专利名称：一种抗病复合微生物菌剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物有机肥领域，具体地涉及一种具有促进农作物生长及抑制病害
的抗病复合微生物菌剂及含此菌剂的生物有机肥。
背景技术：
中国微生物肥料研究起源于20世纪30年代，中国著名的土壤微生物学家张宪武 教授在1937年发表了第一篇《大豆根瘤菌研究与应用》的文章，50年代初，张宪武教授又带 领中国科学院林业土壤研究所的科研人员，在东北地区150万hm2的土地上推广大豆根瘤 菌接种剂的技术，使得农作物平均增产10%以上。60年代推广使用放线菌制成的"5406"抗 生菌肥料和固氮蓝绿藻肥。70 80年代中期，开始研究VA菌根，以改善植物磷素营养条件 和提高水分利用率。80年代中期 90年代，农业生产中又相继应用联合固氮菌和生物钾肥 作为拌种剂。在总结中国微生物肥料几十年的研究、生产和应用历史经验后，微生物肥料研 制单位相继推出联合固氮菌肥、硅酸盐菌剂、光合细菌菌剂、PGPR制剂和有机物料(秸秆) 腐熟剂等适应农业发展需求的新品种。进入21世纪后，国内外出现了基因工程菌肥、作基 肥和追肥用的有机无机复合菌肥、生物有机肥、非草炭载体高密度的菌粉型微生物接种剂 肥料以及其它多种功能类型和名称的微生物肥料。随着研究的深入和应用的不断扩大，微 生物肥料已形成由豆科作物接种剂向非豆科作物肥料转化；由单一接种剂向复合生物肥转 化；由单一菌种向复合菌种转化；由单一功能向多功能转化；由用无芽胞菌种生产向有芽 胞菌种生产转化等趋势。根据我国生产"绿色食品"的要求，控制化肥农药的施用量势在必 行，微生物肥有活化土壤养分，促进根系吸收水分、剌激植物生长，有些还能抑制有害微生 物的存活，表现出减轻一些病(虫)害的作用。因此，研究具有抗病功能的微生物肥料十分 必要。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种具有促进农作物生长及抑制病害的 抗病复合微生物菌剂及用此菌剂生产的生物有机肥。 本发明中，由如下七种菌组成巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、枯草 芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、地衣芽孢杆菌 (licheniformis)、假单抱杆菌(pseudomonas)、酉良酒酵母(Saccharomycescerevisiace) 菌、植物乳酸杆菌(lactobcillus planta進)。 为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下一种抗病复合微生物菌剂，其特
征在于按载体的重量份配比组成如下 含巨大芽孢杆菌载体 0.S 1.2份、 含枯草芽孢杆菌载体 1. 0 2. 0份、 含蜡状芽孢杆菌载体 0. 2 0. 6份、 含地衣芽孢杆菌载体 0. 2 0. 6份、
含假单孢杆菌载体 0. 1 0. 5份、 含酿酒酵母菌株载体 0. 2 0. 6份、
含植物乳酸杆菌载体 0. 1 0.5份、 载体组成为，麸皮和米糠按重量比为i : i i : 2。 上述抗病复合微生物菌剂制备方法如下
l)载体制备 将麸皮和米糠按重量比i : i i : 2混合均匀，作为吸附载体； 2)含微生物菌株的载体制备 ①含巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)载体按微生物领域常规操作进行活 化，经一级放大，二级放大和摇床放大，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸 附，至载体上有效活菌数超过2. 5亿/克，具备混合条件； 采用的培养基为在常规PDA培养基中添加PGY蛋白胨0. 5克，牛肉膏0. 5克，酵 母膏0. 5克，吐温80 0. 5克，调节P朋.8 7. 0 ; ②含枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)载体培养基和步骤同①，当有效活菌 数为2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合 条件； ③含蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)载体培养基和步骤同①，当有效活菌数 为2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条 件； ④含地衣芽孢杆菌(licheniformis)载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为 2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条件；
