杨树类clv3基因编码的活性肽及抑制植物开花的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学和生物技术领域，涉及一种杨树类CLV3基因基因编码的 活性肽的用途。
【背景技术】
[0002] 被子植物又名开花植物，是现时地球上演化最先进及优势的植物种类，也是植物 界最多样化的种类。开花植物的独有特征为花，而开花则是开花植物生长发育的必经阶段。 全世界的农业几乎全然仰赖着被子植物，其中禾本科提供了大量的食用原料（米、玉米、小 麦、大麦、裸麦、燕麦、御谷、甘鹿、高粱）。另外亦重要的还有豆科、茄科（马铃薯、番前、辣 椒等）、萌芦科（南瓜、甜瓜等）、十字花科（芥末、油菜籽、高丽菜等）等。开花植物亦在木 材、纸张、纤维（棉花、亚麻和麻等）、药物（毛地黄、樟脑）、观赏植物和其他许多方面有着 众多的用途。
[0003] 开花植物在其开花前处于营养生长阶段，这一时期内的生长态势和周期长短对植 物后期的开花结实（生殖生长）有着至关重要的影响。抑制植物的开花可以显著增加植物 的营养生长时间，延长植物的营养生长时期，始终是植物界一大热门研宄方向，也是农作物 育种学家的努力方向之一。目前，尚未有用杨树类CLV3基因编码的活性肽抑制植物开花的 用途的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种能延长植物的营养生长时期的杨树类CLV3基因编码的 活性肽抑制植物开花的用途。
[0005] 本发明的技术方案概述如下：
[0006] 杨树类CLV3基因编码的活性肽，用SEQ ID NO. 2所示。
[0007] 上述杨树类CLV3基因编码的活性肽抑制植物开花的用途。
[0008] 上述的用途，包括如下步骤，将植物种子播种于含有杨树类CLV3基因编码的活性 肽的培养基中，培养。
[0009] 所述含有杨树类CLV3基因编码的活性肽的培养基是在1/2MS培养基中加杨树类 CLV3基因编码的活性肽使终浓度最好是10 μ M，也可以在这个周围，如9-11 μ M。
[0010] 上述培养的条件优选为：18-25°c，130-150 μΕ/mVs光照强度，光周期16h光/8h 暗。
[0011] 本发明的优点：
[0012] 在培养基中添加杨树类CLV3基因编码的活性肽，无任何农药、化肥的添加，可以 显著抑制植物开花，可以显著增加植物的营养生长时间。
【附图说明】
[0013] 图1为拟南芥（Columbia-0型）在本发明的培养基与对照培养基生长图例。其中 A为对照1组（1/2MS培养基）B为实验1组（含杨树类CLV3基因编码的活性肽的1/2MS培 养基）生长30天图例。
[0014] 图2为拟南芥（Columbia-0型）在图1所示的培养基中培养30天移栽入土 15天 图例。
[0015] 图3为拟南芥（Columbia-0型）在图1所示的培养基中培养30天移栽入土 30天 图例。
[0016] 图4为番茄在本发明的培养基与对照培养基培养20天移栽入土后10天图例。其 中A为对照2组（1/2MS培养基）B为实验2组（含杨树类CLV3基因编码的活性肽的1/2MS 培养基）。
[0017] 图5为番茄在本发明的培养基与对照培养基培养20天移栽入土后25天图例。其 中A为对照组（1/2MS培养基）B为实验2组（含杨树类CLV3基因编码的活性肽的1/2MS 培养基）。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。实施例中未注明具体条件的实验 方法，按照常规条件以及手册中所述的条件，或按照生产厂商所建议的条件。
[0019] 实施例1
[0020] 杨树类CLV3基因编码的活性肽的获得
[0021] 1.确定杨树中多个CLE基因的全长序列及蛋白序列。
[0022] 2.确定杨树各CLE蛋白中由氨基酸组成的12肽保守结构域。
[0023] 3.通过构建拟南芥和杨树的CLE十二肽进化树，找出杨树中与拟南芥CLV3基因所 对应的类CLV3多肽。
[0024] 4.合成符合以上序列的十二肽命名为杨树类CLV3基因编码的活性肽，用SEQ ID NO·2所示，杨树类CLV3基因基因序列：毛果杨（PopulustrichocarpaTorr·&Gray)用SEQ ID NO. 1 所示。
