细胞中丰富表达且该表达局限于癌细胞的TAA可能是免疫疗法靶的理想候选物。此外，能诱导有力且特异性的抗胂瘤免疫应答的新TAA的鉴定预计会促进肽接种策略在多种类型癌症中的临床使用(BoonandvanderBruggen,JExpMed183:725-9(1996);vanderBruggenetal"Science254:1643-7(1991);Brichardetal"JExpMed178:489-95(1993);Kawakamietal.，JExpMed180:347-52(1994);Shichijoetal"JExpMed187:277-88(1998);Chenetal.，ProcNatlAcadSciUSA94:1914-8(1997);Harris,JNatlCancerInst88:1442-5(1996);Butterfieldetal.,CancerRes59:3134-42(1999);Vissersetal.,CancerRes59:5554-9(1999);vanderBurgetal.,JImmunol156:3308-14(1996);Tanakaetal.,CancerRes57:4465-8(1997);Fujieetal"IntJCancer80:169-72(1999);Kikuchietal.,IntJCancer81:459-66(1999);Oisoetal.,IntJCancer81:387-94(1999》。据反复报道，来自某些健康供体的经肽刺激的外周血单个核细胞(PBMC)应答肽而产生显著水平的IFN-a，但在"Cr-释放测定法中很少以局限于HLA-A24或-A0201的方式对肿瘤细胞发挥细胞毒性(Kawanoetal.，CancerRes60:3550-8(2000);Nishizakaetal"CancerRes60:4830-7(2000);Tamuraetal.,JpnJCancerRes92:762-7(2001》。然而，HLA-A24和HLA-A0201二者是曰本人和高加索人中常见的HLA等位基因(Dateetal.，TissueAntigens47:93-101(1996);Kondoetal.，JImmunol155:4307-12(1995);Kuboetal"JImmunol152:3913-24(1994);Imanishietal,,ProceedingoftheeleventhInternationalHistocompatibilityWorkshopandConferenceOxfordUniversityPress,Oxford,1065(1992);Williamsetal"TissueAntigen49:129(1997))。如此，由这些HLA呈递的癌症抗原性肽对于治疗日本人和高加索人中的癌症可能是特别有用的。另外，已知使用高浓度的肽通常在体外诱导低亲和力的CTL,在抗原呈递细胞(APC)上产生高水平的特定肽/MHC复合物，该复合物会有效激活这些CTL(Alexander-Milleretal.,ProcNatlAcadSciUSA93:4102-7(1996))。发明概述本发明基于CST6和GABRP基因表达样式的发现。为了鉴定用于治疗胰管腺癌(PDAC)的新的分子靶，在通过激光显微解剖来纯化肺瘤细胞群后，本发明人在基因组范围cDNA微阵列上生成了PDAC的精确基因表达序型。通过在PDAC中反式激活的基因的功能分析，半胱氨酸蛋白酶抑制剂E/M(CST6)和GABA受体Ti(GABRP)被鉴定为开发用于在分子水平治疗PDAC的药物的候选物。通过RT-PCR和/或免疫组织化学分析证实CST6和GABRP的过表达，而Northem印迹分析揭示了CST6和GABRP表达局限于成人正常器官。siRNA对PDAC细胞系中内源CST6和GABRP表达的敲减削弱了PDAC细胞的生长，说明它在维持PDAC细胞的生存力中发挥至关重要的作用。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E/M(CST6)属于蛋白酶抑制剂的半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族，它们控制靶蛋白酶诸如组织蛋白酶M的催化功能，且在细胞内和细胞外都发挥功能。CST6在无CST6细胞中的组成性表达在体外促进细胞生长，而且培养基中成熟重组CST6的存在也剂量依赖性的促进细胞增殖，说明所分泌的CST6有可能以自分泌/旁分泌方式涉及PDAC细胞增殖。GABA受体兀(GABRP)是GABAA受体复合物的亚基之一，而且它在GABAa受体中的掺入可调控对GABA的敏感性。观察到GABA刺激促进表达GABRP的PDAC细胞增殖，而且GABAA受体拮抗剂消除此促进效应。另一方面，GABA刺激不影响不表达GABRP的PDAC细胞增殖。这些发现暗示CST6、GABA和GABA受体兀(GABRP)是开发PDAC新治疗策略的有希望的分子靶。在本发明中，与先前的报告相反，本本发明报告了一些比例的PDAC中的CST6过表达并证明了CST6以自分泌/旁分泌方式促进PDAC细胞生长，而且报告了一些比例的PDAC中的GABA受体兀(GABRP)过表达并证明了GABA和GABA受体7i亚基促进PDAC细胞生长，暗示它们是PDAC治疗的有希望的靶。CST6和GABRP的核苷酸序列和氨基酸序列分别列于SEQIDNO:41和42、43和44。这些序列还可见Genbank编号NM—001323和NM—014211。因此，本发明提供了通过测定得自患者的生物学样品诸如组织样品中的CST6或GABRP表达水平来诊断或确定受试者中对胰腺癌的倾向性的方法。正常细胞是从胰腺组织得到的细胞。或者，例如基因表达水平与正常对照基因水平相比的升高表明受试者患有或有风险发生PDAC。在用于本发明的上下文时，术语"对胰腺癌的倾向性"涵盖受试者易患胰腺癌、趋向于胰腺癌、流行、趋向于胰腺癌或易感胰腺癌的状态。此外，该术语还涵盖受试者有风险获得胰腺癌的情况。在本发明的上下文中，术语"对照水平"指在对照样品中4企测到的蛋白质表达水平，而且包括正常对照水平和胰腺癌对照水平二者。对照水平可以是来自单一参照群或来自众多表达样式的单一表达样式。例如，对照水平可以是来自先前测试细胞的表达样式数据库。"正常对照水平"指在正常的、健康的个体中或在已知未患胰腺癌的个体群中检测到的基因表达水平。正常个体指没有胰腺癌的临床症状的个体。另一方面，"PDAC对照水平"指在患有PDAC的人群中检测到的CST6或GABRP表达序型。在测试样品中检测到的CST6或GABRP表达水平与正常对照水平相比的升高表明受试者(获取样品的受试者)患有或有风险发生PDAC。或者，可以将样品中一组CST6或GABRP的表达与同组基因的PDAC对照水平进行比较。样品表达与PDAC对照表达之间的相似性表明受试者(获:取样品的受试者)患有或有风险发生PDAC。根据本发明，若基因表达与对照水平相比升高或降低了10%、25%、50%,则认为基因表达水平有"改变"。或者，若基因表达与对照水平相比升高或降低了至少0.1倍、至少0.2倍、至少1倍、至少2倍、至少5倍、至少10倍或更多倍，则认为表达水平有"升高"或"降低"。表达通过检测例如CST6或GABRP探针与来自患者的组织样品中的基因转录物的杂交情况来测定。在本发明的上下文中，来自患者的组织样品指从测试受试者，例如已知或怀疑患有PDAC的患者获得的任何组织。例如，组织可以包括上皮细胞。更具体的说，组织可以是来自胰管腺癌的上皮细胞。通过使表达CST6或GABRP的测试细胞接触测试化合物，并测定CST6或GABRP的表达水平或其基因产物的活性，本发明进一步提供了鉴定能抑制或增强CST6或GABRP的表达或活性的药剂的方法。测试细胞可以是上皮细胞，诸如从胰管腺癌获得的上皮细胞。CST6或GABRP的表达水平或其基因产物的活性与该基因或其基因产物的对照水平或活性相比的降低表明测试本发明还提供了试剂盒，其包含能与CST6或GABRP核酸或多肽结合的-险测剂。本发明的治疗方法包括治疗或预防受试者中的PDAC的方法，包括给受试者施用CST6或GABRP的拮抗剂或抑制剂的步骤，所述拮抗剂或抑制剂可以是例如反义组合物或抗体组合物。拮抗剂或抑制剂可以作用于核酸或蛋白质水平，从而降低或抑制CST6或GABRP的表达或活性。在本发明的上下文中，反义组合物降低特定靶基因的表达。例如，反义组合物可以包含与CST6或GABRP序列互补的核香酸。或者，本方法可以包括给受试者施用小干扰RNA(siRNA)组合物的步骤。在本发明的上下文中，siRNA组合物降低CST6或GABRP的表达。在有一种方法中，受试者中PDAC的治疗或预防可以通过给受试者施用核酶组合物来进行。在本发明的上下文中，核酸特异性核酶组合物降低CST6或GABRP的表达。实际上，针对CST6或GABRP的siRNA的抑ii制效果得到了证实。例如，实施例部分中已经清楚显示了针对CST6或GABRP的siRNA抑制胰腺癌细胞的细胞增殖。如此，在本发明中，CST6或GABRP是胰腺癌的优选治疗靶。本发明还包括疫苗和疫苗接种方法。例如，治疗或预防受试者中的PDAC的方法可以包括给受试者施用疫苗，该疫苗包含由CST6或GABRP的核酸编码的多肽或其免疫学活性片段。在本发明的上下文中，免疫学活性片段指比全长的天然存在蛋白质短但诱发与全长蛋白质类似的免疫应答的多肽。例如，免疫学活性片段的长度应当是至少8个残基且能够刺激免疫细胞诸如T细胞或B细胞。免疫细胞刺激可以通过检测细胞增殖、细胞因子(例如IL-2)的生成、或抗体的生成来测量。除非另有限定，本文中所使用的所有技术和科学术语均与本发明所属4支术领域的普通技术人员普遍理解的含义相同。尽管与本文所述类似或等同的方法和材料可用于实施或检验本发明，但下文描述了合适的方法和材料。本文中所引用的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献均完整收入本文作为参考。本文中任何文字都不可解释为承认本发明没有资格凭借在先发明而早于所述公开。若有冲突，以本说明书，包括定义为准。另外，本文中所提到的材料、方法和例子仅为例示而非意图限制。本文所述方法的一个优点在于在检测到胰腺癌的明显临床症状前就能鉴定疾病。本发明的其它特定和优点将通过以下详述及通过权利要求而显而易见。附图简述图l显示了半胱氨酸蛋白酶抑制剂E/M(CST6)在PDAC细胞中的过表达。A)通过显微解剖得到的PDAC细胞(1_9)中CST6和TUBA的mRNA表达的RT-PCR,与同样通过显微解剖得到的正常胰管上皮细胞(N)进行比较。B)Northem印迹分析揭示了CST6表达局限于胎盘和曱状腺组织。C)在使用所生成的抗CST6抗体进行的免疫组织化学研究中，在PDAC细胞中观察到强烈染色(左图的箭头，最初放大倍数为x400)。在细胞质中观察到CST6阳性染色。在正常胰组织中，腺泡细胞和正常导管上皮细胞显示出很弱的染色(右图，最初;故大倍数为x400)。图2显示了CST6-siRNA对PDAC细胞生长的影响。A)PDAC细胞系PK-1和PK-59中siRNA对CST6的敲减效应。使用经过针对CST6的siRNA表达载体(#448)和阴性对照载体(#EGFP)转染的细胞进行了半定量RT-PCR。使用卩2-MG来对RNA进行定量。B)经过所示针对CST6的siRNA表达载体(糾48)和阴性对照载体(存EGFP)转染的PK-1和PK-59细胞的集落形成测定法。与遗传霉素一起温育14天后通过0.1%结晶紫染色来显现细胞。C)经过所示针对CST6的siRNA表达载体(糾48)和阴性对照载体(粗GFP)转染的PK-1和PK-59细胞的MTT测定。绘制了与遗传霉素一起温育14天后的平均值及表示SD(标准偏差)的误差范围。Y轴上的ABS表示用微量板读数仪测量得到的490nm吸光度，以630nm为参比。这些实验以一式三份进行。"表示p值小于O.Ol(Students氏t检验)。图3显示了CST6的过表达促进细胞增殖。A)高水平表达外源CST6的KLM-1细胞或经过模拟载体转染的细胞的Western印迹分析。CST6表达的外源导入用抗myc标签单克隆抗体来验证。P-肌动蛋白充当上样对照。B)表达高水平外源CST6的KLM-1克隆(克隆l-3)和经过模拟载体转染的克隆(克隆l-3)的体外生长速率。X轴代表播种后的天数，Y轴代表相对生长速率，其是与作为对照的第l天的吸光度值进行比较而计算得出的。绘制了平均值及表示SD的误差范围。这些实验以一式三份进行。"表示p值小于O.Ol(Students氏t冲全'g全)。图4显示了由重组CST6蛋白刺激的细胞增殖。将C0S7细胞与系列浓度(0、0.02、0.2和2ng/ml)的成熟重组CST6—起温育，补充有2。/oFBS。Y轴代表第6天的相对生长促进速率，其通过与作为对照的Ong/mlCST6的吸光度值进行比较而计算得出。绘制了平均值及表示SD的误差范围。这些实验以一式三份进行。^表示p值小于0.01(Students氏t4企验)。图5显示了GABA受体兀亚基(GABRP)和GAD1在PDAC细胞中的过表达。A)通过显微解剖得到的PDAC细胞中GABRP和TUBA的mRNA表达的RT-PCR，与同样通过显微解剖得到的正常胰管上皮细胞(N.R)和正常重要器官进行比较。B)多种组织Northern印迹分析显示出气管、前列腺和胃有3.3kb弱带，而其它正常成人器官不表达GABRP。PDAC细胞系KLM-1、PK-45P和PK-1高水平表达GABRP。C)通过显微解剖得到的PDAC细胞中GAD1和TUBA的mRNA表达的RT-PCR，与通过显微解剖得到的正常胰管上皮细胞(N.P.)、整个胰腺和脑进行比较。图6显示了GABRP-siRNA对PDAC细胞的生长的影响。A)KLM-1(左图)和PK-45P细胞系(右图)中siRNA对GABRP的敲减效应。使用经过针对GABRP的siRNA表达载体(si6、si7、si8和silO)和阴性对照载体(s正GFP)转染的细胞进行了半定量RT-PCR,这证实了si6、si7、si8和silO的敲减效应，但阴性对照s正GFP没有。使用p2-MG来对RNA进行定量。B)经过所示针对GABRP的siRNA表达载体(si6、si7、si8和silO)和阴性对照载体(s正GFP)转染的KLM-1(左图)和PK-45P(右图)细胞的集落形成测定法。与遗传霉素一起温育2周后通过0.1%结晶紫染色来显现细胞。C)经过所示针对GABRP的siRNA表达载体(si6、si7、si8和silO)和阴性对照载体(siEGFP)转染的KLM-l(左图)和PK-45P(右图)细胞的MTT测定。