⑤含假单孢杆菌(pseudomonas)载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条件；
⑥含酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiace)载体培养基和步骤同①，当有效 活菌数为2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过2. 5亿/克，具 备混合条件； ⑦含植物乳酸杆菌(lactobcillus plantarum)载体培养基和步骤同①，当有效 活菌数为2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过2亿/克，具备 混合条件。
3)混合 将第二步骤制备的含微生物菌株的载体，按上述重量份配比，取料，混合均匀；在 无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，保持温度35 38°C，持续24 36小时；然后进行 低温干燥，干燥温度不高于55t:，至含水量《20%，有效活菌总数> 20亿/克，杂菌率 《10%，即得抗病复合微生物菌剂，常温常压真空包装。 采用如上所述的抗病复合微生物菌剂，可以制成具有促进农作物生长及抑制病害 的生物有机肥，生物有机肥包括如上所述的抗病复合微生物菌剂、有机物料、玉米面和禽 畜粪便；其配比为每立方米的禽畜粪便添加80 100kg的有机物料、1 2kg的玉米面和 0. 8 1. 5kg的抗病复合微生物菌剂； 其中所述的有机物料是稻壳、锯末或秸秆的一种或几种的混合。优选秸秆。
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上述具有促进农作物生长及抑制病害的生物有机肥的制备方法，包括如下步骤
按所述的配比，取禽畜粪便、秸秆和玉米面，混合均匀，通过调节原料的配比，至混 合物的C/N比在20 25 : 1之间，通过添加或不添加泥灰，至混合物的水分在65 70% 之间，将上述混合好的物料送入GALLUS发酵仓，加压混炼，除臭杀菌；出仓后，将抗病复合 微生物菌剂接种于混合物中，混合均匀后，经堆置发酵和摊开晾干，当水分降至25 35% 时，将发酵产物造粒，干燥，制成具有促进农作物生长及抑制病害的生物有机肥。当物料含 水量降低至20%以下时，包装。 上述的生物有机肥，还可以添加辅料，辅料为麸皮、鱼粉、骨粉、草炭、膨润土或页
岩的一种或几种的混合。 本发明的有益效果是 1.本发明的含有抗病复合微生物菌剂的生物有机肥，产生的抗生素对多种真菌性 病害、细菌性病害具有防治作用，对病毒性病害有抑制作用，如常见的立枯病、黄萎病、黑斑 病、霜腐病、根腐病、晚疫病和病毒性花叶病等。防治效果达到80%以上，抑制减少病原菌的 发生和繁衍。对作物安全，提高作物抗病性，是生产无公害、绿色食品有效的生物有机肥料。
2.利用抗病复合微生物菌剂生产的生物有机肥，抗病效果比市场上同类产品高 10 15%。 3.本发明耐受恶劣条件能力强，繁殖速度快，产品易于保存，自然环境下，产品保 存两年后，菌体存活率为75%，菌体中的芽孢杆菌率所占的比例达到总数的90%以上。
4.生产成本低，工艺稳定。价格便宜，农民可以用得起；工艺条件成熟，产品种类 多，成熟度高。
具体实施例方式实施例1 :抗病复合微生物菌剂
(一)按载体的重量份配比组成如下
含巨大芽孢杆菌载体l份、含枯草芽孢杆菌载体1. 45份、含蜡状芽孢杆菌载体0. 4份、含地衣芽孢杆菌载体0. 4份、含假单孢杆菌载体0. 3份、含酿酒酵母菌载体0. 4份、含植物乳酸杆菌载体0. 3份；载体组成为，麸皮和米糠按重量比为i : i。
(二)抗病复合微生物菌剂的制备方法
1、载体制备将麸皮和米糠按重量比1:l混合均匀，作为吸附载体；2、含微生物菌株的载体制备
