专利名称：：一种儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种疾病易感基因检测产品，具体的说，涉及一种有关儿童肥胖体质基因检测评估的试剂盒。
背景技术：
：肥胖指人体脂肪的过量储存，表现为脂肪细胞的增多和(或)细胞体积的增大，即全身脂肪组织块增大，与其它组织失去正常比例的一种状态。肥胖症是由遗传和环境因素共同作用引起体重增加、脂肪积聚过多所致的慢性代谢性疾病，是引起高血压、冠心病、2型糖尿病、胆囊炎及某些癌症的重要诱因和共同的病理基础。肥胖的发生原因有多种，按病因分为原发性(或单纯性)和继发性肥胖症两类。继发性肥胖症存在其他明确原因如下丘脑-垂体感染、肿瘤、胰岛素瘤等。原发性是指在一定的遗传易感背景下不良的饮食习惯(摄食过多)以及静止少动的生活方式引起热能摄入、储存明显多于消耗的平衡失调所致脂肪积聚、体重增加。这里主要叙述原发性肥胖症。全世界有近3亿肥胖症患者，我国的肥胖症发生率也迅速增加，1998年我国超重人数已愈1亿，2001年全国调査超重为21.5%，肥胖为2.92%，女性肥胖(3.7%)高于男性(2.11%)，而且呈现不断增加和年轻化的趋势。肥胖严重影响了我国人民的身心健康。一直以来，国际上都是采用体质指数(BM^体重/身高的平方，kg/m2)作为是否肥胖的主要衡量标准之一，但实际上，对于处在青春发育期的孩子来说，单单这一个指标还远远不够。一个人的体重中，既包括脂肪重量，也包括肌肉、骨骼、水等非脂肪物质的重量。对于两个BMI相同的人，脂肪所占比例可能并不一样，而机体内过度的脂肪含量(脂肪占总体重的比例过高)才是人们患上高血糖、高血脂、高血压和脂肪肝等代谢异常疾病的关键因素，所以，即使是BMI相同的人，其患病几率也是不同的。而且，成年人的身体已经发育成熟，对于一般人而言，BMI数值的增加，基本可以反映体内脂肪含量和比例的增加，但对于青春期的男孩来说，BMI的增加并不伴随脂肪比例的上升，反而可能有小幅度的下降，如此一来，只用BMI作为肥胖与否的评判标准就显然会出现偏差了。此外，脂肪的分布部位也是影响患病几率的因素之一。比如，四肢偏胖的人，比腹型肥胖的人危险性小；同样腹型肥胖的人，如果脂肪主要堆积在内脏周围则患病的危险性更大。因此，采用腰围与身高的比值作为是否腹型肥胖的判定标准对儿童是有价值的。因此，家长在考虑孩子是否肥胖时，至少要考虑三个因素，即体质指数BMI、腰围与身高的比值，以及体内脂肪比例三项。当然，目前来说，可能家长自行测量体内脂肪比例较困难，但借用健身房或一些医院门诊中的体成分分析仪可以起到一定的初步筛查作用。需要提醒的是，这种分析仪的准确度与测量时间、是否排空膀胱，甚至脚底是否有汗都有关系，误差偏大(胖孩子的数值可能偏低，瘦孩子的则可能偏高)，所以只能作为简单的衡量，更精确的判定，还要结合医院儿科或内分泌科进行诊断。即使如此，还是会受儿童临时状态的影响。人们希望有一种简便而客观的方法可以进行儿童肥胖体质测试，提供给父母养育孩童，安排孩子饮食时合适的参考信息。
发明内容为了可以简便而客观地对儿童肥胖体质进行测试，本发明提供一种儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童肥胖体质的基因进行检测，从而简便快捷地测试其肥胖体质，而不需要经过繁锁的多方位测试，并且免受儿童临时身体状况的影响。该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。上述的预混PCR反应液含有SYBRgreenI，以及与儿童肥胖体质相关的PPARG和PPARA基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下检测PPARG基因的扩增引物充列如下上游引物F1(A)C5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACC-323bp，上游引物F1(A)G5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACG-323bp，下游引物R13-TCAAGGAAGGTCTATGCCGATAAC國524bp;检测PPARA基因的扩增引物序列如下上游引物F2C5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCC-325bp，上游引物F2G5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCG-325bp,下游引物R25-GGAACTGAGGAACGAACTGGG-321bp。上述的儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒，所述的阳性对照品有4个，序列SEQ1:TGCTGTTATGGGTGAAACTCTGGGAGATTCTCTGCAAACAACGTGGGGGCAGGTTGTGTT分别包含如下的GGTGAAACTCTGATACACTGGCTATTGGGGTTTGTCTTCCTCCTATTGACTATCACAAGGATTTATGTAATGTTTTAATAATTCCTTCACTCCAGATACGGCTCTTGTAGSEQ2:TAGTATTAAACCCTTACATATTACCTTGTGTGCGTCAATASE(^3:ACAGAAACAAATGCCAGTATTGTCGATTTCACAAGTGCCTTTCTGTCGGGACAAACACAAAATGCCCCCAATATGTTTGCGGAGAATCTCCCTGGAAGACCGTCCCCAATAGACAGTGTACCAGAGTTTCAAACTACAAGAGCCGTATCTTCAGTGAAGGACCCATAACACCAGAAAGCGTAAAGTTCCTGGGTAAAATTCTA;AGCAATTTTAGGAAGGAACTAATCGCTTTCGCA;4ATGTCACACACCTCAGTTCCTGTGCTTCAASEQ4:ACTCTGATTAATAGCTTGATTGGGAAAATGGAAACGCACTACGGTAGGTACCTTCCTTGCCATTTCACACAGGTGGCCCTTCCAAGGGAACCAAGTCATTGCACATTTTCCAGATCAAGCTTGTAATCAGCCAGTTCGTTTATGGATGAAAGT;ACATTCATCCAGGAACGAACCATCCCGACATGT。