绘制了与遗传霉素一起温育2周后的平均值及表示SD(标准偏差)的误差范围。Y轴上的ABS表示用微量板读数仪测量得到的490nm吸光度，以630nm为参比。这些实验以一式三份进行。图7显示了GABA刺激对PDAC细胞增殖的影响及GABA受体拮抗剂的调控作用。A)将GABRP阳性细胞系KLM-1和PK-45P(上图)及GABRP阴性细胞系PK-59和KP-1N(下图)与系列浓度(0、1、10、lOOiaM)的GABA一起温育6天。Y轴代表第6天的相对生长促进速率，其通过与作为对照的Ong/mlGABA的吸光度值进行比较而计算得出。绘制了平均值及表示SD的误差范围。这些实验以一式三份进行。"表示p值小于O.Ol(Students氏t检验)。B)将GABRP阳性细胞系KLM-1和PK-45P(上图)及GABRP阴性细胞系PK-59和KP-1N(下图)与250pM的GABAA受体拮抗剂BMI或lmM的GABAB受体拮抗剂CGP-35348在有或无100pMGABA的条件下一起温育。细胞生存力在暴露于这些药物6天后测量，而Y轴代表第6天的相对生长促进速率，其通过与作为对照的Ong/mlGABA和没有药物的吸光度值进行比较而计算得出。绘制了平均值及表示SD的误差范围。这些实验以一式三份进行。**表示p值小于O.Ol(Students氏t检验)。发明详述词语"一个"、"一种"、"所述"和"该"在用于本文时指"至少一个/种"，除非另有明确说明。在整篇说明书和权利要求书中，除非上下文另有需要，词语"包含"、"包括"和"含有"应理解为包含所述一种或多种成分或者包括所述一个或多个步骤，但不排除任何别的一种或多种成分或者一个或多个步骤。胰腺癌细胞一般以具有高度炎性反应且包含多种细胞成分的实体块形式存在。因此，先前发表的微阵列数据有可能反映异质序型(heterogenousprofile)。本发明部分基于发现来自胰腺癌患者的细胞中CST6或GABRP的表达升高。本文中所鉴定的CST6和GABRP作为PDAC标志物和作为PDAC基因靶可具有诊断效用，可改变其表达来治疗或緩解PDAC的症状。通过测量细胞样品中CST6或GABRP的表达，可以诊断PDAC。类似的，测量CST6或GABRP应答各种药剂的表达，可以鉴定可用于治疗PDAC的药剂。本发明涉及测定(例如测量)CST6或GABRP的表达。使用GenBankTM数据库条目关于已知序列提供的序列信息，可使用本领域普通技术人员公知的技术来检测和测量CST6或GABRP。例如，可以使用对应于CST6或GABRP的序列数据库条目中的序列来构建探针，用于在例如Northem印迹杂交分析中才企测对应于CST6或GABRP的RNA序列。又例如，可以使用上述序列来构建引物，用于在例如基于扩增的检测方法，诸如基于逆转录的聚合酶链式反应中特异性扩增PDAC核酸。然后，将测试细胞群，例如来自患者的组织样品中的CST6或GABRP表达水平与参照群中的CST6或GABRP表达水平进行比较。参照细胞群包括所比较参数已知的一种或多种细胞，即胰管腺癌细胞(例如PDAC细胞)或正常胰管上皮细胞(例如非PDAC细胞)。与参照细胞群相比，测试细胞群中的基因表达样式是否表明PDAC或其倾向性取决于参照细胞群的组成。例如，如果参照细胞群由非PDAC细胞构成，那么测试细胞群与参照细胞群之间基因表达样式的相似性表明测试细胞群是非PDAC。反之，如果参照细胞群由PDAC细胞构成，那么测试细胞群与参照细胞群之间基因表达样式的相似性表明测试细胞群包含PDAC细胞。如果测试细胞群中PDAC标志基因的表达水平与参照细胞群中相应PDAC标志基因的表达水平相差大于1.1倍、大于1.5倍、大于2.0倍、大于5.0倍、大于10.0倍或更多，那么可认为它有"改变"。测试细胞群与参照细胞群之间的差异基因表达可以相对于对照核酸，例如持家基因进行标准化。例如，对照核酸是已知在癌性或非癌性状态的细胞中不存在差异的核酸。可以利用对照核酸的表达水平对测试群和参照群中的信号水平进行标准化。例示性的对照基因包括但不限于例如P-肌动蛋白、甘油醛3-磷酸脱氬酶和核糖体蛋白Pl。可以将测试细胞群与多个参照细胞群进行比较。各个参照群的已知参数可以不同。如此，可以将测试细胞群与已知包含例如PDAC细胞的第一参照细胞群和已知包含例如非PDAC细胞(正常细胞)的第二参照细胞群进行比较。测试细胞可以包含在来自已知包含或怀疑包含PDAC细胞的受试者的组织类型或细胞样品中。测试细胞得自身体组织或体液，例如生物学流体(诸如例如血液或痰)。例如，测试细胞可以纯化自胰腺组织。优选的是，测试细胞群包含上皮细胞。上皮细胞优选来自已知或怀疑是胰管腺癌的组织。参照细胞群中的细胞应衍生自类型与测试细胞类似的组织。任选的是，参照细胞群是细胞系，例如PDAC细胞系(即阳性对照)或正常非PDAC细胞系(即阴性对照)。或者，对照细胞群可衍生自分子信息数据库，该分子信息数据库衍生自所测定参数或条件已知的细胞。受试者优选是哺乳动物。例示性的哺乳动物包括但不限于例如人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、犬、猫、马或牛。可使用本领域已知方法在蛋白质或核酸水平测定本文中所公开的CST6或GABRP的表达。例如，可以使用特异性识别该序列的探针通过Northern杂交分析来测定基因表达。或者，例如可以使用对CST6或GABRP序列特异性的引物通过基于逆转录的PCR测定法来测量基因表达。还可以在蛋白质水平测定表达，即通过测量由本文所述基因编码的多肽的水平或其生物学活性。此类方法是本领域公知的，包括但不限于例如利用针对基因所编码的蛋白质的抗体进行的免疫测定法。由基因所编码的蛋白质的生物学活性一般是公知的。胰腺癌的诊断在本发明的上下文中，通过测量测试细胞群(即得自患者的生物学样品)中CST6或GABRP的表达水平来诊断PDAC。优选的是，测试细胞群包含上皮细胞，例如由胰腺組织获得的细胞。还可以由血液或其它体液诸如尿液来测量基因表达。可以使用其它生物学样品来测量蛋白质水平。例如，可以通过免疫测定法或其它常规生物学测定法来测量衍生自待诊断受试者的血液或血清中的蛋白质水平。测定测试细胞或生物学样品中CST6或GABRP的表达，并与所测定CST6或GABRP相关的正常对照表达水平进行比较。正常对照水平是通常在已知未患PDAC的人群中发现的CST6或GABRP表达序型。来自患者的组织样品中CST6或GABRP表达水平的改变(例如升高)表明受试者患有或有风险发生PDAC。例如，测试群中CST6或GABRP的表达与正常对照水平相比升高表明受试者患有或有风险发生PDAC。测试群中CST6或GABRP与正常对照水平相比降低表明受试者患有或有风险发生PDAC。通过对对应于PDAC相关基因的mRNA或由PDAC相关基因编码的蛋白质定量，可以评估生物学样品中PDAC相关基因的表达水平。mRNA的定量方法是本领域技术人员已知的。例如，可以通过Northern印迹或RT-PCR来评估对应于PDAC相关基因的mRNA的水平。既然PDAC相关基因的核苷酸序列针或引物的核苷S踏列。还可以基于由PDAC相关基因编码的蛋白质的活性或数量来分析该基因的表达水平。用于测定由PDAC相关基因编码的蛋白质的数量的方法显示于下。例如，免疫测定法可用于测定生物学材料中的蛋白质。只要标志基因(PDAC相关基因)在胰腺癌患者的样品中表达，可以将任何生物学材料用作测定蛋白质或其活性的生物学样品。然而，体液，诸如血液和尿液也可用于分析。另一方面，为了测定由PDAC相关基因编码的蛋白质的活性，可以根据待分析蛋白质的活性来选择合适的方法。对生物学样品中PDAC相关基因的表达水平进行评估，并与正常样品(例如来自非患病受试者的样品)中的水平进行比较。当这样的比较显示基因的表达水平比正常样品中的水平高时，则判定该受试者患有PDAC。可以同时测定来自正常受试者和待诊断受试者的生物学样品中PDAC相关基因的表达水平。或者，可以通过统计学方法，基于通过分析从对照组预先采集的样品中基因表达水平获得的结果，确定出表达水平的正常范围。将受试者样品获得的结果与正常范围进行比较，当该结果未落入正常范围时，则判定受试者患有或有风险发生PDAC。在本发明中，还提供了用于诊断细胞增殖性疾病，诸如PDAC的诊断剂。本发明的诊断剂包括能与PDAC相关基因的多核苷酸或多肽结合的化合物。优选的是，使用能与PDAC相关基因的多核苷酸发生杂交的寡核苷酸或能与由PDAC相关基因编码的多肽结合的抗体作为这样的化合物。此外，还可以使用适体，诸如RNA、DNA或肽适体作为这样的化合物。抑制CST6或GABRP表达的药剂的鉴定使表达CST6或GABRP的测试细胞群与测试药剂接触，然后测定CST6或GABRP的表达水平或其基因产物的活性，可以鉴定抑制CST6或GABRP的表达或其基因产物的活性的药剂。存在药剂的条件下CST6或GABRP的表达水平或其基因产物的活性水平与不存在测试药剂的条件下的表达或活性水平相比降低，表明该药剂是CST6或GABRP的抑制剂并可用于抑制PDAC。测试细胞群可以是表达CST6或GABRP的任何细胞。例如，测试细胞群可包含上皮细胞，诸如衍生自胰腺组织的细胞。而且，测试细胞可以是衍生自腺癌细胞的永生化细胞系。或者，测试细胞可以是经过CST6或GABRP转染的细胞或经过与报告基因可操作连接的、来自CST6或GABRP的调控序列(例如启动子序列)转染的细胞。受试者中的PDAC治疗功效的评估本文中所鉴定的差异表达的CST6或GABRP还容许对PDAC的治疗过程进行监测。在该方法中，由接受PDAC治疗的受试者提供测试细胞群。必要时，在治疗前、治疗中和/或治疗后的多个时间点由受试者获取测试细胞群。然后测定细胞群中的CST6或GABRP表达，并与包含PDAC状态已知的细胞的参照细胞群进行比较。在本发明的上下文中，参照细胞应当尚未暴露于所述治疗。如果参照细胞群不含PDAC细胞，那么测试细胞群与参照细胞群中CST6或GABRP表达的相似性表明所述治疗是有效的。然而，测试细胞群中的CST6或GABRP表达与正常对照参照细胞群相比升高表明临床效果或预后较不理想。类似的，如果参照细胞群包含PDAC细胞，那么测试细胞群中的CST6或GABRP表达与参照细胞群相比降低表明所述治疗是有效的，而测试细胞群与癌症对照参照细胞群中CST6或GABRP表达的相似性表明临床效果或预后较不理想。另外，可以将治疗后得到的得自受试者的生物学样品中测定的CST6或GABRP表达水平(即治疗后水平)与治疗开始前得到的得自受试者的生物学样品中测定的CST6或GABRP表达水平(即治疗前水平)进行比较。治疗后样品中CST6或GABRP表达水平的降低表明所述治疗是有效的，而治疗后样品中表达水平的升高或维持表明临床效果或预后较不理想。在用于本文时，术语"有效的"表明治疗引起受试者体内病理性上调的基因的表达降低，病理性下调的基因的表达升高、或者胰管腺癌的大小、流行性(prevalence)或转移潜力降低。在预防性施行所述治疗时，术语"有效的，，指治疗能延迟或防止胰腺肿瘤形成，或者能延迟、防止或减轻PDAC的临床症状。胰腺肿瘤的评估可以使用标准临床规程来进行。此外，可以与任何已知的PDAC诊断或治疗方法相结合来测定有效性。例如，可以通过鉴定症状异常例如体重减轻、腹痛、背痛、食欲减退、恶心、呕吐和全身不适、虚弱和黄症来诊断PDAC。对特定个体适宜的、用于治疗PDAC的治疗剂的选择个体遗传组成(geneticmakeup)的差异可导致其代谢各种药物的相对能力出现差异。在受试者体内代谢从而起到抗PDAC剂作用的药剂，可通过在受试者的细胞中诱导癌性状态特征性基因表达样式向非癌性状态特征性基因表达样式的转变而自我显现出来。因此，本文中所公开的差异表达的CST6或GABRP容许在来自选定受试者的测试细胞群中测试推定的PDAC治疗性或预防性抑制剂，从而确定该药剂在该受试者中是否是合适的PDAC抑制剂。为了鉴定适于特定受试者的PDAC抑制剂，将来自受试者的测试细胞群暴露于治疗剂，并测定CST6或GABRP的表达。在本发明方法的上下文中，测试细胞群包含表达CST6或GABRP的PDAC细胞。优选的是，测试细胞是上皮细胞。例如，可以将测试细胞群在存在候选药剂的条件下温育，测量测试细胞群的基因表达样式，并与一种或多种参照序型例如PDAC参照表达序型或非PDAC参照表达序型进行比较。测试细胞群中CST6或GABRP表达相对于包含PDAC的参照细胞群的降低表明该药剂具有治疗潜力。在本发明的上下文中，测试药剂可以是任何化合物或组合物。例示性的测试药剂包括但不限于免疫调节剂。用于鉴定治疗剂的筛选测定法利用CST6或GABRP基因、由该基因编码的蛋白质、或该基因的转录调控区，可以筛选能改变该基因的表达或由该基因编码的多肽的生物学活性的化合物。此类化合物可作为药物用于治疗或预防PDAC。PDAC的化合物的方法。该篩选方法的一个实施方案包括以下步骤a)使测试化合物与由CST6或GABRP的多核苷酸编码的多肽接触；b)检测多肽与测试化合物之间的结合活性；并c)选择能与多肽结合的测试化合物。用于筛选的CST6或GABRP多肽可以是重组多肽或者衍生自天然的蛋白质或其部分肽。与测试化合物接触的多肽可以是例如纯化的多肽、可溶性蛋白质、与载体结合的形式、或与其它多肽融合的融合蛋白。作为例如使用CST6或GABRP多肽筛选能与CST6或GABRP多肽结合的蛋白质的方法，可以使用本领域技术人员众所周知的许多方法。这样的筛选可以通过例如免疫沉淀法来进行，具体以下述方式。通过将编码CST6或GABRP多肽的基因插入外来基因表达载体，诸如pSV2neo、pcDNAI、pcDNA3.1、pCAGGS和pCD8，使该基因在宿主(例如动物)细胞等中表达。用于表达的启动子可以是常用的任何启动子，包括例如SV40早期启动子(RigbyinWilliamson(ed.),GeneticEngineering,vol.3.AcademicPress,London:83-141(1982))、EF-a启动子(Kimetal.，Gene91:217-23(1990))、CAG启动子(Niwaetal"Gene108:193(1991》、RSVLTR启动子(Cullen,MethodsinEnzymology152:684-704(1987))、SRa启动子(Takebeetal.，MolCellBiol8:466(1988))、CMV立即早期启动子(SeedandAruffo，ProcNatlAcadSciUSA84:3365-9(1987》、SV40晚期启动子(GheysenandFiers，JMolApplGenet1:385-94(1982))、腺病毒晚期启动子(Kaufmanetal.