专利名称：：一种儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种疾病易感基因检测产品，具体的说，涉及一种有关儿童精祌发育迟缓基因检测的试剂盒。
背景技术：
：精神发育迟缓(mentalretardation)又称为精神发育不全或弱智，可由多种原因引起。因为其主要症状是智力缺损，所以过去又称为"智力不足"。这是儿童期最常见的精神障碍之一，并延续终生。主要表现是在发育期内智力明显低于平均水平，并伴有适应行为的缺损。上述所谓发育期是指18岁以前，所谓智力明显低于平均水平是指智商低于正常平均值的两个标准差(即低于70)，所谓适应行为缺损是指根据其年龄及文化背景，不能符合社交的和个人的要求标准。儿童精神发育迟缓有如下表现症状一、语言发展迟缓，发音不清二、心神不定，注意力分散三、不与同伴游戏，不参加集体活动四、动作迟缓、不活泼五、基本生活能力差六、运动机能发展迟缓七、体弱多病标准化的智商测验可测定智力低下的智商水平。智商测定存在一定程度的偏倚，但它仍能合理地、准确地评价儿童的智力，特别是对年长儿。智商(IQ)值为6984的儿童一般有学习困难，无精神发育迟缓。他们在入学前很少被检查出来，当教育和行为问题突出时才被诊断出来。对他们进行特殊的教育，他们一般能完成学业，自谋生计。教育对精神发育迟缓的儿童都是非常有益的。轻度精神发育迟缓的儿童(IQ值5268)可能达到46年级的认知能力，虽然他们诵读困难，但大多数精神发育迟缓的儿童能掌握曰常生活所需的基本教育机能。他们需要辅导、支持、特殊教育和训练设备，长大后他们需要安全的生活环境和工作场所。虽然他们没有明显的身体缺陷，但可能并发癫痫。轻度精神发育迟缓患者不成熟，不懂世故，社会交往能力差，他们的思维仅仅是形象思维，往往不能抽象思维，他们难以适应新的环境，并且判断力差，不能深谋远虑。他们容易受骗，容易发生犯罪行为。但轻度患者常作为团伙的一员，参与团伙犯罪，有时为了充当团伙的头目，而犯下冲动性罪行。中度精神发育迟缓的儿童(IQ值3651)有明显的语言和运动发育迟缓，给予大量的训练和支持，轻中度精祌发育迟缓的成年人可以在社会中过着不同程度的独立生活，有些人通过重返社会训练所，接受最低限度的支持即可生活，而一些人则需要很好的监督。重度精神发育迟缓的儿童(IQ值2035)接受训练的能力较中度患儿差。极重度儿童(IQ值19以下)一般不会走，不会说话，痴呆。精神发育迟缓的儿童预期寿命短，根据病因和病情严重程度不同，预期寿命长短不一，病情越严重的病人，预期寿命越短。由于各家调查统计方法不同，所以患病率的报道差异很大。诊断的确定常依据智力测验，目前我国因为智力测验尚未普遍开展，未能根据智商进行筛选，因此常常只注意到较重的患者。根据一些地区的调查资料，中度及重度患者的患病率略高于0.1%，男性多于女性。有人认为，轻度的精神发育迟缓对社会影响不大，与正常的界线有时也不易划清，因此其患病率很难准确地获得，它主要是一个教育问题，而不是临床医学问题。精神发育迟缓一般是不可逆的。因此早期诊断精神发育迟缓，及早提供制订教育和训练方案的依据非常重要。对患病儿童，尤其是婴幼儿，哪怕是早一两个月都有极为重要的关系。而现有最常用的智力测验方式通常仅针对较大的少儿，还受限于现有的统计水平，而且在我国还不普及，对一些轻度中度这类最易受教育培训影响的患者，十分不利，很可能失去可以具备基本生活自理能力，甚至过正常人生活的机会。既增加患者家庭的痛苦，又增加了社会的负担。人们希望有一种简便而客观的方法可以进行儿童精神发育迟缓测试，对精神发育迟缓者及早做出诊断，及时提供制订教育和训练方案的依据，使更多儿童患者具备基本生活自理能力，甚至可以过正常人的生活。
发明内容为了可以简便而客观地对儿童精神发育迟缓进行测试，本发明提供一种儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童精神发育迟缓的基因进行检测，从而判断其是否患有精神发育迟缓，有助于及时诊断和治疗。该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。所述的预混PCR反应液含有SYBRgreenI，以及与儿童精神发育迟缓相关的P0U1F1和NSUN5基因突变位点的扩增引物；扩增P0U1F1基因的引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，扩增NSUN5基因的引物为包含突变位点的下游引物和正常的上游引物，序列分别如下-扩增P0U1F1基因的引物序列如下上游引物F1C5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，上游引物FIT5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下游引物Rl5-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;扩增NSUN5基因的引物序列如下上游引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp，上游弓1物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp，下游引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp。上述的儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒，所述的阳性对照品有4个，分别包含如下的序列SEQ1:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ2:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ3:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACGCTGTSEQ4:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACACTGTCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCAAATAAATAGAGTGAGATTTTCCACTTTGATCAAGAGTGACACCGCAGGCGGCTGTGTTCAGAACGTACTAGGAGAAAAACACCGCAGGCGGCTGTGTTCAGAACGTACTAGGAGAAAAAATCATATATTTTATGATTGTTGAAACAAATATTTCTGTATAAATAAATAGATCATATATTAGTGAGATTTTTATGATTGTTCCACTTTGATGAAACAAATTCAAGAGTGAATTTCTGTATAGCAGTTTGCTTGCTGGTGACTACGATAGATCTCACATTCAGCAGTTTGCTTGCTGGTGACTACGATAGATCTCACATTCGTTACAGGTTATCTAATAAATTGTTAGACATCATTCATACGTTACAGGTTATCTAATAAATTGTTAGACATCATTCATACGTTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;ATTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT。上述的儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒，所述的阴性对照品包含的序列为SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。本发明的使用不需要儿童本人到场，只需取其DNA样本，比如口腔样本，更有效保护对方隐私。不用问答形式，减轻患者的心理负担，以及人为因素对诊断结果的影响。可以对儿童精神发育迟缓进行简便而客观地分析，便于推广应用，有助于对精神发育迟缓者及时做出诊断，及早提供制订教育和训练方案的依据，使更多儿童患者具备基本生活自理能力，甚t至可以过正常人的生活。图1，图2，图3，图4，图5，图6为荧光定量PCR仪上的扩增曲线图。各图上方的DeltaRnvsCycle，是指ARn随循环变化的对数扩增图谱；ARn(DeltaRn)是指在给定的一组PCR条件下所生成荧光信号的对数值。该图的横坐标表示循环数(CycleNumber),纵坐标表示荧光值(DdtaRn)。横线表示荧光域值，曲线与荧光域值线的交叉点所对应的循环数即为Ct值。图l、图2、图3中横线3表示荧光域值；曲线1表示为扩增NSUN5的引物对F+RC，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线2为扩增NSUN5的引物对F+RT，这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图1表示NSUN5基因CC纯合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cl，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C2。图2表示NSUN5基因CT杂合型样本的产物扩增曲线图曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C3，曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C4。图3表示NSUN5基因TT纯合型样本的产物扩增曲线图曲线2与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C5,曲线1与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C6。图4、图5、图6中横线4表示荧光域值；曲线5表示为扩增P0U1F1的引物对FC+R，扩增样本所生成的扩增曲线；曲线6为扩增P0U1F1的引物对FT+R，这对引物扩增样本所生成的扩增曲线。图4表示POU1F1基因CC纯合型样本的产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C7，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C8。图5表示POU1F1基因CT杂合型样本的产物扩增曲线图曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C9，曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为CIO。图6表示POU1F1基因TT纯合型样本的产物扩增曲线图曲线6与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为Cll，曲线5与荧光域值线的交叉点表示达到域值的Ct循环数值为C12。具体实施例下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。7应当理解，下面实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法如萨姆布鲁克和拉塞尔主编的《分子克隆实验指南》第三版，或按照制造厂商所建议的步骤和条件。实施例h试剂盒的制备。包括(l)探针的准备；(2)DNA抽提试剂；G)预混反应液；(4)标准阳性对照；(5)标准阴性对照。(1)探针的准备；由通常的核苷酸引物合成仪合成。序列如下扩增P0U1F1基因的引物序列上游引物FlC5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，上游引物F1T5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下游引物R15-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;扩增NSUN5基因的引物序列下游引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp'下游引物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp，上游引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp。使用前按每OD引物稀释为100pmol/L(即100pmol/pl)浓度的加水量，开启瓶盖溶解之前最好在3000-4000转/分钟的转速下离心l分钟，防止开盖时引物散失。使用前，将浓溶液稀释成工作液10pmol/ml后进行实验。(2)DNA抽提试剂:<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(3)预混PCR反应液预混反应液包括6种，每种内含一对上下游扩增引物，各对应一个基因型。按lml配比量计算，共同的成分配制为..100|xM的dNTP，20^1;500U/plTaqDNAPolymerase20pl;2XQuantOneStepSYBR1300pi;10的上游引物50pi;10的下游引物50nl;脂ase-freeddH20860^1。管l的l对引物为上游引物F1C5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，下游引物R15-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;管2的1对引物为上游引物F1T5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下游引物Rl5陽CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;管3的1对引物为上游引物F25層TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp，下游引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp;管4的1对引物为上游引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT陽318bp，下游引物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp。(4)标准阳性对照标准阳性模板是含有PPARG和PPARA基因中含突变核苷酸片段构成的Pucl8-T重组质粒，该重组质料转化大肠杆菌DH5(X增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释到109Copy/nI，.2(TC保存。贮存存为109CopyVl,使用浓度为105Copy/|al。标准阳性模板提供4种，每种浓度为105Copy/pl。序列如下SE(J1:CGTGGAGGACCCTGGGCCCTCACCGCAGGCAGCAGTTTGCGTTTTGAAAGGTTATTGGGTCCCTTCCTCGGGCTGTGTTCTTGCTGGTGAGCAAAAGTGTTGCCTGCAGAAATAAAATGCAGAACGTACTCTACGATAGATCACAGTTTTTTATTCTTAATGTCACAAGCAGGAGAAAAATCTCACATTCATACT;SEQ2:CGTGGAGGACCCTGGGCCCTCACCGCAGGCAGCAGTTTGCATTTTGAAAGGTTATTGGGTCCCTTCCTCGGGCTGTGTTCTTGCTGGTGAGCAAAAGTGTTGCCTGCAGAAATAAAATGCAGAACGTACTCTACGATAGATCACAGTTTTTTATTCTTAATGTCACAAGCAGGAGAAAAATCTCACATTCATACT;SEQ3:TTCAACATCAAAATAAATAGATCATATATTGTTACAGGTTTTTAATAGCACTCTGAATGCAGTGAGATTTTTATGATTGTATCTAATAAAAGGCTACTTGCTCTGCCATTTCCACTTTGATGAAACAAATTTGTTAGACAAATAAGCAAAAATACGCTGTTCAAGAGTGAATTTCTGTATTCATTCATACAGACTGCT;SEQ4:TTCAACATCAAAATAAATAGATCATATATTGTTACAGGTTTTTAATAGCACTCTGAATGCAGTGAGATTTTTATGATTGTATCTAATAAAAGGCTACTTGCTCTGCCATTTCCACTTTGATGAAACAAATTTGTTAGACAAATAAGCAAAAATACACTGTTCAAGAGTGAATTTCTGTATTCATTCATACAGACTGCT。(5)标准阴性对照标准阴性模板是含有拟南芥基因片断180个核苷酸构成的Pucl8-T重组质粒。该重组质料转化大肠杆菌DH5a增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释到109Copy/pl，-20°。保存。贮存存为109Copy/|^l，使用浓度为105Copy4U。序列如下SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。实施例2:试剂盒的使用(1)样本的制备取样方式使用棉签在面颊内擦拭IO次。注意为了保证样本不被食物或者饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。a)处理材料将在面颊内擦拭过的棉签转置于2ml离心管中，用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，加入400m1缓冲液ga。b)加入20pl蛋白酶K溶液，涡旋IO秒混匀，56'C放置60分钟，其间每15分钟涡旋混匀数次。c)加入400^1缓冲液GB，充分颠倒混匀，7(TC放置10分钟，此时溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的液滴。d)加200pl无水乙醇，充分颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的液滴。e)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CR中(吸附柱CR放入收集管中)，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管中。