CAAAATGACTTGGGTGTGAAATGTTGAAGCCTGTTCCCTTGGAGCAAGGAAGAGGAACTGTGCAGGGCCACCTTACCTACCGTTGTGTGATGTGAAATCGACAATACTGGCATTTGTTTC上述的儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒，所述的阴性对照品包含的序列为SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。本发明的使用可以在儿童的任何身体条件下进行，而不免受儿童临时身体状况的影响，比如测量时间，排汗情况等。只需取其DNA样本，比如口腔样本，更客观方便地进行测试。可以对儿童肥胖体质评估提供更多的机会，便于推广应用。图l，图2，图3，图4，图5，图6为荧光定量PCR仪上的扩增曲线图。各图上方的DeltaRnvsCycle,是指ARn随循环变化的对数扩增图谱；△Rn(DeltaRn)是指在给定的一组PCR条件下所生成荧光信号的对数值。该图的横坐标表示循环数(CycleNumber),纵坐标表示荧光值(DeltaRn)。横线表示荧光域值，曲线与荧光域值线的交叉点所对应的循环数即为Ct值。图l、图2、图3中横线3表示荧光域值；曲线1表示为扩增？八110的引物对？1八((:)+Rl，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线2为扩增GSTP1的引物对F1G(C)+Rl，这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图1表示PPARG基因CC纯合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cl，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C2。图2表示PPARG基因GG纯合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C3，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C4。图3表示PPARG基因GC杂合型样本的产物扩增曲线图曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C5，曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C6。图4、图5、图6中横线4表示荧光域值；曲线5表示为扩增PPARA的引物对F2C+R2，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线6为扩增XRCC1的引物对F2G+R2，这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图4表示PPARA基因CC纯合型样本的产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C7，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C8。图5表示PPARA基因GC杂合型样本的产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C9，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为CIO。图6表示PPARA基因GG纯合型样本的产物扩增曲线图曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cll，曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C12。具体实施例-下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应当理解，下面实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法如萨姆布鲁克和拉塞尔主编的《分子克隆实验指南》第三版，或按照制造厂商所建议的步骤和条件。实施例l:试剂盒的制备。包括(1)探针的准备；(2)DNA抽提试剂；(3)预混反应液；(4)标准阳性对照；(5)标准阴性对照。(1)探针的准备；由通常的核苷酸引物合成仪合成。序列如下检测PPARG基因的扩增引物序列如下-.上游引物F1(A)C5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACC-323bp，上游弓I物Fl(A)G5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACG-323bp,下游引物Rl3-TCAAGGAAGGTCTATGCCGATAAC-524bp;检测PPARA基因的扩增引物序列如下上游引物F2C5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCC-325bp，上游引物F2G5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCG-325bp'下游引物R25-GGAACTGAGGAACGAACTGGG-321bp;使用前按每OD引物稀释为100pmol/L(即lOOpmol^l)浓度的加水量，开启瓶盖溶解之前最好在3000-4000转/分钟的转速下离心l分钟，防止开盖时引物散失。