，MolCellBiol9:946-58(1989))、HSVTK启动子等。可以依照任何方法将基因导入欲表达外来基因的宿主细胞，例如电穿孔法(Chuetal.,NucleicAcidsRes15:1311-26(1987))、磷酸钧法(ChenandOkayama,MolCellBiol7:2745-52(1987》、DEAE右旋糖香法(Lopataetal"NucleicAcidsRes12:5707-17(1984);SussmanandMilman,MolCellBiol4:1641-3(1984》、月旨转染法(DerijardBetal"Cell76:1025-37(1994);Lambetal"NatureGenetics5:22-30(l朔)；Rabindranetal"Science259:230-4(1993))等。通过将特异性已知的单克隆抗体的表位导入多肽的N末端或C末端，可以以包含单克隆抗体识别位点(表位)的融合蛋白的形式表达由CST6或GABRP基因编码的多肽。可以使用市售的表位-抗体系统(ExperimentalMedicine13:85-90(1995))。利用其多克隆位点来表达含例如卩-半乳糖苷酶、麦芽糖结合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶、绿色荧光蛋白(GFP)等的融合蛋白的载体是可以通过商业途径得到的。还报道了通过仅导入由几个到十几个氨基酸组成的小表位而制备的融合蛋白，使得CST6或GABRP多肽的特性不会因融合而改变。表位，诸如聚组氨酸(His标签)、流感聚集体HA、人c-myc、FLAG、水泡性口膜炎病毒糖蛋白(VSV-GP)、T7基因10蛋白(T7标签)、人单纯疱渗病毒糖蛋白(HSV标签)、E标签(单克隆噬菌体上的表位)等，及识别它们的单克隆抗体都可以作为表位-抗体系统用于筛选能与CST6或GABRP多肽结合的蛋白质(ExperimentalMedicine13:85-90(1995》。在免疫沉淀中，通过向使用合适的洗涤剂制备的细胞裂解物中添加这些抗体，形成了免疫复合物。免疫复合物由CST6或GABRP多肽、具有与该多肽结合能力的多肽和抗体组成。在使用针对上述表位的抗体外，还可以使用针对CST6或GABRP多肽的抗体来进行免疫沉淀，所述抗体可以如上所述制备。当抗体是小鼠IgG抗体时，可以通过例如蛋白Asepharose或蛋白Gsepharose来沉淀免疫复合物。如杲将由CST6或GABRP基因编码的多肽制备成带有表位诸如GST的融合蛋白，那么可使用与这些表位特异性结合的物质，诸如谷胱甘肽-Sepharose4B，按照与使用针对CST6或GABRP多肽的抗体相同的方式形成免疫复合物。免疫沉淀可以遵循或依照例如文献(HarlowandLane,Antibodies,511-52，ColdSpringHarborLaboratorypublications,NewYork(1988))中的方法进行。通常使用SDS-PAGE对免疫沉淀的蛋白质进行分析，可以使用合适浓度的凝胶通过蛋白质的分子量来分析所结合的蛋白质。由于与CST6或GABRP多肽结合的蛋白质难以通过常规染色法诸如考马斯染色或银染色来检测，因而可以如下改进蛋白质检测灵敏度在含有放射性同位素"S-曱疏氨酸或"S-半胱氨酸的培养基中培养细胞，标记细胞中的蛋白质，并检测该蛋白质。在蛋白质的分子量已知时，可以从SDS-聚丙蜂酰胺凝胶直接纯化靶蛋白并测定其序列。作为使用多肽来筛选能与CST6或GABRP多肽结合的蛋白质的方法，可以使用例如West-Western印迹分析(Skolniketal.,Cell65:83-90(1991))。具体的说。可以如下获得能与CST6或GABRP多肽结合的蛋白质使用噬菌体载体(例如ZAP)由预计表达能与CST6或GABRP多肽结合的蛋白质的细胞、组织、器官(例如组织诸如用于CST6的胎盘或曱状腺或者用于GABRP的气管、前列腺或胃)或培养的细胞(例如用于CST6的PK-59或PK-1或者用于GABRP的KLM-1或PK-45P)制备cDNA文库，在LB-琼脂糖上表达该蛋白质，将所表达的蛋白质固定在滤膜上，使经过纯化和标记的CST6或GABRP多肽与上述滤膜反应，并根据标记物来检测表达能与CST6或GABRP多肽结合的蛋白质的噬菌斑。可以利用生物素与亲合素之间的结合，或者利用能与CST6或GABRP多肽或者CST6或GABRP多肽所融合的肽或多肽(例如GST)特异性结合的抗体，来标记本发明的多肽。也可以采用使用放射性同位素或荧光等的方法。或者，在本发明筛选方法的另一个实施方案中，可以使用利用细胞的双杂交系统("MATCHMAKER双杂交系统"、"哺乳动物MATCHMAKER双杂交测定试剂盒"、"MATCHMAKER单杂交系统"(Clontech);"HybriZAP双杂交载体系统，，(Stratagene);参见DaltonandTreisman,Cell68:597-612(1992);FieldsandSternglanz，TrendsGenet10:286-92(1994))。在双杂交系统中，将本发明的多肽与SRF结合区或GAL4结合区融合，并在酵母细胞中表达。由预计表达能与本发明多肽结合的蛋白质的细胞制备该cDNA文库导入上述酵母细胞，并从检测为阳性的克隆分离衍生自该文库的cDNA(当在酵母细胞中表达能与本发明多肽结合的蛋白质时，两者的结合激活报告基因，使得阳性克隆可检测出)。通过将上述分离的cDNA导入大肠杆菌并表达蛋白质，可以制备由该cDNA编码的蛋白质。作为报告基因，在HIS3基因外，可以使用例如Ade2基因、lacZ基因、CAT基因、萤光素酶基因等。还可以使用亲和层析来筛选能与由CST6或GABRP基因编码的多肽结合的化合物。例如，可以将本发明的多肽固定在亲和柱的载体上，并将测试化合物施加至该柱，所述测试化合物包含能与本发明多肽结合的蛋白质。此处的测试化合物可以是例如细胞提取物、细胞裂解物等。在加载测试化合物后，对柱进行洗涤，并可制备出已与本发明多肽结合的化合物。当测试化合物是蛋白质时，分析所得蛋白质的氨基S拼列，基于该序列合成寡聚DNA,并使用该寡聚DNA作为探针来篩选cDNA文库以获得编码该蛋白质的DNA。在本发明中，可以将使用表面等离子体共振现象的生物传感器用作对所结合的化合物进行检测或定量的手段。在使用此类生物传感器时，只使用极少量的多肽且不需标记(例如BIAcore,Pharmacia),可将本发明多肽与测试化合物之间的相互作用实时观察为表面等离子体共振信号。因此，有可能使用生物传感器诸如BIAcore来评估本发明多肽与测试化合物之间的结合。将固定化的CST6或GABRP多肽暴露于合成化学化合物、天然物质库或随机噬菌体肽展示文库后筛选与之结合的分子的方法，及基于组合化学技术使用高通量来分离与能与CST6或GABRP蛋白结合的蛋白质和化学化合物(包括激动剂和拮抗剂)的筛选方法(Wrightonetal.，Science273:458-64(1996);Verdine,Nature384:11-13(19%);Hogan，Nature384:17-9(1996))是本领域技术人员众所周知的。或者，本发明提供了使用由CST6或GABRP基因编码的多肽筛选用于治疗或预防PDAC的化合物的方法，其包括以下步骤(a)使测试化合物与由CST6或GABRP的多核苷酸编码的多肽接触；(b)检测步骤(a)的多肽的生物学活性；并(c)选择与不存在测试化合物的条件下检测到的由CST6或GABRP的多核苷酸编码的多肽生物学活性相比抑制该多肽生物学活性的测试化合物。既然CST6或GABRP蛋白具有促进PDAC细胞的细胞增殖的活性，因而可以使用该活性为指标，篩选能抑制该蛋白质的该活性的化合物。只要具有CST6或GABRP蛋白的生物学活性，任何多肽均可用于筛选。此类生物学活性包括人CST6或GABRP蛋白的细胞增殖活性。例如，可以使用人CST6或GABRP蛋白，也可以使用与这些蛋白质在功能上等同的多肽。23此类多肽可以是细胞内源性或外源性表达的。通过这种篩选而分离的化合物是由CST6或GABRP基因编码的多肽的激动剂或拮抗剂的候选物。术语"激动剂"指通过与多肽结合而活化其功能的分子。然而，该术语也指激活或增强编码CST6或GABRP的基因表达的分子。同样，术语"拮抗剂"指通过与多肽结合而抑制其功能的分子。但是，该术语也指降低或抑制编码CST6或GABRP的基因表达的分子。而且，通过这种筛选分离出的化合物是抑制CST6或GABRP多肽与分子(包括DNA和蛋白质)在体内相互作用的候选化合物。当本发明方法中所检测的生物学活性为细胞增殖时，可以如实施例所述如下检测生物学活性制备表达CST6或GABRP多肽的细胞，在存在测试化合物的条件下培养该细胞，并测定细胞增殖速度、测量细胞周期等、以及测量集落形成活性。在另一个实施方案中，本发明提供了筛选用于治疗或预防PDAC的化合物的方法。如上详细描述，通过控制CST6或GABRP的表达水平，可以控制PDAC的发作和进展。因而，通过以CST6或GABRP的表达水平为指标进行筛选，可以鉴定可用于治疗或预防PDAC的化合物。在本发明的上下文中，这样的筛选可包括例如以下步骤a)使候选化合物与表达CST6或GABRP的细胞接触；并b)选择与对照相比降低CST6或GABRP表达水平的候选化合物。表达CST6或GABRP的细胞包括例如由PDAC建立的细胞系；这样的细胞可以用于本发明的上述筛选(例如用于CST6的PK-59或PK-1或者用于GABRP的KLM-1或PK-45P)。表达水平可以通过本领域技术人员众所周知的方法来评估。在筛选方法中，可选择降低CST6或GABRP表达水平的化合物作为用于治疗或预防PDAC的候选药剂。或者，本发明的筛选方法可包括以下步骤a)使候选化合物与导入了载体的细胞接触，其中所述载体包含CST6或GABRP的转录调控区及在该转录调控区的控制下表达的报告基因；b)测量所述报告基因的表达水平或活性；并c)选择降低所述报告基因表达水平或活性的候选化合物。合适的报告基因和宿主细胞是本领域众所周知的。使用标志基因的转录调控区，可以制备筛选所需的报告子构建体。当本领域技术人员已知标志基因的转录调控区时，可以使用先前的序列信息来制备报告子构建体。当标志基因的转录调控区仍未鉴定时，可以基于标志基因的核苷酸序列信息从基因组文库中分离包含转录调控区的核苷酸区段。可用于结合蛋白质的支持物的实例包括不溶性多糖，诸如琼脂糖、纤维素和右旋糖芬；及合成树脂，诸如聚丙烯酰胺、聚苯乙烯和硅；优选使用由上述材料制备的市售的珠和板(例如多孔板、生物传感器芯片等)。使用珠子时，可以将其填入柱子。蛋白质与支持物的结合可依照常规方法进行，诸如化学键合和物理吸附。或者，蛋白质可通过特异性识别该蛋白质的抗体而与支持物结合。此外，还可以利用亲合素与生物素来进行蛋白质与支持物的结合。蛋白质之间的结合在缓沖液中进行；例如但不限于磷酸盐缓沖液和Tris缓沖液，只要緩沖液不抑制蛋白之间的结合即可。在本发明中，利用表面等离子体共振现象的生物传感器可用作对所结合蛋白质检测或定量的手段。使用这样的生物传感器(例如BIAcore,Pharmacia)时，仅使用极少量的多肽且无需标记，即可将蛋白质之间的相互作用实时观察为表面等离子体共振信号。或者，可以标记CST6或GABRP多肽，所结合蛋白质的标记物可用于检测或测量所结合的蛋白质。具体的说，对一种蛋白质进行预标记之后，在存在测试化合物的条件下使经过标记的蛋白质与另一种蛋白质接触，然后在洗涤之后根据标记物来检测或测量所结合的蛋白质。在本发明的方法中，可以使用标记物质来标记蛋白质，诸如放射性同位素(例如3H、"C、32P、33P、35S、125I、131I)、酶(例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、(3-半乳糖苷酶、(3-葡糖苷酶)、荧光物质(例如异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明)、和生物素/亲合素。在用放射性同位素标记蛋白质时，可通过液体闪烁法进行检测或测量。或者，通过加入酶的底物，用吸收光度计(absorptiometer)检测底物的酶促变化诸如颜色的产生，可以检测或测量用酶标记的蛋白质。此外，在将荧光物质用作标记物的情况中，可使用荧光光度计来检测或测量所结合的蛋白质。在本发明的筛选中使用抗体的情况中，抗体优选用上述标记物质之一进行标记，并基于标记物质进行^^测或测量。或者，也可以将针对CST6或GABRP多肽的抗体用作第一抗体，使用以标记物质标记的第二抗体对其进行检测。此外，本发明的筛选中与蛋白质结合的抗体可使用蛋白G或蛋白A柱进4于;险测或测量。或者，在本发明筛选方法的另一个实施方案中，可以使用利用细胞的双杂交系统("MATCHMAKER双杂交系统"、"哺乳动物MATCHMAKER双杂交测定试剂盒"、"MATCHMAKER单杂交系统，，(Clontech);"HybriZAP双杂交载体系统，，(Stratagene);参见DaltonandTreisman,Cell68:597-612(1992);FieldsandStemglanz，TrendsGenet10:286-92(1994))。在双杂交系统中，将本发明的CST6或GABRP多肽与SRF结合区或GAL4结合区融合并在酵母细胞中表达。作为报告基因，在HIS3基因夕卜，可以使用例如Ade2基因、lacZ基因、CAT基因、萤光素酶基因等。在本发明中，GABAa受体拮抗剤曱碘荷包牡丹碱(Bicucullinemethiodide，BMI)在GABRP阳性PDAC细胞系中抑制细胞增殖。因此，GABAa受体拮抗剂可用于治疗和预防PDAC。因此，本发明提供了治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，所述方法包括使用制药学有效量的GABAa受体(GABRA)拮抗剂的步骤。或者，本发明还提供了用于治疗或预防胰腺癌的组合物，所述组合物包括包含作为活性成分的制药学有效量的GABAA受体(GABRA)拮抗剂及制药学可接受载体。在本发明中，优选的GABAA受体(GABRA)拮抗剂是荷包牡丹碱或其制药学可接受的季铵盐。具体而言，荷包牡丹碱的制药学可接受季铵盐可以包括荷包牡丹碱的甲碘化物、曱溴化物、曱氯化物或曱醇盐(methoxide)。荷包牡丹碱(CAS注册号19730-80-4)是众所周知的A型，氨基丁酸受体拮抗剂(KardosJetal.,EurJPharmacol337/1:83-86(1997，Oct.15))。