专利名称：丽格海棠组织培养快速繁殖方法
技术领域：
本发明属于生物工程技术领域，涉及植物组织培养技术，具体涉及一种丽 格海棠组织培养快速繁殖方法。
背景技术：
丽格海棠(Rieger begonias),又称玫瑰海棠，秋海棠科秋海棠属的多年生草 本花卉，是球根海棠和野生秋海棠的杂交品系，属于高档盆花。 一般无法形成 种子，大多都采用扦插繁殖，但丽格海棠对温度要求比较严格，怕热怕冷，多 数品种不宜强光照射，扦插养护很不容易，而且丽格海棠种质资源退化较为严 重，扦插繁殖的质量很不理想。组织培养繁殖植物的技术是一种特殊的营养繁 殖方式，现在一般称为快速繁殖技术或微繁殖技术。它是在无菌条件下，利用植 物体的一部分，包括细胞、组织和器官，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植 物的方法。该技术比较成熟，设备比较简单，技术要求不十分高，而经济效益可观， 越来越受到人们的重视。因此，采用工厂化生产方式繁育丽格海棠种苗既能防 止品种退化，保证种苗质量，又能提供大量优质廉价的种苗。现有技术一般取 丽格海棠幼嫩的叶片、茎段或茎尖作外植体，以MS为基本培养基，调节细胞分 裂素和生长素比例，在25至28摄氏度培养室中，14到16小时光照条件下，约 40至60天可诱导分化出小苗。但是现有技术的出苗诱导率不高；而且诱导时间 也较长，不能适应更加快速的市场需求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能更快繁殖出丽格海棠幼亩，且诱 导率更高的丽格海棠组织培养快速繁殖方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案 丽格海棠组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤-Sl)、外植体材料处理即选用外植体材料进行处理，制备出符合要求的外植体；
S2)、诱导即将步骤Sl中所述的外植体接种到培养基上，在诱导条件下 诱导出芽；所述诱导条件包括光照度小于1500k的弱光照条件。
进一步的，步骤S2中所述弱光照条件包括两个阶段，第一个阶段的光照度 为100 2001x，第二个阶段的光照度为1100 12001x。每天光照时间均为12小 时。 ，
所述第一个阶段的光照时间为10 14天。
所述第二个阶段的光照时间为18 28天。
进一步的，步骤S2中所述培养基的配方为MS+6-苄氨基喋呤0.4 0.6mg/l +
萘乙酸0.1 0.3mg/l+蔗糖25 30g +琼脂6~8g。
优选的技术方案中，所述步骤S1外植体材料处理包括清洗、消毒和裁剪；
所述清洗将用于制作外植体的外植体材料洗净；所述消毒对洗净的外植体材料
作消毒处理；所述裁剪将消毒后的外植体材料裁成合适大小的外植体。 所述外植体材料为丽格海棠的幼嫩叶片。 所述清洗包括自来水冲洗和含洗洁精的水浸洗。 所述消毒包括酒精消毒和加入吐温-20的次氯酸钠溶液浸洗消毒。 所述裁剪为将外植体材料去掉叶缘和叶柄之后切成0.5-1 cmx0.5 lcm大小
的叶片块。
采用本发明技术方案的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，与现有技术对比 的有益效果在于
由于进一步优化了丽格海棠组织培养快速繁殖过程中的光照条件，使得丽 格海棠的诱导时间更短；而且诱导率更高，诱导率可达100%。
由于弱光照条件进一步优化分解为两个阶段，且在两个阶段的光照度控制 更加准确，能够达到更好的诱导效果。
由于将第一个阶段的弱光照条件的光照时间确定为10 14天，过程控制更 加精准，效果更好。
由于将第二个阶段的弱光照条件的光照时间确定为1S 28天，过程控制更 加精准，效果更好。
由于采用MS+6-苄氨基喋呤0.4 0.6mg/l +萘乙酸0.l-0.3mg/l+蔗糖25 30g +琼脂6 8g作为培养基，诱导培养效果较好。
由于外植体材料处理包括清洗、消毒和裁剪，能够获得更加优质的外植体， 为组织培养快速繁殖方法奠定良好的基础。
由于优选丽格海棠的幼嫩叶片作为外植体材料，为组织培养快速繁殖提供 良好的材料保证。
由于清洗包括自来水冲洗和含洗洁精的水浸洗，可以使得清洁更加彻底。 由于消毒包括酒精消毒和加入吐温-20的次氯酸钠溶液浸洗消毒，消毒更加 彻底。
由于将外植体材料去掉叶缘和叶柄之后切成0.5 1 cmx0.5 lcm大小的叶片 块作为外植体，诱导培养更加方便，且效果更好。
具体实施例方式
下面结合具体实例对本发明的实施做进一步的说明
实例一
1、 外植体材料处理包括对外植体材料进行清洗、消毒和裁剪等处理，以 制备出合乎要求的外植体。具体为取红色花的丽格海棠的幼嫩叶片，用自来 水中冲洗20 30min，再用加洗洁精的水浸洗20 30min。清洗干净之后在超净 工作台上进行消毒处理，先用70%酒精浸20s,再用加入吐温-20的10%(V/V) 的次氯酸钠(有效氯27.5%)溶液中浸洗10min，叶片消毒完成之后放入无菌瓶中 备用。需要时将叶片从无菌瓶中取出，在超净工作台上去掉叶片的叶缘和叶柄 之后，然后切成0.5~1 cmx0.5 lcm大小的叶片块即成外植体。
2、 诱导出芽将作为外植体的叶片块背面朝下接种在配方为MS+6-苄氨基 喋呤0.4mg/l+萘乙酸O.lmg/1+蔗糖30g+琼脂6g的培养基上。先放在100 2001x 光照下培养14天，再移到1100 12001x光照下培养18天。每天光照12小时， 培养温度为22-24摄氏度，以下与此相同。经过统计发现诱导率高达100%，而 诱导时间仅为32天。 -
注诱导率(％)=出现丛生芽的外植体数/总外植体数\100%。 6-苄氨基喋 呤6曙BA (6-Benzyl Aminopurine);萘乙酸NAA (naphtalene acetic acid)， 以下 相同。
