专利名称：一种玉米花丝多糖分离与脱色方法
技术领域：
本发明属于植物多糖分离与脱色方法，特别涉及一种玉米花丝多糖分离与脱色方法。
背景技术：
玉米花丝(又名玉米须)多糖味甘、平、无毒，具有降血糖、降血压、抗癌、抗菌及免 疫活性等生理功能。我国玉米花丝资源丰富，且花丝容易采集，费用低。玉米花丝的功效与 花粉相当。在分离提取过程中，花丝多糖混有色素、蛋白质和一些小分子物质。这些杂质中， 色素对花丝多糖的外观品质有一定的影响，并使多糖的分离、纯化与结构鉴定更加困难，因 此需要将色素除去。在玉米花丝多糖的分离提取过程中，脱色一直是一个难题。多糖脱色的 方法很多，主要有离子交换树脂法、大孔吸附树脂法、活性炭吸附法、双氧水脱色、透析法、 有机溶剂法等。然而，每种方法都有其局限性，且对不同的植物多糖进行脱色，得到的效果 也不尽相同。采用活性炭吸附脱色，活性炭难以除去；采用双氧水氧化脱色，效果不太理想， 并且双氧水具有氧化性，会破坏多糖的生物活性；树脂法、透析法及有机溶剂法对多糖中的 色素的脱除率也不太高。 粉末活性炭具有惊人的比表面积(800 2000m7g)，当被脱色的有色物质的分子 直径小于或等于活性炭孔的入口直径时，可被活性炭吸附而起到脱色的效果。本发明利用 粉末活性炭对玉米花丝多糖溶液进行脱色，并利用微孔滤膜除去残存的活性炭，达到分离 玉米花丝多糖并顺利脱色的良好效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种玉米花丝多糖分离与脱色的方法。在确定多糖分离与脱
色方法的基础上，对工艺进行优化，以获得脱色效果好、得率高的玉米花丝多糖。 本发明的技术解决方案是 —种玉米花丝多糖分离与脱色方法，其特殊之处是
1)玉米花丝粉碎与酶解 将经过清洗、干燥的玉米花丝进行粉碎；将粉碎后的玉米花丝与水以质量比
i : io i : 15的比例混合，加入玉米花丝质量i.o% 1.5^的纤维素酶，调节至pH值
4. 5 5. 5，45。C恒温水浴，搅拌酶解4. 0 5. Oh，得多糖浸提液；
2)活性炭脱色 将酶解后的多糖浸提液过滤后离心，取上清液进行真空浓縮至上清液体积的 1/4 1/3，除去蛋白；将粉末状活性炭加入脱蛋白后的多糖溶液，活性炭添加量为0. 08 0. 12g/ml，混合均匀后，45t:恒温水浴1. 0 1. 5h ;离心后取上清液，利用微孔滤膜进行抽 滤1 3次，去除活性炭残渣，微孔滤膜的孔径大小为0. 45 0. 80 ii m ;脱色后的花丝多糖 溶液按0.8 : 1 1.2 : l的比例添加无水乙醇或甲醇，混匀后离心，沉淀经真空干燥即得 玉米花丝多糖。
3
本发明将玉米花丝经过粉碎后，利用纤维素酶进行酶解反应，水浴浸提，过滤后进 行离心，取上清液进行真空浓縮，Sevage法除蛋白，活性炭脱色，去除活性炭残渣，然后用乙 醇进行沉淀，得到玉米花丝多糖。可脱除玉米花丝多糖分离提取时溶液中的色素，效果显 著，色素脱除率可达85 90%，多糖保留率可达83%以上，且工艺简单；同时有效除去了脱
色后多糖溶液中残留的活性炭，保持玉米花丝多糖色泽的纯正。
具体实施方式
实施例1 将清洗、干燥的玉米花丝粉碎，称取花丝粉末50g，加入花丝质量1.0%的纤维素 酶(酶活2000单位)，按1 : 10比例添加蒸馏水，调节至pH值4. 5， 45t:恒温水浴，搅拌酶 解5h。酶解后的花丝多糖浸提液用尼龙网或纱布过滤后离心，弃沉淀，取上清液，利用旋转 蒸发仪真空浓縮至1/3体积。Sevage法除蛋白，具体操作为按上一步的上清液脱蛋白试 剂(氯仿正丁醇=5 : 1) = 5 : 1的比例(体积比)混匀，以3500r/min离心10min，取 上清液。将粉末状活性炭加入脱蛋白后的多糖溶液，活性炭添加量为0.08g/ml(脱蛋白后 的多糖溶液)，混合均匀后，45t:恒温水浴1. 5h ;以3500r/min离心10min，然后取上清液， 利用微孔滤膜进行抽滤1次，去除活性炭残渣，微孔滤膜的孔径大小为0. 45 ii m。利用可见 分光光度计在470nm处测定多糖溶液脱色前后的吸光值，并按下式计算脱色率
脱色率％=[(脱色前吸光度_脱色后吸光度)/脱色前吸光度]X 100。
以苯酚-硫酸法测定多糖含量。活性炭脱色率为85.8%，多糖保留率为85.4%。
脱色后的花丝多糖浸提液按体积比1.2 : l添加无水乙醇(或甲醇)，混匀后以 3500r/min离心10min，沉淀经真空干燥即得玉米花丝多糖。