然而，用荷包牡丹碱抑制PDAC的细胞增殖是新方法。此外，GABAA受体拮抗剂可用于治疗或预防PDAC。因此，本发明提供了筛选可用于治疗或预防PDAC的化合物的方法。此筛选方法的一个实施方案包括以下步骤(a)在存在测试化合物的条件下使GABA或其类似物与GABRP接触，并检测GABRP与GABA或其类似物的结合活性；(b)选择与不存在测试化合物的条件下所检测到的结果相比降低步骤(a)中检测到的结合活性的化合物。在本发明中，术语GABA指神经递质Y-氨基丁酸。GABA在成熟脑中主要发挥抑制性神经递质的功能。它在神经系统发育过程中还可以发挥营养因子的作用以影响神经细胞等的增殖、迁移和分化。"类似物"在本文中指配包括天然的和人工合成的这两类化合物。GABRP不仅可作为天然蛋白来制备，还可以通过基因重组技术作为重组蛋白来制备。天然蛋白可通过例如亲和层析来制备。另一方面，重组蛋白可如下制备，即培养经过编码GABRP的DNA转化的细胞以表达该蛋白质，然后回收之。GABRP与GABA或其类似物的结合活性可使用附着于GABA或其类似物的标记物来检测(例如所结合的量通过;^文射性或荧光强度来测定)。或者，标。在本发明的筛选方法中可以使用任何测试化合物，例如细胞4是取物、细胞培养物上清液、微生物发酵产物、海洋生物提取物、植物提取物、纯化或粗制的蛋白质、肽、非肽化合物、合成小分子化合物和天然化合物。在本发明中，测试化合物还可以使用本领域已知的组合文库法的多种方法的任一种获得，包括(l)生物学文库，(2)空间定位平行固相或溶液相文库(spatiallyaddressableparallelsolidphaseorsolutionphaselibraries),(3)需要重叠合法(deconvolution)的合成文库法，(4)"一珠一化合物，，(onebeadonecompound)文库法，和(5)使用亲和层析选择的合成文库法。使用亲和层析选择的生物学文库法限于肽文库，而其它四种方法适用于肽、非肽寡聚物或小分子化合物文库(Lam,AnticancerDrugDes12:145(1997))。合成分子文库的方法的例子可在本领域找到(DeWittetal.,ProcNatlAcadSciUSA卯6909(1993);Erbetal.，ProcNatlAcadSciUSA91:11422(1994);Zucke謹nnetal.,JMedChem37:2678(1994);Choetal"Science261:1303(1993);Carelletal"AngewChemIntEdEngl33:2059(1994);Carelletal.,Angew.ChemIntEdEngl33:2061(1994);Gallopetal.,JMedChem37:1233(1994))。化合物文库可存在于溶液中(参见Houghten，Bio/Techniques13:412(1992》、珠子上(Lam,Nature354:82(1991))、芯片上(Fodor,Nature364:555(1993))、细菌上(美国专利5，223,409)、孢子上(美国专利5,571,698;5,403,484和5，223，409)、质粒上(Culletal"ProcNatlAcadSciUSA89:1865(1992))或噬菌体上(ScottandSmith,Science249:386(1990);Delvin，Science249:404(1990);Cwirlaetal"ProcNatlAcadSciUSA87:6378(1990);Felici,JMolBiol222:301(1991);美国专利申请20020103360)。通过本发明筛选方法分离的化合物是抑制CST6或GABRP多肽的活性、用于治疗或预防可归于例如细胞增殖性疾病的疾病、诸如PDAC的药物候选用于治疗或预防PDAC的药物组合物本发明提供了用于治疗或预防胰腺癌的组合物，其包含通过本发明的筛选方法选4奪出的任何化合物。在将通过本发明方法分离出的化合物作为药物施用于人和其它哺乳动物诸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猫、犬、绵羊、猪、牛、猴、狒狒和黑猩猩时，分离的化合物可以直接施用，或者可以使用已知的药物制备方法配制成剂型。例如，根据需要，药物可以作为糖衣片剂、胶嚢剂、酏剂和微胶嚢剂口服施用；或者用水或任何其它制药学可接受液体配制成无菌溶液或悬浮液，以注射的形式非口服施用。例如，可以将化合物以普遍接受的药物实施(implementation)所需的单位剂型与药理学可接受载体或介质混合，具体为无菌水、生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、芳香剂、赋形剂、媒介物、防腐剂、粘合剂等。这些制剂中所包含的有效成分的量是可获得的指定范围内的合适剂量。可以混合到片剂和胶嚢中的添加剂的例子包括但不限于粘合剂，诸如明胶、玉米淀粉、黄蓍胶和阿拉伯胶；赋形剂，诸如结晶纤维素；溶胀剂，诸如玉米淀粉、明胶和褐藻酸；润滑剂，诸如硬脂酸镁；增甜剂，诸如蔗糖、乳糖或糖精；和芳香剂，诸如薄荷、Gaultheriaadenothrix油和櫻桃。若单位剂量形式为胶嚢剂，则上述成分中还可以包括液体载体，诸如油。注射用无菌组合物可以使用媒介物诸如注射用蒸馏水，遵循正规药物实施进行配制。生理盐水、葡萄糖及包含佐剂诸如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇和氯化钠的其它等渗液体可用作注射用水溶液。这些可以与合适的增溶剂组合使用，诸如醇，例如乙醇；多元醇，诸如丙二醇和聚乙二醇；及非离子表面活性剂，诸如Polysorbate80tm和HCO-50。芝麻油或大豆油可用作油质液体，它们可以与苯曱酸苯曱酯或苯甲醇组合使用作为增溶剂，而且可以与緩冲液，诸如磷酸盐緩冲液和乙酸钠緩冲液；止痛药，诸如盐酸普鲁卡因；稳定剂，诸如苯曱醇和酚；和/或抗氧化剂配制在一起。所制备的注射剂可以装入合适的安瓿。可以使用本领域技术人员众所周知的方法给患者施用本发明的药物组合物，例如动脉内、静脉内或经皮注射或者鼻内、经支气管、月几肉内或口服施用。施用的剂量和方法根据患者的体重和年龄及施用方法而变化；然而，本领域技术人员可以常规选择合适的施用方法。如果所述化合物可以由DNA编码，那么可以将该DNA插入基因疗法的载体，并给患者施用该载体以进行治疗。施用的剂量和方法根据患者的体重、年龄和症状而变化，但是本领域技术人员可以合适的选择它们。举例来说，虽然能与本发明蛋白质结合并调节其活性的化合物的剂量取决于症状，在给正常体重成人(60kg)口服施用时，其剂量为约0.1mg到约100mg每天，优选为约1.0mg到约50mg每天，更优选为约l.Omg到约20mg每天。在以注射形式给正常体重成人(体重60kg)肠胃外施用时，虽然才艮据患者、靶器官、症状和施用方法存在一些差异，静脉内注射约0.01mg到约30mg每天，优选约0.1mg到约20mg每天，更优选约0.1mg到约10mg每天的剂量是合适的。在其它动物的情况中，可以通过换算为60kg体重而常规计算适宜的剂量。对胰腺癌患者的预后的评估本发明还提供了评估患有PDAC的受试者的预后的方法，包括将测试细胞群中的CST6或GABRP表达与来自疾病阶段谱中一系列疾病阶段患者的参照细胞群中的CST6或GABRP表达进行比较的步骤。通过比较测试细胞群与一个或多个参照细胞群中的CST6或GABRP基因表达，或者通过比较来自受试者的测试细胞群中基因表达的时间样式，可以评估受试者的预后。例如，CST6或GABRP的表达与正常对照相比升高表明预后不太理想。相反，CST6或GABRP的表达与正常对照相比的相似性表明受试者的预后更加理想。优选的是，可以通过比较CST6或GABRP的表达序型来评估受试者的预后。试剂盒本发明还包括PDAC检测剂，例如能特异性结合或鉴定CST6或GABRP核酸的核酸，诸如与CST6或GABRP核酸的一部分互补的寡核香酸序列，DNA、RNA或肽适体，或者能与由CST6或GABRP核酸编码的蛋白质结合的抗体。检测剂可以以试剂盒的形式包装在一起。例如，可以将检测剂包装在不同的容器中，例如核酸或抗体(或与固体基质结合，或与使其与基质结合的试剂分开包装)、对照试剂(阳性和/或阴性)、和/或可一全测标记物。试剂盒中还可以包括实施测定的说明(例如书面说明书、磁带、VCR、CD-ROM等)。试剂盒的测定方式可以是本领域已知的Northem杂交或夹心ELISA。例如，可以将PDAC检测剂固定在固体基质上，诸如多孔条(porousstrip),以形成至少一个PDAC检测位点。多孔条的测量或检测区可以包括多个位点，每个位点都含有核酸。测试条也可以包含阴性和/或阳性对照的位点。或者，对照位点可以设置于与测试条不同的条上。任选的是，不同检测位点可以包含不同量的固定化核酸，即第一个检测位点的量较多，后续位点的量较少。添加测试样品后，展现出可检测信号的位点数目提供了样品中存在的PDAC量的定量指标(quantitativeindication)。4企测位点的形状可以i殳置成任何合适的可检测形状，一般为跨越测试条宽度的条状或点状。抑制胰腺癌的方法本发明进一步提供了通过降低CST6或GABRP的表达(或其基因产物的活性)来治疗或緩解受试者中的PDAC症状的方法。可以将合适的治疗化合物预防性或治疗性的施用于患有或有风险发生(或易感)PDAC的受试者。产物的异常活性来鉴定此类受试者。在本发明的上下文中，合适的治疗剂包括例如细胞周期调控和细胞增殖的抑制剂。或者，本发明的治疗方法可以包括如下步骤降低在胰腺细胞中表达异常升高的CST6或GABRP基因("上调"或"过表达"的基因)产物的表达、功能或二者。可以按照本领域已知的数种方法中的任何一种来抑制表达。例如，可以通过给受试者施用能抑制或拮抗过表达基因的表达的核酸来抑制表达，所述核酸例如能破坏过表达基因的表达的反义寡核芬酸或小干扰RNA。当然，本文所述治疗或緩解方法的实施方案在必要改动后适用于使用本文所述能降低CST6或GABRP表达(或其基因产物的活性)的化合物来制备用于治疗或緩解受试者中PDAC症状的药物组合物。这样的化合物可以是例如反义、siRNA、抗体、适体或核酶组合物。反义核酸和siRNA如上所述，与CST6或GABRP的核苷酸序列对应的反义核酸可用于降低该基因的表达水平。与在胰腺癌中上调的CST6或GABRP对应的反义核酸可用于治疗胰腺癌。具体而言，本发明的反义核酸可如下发挥作用，即与CST6或GABRP的核苷酸序列或其相应的mRNA结合，由此抑制基因的转录或反义，促进mRNA的降解，和/或抑制由CST6或GABRP编码的蛋白质的表达，由此抑制蛋白质的功能。术语"反义核酸"在用于本文时涵盖与靶序列完全互补的核苷酸和具有一个或多个核苷酸错配的核普酸，只要反义核酸能与靶序列发生特异性杂交。例如，本发明的反义核酸包括这样的多核苷酸，它们在至少15个连续核苷酸的跨度上具有至少70%或更高、优选至少80%或更高、更优选90%或更高、甚至更优选95。/。或更高的同源性。可使用本领域已知算法来确定同源性。本发明的反义核酸可如下作用于生成由CST6或GABRP编码的蛋白质的细胞，即与编码蛋白质的DNA或mRNA结合，抑制其转录或翻i奪，促进mRNA降解，并抑制蛋白质表达，由此导致对蛋白质功能的抑制。通过与对核酸无活性的合适基质混合，可以将本发明的反义核酸制成外用制剂，诸如搽剂(liniment)或罨剂(poultice)。同样，根据需要，通过添加赋形剂、等渗剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂、止痛药等，可以将本发明的反义核酸配制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶嚢、脂质体胶嚢、注射剂、溶液、滴鼻剂和冷冻干燥剂。这些可以依照已知方法来制备。通过直接施加到患处上或通过注射到血管中使其到达患处，可以将本发明的反义核酸给予患者。也可以使用反义-封固剂(mountingmedium)来提高持久性和膜通透性。例子包括脂质体、聚-L-赖氨酸、脂质、胆固醇、脂转染剂、或它们的衍生物。本发明反义核酸衍生物的剂量可以根据患者的状况进行调整并以所需量使用。例如，可使用的剂量范围为0.1-100mg/kg,优选为0.1-50mg/kg。本发明的反义核酸能抑制本发明蛋白质的表达，因此可用于抑制本发明蛋白质的生物学活性。另外，表达抑制剂，包括本发明的反义核酸，因其可抑制本发明蛋白质的生物学活性而是有用的。本发明的反义核酸包括经过修饰的寡核香酸。例如，可以使用硫代磷酸酯(thioated)寡核苦酸赋予寡核苦酸以核酸酶抗性。同样，针对CST6或GABRP的siRNA可用于降低CST6或GABRP的表达水平。在本文中，术语"siRNA"指能阻止靶mRNA翻译的双链RNA分子。可以使用标准技术将siRNA导入细胞，包括那些其中使用DNA作为转录RNA的模板的。在本发明的上下文中，siRNA包含针对上调标志基因，诸如CST6或GABRP的有义核酸序列及反义核酸序列。构建siRNA使其单一转录物具有来自靶基因的有义序列及互补的反义序列二者，例如为发夹结构。CST6或GABRP的siRNA与靶mRNA发生杂交，通过与通常的单链mRNA转录物结合，由此干扰翻译，并由此干扰蛋白质的表达，来降低或抑制由CST6或GABRP编码的多肽的生成。如此，本发明的siRNA分子可以通过其在严格条件下与CST6或GABRP的mRNA发生特异性杂交的能力来限定。为了本发明的目的，术语"杂交"或"特异性杂交"用于指两个核酸分子在"严格杂交条件"下发生杂交的能力。术语"严格杂交条件"指核酸分子会与(通常是在复杂核酸混合物中的)其靶序列发生杂交，但检测不到与其它序列发生杂交的条件。严格条件依赖于序列，并且在不同情况中是不同的。较长序列在较高温度发生特异性杂交。关于核酸杂交的全面指导见于Tijssen,TechniquesinBiochemistryandMolecularBiology—HybridizationwithNucleicProbes,"Overviewofprinciplesofhybridizationandthestrategyofnucleicacidassays"(1993)。通常，选择的严格条件比特定序列在限定离子强度、pH下的热解链温度(Tm)低约5-10。C。Tm是(在限定的离子强度、pH和核酸浓度下)过量时，在Tm,有50°/。的探针在平衡状态下被占用)。通过添加去稳定剂，诸如甲酰胺也可以实现严格条件。