专利名称：多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法
技术领域：
本发明属于微生物液体深层发酵技术，特别是采用多菌种混合液 体发酵生产畜禽用菌剂的方法。
背景技术：
多菌种混合发酵始于古老的酿酒技术，但随着现代工业微生物的 发展，深层液体发酵在酿酒、制药、保健等领域逐渐占主导地位。发 酵菌种的选择也有多菌种转向单菌种发酵，这种转变与工业化生产单 一品种有关，如生产抗生素、味精、氨基酸等，随着微生态制剂在畜 禽上的广泛应用，单菌种液体微生态制剂无论在保质期还是在功能上 远不能满足市场需求。
发明内容
本发明的目的是，通过筛选多菌种混合液体发酵，生产出含菌量 高、保质期长、多功能性的畜禽保健微生态制剂，镜检活菌数大于
50亿/毫升。
本发明所采用的技术方案是 一种多菌体混合液发酵生产畜禽用 菌剂的方法，步骤如下
(1)、选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒
酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的原菌种，接入三角瓶中震荡培养24 —48小时，再按不同的培养基在摇床上进行好氧发酵，好氧发酵时 加入20%的水，制成原菌液；
所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、
黑曲霉菌和米曲霉菌的重量份数及加入比例是枯草芽孢杆菌20 —
30份，地衣芽孢杆菌30—40份，纳豆芽孢杆菌30—40份，啤酒酵 母菌40—60份，黑曲霉菌15 —25份，米曲霉菌15 — 25份；
所述好氧发酵的温度为31 —33°C，转速180r/min，好氧发酵期 通气比1: 0. 6，好氧发酵时间16小时；
(2) 、选用嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的原菌种，接入克 氏瓶中，在37。C恒温下培养24小时，进行厌氧发酵，厌氧发酵时加 入20%的水，制成原菌液；
所述嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的重量份数及加入比例是
嗜酸乳杆菌30—40份，双歧杆菌30—40份，粪肠球菌20 — 30份； 所述厌氧发酵的温度为31 — 33'C，厌氧发酵的时间40_50小时；
(3) 、选用纯化后的光合菌液接入克氏瓶中，在60瓦白炽灯下培 养3 — 5天j
(4) 、取上述步骤(1)所述原菌液总重量的2%，取上述步骤(2) 所述原菌液总重量的1。％，取上述步骤(3)所述光合菌液总重量的 0.5%，混合，按混合后总重量的4%接种，接入种子罐，种子罐内 的余量为种子培养基和水，进行厌氧培养，培养时间48—60小时， 制成种子液；
(5) 、将上述步骤(4)所述的种子液，取总重量的10%,接入 生产罐，生产罐内的余量为培养基和水，进行厌氧发酵；
(6) 、生产罐的发酵条件控制温度控制在31 — 33'C，全程搅拌， 转速为180r/min，发酵时间60—72小时，当PH值降至4. 0时，即
为发酵终点，镜检活菌数大于50亿/毫升。
本发明，所述种子罐的种子培养基为红糖、豆粕、磷酸二氢钾、 氯化钠和轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为红糖5 — 8
份、豆粕1—2份、磷酸二氢钾0. 2份、氯化钠0. 15份、轻质碳酸钙 0.6份，余量为水，并将初始ra値调至7.0，在12rC时灭菌处理30 分钟，冷却至30。C时接种。
本发明，所述生产罐的培养基为糖蜜、粕、磷酸二氢钾、氯化 钠、轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为糖蜜8 — 12份、 粕1_2份、磷酸二氢钾0. 2份、氯化钠0. 15份、轻质碳酸钙0. 6份， 余量为水，并将初始PH値调至7. 0，在121。C时灭茼处理30分钟， 冷却至3(TC时接种。
本发明，所述的糖蜜是红糖或蜂蜜；所述粕是菜粕、棉粕或豆粕。
其生产方法采用独特的好氧发酵与厌氧发酵相结合的发酵方法， 将我国允许在畜禽上使用的安全的有益菌进行提纯筛选并将这些有 益的好氧菌和厌氧菌混合培养，在特定的培养基下进行培养，形成多 种微生物菌群，这些微生物菌群在生长过程中，其代谢产物互为利用， 同时好氧菌的夺氧又为厌氧菌的生长提供了生长空间，菌群之间形成 了互惠共生的增值关系，组成了复杂而稳定的微生态系统，生成大量 促生长、抗病功能活性物质。
本发明，所述的各菌种均从中国普通微生物菌种保藏管理中心 (CGMCC)或农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)引进，确保了 各菌液的发酵质量。
用本发明所制成的畜禽用菌剂，于2007年3月一2008年9 月在河南省的部分地区进行了试用，实际使用效果实例如下 试用实例1: 2^)07年3月一2008年9月，试用于河南省平
顶山市新华区溃阳镇何庄村养猪场，饲养种类肉猪；饲养头数: 100头；所饲养的100头猪全部食用本发明所制成的畜禽用菌剂
加用蛋白饲料，经与同期用其它饲养的100头猪相比，平均增重
9.6%;存活率提高18.7%;经济效益显著。
试用实例2: 2007年4月一2008年8月，试用于河南省平
顶山市新华区潘阳镇西潘村养殖户康民的鱼塘，养殖量10亩 鱼塘；采用我公司生产的畜禽用菌剂，并配合微生物水质净化剂
精养草鱼，产量达到1750Kg/亩，与往年相比，饵料系数降低 18.2%，净产量提髙29.3%，成活率达92.5%。其池塘净化效 果为养殖水体溶解氧比对照提高16.2%，氨氮和亚硝酸盐分 别降低了 54.4%和68.5%，透明度比对照池塘提高39.6，生物 耗氧量降低34.7%，池水呈茶褐色，以褐藻为主。
本发明的有益效果是所有菌株都是国家允许使用的安全菌种， 安全、无毒，并且是一次性使用的产品，避免了再次发酵造成的杂菌 感染；本发明的产品经多次试用效果良好，镜检活菌数大于50亿/ 毫升，不仅提高了畜禽的抗病力，并促进了畜禽的快速生长，降低了 料肉比，提高了肉蛋奶的品质。
具体实施例方式
一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，步骤如下
(1)、选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒
酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的原菌种，接入三角瓶中震荡培养24 一48小时，再按不同的培养基在摇床上进行好氧发酵，好氧发酵时 加入20%的水，制成原菌液； .