实例二
取粉红色花的丽格海棠的幼嫩叶片，以和实例一相同的方法处理得到外植体。然后将外植体接种在与实施例一相同的培养基上，先放在100 200lx光照 下培养14天，然后移到1100 1200k光照下培养，18天后丛生芽的诱导率达 99%， 21天后丛生芽诱导率达100%。 实例三
取红色花的丽格海棠的幼嫩叶片，以和实例一相同的方法处理得到外植体。 然后将外植体接种在配方为MS+6-苄氨基喋呤0.6mg/l +萘乙酸0.3mg/l+蔗糖3 Og +琼脂6g的培养基上，先在100 2001x光照条件下培养14天，然后移到 1100 12001x光照条件下培养，18天后丛生芽的诱导率达90%， 28天后丛生芽 的诱导率达100%。
实例四
取红色花的丽格海棠的幼嫩叶片，以和实例一相同的方法处理得到外植体。 然后将外植体接种在配方为MS+6-节氨基喋呤0.4mg/l+萘乙酸O.lmg/1+蔗糖 30g+琼脂6g的培养基上。先在100 200k光照条件下培养10天，然后移到 1100 12001x光照下培养，22天后丛生芽的诱导率达97%， 27天后丛生芽的诱 导率达100%。
实例五
取红色花的丽格海棠的幼嫩叶片，以和实例一相同的方法处理得到外植体。 然后将外植体接种在配方为MS+6-节氨基喋呤0.6mg/l+萘乙酸O.lmg/1+蔗糖 25g+琼脂8g的培养基上。先在100 2001x光照条件下培养14天，然后移到 1100 12001x光照下培养，22天后丛生芽的诱导率达87%， 2 天后丛生芽的诱 导率达100%。
光照条件是组织培养的重要条件之一。本发明的关键技术在于，在合适的 激素浓度基础上，在小于15001x的弱光条件下，通过改变光照条件来提高丽格 海棠丛生芽的诱导率并縮短诱导时间。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不 能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通 技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替 换，都应当视为属于本发明的保护范围。
权利要求
1、丽格海棠组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤S1)、外植体材料处理即选用外植体材料进行处理，制备出符合要求的外植体；S2)、诱导即将步骤S1中所述的外植体接种到培养基上，在诱导条件下诱导出芽；所述诱导条件包括光照度小于1500lx的弱光照条件。
2、 如权利要求1所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于， 步骤S2中所述弱光照条件包括两个阶段，第一个阶段的光照度为100 200k， 第二个阶段的光照度为1100 12001x。
3、 如权利要求2所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于， 所述第一个阶段的光照时间为10 14天。
4、 如权利要求2所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于， 所述第二个阶段的光照时间为18 28天。
5、 如权利要求1所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于， 步骤S2中所述培养基的配方为MS+6-苄氨基喋呤0.4 0.6mg/l +萘乙酸0.1 0.3mg/l+蔗糖25 30g +琼脂6~8g。
6、 如权利要求1至5中任意一项所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法， 其特征在于，所述步骤S1外植体材料处理包括清洗、消毒和裁剪；所述清洗将 用于制作外植体的外植体材料洗净；所述消毒对洗净的外植体材料作消毒处理; 所述裁剪将消毒后的外植体材料裁成合适大小的外植体。
7、 如权利要求6所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于， 所述外植体材料为丽格海棠的幼嫩叶片。
8、 如权利要求6所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于， 所述清洗包括自来水冲洗和含洗洁精的水浸洗。
9、 如权利要求6所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述消毒包括酒精消毒和加入吐温-20的次氯酸钠溶液浸洗消毒。
10、如权利要求6所述的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，其特征在于， 所述裁剪为将外植体材料去掉叶缘和叶柄之后切成0.5~1 cmx0.5 lcm大小的叶片块。
全文摘要
本发明涉及丽格海棠组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤首先进行外植体材料处理，即选用外植体材料进行处理，制备出符合要求的外植体；然后进行诱导，即将前述步骤准备好的外植体接种到培养基上，在诱导条件下诱导出芽；所述诱导条件包括光照度小于1500lx的弱光照条件。采用本发明技术方案的丽格海棠组织培养快速繁殖方法，由于进一步优化了丽格海棠组织培养快速繁殖过程中的光照条件，使得丽格海棠的诱导时间更短；而且诱导率更高，诱导率可达100％。
文档编号C12N5/04GK101292630SQ200810067879
公开日2008年10月29日 申请日期2008年6月18日 优先权日2008年6月18日
发明者卢爱华, 李晓东, 盾 邓 申请人:深圳职业技术学院