对选择性或特异性杂交而言，阳性信号为背景的至少2倍，优选背景杂交的10倍。例示性的严格杂交条件可以如下在50%甲酰胺、5xSSC和10/0SDS中于42。C温育，或者在5xSSC、1%SDS中于65。C温育，然后用0.2xSSC、0.1。/oSDS于50。C进行洗涤。在本发明的上下文中，siRNA的长度优选小于500、200、100、50或25个核苷酸。更优选的是，siRNA的长度为19-25个核苦酸。用于生成CST6或GABRPsiRNA的例示性核酸序列包含SEQIDNO:15、19、23、27或31的核苷酸序列作为靶序列。在RNA或其衍生物中，核普酸序列中的碱基"t"应当用"u"替换。因此，例如，本发明提供了包含以下核苦酸序列的双链RNA分子5'-gugguucccuggcagaacu-3，(SEQIDNO:15)、5'-gaugggcaggauuguugau-3，(SEQIDNO:19)、5'-uaucaucaacagciuccauc-3,(SEQIDNO:23)、5'-ccccaguaauguugaucac-3'(SEQIDNO:27)或5'-aggaaguagaagaagucag-3，(SEQIDNO:31)。为了增强siRNA的抑制活性，可以将核苷酸"u"添加到靶序列反义链的3，端。待添加的"u"的数目为至少2个，一般为2-10个，优选为2-5个。所添加的"u，，在siRNA反义链的3，端形成单链。可以将CST6或GABRPsiRNA以能够与mRNA转录物结合的形式直接导入细胞。在这些实施方案中，本发明的siRNA分子通常如上文关于反义分子所述进行^f奮饰。其它修饰也是可能的，例如偶联有胆固醇的siRNA显示出改善的药理学特性(Songetal.NatureMed9:347-51(2003))。或者，编码siRNA的DNA被携带于载体中。可以如下生成载体，例如通过将CST6或GABRP靶序列克隆入表达载体，其中所述表达载体具有可操作连接的、以容许两条链均能表达(通过DNA分子的转录)的方式位于该序列侧翼的调控序列(Lee，N.S.，etal.,(2002)NatureBiotechnology20:500-505)。其为CST6或GABRPmRNA的反义链的RNA分子由第一启动子(例如所克隆DNA3，端的启动子序列)转录，其为CST6或GABRPmRNA的有义链的RNA分子由第二启动子(例如所克隆DNA5'端的启动子序列)转录。所述有义链与反义链在体内杂交，从而产生用于沉默CST6或GABRP的siRNA构建物。或者，可利用两个构建物来制备siRNA构建物的有义链和反义链。所克隆的CST6或GABRP可编码具有二级结构例如发夹的构建物，其中单一转录物具有来自靶基因的有义序列及互补的反义序列二者。为了形成发夹环结构，可以在有义序列与反义序列之间放置由任意核苷酸序列组成的环序列。如此，本发明还提供了具有通式5，-[A]-[BHA，]-3，的siRNA,其中[A]为核糖核苷酸序列，其对应于能与CST6或GABRP的mRNA或cDNA发生特异性杂交的序列。在优选的实施方案中，[A]为对应于CST6或GABRP的序列的核糖核香酸序列，为由3-23个核苷酸组成的核糖核苷酸序列，且为由[A]的互补序列组成的核糖核苷酸序列。[A]区与[A，]区发生杂交，然后形成由[B]区组成的环。环序列的长度可以优选是3-23个核芬酸。环序列可以选自例如如下序列(http:〃www.ambion.com/techlib/tb/tb—506.html)。此外，由23个核芬酸组成的环序列也提供活性siRNA(Jacque,JMetal.,Nature418:435-438(2002))。CCC、CCACC或CCACACC:Jacque,J,M.，etal"Nature418:435-438(2002);UUCG:Lee,N.S.，etal.，NatureBiotechnology20:500-505(2002);Fruscoloni，P.etal.，ProcNatlAcadSciUSA100(4):1639-1644(2003);和UUCAAGAGA:Dykxhoorn，D.M.etal"NatureReviewsMolecularCellBiology4:457-467(2003)。因此，环序列可以选自由CCC、UUCG、CCACC、CCACACC和UUCAAGAGA组成的组。优选的环结构是UUCAAGAGA(DNA中为"ttcaagaga")。适用于本发明上下文的例示性发夹siRNA包括用于CST6-siRNA的5'-gugguucccuggcagaacu-[b]-aguucugccagggaaccac-3，(SEQIDNO:15的輩巴序歹'J)用于GABRP-siRNA的5'-gaugggcaggauuguugau-[b]-aucaacaauccugcccauc墨3，(SEQIDNO:19的輩巴序歹'J)5，-uaucaucaacagcuccauc-[b]陽gauggagcuguugaugaua-3，(SEQIDNO:23的革巴序歹寸)5'-ccccaguaauguugaucac-[b]-gugaucaacauuacugggg-3'(SEQIDNO:27的革巴序歹寸)5'-aggaaguagaagaagucag-[b]-cugacuucuucuacuuccu-3，(SEQIDNO:31的輩巴序歹ll)合适siRNA的核苷酸序列可4吏用乂人Ambion网站(http:〃www.ambion.com/techlib/misc/siRNA一finder.html)可4寻至)J的siRNAi殳计计算机程序来设计。所述计算机程序基于如下方案选择用于合成siRNA的核苷酸序列siRNA耙位点的选择1.从对象转录物的AUG起始密码子开始向下游扫描，寻找AA二核香S吏序位点。Tuschl等人不推荐针对5，和3，非翻译区(UTR)和邻近起始密码子的区域(75个碱基之内)设计siRNA,因为上述区域可能富含调控蛋白结合位点。UTR结合蛋白和/或翻译起始复合物可干扰siRNA内切核酸酶复合物的结合。2.将所迷潜在靶位点与人基因组数据库进行比较，不考虑与其它编码序列有显著同源性的任何靶序列。可使用可在NCBI服务器www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/上找到的BLAST(AltschulSFetal.,JMolBiol1990Oct5;215(3):403-10;AltschulSFetal.,NucleicAcidsRes1997Sep1;25(17):3389-402)来进行同源性搜索。3.选择合格的靶序列用于合成。在Ambion，可优选沿待评估基因的长度选择数个靶序列。CST6或GABRP基因序列侧翼的调控序列可以是相同的或不同的，使得可以独立的、或者以时间性或空间性方式调控它们的表达。如下在细胞外转录siRNA,通过将CST6或GABRP模板分别克隆入包含例如来自小核RNA(snRNA)U6的RNA聚合酶III转录单元或人H1RNA启动子的载体使siRNA进行细胞内转录。为了将载体导入细胞，可以使用转染增强剂。FuGENE(Rochediagnostices)、Lipofectamin2000(Invitrogen)，Oligofectamine(Invitrogen)牙口Nucleofector("WakopureChemical)可以用4乍寿争染增强剂。本发明的反义寡核苷酸或siRNA能抑制本发明多肽的表达，因此可用于抑制本发明多肽的生物学活性。另外，表达抑制剂，包括本发明的反义寡核苦酸或siRNA，因其可抑制本发明多肽的生物学活性因而是有用的。因此，包含本发明反义寡核苷酸或siRNA的组合物可用于治疗胰腺癌。抗体或者，在PDAC中过表达的CST6或GABRP的基因产物的功能可以通过施用能与该基因产物结合或能以其它方式抑制其功能的化合物来抑制。例如，所述化合物是能与CST6或GABRP的基因产物结合的抗体。本发明涉及抗体的使用，特别是针对由CST6或GABRP编码的蛋白质的抗体或其片段。在用于本文时，术语"抗体"指具有特定结构、只与用于生成该抗体的抗原(即上调标志的基因产物)或其密切相关抗原相互作用(即结合)的免疫球蛋白分子。此外，抗体可以是抗体片段或经过修饰的抗体，只要它能结合由CST6或GABRP编码的蛋白质。例如，抗体片段可以是Fab、F(ab，)2、Fv或将来自H链和L链的Fv片段通过合适的接头连接而成的单链Fv(scFv)(HustonJSetal.,ProcNatlAcadSciUSA85:5879-5883(1988))。更具体的说，可以通过用酶诸如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶处理抗体来生成抗体片段。或者，可以构建编码抗体片段的基因，将其插入表达载体，并在合适的宿主细胞中表达(参见例如CoMSetal.,JImmunol152:2968-2976(1994);BetterMandHorwitzAH,MethodsEnzymol178:476-496(1989);PluckthunAandSkerraA，MethodsEnzymol178:497-515(1989);LamoyiE，MethodsEnzymol121:652-663(1986);RousseauxJetal.，MethodsEnzymol121:663-669(1986);BirdREandWalkerBW,TrendsBiotechnol9:132-137(1991))。抗体可以通过与多种分子诸如聚乙二醇(PEG)偶联来修饰。本发明提供了经过这样修饰的抗体。可通过化学修饰抗体来获得经过修饰的抗体。这些修饰方法是本领域常规的。体的框架区(FR)及恒定区的人源化抗体。此类抗体可使用已知技术来制备。人源化可通过用啮齿类的CDR或CDR序列替换人抗体的相应序列来进行(参见例如Verhoeyenetal.,Science239:1534-1536(1988))。因而，此类人源化抗体是嵌合抗体，其中基本上小于整个人可变域已被来自非人物种的相应序列所替换。也可以使用在人框架区和恒定区外还包含人可变区的完全人的抗体。此类抗体可使用本领域已知的多种技术来制备。例如，体外方法涉及使用展示在p盆菌体上的人抗体片段的重组文库(例如Hoogenboom&Winter,J.Mol.Biol.227:381(1992))。类似的，可通过将人免疫球蛋白基因座导入转基因动物，例如内源免疫球蛋白基因部分或完全灭活的小鼠，来生成人抗体。该方法记载于例如美国专利Nos.6,150,584;5,545,807;5，545，806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,661,016。在本发明的上下文中用于治疗或緩解PDAC症状的抗体还可以是单链抗体。可以修改为生成单链抗体而记载的技术(见美国专利4,946,778等)以适应生成本发明多肽或其部分的单链抗体。针对癌细胞中发生的特定分子变化的癌症疗法已经通过下述抗癌药的临床开发和管理机构的批准被认定为有效用于治疗晚期乳腺癌的曲妥单抗(trastuzumab)(Herceptin)、用于治疗慢性骨髓性白血病的曱磺酸伊马替尼(imatinibmethylate)(Gleevec)、用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的gefitinib(Iressa)和用于B细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤的利妥昔单抗(rituximab)(抗CD20mAb)(CiardielloFetal.,ClinCancerRes.2001Oct;7(10):2958-70.Review;SlamonDJetal.，NEnglJMed2001Mar15;344(11):783-92;RehwaldUetal.,Blood2003Jan15;101(2):420-424;FangGetal.,Blood96:2246-2253((2000)))。这些药物临床上是有效的，并且比传统抗癌剂具有更好的耐受性，因为它们仅仅靶向转化细胞。因此，这些药物不仅改善了癌症患者的存活率和生活质量，而且验证了分子靶向癌症疗法的理念。另外，靶向药物在与标准化疗组合使用时可增强标准化疗的功效(GianniL,Oncology63Suppl1:47-56(2002);KlejmanAetal.，Oncogene21:5868-5876(2002》。因此，未来的癌症治疗将很可能涉及将常规药物与针对肿瘤细胞不同特性诸如血管发生和侵入的靶特异性药剂组合。这些调控方法可以离体、体外(例如通过在存在药剂的条件下培养细胞)或体内(例如通过给受试者施用药剂)进行。所述方法涉及施用蛋白质或蛋白质组合或者核酸分子或核酸分子组合，作为抵制(counteract)差异表达基因的异常表达或其基因产物的异常活性的疗法。可以用拮抗(即降低或抑制)一种或多种过表达基因的活性的治疗剂来治疗特征在于基因和基因产物的表达水平或生物学活性(相对于未患有疾病或病症的受试者)升高的疾病和病症。可以治疗性或预防性的施用拮抗活性的治疗剂。因此，可以用于本发明上下文中的治疗剂包括例如(i)过表达基因的多肽或其类似物、衍生物、片段或同系物；(ii)过表达基因或基因产物的抗体；(iii)编码过表达基因的核酸；(iv)反义核酸或"功能障碍(dysfUnctional)"的核酸(即由于过表达基因的核酸内的异源插入所致)；(v)小干扰RNA(siRNA);或(vi)调节剂(即改变过表达多肽与其结合配偶(bindingpartner)之间相互作用的抑制剂和拮抗剂)。将功能障碍的反义分子用于通过同源重组来"敲除"多肽的内源功能(参见例如Capecchi,Science244:1288-1292(1989))。可以通过如下对肽和/或RNA进行定量而容易的冲佥测出水平的升高，即通过获取患者组织样品(例如来自从活检组织)，并在体外测定其RNA或肽水平、所表达的肽(或表达有所改变的基因的mRNA)的结构和/或活性。本37领域公知的方法包括但不限于免疫测定法(例如通过Westem印迹分析、免疫沉淀接着十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫细胞化学等)和/或检测mRNA表达的杂交测定法(例如Northern测定法、点印迹、原位杂交等)。预防性施用在出现疾病的明显临床症状之前进行，从而阻止疾病或病症的出现或者延迟其进程。