专利名称：：抗高血压活性肽的制造方法
技术领域：
：本发明属于生物工程
技术领域：
，涉及生物工程领域和来源于动物蛋白的生物活性肽开发和利用。
背景技术：
：生物活性肽(bioactivitypeptides)是指那些具有特殊生理功能的肽类，不但易于消化吸收，且还有多种生理调节功能的肽。生物活性肽可分为天然存在的活性肽、蛋白质酶解活性肽和化学合成的活性肽。其中，天然存在的活性肽包括肽类抗生素、激素以及在骨骼、肌肉等组织中存在的活性肽。这些活性肽的缺点是含量少、提取比较困难；化学合成的活性肽成本较贵，合成条件要求高；酶解法所得活性肽，其制备条件温和，是获取生物活性肽比较合理的途径。高血压是常见的心血管疾病之一，对人类的健康危害极大，目前我国成人高血压患者超过1.6亿，并且有低龄化趋势。医学研究证明，血管紧张素转化酶(AngiotensionConwertingEnzyme,ACE)是引起人体高血压的重要物质，ACE是由两条肽链组成的酶，主要存在血管内皮细胞和其他组织细胞中，ACE可以将无活性的血管紧张素I转化成有活性的血管紧张素II，血管紧张素II可以降低血液的流速，导致血管平滑肌收缩，引发高血压。同时，ACE可以使血管舒缓激肽失活，同样会使血压升高。牛乳是一种复杂的分散体系，水是分散剂，其他成分如脂肪、蛋白质、乳糖、无机盐等为分散质。牛乳营养价值丰富，蛋白质含量为3.O3.5%，蛋白质主要包括酪蛋白和乳球蛋白，酪蛋白占蛋白总量的8082%，酪蛋白是我们制备抗高血压活性肽(ACEI)基础原料。我们制造的抗高血压活性肽是以动物乳为原料，选用食用级的蛋白酶进行酶解，所得到的ACEI具有安全性高、无毒副作用。其降压特点是，只对高血压患者有降压作用，对血压正常者没有影响，不会造成降压过度的问题。同时，该ACEI降压平稳，不仅对靶器官无损伤，还能对靶器官有保护作用。
发明内容本发明的目的是提供一种抗高血压活性肽的制造方法，该方法以动物乳中的酪蛋白为原料生产抗高血压活性肽(ACEI)。本发明的制造方法是(1)酪蛋白提取称取一定量的鲜牛乳，过滤除去乳中的杂质，将牛乳升温到3852°C，用乳脂分离机去除奶油，将脱脂乳在4000IOOOOrpm离心进一步除去多余的奶油。将脱脂乳温度调为2052°C，用0.52.OMHCl调节脱脂乳的pH值至4.84.3，在加入酸的过程中用搅拌器进行连续搅拌其转速为4080rpm。若以脱脂乳粉为原料时，称取一定量的脱脂乳粉，加入812倍的水复原为还原乳，其他过程同鲜牛乳。⑵酶解反应称取一定量的酪蛋白放入容器中，在搅拌器缓慢搅拌过程中逐渐将812倍水加入容器里，用0.52MNa0H调节pH值至6.09.5，溶液温度升到3045°C。加入15%食品级胰蛋白酶Trypsin，酶解过程中反应滴加0.52MNa0H维持酶解液的pH值，温度为3045°C，酶解时间为116小时。(3)干燥样品将酶解液升温到80100°C灭酶815分钟，离心所得上清液超滤浓缩、冷冻干燥，得到目标活性肽。本发明的有益效果是由于本发明是以动物乳为原料，选用食用级的蛋白酶进行酶解，所得到的ACEI具有安全性高、无毒副作用。其降压特点是，只对高血压患者有降压作用，对血压正常者没有影响，不会造成降压过度的问题。同时，该ACEI降压平稳，不仅对靶器官无损伤，还能对靶器官有保护作用。原料易得，选用的胰蛋白酶来源广，安全，提取活性肽后的原料可以综合利用。在酶解液浓缩时采用超滤，可以节省能耗和劳动强度，更重要的是可以易于大规模生产。具体实施例方式实施例1(1)酪蛋白提取称取10000ml的鲜牛乳，用3层纱布过滤除去乳中的杂质，将牛乳升温到40°C，用乳脂分离机去除奶油，将脱脂乳7000rpm离心进一步除去多余的奶油。将脱脂乳温度调为25°C，用IMHCl调节脱脂乳的pH值至4.6，在加入酸的过程中用搅拌器进行连续搅拌其转速为45rpm。