实施例2 将清洗、干燥的玉米花丝粉碎，称取定量花丝粉末100g，加入花丝质量1. 2%的纤 维素酶(酶活1500)，按1 : 12. 5比例添加蒸馏水。调节至pH值5. 0， 45"恒温水浴4. 5h。 将花丝多糖浸提液用尼龙网或纱布过滤后离心，弃沉淀，取上清液，利用旋转蒸发仪真空浓 縮至1/3. 5体积。Sevage法除蛋白，具体操作为按上一步的上清液脱蛋白试剂(氯仿正 丁醇=5 : 1) = 5 : 1的比例(体积比)混匀，以4000r/min离心9min，取上清液。将粉 末状活性炭加入脱蛋白后的多糖溶液，活性炭添加量为0. 10g/ml (脱蛋白后的多糖溶液)， 混合均匀后，45t:恒温水浴1. 25h ;以4000r/min离心9min，然后取上清液，利用微孔滤膜 进行抽滤2次，去除活性炭残渣，微孔滤膜的孔径大小为0. 65 ii m。利用可见分光光度计在 470nm处测定多糖溶液脱色前后的吸光值，并按下式计算脱色率
脱色率％=[(脱色前吸光度_脱色后吸光度)/脱色前吸光度]X 100。
以苯酚-硫酸法测定多糖含量。活性炭脱色率为88.9%，多糖保留率为83.8%。
脱色后的花丝多糖浸提液按体积比1 : l添加无水乙醇(或甲醇)，混匀后以 4000r/min离心9min，沉淀经真空干燥即得玉米花丝多糖。
实施例3 将清洗、干燥的玉米花丝粉碎，称取花丝粉末200g，加入花丝质量1. 5%的纤维素 酶(酶活IOOO单位)，按1 : 15添加蒸馏水，调节至pH值5. 5，45t:恒温水浴4h。将花 丝多糖浸提液用尼龙网或纱布过滤后离心，弃沉淀，取上清液，利用旋转蒸发仪真空浓縮至1/4体积。Sevage法除蛋白，具体操作为按上一步的上清液脱蛋白试剂(氯仿正丁醇 =5 : 1) = 6 : l的比例(体积比)混匀，以4500r/min离心8min，取上清液。将粉末状 活性炭加入脱蛋白后的多糖溶液，活性炭添加量为0. 12g/ml(脱蛋白后的多糖溶液)，混合 均匀后，45t:恒温水浴1. Oh ;以4500r/min离心8min，然后取上清液，利用微孔滤膜进行抽 滤3次，去除活性炭残渣，微孔滤膜的孔径大小为0. 80iim。利用可见分光光度计在470nm 处测定多糖溶液脱色前后的吸光值，并按下式计算脱色率 脱色率％ =[(脱色前吸光度_脱色后吸光度)/脱色前吸光度]X 100。
以苯酚-硫酸法测定多糖含量。活性炭脱色率为87. 3%，多糖保留率为84. 7%。
脱色后的花丝多糖溶液按体积比0.8 : l添加无水乙醇(或甲醇)，混匀后以 4500r/min离心8min，沉淀经真空干燥即得玉米花丝多糖。
权利要求
一种玉米花丝多糖分离与脱色方法，其特征是1.1)玉米花丝粉碎与酶解将经过清洗、干燥的玉米花丝进行粉碎；将粉碎后的玉米花丝与水以质量比1∶10～1∶15的比例混合，加入玉米花丝质量1.0％～1.5％的纤维素酶，调节至pH值4.5～5.5，45℃恒温水浴，搅拌酶解4.0～5.0h，得多糖浸提液；1.2)活性炭脱色将酶解后的多糖浸提液过滤后离心，取上清液进行真空浓缩至上清液体积的1/4～1/3，除去蛋白；将粉末状活性炭加入脱蛋白后的多糖溶液，活性炭添加量为0.08～0.12g/ml，混合均匀后，45℃恒温水浴1.0～1.5h；离心后取上清液，利用微孔滤膜进行抽滤1～3次，去除活性炭残渣，微孔滤膜的孔径大小为0.45～0.80μm；脱色后的花丝多糖溶液按0.8∶1～1.2∶1的比例添加无水乙醇或甲醇，混匀后离心，沉淀经真空干燥即得玉米花丝多糖。
全文摘要
一种玉米花丝多糖分离与脱色方法，其特征是将玉米花丝进行粉碎，然后与水以质量比1∶10～1∶15的比例混合，加入玉米花丝质量1.0％～1.5％的纤维素酶，调节至pH值4.5～5.5，45℃恒温水浴；将酶解后的多糖浸提液过滤后离心，取上清液进行真空浓缩，除去蛋白；将粉末状活性炭加入脱蛋白后的多糖溶液，45℃恒温水浴；离心后取上清液，利用微孔滤膜进行抽滤1～3次，去除活性炭残渣；脱色后的花丝多糖溶液中添加无水乙醇或甲醇，混匀后离心，沉淀经真空干燥得玉米花丝多糖。本发明可脱除玉米花丝多糖分离提取时溶液中的色素，效果显著，色素脱除率可达85～90％，多糖保留率可达83％以上，且工艺简单；同时有效除去了脱色后多糖溶液中残留的活性炭，保持玉米花丝多糖色泽的纯正。
文档编号C12P19/00GK101748173SQ20091022058
公开日2010年6月23日 申请日期2009年12月3日 优先权日2009年12月3日
发明者何余堂, 刘贺, 宫照杰, 潘孝明 申请人:渤海大学