本发明的治疗方法可以包括使细胞与能调节差异表达基因的基因产物的一种或多种活性的药剂接触的步骤。调控蛋白质活性的药剂的例子包括但不限于核酸、蛋白质、这些蛋白质的天然存在关联配体、肽、肽模拟物及其它小分子。针对胰腺癌的疫苗接种本发明还涉及治疗或预防受试者中胰腺癌的方法，包括对所述受试者施用疫苗的步骤，该疫苗包含由CST6或GABRP的核酸编码的多肽、该多肽的免疫学活性片段、或者编码该多肽或其片段的多核苷酸。当然，本发明还涉及由CST6或GABRP的核酸编码的多肽、该多肽的免疫学活性片段、或者编码该多肽或其片段的多核苷酸在制备用于治疗或预防受试者中胰腺癌的疫苗组合物中的用途。施用所述多肽在受试者中诱发抗肿瘤免疫力。为了诱导抗肿瘤免疫力，给有所需要的受试者施用由CST6或GABRP的核酸编码的多肽、该多肽的免疫学活性片段、或者编码该多肽或其片段的多核苷酸。此外，由CST6或GABRP的核酸编码的多肽可诱发针对胰腺癌侵入的抗肿瘤免疫力。该多肽或其免疫学活性片段可用作针对PDAC的疫苗。在有些情况中，可以以结合至T细胞受体(TCR)或由抗原呈递细胞(APC)诸如巨噬细胞、树突细胞(DC)或B细胞呈递的形式施用蛋白质或其片段。由于DC具有强抗原呈递能力，在APC中使用DC是最优选的。在本发明中，针对PDAC的疫苗指有能力在接种后的动物中诱发抗肿瘤免疫力的物质。依照本发明，由CST6或GABRP编码的多肽或其片段建议为HLA-A24或HLA-A+0201限制表位肽，它们可诱导针对表达CST6或GABRP的PDAC细胞的有力且特异性的免疫应答。如此，本发明还涵盖使用多肽来诱发抗肿瘤免疫力的方法。一般而言，抗肿瘤免疫力包括诸如以下的免疫应谷-诱导针对肺瘤的细胞毒性淋巴细胞，-诱导识别肿瘤的抗体，和-诱导抗肿瘤细胞因子的产生。因此，若某种蛋白质在接种后的动物中诱导任一种上述免疫应答，则确定该蛋白质具有抗胂瘤免疫力诱导效果。蛋白质对抗肿瘤免疫力的诱导可以通过在体内或在体外观察宿主中的免疫系统针对蛋白质的应答来检测。例如，用于检测细胞毒性T淋巴细胞诱导的方法是众所周知的。具体而5，细胞分化为细胞毒性T细胞(或细胞毒性T淋巴细胞；CTL)，然后增殖(这称为丁细胞活化)。因此，某种肽的CTL诱导可以通过将该肽经由APC呈递给T细胞并检测CTL的诱导来评估。此外，APC具有激活CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞、嗜曙红细胞和NK细胞的效果。由于CD4十T细胞和CD8十T细胞在抗胂瘤免疫力中也是重要的，可使用这些细胞的活化效果作为指标来评估肽的抗肿瘤免疫力诱导作用。周知的。在APC中，DC是具有最强CTL诱导作用的代表性APC。在该方法中，首先使测试多肽与DC接触，然后使该DC与T细胞接触。在与DC接触后检测到具有针对目的细胞的细胞毒性效果的T细胞，则表示该测试多肽具有诱导细胞毒性T细胞的活性。针对肿瘤的CTL活性可以使用例如"Cr标记的肺瘤细胞的溶解作为指标来检测。或者，使用3H-胸苷摄取活性或LDH(乳糖脱氳酶)释放作为指标来评估肺瘤细胞破坏程度的方法也是众所周知的。在DC外，外周血单个核细胞(PBMC)也可用作APC。已才艮道可通过在存在GM-CSF和IL-4的条件下培养PBMC来增强CTL的诱导。相似的，已显示通过在存在钥孔i戚血蓝蛋白(KLH)和IL-7的条件下培养PBMC来诱导CTL。通过这些方法证实为具有CTL诱导活性的测试多肽就是具有DC活化效应和随后的CTL诱导活性的多肽。因此，诱导针对胂瘤细胞的CTL的多肽可用作针对肺瘤的疫苗。此外，通过与多肽接触而获得诱导针对肿瘤的CTL的能力的APC也可用作针对肿瘤的疫苗。此外，通过APC呈递多肽抗原而获得细胞毒性的CTL也可用作针对肿瘤的疫苗。利用由APC和CTL引起的抗肺瘤免疫力的这些肿瘤治疗方法称为细胞免疫疗法。一^L来说，在将多肽用于细胞免疫疗法时，已知通过组合多种具有不同结构的多肽并使它们与DC接触来增加CTL诱导的效率。因此，在用蛋白质片段刺激DC时，使用多种类型的片段的混合物是有利的。或者，多肽对抗肿瘤免疫力的诱导可通过观察针对胂瘤的抗体的产生的诱导来证实。例如，在用多肽免疫的实验动物中诱导了针对该多肽的抗体时及在这些抗体抑制肿瘤细胞的生长时，可确定该多肽具有诱导抗肿瘤免疫力的能力。通过施用本发明的疫苗来诱导抗肿瘤免疫力，而且该抗肿瘤免疫力的诱导能够治疗和预防PDAC。针对癌症的治疗或对癌症发作的预防包括任何下述步骤，诸如癌性细胞生长的抑制，癌症的退化(involution)及癌发生的抑制。癌症的治疗或预防效果还包括患有癌症的个体的死亡率和发病率的降j氐、血液中肿瘤标记物水平的减少、癌症伴发的可检测症状的緩解等。此类治疗和预防效果优选是统计学上显著的。例如，将疫苗对细胞增殖性疾病的治疗或预防效果与未施用疫苗的对照进行比较，观察到的显著性水平为5%或更低。例如，可以将Student氏t检验、Mann-WhitneyU检验或ANOVA用于统计学分析。上述具有免疫学活性的蛋白质或编码该蛋白质的载体可以与佐剂组合。佐剂指在与具有免疫学活性的蛋白质一起(或相继)施用后能增强针对该蛋白质的免疫应答的化合物。佐剂的例子包括但不限于霍乱毒素、沙门氏菌毒素、明矾等。此外，本发明的疫苗可适当的与制药学可接受载体组合。此类载体的例子有无菌水、生理盐水、磷酸盐緩冲液、培养液等。此外，疫苗可以在必要时包含稳定剂、悬浮剂、防腐剂、表面活性剂等。疫苗可全身或局部施用。疫苗施用可以通过单次施用进行，或者通过多次施用来强化。在使用APC或CTL作为本发明的疫苗时，可以通过例如离体方法来治疗或预防肿瘤。更具体的说，收集接受治疗或预防的受试者的PBMC,使该细胞与多肽在离体条件下接触，并在诱导APC或CTL后将该细胞施用于受试者。也可通过将编码多肽的载体在离体条件下导入PBMC来诱导APC。可以在施用前克隆经过体外诱导的APC或CTL。通过克隆和培养对靶细胞具有高破坏活性的细胞，可以更有效的实施细胞免疫疗法。此外，以该方式分离的APC和CTL不仅可用于针对提供细胞的受试者进行细胞免疫疗法，还可以用于针对来自其他个体的相似类型肿瘤进行细胞免疫疗法。此外，本发明提供了用于治疗或预防细胞增殖性疾病诸如癌症的药物组合物，其包含制药学有效量的本发明多肽。该药物组合物可用于引发抗肿瘤免疫力。用于抑制PDAC的药物组合物在本发明的上下文中，合适的药物制剂包括那些适于口服、直肠、鼻、局部(包括口腔或舌下)、阴道或肠胃夕卜(包括肌肉内、皮下和静脉内)施用的制剂，或者适于通过吸入或吹入施用的制剂。优选静脉内施用。制剂任选包装在离散的剂量单位(dosageunit)中。适于口服施用的药物制剂包括胶嚢剂、扁嚢剂或片剂，各自含有预定量的活性成分。合适的制剂还包括粉剂、颗粒剂、溶液、悬浮液和乳液。活性成分任选以大丸剂(bolus)、药糖剂(electuary)或糊剂(paste)的形式施用。用于口服施用的片剂和胶嚢剂可含有常规赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂和/或湿润剂。片剂可通过压制或模制来制备，其中任选含有一种或多种配方成分。压制片剂可如下制备在合适的机器中对自由流动形式(诸如粉末或颗粒)的活性成分进行压制，任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂和/或分散剂混合。模制片剂可如下制备在合适的机器中对用惰性液体稀释剂湿润的粉末化化合物的混合物进行模制。片剂可依照本领域已知方法进行包衣。口服液体制备物可以是例如水性或油性的悬浊液、溶液、乳液、糖浆或酏剂的形式，或者也可以作为干燥产物提供，在使用前用水或其它适宜^某介物制成。所述液体制备物可含有常规添加剂，诸如悬浮剂、乳化剂、非水性媒介物(可包括食用油)和/或防腐剂。片剂可任选配制成提供其中活性成分的緩慢释放或受控释放。片剂的包装中可以包含每月服用的一片药物。适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性的无菌注射溶液，其中任选含有抗氧化剂、緩沖剂、抑菌剂和使得制剂与目标受体的血液等渗的溶质；以及水性和非水性的无菌悬浮液，其中含有悬浮剂和/或增稠剂。所述制剂可以以单位剂量或多剂量容器提供，例如密封的安瓿和小瓶，还可以在冷冻-干燥(冻干)条件下保存，这样仅需要临使用前添加无菌液体载体例如盐水、注射用水。或者，可提供所述制剂用于连续输注。即配即用的注射溶液和悬浮液可由前述的无菌粉剂、颗粒剂和片剂类型制备。适于直肠施用的制剂包括含标准载体诸如可可脂或聚乙二醇的栓剂。适于口腔局部施用，例如口腔或舌下施用的制剂包括锭剂(lozenge)和软锭剂(pastille),其中锭剂在调味基质，诸如蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶中包含活性成分，而软锭剂在基质，诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯树胶中包含活性成分。鼻内施用时，本发明的化合物可以用作液体喷雾剂、可分散粉剂、或以滴剂的形式。滴剂可用水性或非水性基质配制，该基质中也含有一种或多种分散剂、增溶剂和/或悬浮剂。吸入给药时，可以由吹入器、雾化器、加压包装(pressurizedpack)或其它投递气溶胶喷雾的便利装置方便地投递化合物。加压包装可含有适宜的压缩气体推进剂(propdlant)，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟曱烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适宜气体。在加压气溶胶的情况下，可通过提供投递计量量(meteredamount)的阀门来确定剂量单4立。或者，通过吸入或吹入施用时，化合物可以是干^^分组合物的形式，例如该化合物与合适粉末基质(诸如乳糖或淀粉)的粉末混合物。粉末组合物可以以单位剂量形式提供，例如胶嚢、药筒(cartridge),凝胶(gelatin)或泡罩包装(blisterpack),借助吸入器或吹入器施用粉剂。其它的制剂包括能释放治疗剂的可植入装置和粘性贴片。需要时，可以采用适于持续释放活性成分的上述制剂。药物组合物还可以含有其它活性成分，诸如抗;欽生物剂、免疫抑制剂和/或防腐剂。应当理解，在上述具体提及的成分外，本发明的制剂可含有本领域在所讨论制剂类型方面常规的其它药剂。例如，适于口服施用的制剂可含有芳香剂。优选的单位剂量制剂如下所述含有有效剂量或其适当部分的活性成分。对于前述的各种情况，可以以约0.1到约250mg/kg每天的剂量范围口服或通过注射施用所述组合物，例如多肽和有机化合物。成人的剂量范围通常为约5mg到约17.5g/天、优选为约5mg到约10g/天、最优选为约100mg到约3g/天。为方便起见，片剂或其它在离散单元中提供的单位剂量形式可含有在此种剂量时有效或在多个此种剂量时有效的量，例如含有约5mg到约500mg、通常为约1OOmg到约5OOmg。所采用的剂量将取决于多种因素，包括受试者的年龄和性别、所治疗的确切病症及其严重程度。同样，施用途径可随着疾患及其严重程度而变化。无论任何，本领域技术人员在考虑上述因素后可常规计算适宜的和最佳的剂量。以下实施例描述了本发明的各方面，它们并非意图限制权利要求中所述本发明范围。以下实施例例示了PDAC细胞中差异表达基因的鉴定和表征。实施例材料和方法细胞系PDAC细胞系KLM隱1、SUIT画2、KP-1N、PK-1、PK-45P和PK-59得自生物医学研究细胞资源中心(CellResourceCenterforBiomedicalResearch,TohokuUniversity,Sendai,Japan),Cos7购自美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC,Rockville，MD)。MIAPaCa-2和Pane-l购自美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC,Rockville,MD)。将所有细胞系在补充有10。/。胎牛血清(CanseraInternational,Ontario,Canada)和1%抗生素/4元真菌〉容液(Sigma-Aldrich)的RPMI1640(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)中进行培养。在含5%002的潮湿空气中于37。C维持细胞。半定量RT-PCR自胰腺癌组织纯化PDAC细胞和正常导管上皮细胞的规程如前所述(NakamuraTetal.，Oncogene23:2385-400(2004》。通过基于T7的体外转录(EpicentreTechnologies,Madison,WI)，将来自纯化的PDAC细胞和正常胰管上皮细胞的RNA进行两轮RNA扩增，并合成出单链cDNA。使用Trizol试剂(Invitrogen，Carlsbad,CA)依照制造商推荐的规程自人胰腺癌细胞系提取总RNA。用DNA酶I(RocheDiagnostic,Mannheim,Germany)处理所提取的RNA,并用寡聚d(T)引物及SuperscriptII逆转录酶(Invitrogen)逆转录成单链cDNA。本发明人配制了适宜稀释度的每份单链cDNA,用于后续PCR扩增，通过检测oc-微管蛋白(TUBA)作为定量对照。所用引物序列如下5，-AAGGATTATGAGGAGGTTGGTGT-3，(SEQIDNO.l)和5，-CTTGGGTCTGTAACAAAGCATTC-3，(SEQIDNO.2)用于TUBA,5'画GGCAGCAACAGCATCTACTACTT-3，(SEQIDNO,3)和5'扁ACAGTTGTGCTTTAGGAGCTGAG-3,(SEQIDNO,4)用于CST6,5'-CTCTCCAAATCCAGCCAGAG-3,(SEQIDNO,5)和5'画ATGATTGGCTCATACAACCACA-3，(SEQIDNO.6)用于GABRP,及5,-TGCATTTGTGAGCCAAAGAG-3，(SEQIDNO,7)和5'陽CCTTAGGTTTCAGCTAAGCGAG-3，(SEQIDN0.8)用于GAD1。所有反应包括94。C初始变性2分钟，接着是23个循环(用于TUBA)、28个循环(用于CST6和GABRP)或30个循环(用于GAD1)的94。C30秒、58°C30秒及72。C1分钟，在GeneAmpPCR系统9700(PEAppliedBiosystems,Foster,CA)上进行。