使用前，将浓溶液稀释成工作液10pmol/ml后进行实验。(2)DNA抽提试齐廿:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>预混反应液包括4种，每种内含一对上下游扩增引物，各对应一个基因型。按lml配比量计算，共同的成分配制为100的dNTP，20^1;500U4dTaqDNAPolymerase20^1;2XQuantOneStepSYBR1300pi;10的上游引物50^U;10的下游引物50pi;RNase-freeddH20860pi。管l的l对引物为上游引物Fl(A)C5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACC-3，下游引物Rl3-TCAAGGAAGGTCTATGCCGATAAC墨5;管2的l对引物为上游弓I物Fl(A)G5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACG-3，下游引物Rl3-TCAAGGAAGGTCTATGCCGATAAC-5;管3的1对引物为上游弓1物F2C5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCC-3，下游引物R25-GGAACTGAGGAACGAACTGGG-3;管4的l对引物为上游引物F2G5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCG-3，下游引物R25-GGAACTGAGGAACGAACTGGG-3;(4)标准阳性对照标准阳性模板是含有PPARG和PPARA基因中含突变核苷酸片段构成的Pucl8-T重组质粒，该重组质料转化大肠杆菌DH5a增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释到109Copy/pl，-2(TC保存。贮存存为109Copy/pl，使用浓度为105Copy/pl。标准阳性模板提供4种，每种浓度为105Copy/^。序列如下SEQ1:TGCTGTTATGGGTGAAACTCTGGGAGATTCTCCTATTGACCCAGAAAGCGATTCCTTCACTGATACACTGTCTGCAAACATATCACAAGGTAAAGTTCCTTCCAGATACGGCTATTGGGGACGTGGGGGCATTTATGTAAGGGTAAAATTGCTCTTGTAGTTTGTCTTCCAGGTTGTGTTTGTTTTAATACTA，SEQ2:TAGTATTAAAACAAACACAACCTGGAAGACAAACTACAAGAGCAATTTTACCCTTACATAAATGCCCCCACGTCCCCAATAGCCGTATCTGGAAGGAACT7TTACCTTGTGATATGTTTGCAGACAGTGTATCAGTGAAGGAATCGCTTTCTGCGTCAATAGGAGAATCTCCCAGAGTTTCACCCATAACAGCA,SEG3:ACAGAAACAAATGCCAGTATTGTCGATTTCACAAGTGCCTTTCTGTCGGGATGTCACACAACGGTAGGTAAGGTGGCCCTGCACATTTTCCCAGTTCGTTCCTCAGTTCCCCTTCCTTGCTCCAAGGGAACAGATCAAGCTATGGATGAATGTGCTTCAACATTTCACACCCAAGTCATTTTGTAATCAGAGT，SEQ4:ACTCTGATTACAAAATGACTTGGGTGTGAAATGTTGAAGCACATTCATCCATAGCTTGATCTGTTCCCTTGGAGCAAGGAAGAGGAACTGAGGAACGAACTGGGAAAATGTGCAGGGCCACCTTACCTACCGTTGTGTGACATCCCGACAGAAACGCACTTGTGAAATCGACAATACTGGCATTTGTTTCTGT。(5)标准阴性对照标准阴性模板是含有拟南芥基因片断180个核苷酸构成的Pucl8-T重组质粒。该重组质料转化大肠杆菌DH5a增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释到109Cop*l，.2(TC保存。贮存存为109Copy/pl,使用浓度为105Copy&l。序列如下SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。实施例2:试剂盒的使用(1)样本的制备取样方式使用棉签在面颊内擦拭IO次。注意为了保证样本不被食物或者饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。a)处理材料将在面颊内擦拭过的棉签转置于2ml离心管中，用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，加入400^1缓冲液GA。b)加入20pl蛋白酶K溶液，涡旋IO秒混匀，56'C放置60分钟，其间每15分钟涡旋混匀数次。c)加入400^1缓冲液GB，充分颠倒混匀，7(TC放置10分钟，此时溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的液滴。d)加200pl无水乙醇，充分颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的液滴。e)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CR中(吸附柱CR放入收集管中)，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管中。