①含巨大芽孢杆菌载体:按微生物领域常规操作进行活化，经一级放大，二级放大
和摇床放大，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数 超过2. 5亿/克，具备混合条件；
采用的培养基为在常规PDA培养基中添加PGY蛋白胨0. 5克，牛肉膏0. 5克，酵 母膏0. 5克，吐温80 0. 5克，调节P朋.8 7. 0 ; ②含枯草芽孢杆菌载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数
时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条件； ③含蜡状芽孢杆菌载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数
时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条件； ④含地衣芽孢杆菌载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数
时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条件； ⑤含假单孢杆菌载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数
时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条件； ⑥含酿酒酵母菌载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数
时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过2. 5亿/克，具备混合条件 ⑦含植物乳酸杆菌载体培养基和步骤同①，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数
时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过2亿/克，具备混合条件。 3、混合 将第二步骤制备的含微生物菌株的载体，按载体重量份配比，取料，混合均匀；在
无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，保持温度35 3『C，持续24 36小时；然后进行低 温干燥，干燥温度不高于55°C ，当含水量《20% ，有效活菌总数^ 20亿/克，杂菌率《10% 时，常温常压下真空包装，制成抗病复合微生物菌剂。实施例2 :抗病复合微生物菌剂
(一)按载体的重量份配比组成如下:
含巨大芽孢杆菌载体0. 8份、含枯草芽孢杆菌载体l.O份、含蜡状芽孢杆菌载体0. 2份、含地衣芽孢杆菌载体0. 2份、含假单孢杆菌载体0. 1份、含酿酒酵母菌载体0. 2份、含植物乳酸杆菌载体0. 1份、载体组成为，麸皮和米糠按重量比为1
(二)制备方法同实施例1。
实施例3抗病复合微生物菌剂
(一)按载体的重量份配比组成如下:
含巨大芽孢杆菌载体1.2份、含枯草芽孢杆菌载体2. 0份、含蜡状芽孢杆菌载体0. 6份、含地衣芽孢杆菌载体0. 6份、含假单孢杆菌载体0. 5份、含酿酒酵母菌载体0. 6份、含植物乳酸杆菌载体0. 5份、
载体组成为，麸皮和米糠按重量比为1 : 2。
( 二 )制备方法同实施例1 。 实施例4 一种含有抗病复合微生物菌剂的生物有机肥
( — )生物有机肥的配比 每立方米鸡粪添加90kg秸秆、1. 5kg玉米面和1. Okg实施例1制备的抗病复合微 生物菌剂。
( 二 )制备方法如下 按配比，将鸡粪、秸秆和玉米面，混合均匀，测得C/N比为25 : l，水分为75. 3%， 添加泥灰，至测得混合物的水分在65 70%之间。将上述混合好的物料送入GALLUS发酵 仓，加压混炼，除臭杀菌。出仓后，将1. Okg抗病复合微生物接种于混合物中，物料混合均匀 后，堆置发酵，堆置成高0.7m、宽2.2m的长条形料堆。上插温度计，用草苫覆盖。24小时后 翻堆1次，之后每天翻1次，每天测定温度1次，翻拌后温度升高微弱或不再升高，标志着易 分解的碳水化合物和氮化物的初级分解已基本结束。发酵5天后，将料堆摊开晾干，当水分 降至30 %时，将发酵产物造粒，干燥，当物料含水量降低至20 %以下时，包装，制成含有抗 病复合微生物菌剂的生物有机肥。 实施例5含有抗病复合微生物菌剂的生物有机肥