Northern印迹分析将来自7种PDAC细胞系(KLM-1、PK-59、PK-45P、MIAPaCa-2、Panc-l、PK-l和SUIT-2)和数种成人正常组织(BDBioscience,PaloAlto，CA)的lpgpolyA+RNA印到膜上。将此癌细胞系膜和人多种组织Northern印迹(BDBioscience)与"P标记的GABRP杂交16小时，其中"P标记的GABRP是使用Mega标记试剂盒(Amersham，Piscataway,NJ)标记的。CST6的4罙针cDNA4吏用以下引物制备成255bp的PCR产物5'-GGCAGCAACAGCATCTACTACTT陽3，(SEQIDN0.9)和5，陽ACAGTTGTGCTTTAGGAGCTGAG-3，(SEQIDNO.IO)，而GABRP的探针cDNA使用以下引物制备成958bp的PCR产物5'-AAGGACTCTGAGGCTTTATTCCC-3，(SEQIDNO.11)和5，-ATGATTGGCTCATACAACCACA_3，(SEQIDN0.12)。预杂交、杂交、和洗涤依照制造商的说明书进行。将印迹于-80。C放射自显影10天。CST6蛋白特异性抗体的生成使用包含BamHI和EcoRI限制性位点(分别用第一条和第二条下划线标示)的引物5，-CGCGGATCCGCCGCAGGAGCGCATGGTCGG-3，(SEQIDNO,13)和5，-CCGGAATTCTCACATCTGCACACAGTTGTG-3，(SEQIDNO,14)通过PCR扩增编码缺少其信号肽的人CST6蛋白的cDNA片段。将产物克隆入pET28b载体(Novagen,Madison,WI)以生成携带N末端6-His标签的融合蛋白，依照供应商的方案在天然条件下用TALONSuperflow金属亲和树脂(BDBiosciences,FranklinLakes,NJ)进行纯化。将此重组CST6-6His用于免疫家兔，并使用偶联有六组氨酸与CST6蛋白的融合物的Affi-geI10(Bio-RadLaboratories,Hercules,CA)亲和纯化所得多克隆抗体。免疫组织化学染色自知情同意下切除的手术标本制备PDAC的常规组织切片。将切片脱石蜡，并在pH6.0的柠檬酸盐緩冲液中于108。C高压灭菌15分钟。通过在过氧化物酶封闭试剂(DakoCytomation,Carpinteria，CA)中温育30分钟来淬灭内源过氧化物酶活性。与胎牛血清一起温育以进行封闭后，将切片与兔抗CST6多克隆抗体(l:5000稀释)一起于室温温育l小时。用PBS洗涤后，用过氧化物酶标记的抗兔免疫J求蛋白(Envisionkit,DakoCytomation)进4亍免疫4佥测。最后，用3，3，-二氨基联苯胺(DakoCytomation)显现反应物。用苏木精进行复染。对CST6或GABRP特异的小干扰RNA(siRNA)表达构建物为了下调PDAC细胞中的内源CST6和GABRP表达，使用psiU6BX3.0载体来表达针对靶基因的短发夹RNA,如前所述(TaniuchiKetal.,CancerRes65:105-12(2005))。将U6启动子克隆到基因特异序列(来自靶转录物的19个以五个胸苷作为终止信号并将neo盒用于使用遗传霉素(Invitrogen)进行的选择。靶序列为5，-GTGGTTCCCTGGCAGAACT-3，(SEQIDN0.15)用于CST6-#448,5，-GATGGGCAGGATTGTTGAT匿3，(SEQIDNO.19)用于GABRP陽si6，5，-TATCATCAACAGCTCCATC-3，(SEQIDNO.23)用于GABRP-si7,5，-CCCCAGTAATGTTGATCAC-3，(SEQIDNO.27)用于GABRP-si8，5'-AGGAAGTAGAAGAAGTCAG陽3，(SEQIDN0.31)用于GABRP-silO,而5，-GAAGCAGCACGACTTCTTC-3，(SEQIDNO,35)用于EGFP作为阴性对照。实验中所使用的siRNA序列显示如下<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>si7插入序列24cacctatcatcaacagctccatcttcaagagagatggagctgttgatgata位置25aaaatatcatcaacagctccatctctcttgaagatggagctgttgatgata1215-1233发夹siRNA26tatcatcaacagctccatcttcaagagagatggagctgttgatgataGABRP靶27ccccagtaatgttgatcacsi8插入序列28caccccccagtaatgttgatcac加aagagagtgatcaacattactgggg位置29aaaaccccagtaatgttgatcactctcttgaagtgatcaacattactgggg386-1404发夹siRNA30ccccagtaatgttgatcacttcaagagagtgatcaacattactggggGABRP靶31aggsagtagaagaagtcagsi10插入序列32caccaggaagtagaagaagtcagttcaagagactgacttcttctacttcct位置33aaaaaggaagtagaagaagtcagtctcttgaactgacttcttctacttcct1187-1205发夹siRNA34aggaagtagaagaagtcagttoaagagactgacttcttctacttcctEGFP靶35gaagcagcacgacttcttc对照插入序列36caccgaagcagcacgacttcttcttcaagagagaagaagtcgtgctgcttc37aaaagaagcagcacgacttcttctctcttgaagaagaagtcgtgctgcttc发夹siRNA38gaagcagcacgacttcttcttcaagagagaagaagtcgtgctgcttc将人PDAC细胞系(PK-l、PK-59、PK-45P和KLM-1细胞)涂布到10cm培养皿上，使用FuGene6(Roche)依照供应商的说明书用CST6和GABRP的si認A及EGFPsiRNA表达载体进行转染。用0.15mg/ml(PK-59)、0.2mg/ml(PK-1)或500吗/ml(PK-45P,KLM-1)遗传霉素对细胞选择9天。初步的，自10cm培养皿收获细胞，使用上述引物通过RT-PCR进行分析，其中培养3天的细胞用于分析对CST6的敲减效应，培养7天的细胞用于分析对GABRP的敲减效应。在含有遗传霉素的适宜培养基中培养14天后，将细胞用100%曱醇固定，用0.1%结晶紫-1120染色，供集落形成测定法之用。在MTT测定法中，在转染后14天使用细胞计数试剂盒-8(DOJINDO,Kumamoto，Japan)测量细胞生存力。4吏用樣i量板读数仪550(Bio-Rad)测量490nm的吸光度，以630nm为参比。CST6过表达细胞的生成和生长测定法使用以下包含限制酶位点的引物对通过PCR扩增编码CST6可读框的cDNA:5，-GGGGTACCGAATGGCGCGTTCGAACCTCC-3，(SEQIDN0.39)和5，-CCGGAATTCCATCTGCACACAGTTGTGCT-3,(SEQIDNO.40)(以下和EcoRI位点)。将PCR扩增产物克隆入pcDNA3.1/myc-HisA(+)载体(Invitrogen)。使用FuGENE6(Roche)依照制造商推荐的规程将质粒转染入无CST6的PDAC细胞系KLM-1。用0.5mg/ml遗传霉素(Invitrogen)选择出一群细胞，并通过有限稀释对克隆KLM-1细胞进行亚克隆。使用抗myc抗体(SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA)和抗卩-月几动蛋白抗体(Sigma)通过Western印迹评估这些克隆细胞中带myc标签的CST6的表达，并建立了三个组成性表达CST6的克隆(KLM1-CST6)。还建立了经pcDNA3.1/myc-HisA(+)载体转染的对照KLM-1细胞(KLMl-Mock)。使用细胞计^:试剂盒-8(DOJINDO)测量这些已建立克隆的生长曲线。CST6自分泌/旁分泌测定法成熟重组人CST6购自R&Dsystem(Minneapolis,MN)，它是在哺乳动物细胞中生产的。将成熟重组CST6以数个浓度(0、0.02、0.2和2ng/ml)添加至COS7细胞的培养基并补充2。/。FBS。使用细胞计数试剂盒-8(DOJINDO)测量存在各种浓度CST6时细胞的生长曲线。GABA刺激对PDAC细胞增殖的影响和GABA受体拮抗剂的调控将GABRP阳性细胞系KLM-1和PK-45P及GABRP阴性细胞系PK-59和KP-1N与一系列浓度(0、1、10、lOOjaM)的GABA(Sigma)—起温育6天。此外，为了抑制GABA介导的途径，还将它们与250^iMGABAa受体拮抗剤BMI(BicuculUnemethiodide(曱碘荷包牡丹碱)，Sigma)或lmMGABAb受体拮抗剂CGP-35348(Sigma)—起温育。暴露于这些药物6天后使用细胞计数试剂盒-8(DOJINDO)测量细胞生存力，并使用微量板读数仪550(Bio-Rad)测量490nm的吸光度，以630nm为参比。结果PDAC细胞中CST6的过表达在通过基因组范围cDNA微阵列分析中鉴定为在PDAC细胞中上调的数十种基因中(NakamuraTetal.,Oncogene23:2385-400(2004))，本发明人的这项研究聚焦于CST6。显示CST6过表达的微阵列数据通过RT-PCR得到了9份显微解剖的PDAC细胞群中8份的证实(图1A)。使用CST6cDNA片段作为探针进行的Northern印迹分析鉴定出在胎盘和曱状腺中表达的大约0.6kb的转录物；在任何其它重要器官中没有观察到表达，包括肺、心、肝和肾(图1B)。使用所生成的对CST6特异的多克隆抗体进行的组织切片免疫组织化学分析揭示了所检查的IO份PDAC案例中6份有CST6的强烈信号，而胰腺中的正常导管和腺泡细胞显示出非常微弱的CST6染色(图1C)。CST6-siRNA对PDAC细胞生长的影响本发明人构建了数种对CST6mRNA序列特异的siRNA表达载体，并将它们转染入内源表达高水平CST6的PDAC细胞系PK-1和PK-59。在使用#448时(图2A)，通过RT-PCR证实了敲减效应。使用PK-59进行的集落形成测定(图2B)和MTT测定(图2C)揭示了经#448转染的细胞数与没有明显敲减效应的阴性对照EGFP相比的显著减少。使用PK-1细胞系得到了相似的效果(图2A、B和C)。另一方面，有效的siRNA不影响不表达CST6的其它PDAC细胞系KLM-1的细胞生存力(数据未显示)。CST6的过表达促进PDCA细胞的生长为了调查CST6过表达在PDAC细胞中的生物学功能，本发明人使用通过RT-PCR几乎检测不到CST6表达的KLM-1细胞建立稳定且组成性表达野生型CST6的细胞系。如图3A所示，通过使用抗myc抗体进4亍的Western印迹分析证实了三个KLM-1克隆(CST6-1、-2和-3)的高水平表达，但在三个KLMl-Mock克隆(Mock-l、-2和-3)中检测不到表达。本发明人还证实了CST6蛋白在来自这些KLM1-CST6克隆每一个的培养液中含量丰富(数据未显示)。MTT测定法证明了在体外这三个KLMl-CST6克隆比KLMl-Mock克隆生长更快速(图3B)，说明在PDAC细胞中过表达的CST6促进细胞增殖且可以致癌方式发挥作用。所分泌的CST6促进细胞生长CST6是分泌型蛋白质，且有可能主要在细胞外发挥功能。为了检验所分泌的CST6对细胞生长的效应，在存在数种浓度(0.02-2ng/ml)的成熟人重组CST6时进行了细胞生长测定法。此重组CST6蛋白是在哺乳动物细胞中生成的，且证实是N-糖基化的。图4显示了培养基中CST6蛋白的存在以剂量依赖性方式明显刺激细胞增殖，这也暗示了所分泌的CST6可能在细胞外且以自分泌/旁分泌方式发挥作用以促进细胞增殖。PDAC细胞中GABRP和GAD1的过表达在通过基因组范围cDNA微阵列分析中筌定为在PDAC细胞中上调的数十种基因中(NakamuraTetal.,Oncogene23:2385-400(2004))，本发明人的这项研究聚焦于CST6。显示GABRP过表达的微阵列数据得到了9份显微解剖的PDAC细胞群中5份的RT-PCR的证实(图5A)。使用GABRPcDNA片段作为探针进行的Northem印迹分析鉴定出在气管、前列腺和胃中表达的大约3.3kb的转录物；在任何其它重要器官中没有观察到表达，包括肺、心、肝和肾(图5B)。本发明人还分析了数种PDAC细胞系的GABRP表达，而图5B显示了GABRP在KLM-1、PK-45P和PK-1中明显表达，但在重要器官中不表达，包括心、肺、肝、肾和脑。此外，为了调查胰腺癌组织中的局部GABA生成，还用RT-PCR分析了主要在神经元中催化GABA生成的谷氨酸脱羧酶1(GAD1)在PDAC细胞、正常胰管细胞和正常胰腺的表达。图5C显示了GAD1表达在PDAC细胞中像GABRP—样上调，表明PDAC细胞自身生成GABA。GABRP-siRNA对PDAC细胞生长的影响本发明人构建了数种对GABRPmRNA序列特异的siRNA表达载体，并将它们转染入内源表达高水平GABRP的PDAC细胞系KLM-1和PK-45P。在转染si6、si7、si8和silO时通过RT-PCR证实了敲减效应，但阴性对照s正GFP则不然(图6A)。使用KLM-1进行的集落形成测定(图6B)和MTT测定(图6C)揭示了经si6、si7、si8和silO转染的细胞数与没有敲减效应的阴性对照siEGFP相比明显减少。在PK-45P细胞系中观察到相似的效果(图6A、6B和6C,右图)。GABA刺激对PDAC细胞增殖的影响和GABA受体拮抗剂的调控为了调查GABA和GABRP表达对PDAC细胞的功能，将GABRP阳性或阴性PDAC细胞系与数种浓度的GABA—起温育。如图7A所示，培养基中的GABA以剂量依赖性方式促进GABRP阳性PDAC细胞系KLM-1和PK-45P的增殖(上图)，对细胞增殖最多有大约50%的促进效应，但对GABRP阴性PDAC细胞系PK-59和KP-1N则不然(下图)。接着，分析了已知的GABA拮抗剂对GABA激发的GABRP阳性细胞系生长的影响。GABAA受体拮抗剂BMI抑制细胞生长的GABA激发，但GABAb受体拮抗剂不影响GABA激发的细胞增殖(图7B,上图)。