f)向吸附柱CR中加入500|xl缓冲液GD，12,000rpm(13,40()xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管中。g)向吸附柱CR中加入700pl漂洗液PW，12,000rpm(13，400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR放回收集管。h)向吸附柱CR中加入500pl漂洗液PW，12,000rpm(13,400xg)离心30秒，倒掉收集管中的废液。i)将吸附柱CR放回收集管中，12,000rpm(13,400xg)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱CR室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗。j)将吸附柱CR转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20-50W洗脱缓冲液TB，室温放置2-5分钟，12,000rpm(13,400xg)离心2分钟。重复一次。(2)实验过程a)按样品数n(样品数二待测样本数+阴性对照l个+阳性对照l个)取预混PCR反应液每管23pl分装于反应管中。b)将上述处理好的待测样本和阴性、阳性对照(务必振荡混匀数秒)各取2pl分别加入反应管中，混匀，低速离心数秒，立即进行PCR扩增反应。c)PCR条件1095°C10sec(95°C15sec,60°C60sec)X40个循环(3)结果分析与判断a)定量检测SNP的判断标准两曲线的Ct值之差的绝对值记为IACtl，当IACtl《1，判断为杂合型；当IACtl^5，判断为纯合型。如图，图l中lACtl》5，表示该样本为NSUN5基因CC纯合型样本。图2中，|ACt|《l，表示该样本为NSUN5基因CT杂合型样本。图3中，|ACt|》5，表示该样本为NSUN5基因TT纯合型样本。图4中|ACt|》5，表示该样本为P0U1F1基因CC纯合型样本。图5中，|△Ct|《l，表示该样本为P0U1F1基因CT杂合型样本。图6中，|ACt|》5，表示该样本为P0U1F1基因TT纯合型样本。b)结果分析基因型诊断结果NSUN5CC+POU1F1CC基因检测结果显示儿童精神发育迟缓发生的机率比较大。NSUN5TT+POU1F1TT基因检测结果显示儿童精神发育迟缓发生的机率较小。NSUN5+POU1F1的其他组基因检测结果显示可能发生儿童精神发育迟缓，需要结合合其他的检查手段。序列表<110>上海裕隆生物科技有限公司<120>—种儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒<160>11<210>1<21>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒中检测POU1F1基因序列相关突变的DNA弓I物，命名为上游引物F1C。<400>1gaatacagaaattcactcttgaacacc27<210>2<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒中检测P0U1F1基因序列相关突变的DNA引物，命名为上游引物F1T。<400>2ggatacagaaattcactcttgaacact27<210>3<211〉22<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒中检测P0U1F1基因序列相关突变的DNA引物，命名为下游引物R1。<400>3cttgctctgccatttccacttt22<210>4<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒中检领(JNSUN5基因序列相关突变的DNA引物，命名为下游引物R2T。<400〉4cgc鄉cagcagtttaca18<210>5<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒中检坝i]NSUN5基因序列相关突变的DNA弓I物，命名为下游引物R2C。<400>5cgcaggcagcagtttacg18<210>6<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>根据核酸碱基配对原理和基因芯片杂交条件设计，以用作儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒中检测NSUN5基因序列相关突变的DNA弓|物，命名为上游引物F2。<400〉6tttatttctgcaggcaacactttt18<210〉7<211>195<212>DNA<213>人属(Homo)<400>760120180195cgtggaggaccctgggccctcaccgcaggcagcagtttgcgttttgaaaggttattgggtcccttcctcgggctgtgttcttgctggtgagcaaaagtgttgcctgcagaaataaaatgcagaacgtactctacgatagatcacagttttttattcttaatgtcacaagcaggagaaaaatctcacattcatact<210>8<211>195<212>DNA<213〉人属(Homo)<400>8cgtggaggaccctgggccctcaccgcaggcagcagtttgcattttgaaaggttattgggt60cccttcctcgggctgtgttcttgctggtgagcaaaagtgttgcctgcagaaataaaatgc120agaacgtactctacgatagatcacagttttttattcttaatgtcacaagcaggagaaaaa180tctcacattcatact195<210>9<211>198<212>DNA<213>人属(Homo)<400>9ttcaacatcaaaataaatagatcatatattgttacaggtttttaatagcactctgaatgc60agtgagatttttatgattgtatctaataaaaggctacttgctctgccatttccactttga12013