向实施例4制得的生物有机肥中添加辅料。 ①每公斤生物有机肥中添加0.05kg鱼粉，制成进一步含有鱼粉的生物有机肥。
②每公斤生物有机肥中添加0. 05kg骨粉和0. 5kg草炭，制成进一步含有骨粉和草 炭的生物有机肥。 ③每公斤生物有机肥中添加0. 04kg鱼粉、0. 2kg草炭和0. 2kg膨润土，制成进一步 含有鱼粉、草炭和膨润土的生物有机肥。 ④每公斤生物有机肥中添加0. 6kg页岩，制成进一步含有页岩的生物有机肥。
权利要求
一种抗病复合微生物菌剂，其特征在于按载体的重量份配比组成如下含巨大芽孢杆菌载体0.8～1.2份、含枯草芽孢杆菌载体1.0～2.0份、含蜡状芽孢杆菌载体0.2～0.6份、含地衣芽孢杆菌载体0.2～0.6份、含假单孢杆菌载体 0.1～0.5份、含酿酒酵母菌载体 0.2～0.6份、含植物乳酸杆菌载体0.1～0.5份、载体组成为，麸皮和米糠按重量比为1∶1～1∶2。
2. —种权利要求1所述的抗病复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于制备方法如下1)载体制备 将麸皮和米糠按重量比11 12混合均匀，作为吸附载体；2) 含微生物菌株的载体制备分别将巨大芽孢杆菌和酿酒酵母菌活化，经一级放大，二级放大和摇床放大，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数时，分别进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过2. 5亿/克， 具备混合条件；分别将枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和假单孢杆菌活化，经一级放大， 二级放大和摇床放大，当有效活菌数为2. 5 5亿/ml个数时，分别进行载体吸附，至载体 上有效活菌数超过3亿/克，具备混合条件；将植物乳酸杆菌活化，经一级放大，二级放大和摇床放大，当有效活菌数为2. 5 5亿 /ml个数时，进行载体吸附，至载体上有效活菌数超过2亿/克，具备混合条件；3) 混合将第二步骤制备的含微生物菌株的载体，按权利要求1所述的重量份配比，取料，混合 均匀；在无菌条件下，进行自然固态堆积发酵，保持温度35 38t:，持续24 36小时；然 后进行低温干燥，干燥温度不高于55°C ，至含水量《20% ，有效活菌总数^ 20亿/克，杂菌 率《10%。
3. —种含有权利要求1或2所述的抗病复合微生物菌剂的生物有机肥，其特征在于包 括抗病复合微生物菌剂、有机物料、玉米面和禽畜粪便；其配比为每立方米的禽畜粪便添加 80 100kg的有机物料、1 2kg的玉米面和0. 8 1. 5kg的抗病复合微生物菌剂；其中所述的有机物料是稻壳、锯末或秸秆的一种或几种的混合。
4. 按照权利要求3所述的生物有机肥，其特征在于包括辅料，辅料为麸皮、鱼粉、骨粉、 草炭、膨润土或页岩的一种或几种的混合。
5. —种权利要求3所述的生物有机肥的制备方法，其特征在于包括如下步骤 按权利要求3所述的配比，取禽畜粪便、秸秆和玉米面，混合均匀，通过调节原料的配比，至混合物的C/N比在20 25 : 1之间，通过添加或不添加泥灰，至混合物的水分在 65 70%之间，将上述混合好的物料送入GALLUS发酵仓，加压混炼，除臭杀菌；出仓后， 将抗病复合微生物菌剂接种于混合物中，混合均匀后，经堆置发酵和摊开晾干，当水分降至 25 35%时，将发酵产物造粒，干燥。
全文摘要
本发明涉及一种抗病复合微生物菌剂及其制备方法和应用。采用的技术方案是抗病复合微生物菌剂含有巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、假单孢菌、酿酒酵母菌和植物乳酸杆菌等七种菌株。采用此抗病复合微生物菌剂制备的生物有机肥具有促进农作物生长及抑制病害的作用。本发明对多种真菌性病害、细菌性病害具有防治作用，对病毒性病害有抑制作用，防治效果达到80％以上。抗病效果提高10～15％。本发明生产成本低，工艺稳定。
文档编号C12N1/18GK101724558SQ20091022054
公开日2010年6月9日 申请日期2009年12月8日 优先权日2009年12月8日
发明者王秀兰, 肖千明 申请人:营口恒新生物技术开发有限公司