f)向吸附柱CR中加入500^缓冲液GD，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管中。g)向吸附柱CR中加入700^1漂洗液PW，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管。h)向吸附柱CR中加入500^1漂洗液PW，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液。i)将吸附柱CR放回收集管中，12,000rpm(B,400xg)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱CR室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗。j)将吸附柱CR转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50^洗脱缓冲液TB，室温放置2-5分钟，12,000rpm(13，400xg)离心2分钟。重复一次。(2)实验过程a)按样品数n(样品数=待测样本数+阴性对照1个+阳性对照1个)取预混PCR反应液每管23pl分装于反应管中。b)将上述处理好的待测样本和阴性、阳性对照(务必振荡混匀数秒)各取2ul分别加入反应管中，混匀，低速离心数秒，立即进行PCR扩增反应。c)PCR条件95°C10sec(95°C15sec，60°C60sec)X40个循环(3)结果分析与判断a)定量检测SNP的判断标准两曲线的Ct值之差的绝对值记为IACtl，当IACtl《1，判断为杂合型；当IACtl》5，判断为纯合型。如图，图l中IACtl》5，表示该样本为PPARG基因CC纯合型样本。图2中，|ACt|》5，表示该样本为PPARG基因GG纯合型样本。图3中，|ACtl《l，表示该样本为PPARG基因GC杂合型样本。图4中IACtl》5，表示该样本为PPARA基因CC纯合型样本。图5中，|ACt|《l，表示该样本为PPARA基因GC杂合型样本。图6中，IACt|》5，表示该样本为PPARA基因GG纯合型样本。b)结果分析基因型诊断结果PPARGGG+PPARAGG基因检测结果显示儿童肥胖发生的机率比较大。PPARGCC+PPARACC基因检测结果显示儿童肥胖发生的机率较小。PPARG+PPARA的其基因检测结果显示可能发生儿童肥胖，需要结合其他的检查手他组合段。序列表<110>上海裕隆生物科技有限公司<120>—种儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒<160>11<210>1<211〉23<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒中检测PPARG基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F1A(C)。<400>1tctgggagattctcctattgacc23<210>2<211>23<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒中检测PPARG基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F1A(G)。<400>2tctgggagattctcctattgacg23<210>3<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒中检测PPARG基因序列相关突变的DNA引物，命名为下游引物Rl。<400>3caatagccgtatctggaaggaact24<210>4<211>25<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒中检测PPARA基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F2C。<400>4cagtattgtcgatttcacaagttcc25<210>510<211〉25<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒中检测PPARA基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F2G。<400>5cagtattgtcgatttcacaagttcg25<210>6<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒中检测PPARA基因序列相关突变的DNA引物，命名为下游引物R2。<400>6ggaactgaggaacgaactggg21<210>7<211>193<212>DNA<213>人属(Homo)<400>760120180193tgctgttatgggtgaaactctgggagattctcctattgacccagaaagcgattccttcactgatacactgtctgcaaacatatcacaaggtaaagttccttccagatacggctattggggacgtgggggcatttatgtaagggtaaaattgctcttgtagtttgtcttocaggttgtgtttgttttaataeta<210>8<211〉193<212>DNA<213>人属(Homo)<400>8tagtattaaaacaaacacaacctggaagacaaactacaagagcaattttacccttacataaatgcccccacgtccccaatageegtatetggaaggaactttaccttgtgatatgtttgcagacagtgtatcagtgaaggaatcgctttctgcgtcaataggagaatctcccagagtttcaccca加cagca60120180193<210>9<211>193<212〉DNA<213