⑵酶解反应称取200克酪蛋白放入容器中，在搅拌器缓慢搅拌过程中逐渐将2000克水加入容器里，用IMNaOH调节pH值至7.6，溶液温度升到40°C。加入7.0克食品级胰蛋白酶Trypsin，酶解过程中滴加IMNaOH维持酶解液的pH值为7.6，温度为40°C左右，酶解时间为6小时。(3)干燥样品将酶解液升温到100°C灭酶815分钟，离心所得上清液超滤浓缩、冷冻干燥，得到目标活性肽。实施例2(1)酪蛋白提取称取150克脱脂乳粉，溶于IOOOml水中，将复原乳温度调为25°C，用IMHCl调节脱脂乳的PH值至4.6，在加入酸的过程中用搅拌器进行连续搅拌其转速为45rpm。其余提取步骤同实施例1。抗高血压体外活性试验在5ml离心管中加入120ul的5mmol的马尿酰组氨酰亮氨酸(HHL)和作为抑制剂的20ul的50ug/ml本发明的酶解液样品，在37°C恒温水浴预热5min，然后加入0.lU/ml的血管紧张素转移酶(ACE)IOul启动反应，37°C恒温保持60min后，加入150ul的ImolHCl中止反应。再加入Iml乙酸乙酯，漩涡混合20s，4000r/min，离心IOmin后取出750ul酯层转入另一试管中，在50°C的真空干燥箱中经60min蒸干，再将它重新溶于3.Oml的去离子水中，在228nm处测定吸光度值。具体实验步骤如下药品添加量单位ul<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中Ab在反应中不加抑制剂，是ACE与HHL完全反应的对照值。Aa在反应中加抑制剂，是ACE与HHL同时反应的样品测定值。Ac在反应前先失活ACE，是ACE与HHL反应的空白值。经过测定超滤前酶解液对ACE抑制活性为28.53%，超滤后酶解液对ACE抑制活性为62.48%。权利要求一种抗高血压活性肽的制造方法，其制造方法是a、酪蛋白提取称取一定量的鲜牛乳，过滤除去乳中的杂质，将牛乳升温到38～52℃，用乳脂分离机去除奶油，将脱脂乳在4000～10000rpm离心进一步除去多余的奶油。将脱脂乳温度调为20～52℃，用0.5～2.0MHCl调节脱脂乳的pH值至4.8～4.3，在加入酸的过程中用搅拌器进行连续搅拌其转速为40～80rpm。若以脱脂乳粉为原料时，称取一定量的脱脂乳粉，加入8～12倍的水复原为还原乳，其他过程同鲜牛乳。b、酶解反应称取一定量的酪蛋白放入容器中，在搅拌器缓慢搅拌过程中逐渐将8～12倍水加入容器里，用0.5～2MNaOH调节pH值至6.0～9.5，溶液温度升到30～45℃。加入1～5％食品级胰蛋白酶Trypsin，酶解过程中反应滴加0.5～2MNaOH维持酶解液的pH值，温度为30～45℃，酶解时间为1～16小时。c、干燥样品将酶解液升温到80～100℃灭酶8～15分钟，离心所得上清液超滤浓缩、冷冻干燥，得到目标活性肽。全文摘要一种抗高血压活性肽的制造方法，属于生物工程
技术领域：
，其制造方法是a、酪蛋白提取，过滤杂质，将牛乳升温到38～52℃，去除奶油，将脱脂乳温度调为20～52℃，用MHCl调节脱脂乳的pH值，连续搅拌。b、酶解反应，在搅拌过程中逐渐将8～12倍水加入容器里，用MNaOH调节pH值，溶液温度升到30～45℃。加入胰蛋白酶，酶解过程中反应滴加MNaOH维持酶解液的pH值，温度为30～45℃，酶解时间为1～16小时。c、干燥样品，将酶解液升温到80～100℃灭酶8～15分钟，浓缩、冻干，得到目标活性肽。有益效果是原料易得，安全，提取活性肽后的原料可以综合利用。在酶解液浓缩时采用超滤，可以节省能耗和劳动强度，更重要的是可以易于大规模生产。文档编号C12P21/06GK101824456SQ20091021801公开日2010年9月8日申请日期2009年12月16日优先权日2009年12月16日发明者代永刚,南喜平,张莉,杨贞耐,薛培宇申请人:吉林省农业科学院