[0025] 5.将合成的杨树类CLV3基因编码的活性肽以不同浓度加入1/2MS培养基，在恒温 恒湿的组织培养条件下培养，观察植物生长表型。
[0026] 实施例2
[0027] 含有杨树类CLV3基因编码的活性肽的培养基的配制
[0028] (1)1/2MS 培养基（IL)的配制：取 MS 盐 2. 2g，蔗糖 15g，琼脂 7. lg，MES(2-N-吗啡 啉乙磺酸）0. 5g，加水至1L，pH = 5. 7,灭菌，降温至45°C ;
[0029] (2)将杨树类CLV3基因编码的活性肽粉末溶解于适量无菌水中，经过0. 22微米的 滤膜进行过滤，并用无菌水定容，作为母液，将母液加入步骤（1)获得的液体中，使所述活 性肽的终浓度为10 μΜ。也可以选9 μΜ或11 μΜ，或9-11 μΜ中的任意数值。
[0030] 实施例3
[0031] 杨树类CLV3基因编码的活性肽对拟南芥开花的影响（观察其株高、叶形、开花时 间等表型）
[0032] 将消毒并经过3天4°C春化处理的拟南芥（Columbia-Ο型）种子点于1/2MS培 养基（对照1组）和含有杨树类CLV3基因编码的活性肽的培养基（实验1组）上，在 18-25°C，130-150 μΕ/mVs光照强度，光周期16h光/8h暗的条件下培养。
[0033] 对照1组和实验1组的种子均在播种3天左右发芽，并能够正常生长，播种20天， 对照1组拟南芥全部抽薹，而实验1组拟南芥均未抽薹。播种25天，对照1组拟南芥全部 长出花苞，实验1组拟南芥均未抽薹。播种30天（见图1)，对照1组拟南芥全部开花，实验 1组拟南芥仍均未抽薹。
[0034] 将对照1组和实验1组植物均移栽至土壤中（18-20°C，130-150 μ E/m2/s光照强 度，光周期16h光/8h暗）进行观察，对照1组继续正常生长；实验1组在经过15天的恢复 期后，大多数仍未抽薹（图2);继续培养，对照1组在经过30天结果荚。实验1组在经过 30天抽薹开花（图3)。
[0035] 实施例4杨树类CLV3基因编码的活性肽对番茄开花的影响
[0036] 将消毒过的番茄种子在质量浓度为0. 3% (0. 2%~0. 3%都可以）的高锰酸钾水 溶液中浸种并保持水温50°C，约20分钟。将番茄种子点于1/2MS培养基（对照2组）和含 有杨树类CLV3基因编码的活性肽的培养基（实验2组）上，在23-25°C恒温，130-150 μ E/ m2/s光照强度，光周期16h光/8h暗的条件下培养。
[0037] 当番茄展开两片真叶（播种20天）后进行移苗，栽种到土里（23-25 °C恒 温，130-150 μ Ε/mVs光照强度，光周期16h光/8h暗），观察其开花情况。移栽10天，对 照2组番茄全部开花，实验2组番茄没有开花。如图4所示。经过25天实验2组番茄开花 (图 5)。
【主权项】
1. 杨树类CLV3基因编码的活性肽，其特征是用SEQ ID NO. 2所示。
2. 权利要求1的杨树类CLV3基因编码的活性肽抑制植物开花的用途。
3. 根据权利要求2所述的用途，其特征是包括如下步骤，将植物种子播种于含有杨树 类CLV3基因编码的活性肽的培养基中，培养。
4. 根据权利要求3所述的用途，其特征是所述含有杨树类CLV3基因编码的活性肽的培 养基是在1/2MS培养基中加杨树类CLV3基因编码的活性肽使终浓度为10 y M。
5. 根据权利要求3所述的用途，其特征是所述培养的条件为：18-25°C，130-150 y E/ m2/s光照强度，光周期16h光/8h暗。
【专利摘要】本发明公开了一种杨树类CLV3基因编码的活性肽及抑制植物开花的用途，杨树类CLV3基因编码的活性肽是用SEQ ID NO.2所示。杨树类CLV3基因编码的活性肽抑制植物开花的用途。在培养基中添加杨树类CLV3基因编码的活性肽，无任何农药、化肥的添加，可以显著抑制植物开花，可以显著增加植物的营养生长时间。
【IPC分类】A01H5-00, C07K14-415, A01G7-06
【公开号】CN104861052
【申请号】CN201510218257
【发明人】王洁华, 王彩丽, 杨少辉, 宋英今
【申请人】天津大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年4月30日