另一方面，GABRP阴性细胞系不响应GABA或GABA受体拮抗剂(图7B，下图)。在拮抗外源GABA外，羊独用GABAa受体拮抗剂BMI进行的处理在KLM-l和PK-59细胞中抑制细胞生长(图7B,上图)，它们表达GAD1且预计自身生成内源GABA(数据未显示)，而且认为KLM-1和PK-59细胞中GABA-GABAA受体的这些内源自分泌/旁分泌效应受到BMI在通过先前的基因组范围基因表达分析中鉴定为在PDAC细胞中上调的数十种基因中(NakamuraTetal.，Oncogene23:2385-400(2004))，本发明人聚焦于CST6基因。免疫组织化学分析显示了CST6在PDAC的有些群中过表达(60%)，而RNA和蛋白质水平的表达分析显示了CST6在成人正常重要器官(肺、心、肝和肾)中表达水平很低。这些发现对于选择最小副作用的新治疗方法的分子靶是至关重要的，而CST6有可能因其表达样式而成为PDAC治疗的理想分子輩巴。本发明人还证明了分泌的CST6或过表达的CST6在体外促进细胞增殖，究证明了CST6在乳腺癌中下调且可抑制乳腺癌的转移或侵入表型以及其生长(ShridharRetal.,Oncogene23:2206-15(2004);ZhangJetal.,CancerRes64:6957-64(2004)),这与本发明的发现不一致。然而，另一项研究揭示了CST6在头颈癌中上调，为癌细胞提供了抗凋亡特性并促进转移(VigneswaranNetal.，OralOncology39:559-68(2003)),而且大鼠CST6的上调据说还涉及神经细胞分化和发育(HongJetal.,JNeurochem81:922-34(2002))。在功能上，CST6是半胱氨酸蛋白酶的抑制剂，事实上，它有抑制组织蛋白酶B(NiJetal.，JBiolChem272:10853-8(1997);HongJetal.,JNeurochem81:922-34(2002))、与TNF所诱导的凋亡有关的溶酶体蛋白酶(GuicciardiMEetal.,JClinInvest106:1127-37(2000);FoghsgaardLetal.,JCellBiol153:999-1010(2001))的潜力，这意味着CST6具有潜在的抗凋亡能力。然而，与组织蛋白酶B有关的这种凋亡途径存在于细胞内，而且CST6对细胞生长的4足进效应有可能涉及受体-配体相互作用，因为所分泌的CST6促进细胞生长，如图4所示，而且这将需要鉴定CST6在癌细胞中功能的受体。表征最多的半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族成员半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CST3)刺激细月包生长(TaveraCetal,,BiochemBiophysResCommun182:1082-8(1992))，且可发挥TGF-(3受体拮抗剂的作用(SokolJPetal.,MolCancerRes2:183-95(2004)),涉及细胞组织和癌侵入的TGF-J3途径。作为FGF-2的自分泌/旁分泌辅因子，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C刺激神经干细胞的增殖(TaupinPetal.，Neuron28:385-97(2000)),且其蛋白酶抑制剂活性对其对神经干细胞的生长效应不是至关重要的。这表明半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族在蛋白酶抑制剂以外的其它功能可能涉及细胞生长促进。/旁分泌方式促进癌细胞增殖。用小分子抑制CST6对癌细胞生存力的功能或者用抗体中和所分泌的CST6可以为致命PDAC的分子疗法^是供理想的新方法。在通过基因组范围基因表达分析中鉴定为在PDAC中上调的数十种基因中(NakamuraTetal.,Oncogene23:2385-400(2004))，本发明人聚焦于GABA受体兀(GABRP)。通过对显微解剖细胞进行的RT-PCR在大约半数PDAC细胞中证实了GABA受体u(GABRP)表达，而Northern印迹分析显示了GABRP的表达局限于成人正常器官，暗示GABRP可能因其表达样式而成为最小副作用的PDAC治疗的理想分子靶。在成熟脑中，GABA和GABA受体主要作为抑制性神经递质发挥功能，而且它还可在神经系统发育过程中发挥营养因子的作用以影响神经干细胞等的增殖、迁移和分化(MacdonaldRLandOlsenRW，AnnuRevNeurosci17:569-602(1994);FiszmanML,BrainResDevBrainRes115:1-8(1999))。然而，显然GABA和GABA受体在非神经组织中表达，而且目前不知道它们在非神经细胞中的确切功能(MacdonaldRLandOlsenRW.，AnnuRevNeurosci17:569-602(1994))。文献中(AzumaH,CancerRes63:80卯-6(2003))报导了GABA和GABAB受体途径可能通过调控MMP生成而涉及前列腺癌转移或侵入。另一方面，其它报导显示了GABA可抑制与去曱肾上腺素(nor-epinepherin)诱导的途径有关的结肠癌迁移(JosephJetal.,CancerRes62:6467-9(2002))。如此，GABA途径对癌细胞行为是发挥积极作用还是消极作用尚有争议，但有发现清楚显示了掺入有兀亚基的GABA和GABAA受体复合物应促进PDAC细胞增殖。此外，生成GABA的酶GAD1在PDAC细胞中也上调，正如我们在此所显示的，而且GABA的局部浓度预计在PDAC组织中处于高水平。GABA还有可能在胰腺癌增殖中以自分泌/旁分泌方式发挥促进癌细胞生长的功能。将这些发现综合在一起，用小分子或特弄性抗体阻断整合入GABAa的GABRP或GABA对PDAC细胞生存力的功能可以为致命PDAC的分子疗法提供理想的新方法。在本发明中，我们证明了经典的GABAA受体拮抗剂诸如BMI在体外抑制癌细胞生长。由于BMI阻断GABAAf3亚基，其抑制活性可影响所有种类的常见GABAA受体(cx(3Y复合物)，对癌细胞没有特异性。我们需要开发对GABA受体7i亚基(GABRP)特异的拮抗性药物或抗体，使得靶向PDAC的GABA途径的分子疗法不会危及正常器官，尤其是中枢神经系统。工业应用通过基因组范围cDNA微阵列得到的本文所述胰腺癌基因表达分析鉴定出了可作为癌症预防和治疗的靶的特定基因。根据这些差异表达基因子集的表达，本发明提供了用于鉴定和检测胰腺癌的分子诊断标志物。本文所述方法还可用于鉴定预防、诊断和治疗胰腺癌的别的分子靶。本文所报告的数据增加了对胰腺癌的全面了解，促进了新治疗策略的开发，并提供了鉴定治疗性药物和预防性药剂的分子靶的线索。这些信息有助于更深刻的了解胰腺肿瘤发生，并提供了开发用于诊断、肿瘤和最终预防胰腺癌的新策略的指标。完整收入本文中所引用的所有专利、专利申请和出版物作为参考。此外，尽管本发明已经进行了详细描述并参考其具体实施方案，应当了解，上文描述本质上是例示性和解释性的，意图例示本发明及其优选实施方案。通过常规实验，本领域技术人员将认识到可以在不背离本发明的精神和范围的前提下对本发明进行多种改变和修饰。如此，本发明意图以所附权利要求及其等同方案来进行限定，而非上文描述。权利要求1.诊断受试者中的胰腺癌或发生胰腺癌的倾向性的方法，包括测定得自患者的生物学样品中的CST6或GABRP表达水平，其中所述基因在所述样品中的表达水平与正常对照水平相比的升高表明所述受试者患有胰腺癌或有风险发生胰腺癌。2.权利要求l的方法，其中所述样品中的表达水平比所述正常对照水平高至少10%。3.权利要求l的方法，其中基因表达水平是通过选自下组的方法测定的(a)4全测CST6或GABRP的mRNA;(b)4全测由CST6或GABRP编码的蛋白质；和(c)检测CST6或GABRP的生物学活性。4.权利要求l的方法，其中所述得自患者的生物学样品包括上皮细胞。5.权利要求l的方法，其中所述得自患者的生物学样品包括胰腺癌细胞。6.权利要求l的方法，其中所述得自患者的生物学样品包括来自胰腺癌细胞的上皮细胞。7.筛选用于治疗或预防胰腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)将测试化合物与由CST6或GABRP的多核苷酸编码的多肽接触；(b)检测所述多肽与测试化合物之间的结合活性；并(c)选4奪与所述多肽结合的测试化合物。8.筛选用于治疗或预防胰腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)将候选化合物与表达CST6或GABRP的细胞接触；并(b)选择与不存在测试化合物时检测到的CST6或GABRP表达水平相比降低所述肽表达水平的候选化合物。9.权利要求8的方法，其中所述细胞包括胰腺癌细胞。10.筛选用于治疗或预防胰腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)使测试化合物与由CST6或GABRP的多核苷酸编码的多肽接触；(b)纟佥测步骤(a)的多肽的生物学活性；并(c)选择与不存在测试化合物时检测到的由CST6或GABRP的多核苦酸编码的多肽的生物学活性相比抑制所述多肽的生物学活性的测试化合物。11.筛选用于治疗或预防胰腺癌的化合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)将候选化合物与细胞接触，所述细胞中导入了载体，所述载体包含CST6或GABRP的转录调控区及在该转录调控区控制下表达的报导基因；(b)测量所述报导基因的表达或活性；并(c)选择与对照相比降低所述报导基因的表达或活性水平的候选化合物。12.试剂盒，其包含能与(a)CST6或GABRP,或(b)由CST6或GABRP编码的多肽结合的检测剂。13.治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，包括对所述受试者施用反义列。14.治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，包括对所述受试者施用siRNA组合物，其中所述siRNA组合物能降低CST6或GABRP的表达。15.权利要求14的方法，其中所述siRNA包含有义链，该有义链包含SEQIDNO:15、19、23、27或31的核香酸序列。16.权利要求15的方法，其中所述siRNA具有通式5，-[A]-[B]-[A，]-3，，其中[A]是对应于序列SEQIDNO:15、19、23、27或31的核糖核苷酸序列，[B]是由3-23个核苷酸组成的核糖核芬酸环序列，且[A，]是由[A]的互补序列组成的核糖核苦酸序列。17.治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，包括对所迷受试者施用药用有效量的能与CST6或GABRP的蛋白质结合的抗体或其免疫活性片段。18.治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，包括对所述受试者施用疫苗，该疫苗包含(a)由CST6或GABRP的核酸编码的多肽，(b)所述多肽的免疫活性片段，或(c)编码所述多肽的多核苷酸。19.诱导抗肿瘤免疫力的方法，所述方法包括使抗原呈递细胞接触多肽、编码该多肽的多核苷酸、或包含该多核苷酸的载体的步骤，其中所述多肽是由CST6或GABRP编码的多肽。20.权利要求19的诱导抗肿瘤免疫力的方法，所述方法进一步包括对受试者施用所述抗原呈递细胞的步骤。21.治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，所述方法包括施用通过权利要求7-1l任一项的方法得到的化合物的步骤。22.用于治疗或预防胰腺癌的组合物，所述组合物包含药用有效量的针对CST6或GABRP多核苦酸的反义多核苷酸或siRNA。23.权利要求22的组合物，其中所述siRNA包含有义链，该有义链包含SEQIDNO:15、19、23、27或31的核香酸序列。24.权利要求23的组合物，其中所述siRNA具有通式5，-[A]-[B]-[A，]-3，，其中[A]是对应于序列SEQIDNO:15、19、23、27或31的核糖核苷酸序列，[B]是由3-23个核苷酸组成的核糖核香酸环序列，且[A，]是由[A]的互补序列组成的核糖核香酸序列。25.用于治疗或预防胰腺癌的组合物，所述组合物包含药用有效量的抗体或其片段，所述抗体或其片段能与由CST6或GABRP编码的蛋白质结合。26.用于治疗或预防胰腺癌的组合物，所述组合物包含药用有效量的通过权利要求7-ll任一项的方法选择出的化合物作为活性成分并包含药学可接受的载体。27.筛选用于治疗或预防胰腺癌的方法，所述方法包括以下步骤(a)在存在测试化合物时使GABA或其类似物接触GABRP,并检测GABRP与GABA或其类似物结合的活性；(b)选择与不存在测试化合物时检测到的结果相比降低步骤(a)中检测到的结合活性的化合物。28.治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，所述方法包括施用通过权利要求27的方法得到的化合物的步骤。29.治疗或预防受试者中的胰腺癌的方法，所述方法包括施用药用有效量的GABAa受体(GABRA)拮抗刑的步骤。30.权利要求29的方法，其中所述GABAa受体(GABRA)拮抗刑是Bicuculline或其在药学上可接受的季4妄盐。31.用于治疗或预防胰腺癌的组合物，所述组合物包含药用有效量的GABAA受体(GABRA)拮抗剂作为活性成分并包含药学可接受的载体。32.权利要求31的组合物，其中所述GABAA受体(GABRA)拮抗剂是Bicuculline或其在药学上可接受的季铵盐。全文摘要本文描述了检测和诊断胰腺癌(PDAC)的客观方法。在一个实施方案中，诊断方法涉及测定CST6或GABRP的表达水平，该表达水平得以将PDAC细胞与正常细胞区别开。最后，本发明提供了筛选可用于治疗胰腺癌的治疗剂的方法、治疗胰腺癌的方法、和给受试者针对胰腺癌进行疫苗接种的方法。文档编号C12Q1/68GK101273131SQ200680035760公开日2008年9月24日申请日期2006年7月14日优先权日2005年7月27日发明者中川英刀,中村佑辅,中鹤修一申请人:肿瘤疗法科学股份有限公司