所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、 黑曲霉菌和米曲霉菌的重量份数及加入比例是枯草芽孢杆菌20_ 30份，地衣芽孢杆菌30—40份，纳豆芽孢杆菌30—40份，啤酒酵 母菌40—60份，黑曲霉菌15 — 25份，米曲霉菌15 — 25份；
所述好氧发酵的温度为31_33°C，转速180r/min，好氧发酵期 通气比l: 0.6，好氧发酵时间16小时；
(2) 、选用嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的原菌种，接入克 氏瓶中，在37。C恒温下培养24小时，进行厌氧发酵，厌氧发酵时加 入20%的水，制成原菌液；
所述嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的重量份数及加入比例是
嗜酸乳杆菌30—40份，双歧杆菌30—40份，粪肠球菌20 — 30份； 所述厌氧发酵的温度为31_33°C，厌氧发酵的时间40 — 50小时；
(3) 、选用纯化后的光合菌液接入克氏瓶中，在60瓦白炽灯下培 养3_5天；
(4) 、取上述步骤(1)所述原菌液总重量的2%，取上述步骤(2) 所述原菌液总重量的1%，取上述步骤(3)所述光合菌液总重量的 0.5%，混合，按混合后总重量的4%接种，接入种子罐，种子罐内 的余量为种子培养基和水，进行厌氧培养，培养时间48_60小时，
制成种子液；
(5) 、将上述步骤(4)所述的种子液，取总重量的10%,接入 生产罐，生产罐内的余量为培养基和水，进行厌氧发酵；
(6) 、生产罐的发酵条件控制温度控制在31—33"C，全程搅拌， 转速为180r/min，发酵时间60 — 72小时，当PH值降至4. 0时，即 为发酵终点，镜检活菌数大于50亿/毫升。
本发明，所述种子罐的种子培养基为红糖、豆粕、磷酸二氢钾、 氯化钠和轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为红糖5 — 8 份、旦粕1_2份、磷酸二氢钾0. 2份、氯化钠0. 15份、轻质碳酸钙 0.6份，余量为水，并将初始PH値调至7.0，在12rC时灭菌处理30 分钟，冷却至3(TC时接种。
本发明，所述生产罐的培养基为糖蜜、粕、磷酸二氢钾、氯化
钠、轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为糖蜜8 —12份、
粕1_2份、磷酸二氢钾0. 2份、氯化钠0. 15份、轻质碳酸钙0. 6份， 余量为水，并将初始PH値调至7.0，在12rC时灭菌处理30分钟， 冷却至3(TC时接种。
本发明生产出的菌液，我们称之为NEM菌剂，目的是区别市场上 流行的EM菌，其最大特点是安全无毒性，所有菌株都是从中科院菌 种保藏中心引进的，均为国家允许使用的安全菌种，并且是一次性使 用的产品，避免了再次发酵造成的杂菌感染。本发明的产品用户试用 后反应良好，不仅提高了畜禽的抗病力，并促进了畜禽的快速生长， 降低了料肉比，提高了肉蛋奶的品质。
权利要求
1、一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，其特征在于包括如下步骤
2、 如权利要求1所述的一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂 的方法，其特征在于步骤(4)中所述种子罐的种子培养基为红 糖、豆粕、磷酸二氢钾、氯化钠和轻质碳酸钙，各物料的重量份数及 加入比例为红糖5 — 8份、豆粕1一2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化 钠0. 15份、轻质碳酸钙0. 6份，余量为水，并将初始PH値调至7. 0， 在12rC时灭菌处理30分钟，冷却至3(TC时接种。
3、 如权利要求1所述的一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂 的方法，其特征在于步骤(5)中所述生产罐的培养基为糖蜜、 粕、磷酸二氢钾、氯化钠、轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比 例为糖蜜8 — 12份、粕1一2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化钠0.15 份、轻质碳酸钙0.6份，余量为水，并将初始PH値调至7.0，在121 。C时灭菌处理30分钟，冷却至3(TC时接种。
4、 如权利要求3所述的一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，其特征在于所述的糖蜜是红糖或蜂蜜；所述粕是菜粕、棉 粕或豆粕。
全文摘要
一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，是将好氧菌枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母、黑曲霉、米曲霉按不同的培养基在摇床上培养出原种液；同时将嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌利用克氏瓶进行厌氧培养，并用克氏瓶在光照下培养光合细菌原菌夜；将上述原菌夜按4％的接种量接入种子罐进行厌氧培养发酵，发酵时间48～60小时；将培养好的种子液按10％接入生产罐，进行厌氧培养发酵，发酵时间60～72，当pH值降至4.0时即达到发酵终点。优点是所生产的菌剂镜检活菌数大于50亿/毫升，安全、无毒，不仅能提高畜禽的抗病力，并能促进畜禽的快速生长，降低了料肉比，提高了肉蛋奶的品质。
文档编号C12N1/16GK101386827SQ20081023064
公开日2009年3月18日 申请日期2008年10月30日 优先权日2008年10月30日
发明者张培举, 汪松林 申请人:张培举