tgaaacaaatttgttagacaaataagcaaaaatacgctgttcaagagtgaatttctgtat180tcattcatacagactgct198<210>10<211>198<212>DNA<213>人属(Homo)<400>10ttcaacatcaaaataaatagatcatatattgttacaggtttttaatagcactctgaatgc60agtgagatttttatgattgtatctaataaaaggctacttgctctgccatttccactttga120tgaaacaaatttgttagacaaataagcaaaaatacactgttcaagagtgaatttctgtat180tcattcatacagactgct198<210〉11<211>180<212>DNA<213>拟南芥(Arabidopsisthaliana)<400〉11ttcgttattgaatcttgttttggttctcttgtgtggaatgcattgttettgcttctctgg60aacttgggatatgatgacaaaaatacgatatctctaaggctaattgctgtgcggatgaaa120tatatttgcacgtcagtctgatcccattatgtatataacattaggagttggtgcatgctc180权利要求1.一种儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒，其特征在于由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成；所述的预混PCR反应液含有SYBRgreenI，以及与儿童精神发育迟缓相关的POU1F1和NSUN5基因突变位点的扩增引物；扩增POU1F1基因的引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，扩增NSUN5基因的引物为包含突变位点的下游引物和正常的上游引物，序列分别如下扩增POU1F1基因的引物序列如下上游引物F1C5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，上游引物F1T5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下游引物R15-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp；扩增NSUN5基因的引物序列如下下游引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp，下游引物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp，上游引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp。2.如权利要求1所述的儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒，其特征在于所述的阳性对照品有4个，分别包含如下的序列SEQ1:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ2:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ3:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACGCTGTSEQ4:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACACTGTCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCAAATAAATAGAGTGAGATTTTCCACTTTGATCAAGAGTGAAAATAAATAGAGTGAGATTTTCCACTTTGATCAAGAGTGACACCGCAGGCAGCAGTTTGCGGCTGTGTTCTTGCTGGTGAAGAACGTACTCTACGATAGAAGGAGAAAAATCTCACATTCCACCGCAGGCGGCTGTGTTCAGAACGTACTAGGAGAAAAAAGCAGTTTGCTTGCTGGTGACTACGATAGATCTCACATTCATCATATATTTTATGATTGTGTTACAGGTTATCTAATAAATGAAACAAATTTGTTAGACAATTTCTGTATTCATTCATACATCATATATTTTATGATTGTTGAAACAAATATTTCTGTATGTTACAGGTTATCTAATAAATTGTTAGACATCATTCATACGTTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;ATTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT。3.如权利要求1或2所述的儿童精神发育迟缓基因检测试剂盒，其特征在于所述的阴性对照品包含的序列为SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。全文摘要本发明提供一种儿童精神发育迟缓基因分析检测试剂盒。该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。预混PCR反应液中含有扩增儿童精神发育迟缓分析POU1F1-1和NSUN5基因突变位点的扩增引物。本发明克服了通常采用的智力测验方式诊断儿童精神发育迟缓的不足该方法存在一定程度的偏倚，并且较适宜对年长儿童作检查，不适于对婴幼儿检测；且受限于各国分析水平，在我国推行不广。本发明提供一种简便而客观的方法，以儿童DNA基因样本为测试对象样本，对儿童精神发育迟缓及早做出诊断，及时提供制订教育和训练方案的依据，使更多儿童患者具备基本生活自理能力，甚至可以过正常人的生活。文档编号C12Q1/68GK101684491SQ20081020058公开日2010年3月31日申请日期2008年9月26日优先权日2008年9月26日发明者汪宁梅,穆海东,飒黎申请人:上海裕隆生物科技有限公司