〉人属(Homo)<400>9acagaaacaaatgecagtattgtcgatttcacaagtgectttctgtcgggatgtcacaca60acggtaggtaaggtggccctgcacattttcccagttcgttcctcagttccccttccttgc12011tccaagggaacagatcaagctatggatgaatgtgcttcaacatttcacacccaagtcattttgtaatcagagt180193<210>10<211>193<212〉DNA<213>人属(Homo)<400>10actctgattacaaaatgacttgggtgtgaaatgttgaagcacattcatccatagcttgatctgttcccttggagcaaggaagaggaactgaggaacgaactgggaaaatgtgcagggccaccttacctaccgttgtgtgacatcccgacagaaacgcacttgtgaaatcgacaatactggcatttgtttctgt60120180193<210>11<211>180<212〉DNA<213>拟南芥(Arabidopsisthaliana)<400>11ttcgttattgaatcttgttttggttctcttgtgtggaatgcattgttcttgcttctctggaacttgggatatgatgacaaaaatacgatatctctaaggctaattgctgtgcggatgaaatatatttgcacgtcagtctgatcccattatgtatataacattaggagttggtgcatgctc60120180权利要求1.一种儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒，其特征在于由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混PCR反应液含有SYBRgreenI，以及与儿童肥胖体质相关的PPARG和PPARA基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下检测PPARG基因的扩增引物充列如下上游引物F1(A)C5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACC-3，上游引物F1(A)G5-TCTGGGAGATTCTCCTATTGACG-3，下游引物R13-TCAAGGAAGGTCTATGCCGATAAC-5；检测PPARA基因的扩增引物充列如下上游引物F2C5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCC-3，上游引物F2G5-CAGTATTGTCGATTTCACAAGTTCG-3，下游引物R25-GGAACTGAGGAACGAACTGGG-3。2.如权利要求1所述的儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒，其特征在于所述的阳性对照品有4个，分别包含如下的序列SEQ1:TGCTGTTATGATTCCTTCACTCCAGATACGGCTCTTGTAGSEQ2:TAGTATTAAACCCTTACATATTACCTTGTGTGCGTCAATASEq3:ACAGAAACAAATGTCACACACCTCAGTTCCTGTGCTTCAASE(^4:ACTCTGATTAGGTGAAACTCTGATACACTGGCTATTGGGGTTTGTCTTCCACAAACACAAAATGCCCCCAATATGTTTGCGGAGAATCTCATGCCAGTATACGGTAGGTACCTTCCTTGCCATTTCACACTGGGAGATTCTCTGCAAACAACGTGGGGGCAGGTTGTGTTCCTGGAAGACCGTCCCCAATAGACAGTGTACCAGAGTTTCTGTCGATTTCAGGTGGCCCTTCCAAGGGAACCAAGTCATTTCCTATTGACTATCACAAGGATTTATGTAATGTTTTAATAAAACTACAAGAGCCGTATCTTCAGTGAAGGACCCATAACAACAAGTGCCTGCACATTTTCCAGATCAAGCTTGTAATCAGCCAGAAAGCGTAAAGTTCCTGGGTAAAATTCTA;AGCAATTTTAGGAAGGAACTAATCGCTTTCGCA;TTCTGTCGGGCCAGTTCGTTTATGGATGAAAGT;ATAGCTTGATTGGGAAAATGGAAACGCACTCAAAATGACTCTGTTCCCTTTGCAGGGCCATGGGTGTGAAGGAGCAAGGACCTTACCTACACATTCATCCAGGAACGAACCATCCCGACATGT。ATGTTGAAGCAGAGGAACTGCGTTGTGTGATGTGAAATCGACAATACTGGCATTTGTTTC3.如权利要求l或2所述的儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒，其特征在于所述的阴性对照品包含的序列为SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。全文摘要一种用于儿童肥胖体质基因检测评估试剂盒，可以克服儿童肥胖体质检测方法如BMI测量及脂肪测量方法在原理和操作上的局限性。本试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。本发明提供的儿童肥胖体质测试方法简便而客观，而不需要经过繁锁的多方位测试，并且免受儿童临时身体状况的影响。文档编号C12Q1/68GK101684490SQ20081020058公开日2010年3月31日申请日期2008年9月26日优先权日2008年9月26日发明者汪宁梅,穆海东,飒黎申请人:上海裕隆生物科技有限公司