用于肿瘤治疗的诊断用途的方法和组合物的制作方法

专利名称：用于肿瘤治疗的诊断用途的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及有效用于治疗癌症的诊断法和组合物。
背景技术：
癌症是对人类健康最致命的威胁之一。仅在美国，癌症每年影响接近一百三十万 新患者，并且是位于心血管病之后的第二致死原因，4名死亡者中占约1名。实体瘤是造成 那些死亡中的大部分的原因。尽管已经有某些癌症医学治疗的显著进步，但是全部癌症的 全面5年存活率在过去的20年内仅提高了约10%。癌症，或恶性肿瘤，转移并以不受控的 方式快速生长，从而使及时的检测和治疗极端困难。根据癌症类型，患者典型地具有若干种他们可以使用的治疗选择，包括化学疗法、 放射和基于抗体的药物。有效用于预测来自不同治疗方案的临床结果的诊断法应该非常有 益于这些患者的临床管理。若干研究已经探索了基因表达与确定特定癌症类型的相关性， 例如通过突变特异性测定、微阵列分析、qPCR等。这样的方法可以有效用于确定和分类患 者表现出的癌症。然而，关于具有临床结果的基因表达的预测值或预后值知之甚少。因此，存在对各患者的最佳治疗方案的客观、可重复方法的需要。发明概述本发明的方法可以用于多种设置，包括，例如，选择用于治疗过程的患者，在用具 体治疗方案治疗个体时预测成功的可能性，评估疾病进展，监测治疗效果，确定个体患者的 预后和评估个体除受益于抗血管生成治疗以外还受益于具体抗癌治疗的倾向。本文中提供确定可以除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于抗癌治疗的患者的方 法，预测患者除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗的反应的方法，和确定患者除由 VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的可能性的方法。例如，所述方法包括确定获自患 者的样品中的基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中样品中该基因的表达水 平和VEGF-A表达水平之间的比率与参照样品中该基因的表达水平和VEGF-A表达水平之间 的比率相比较时的变化表明该患者可以除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于抗癌治疗，该 患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗反应和/或该患者除由VEGF拮抗剂以 外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在所述方法的某些实施方案中，所述比率的变化是增加。在另一个实施方案中，所 述比率的变化是减小。在某些实施方案中，所述基因是血管生成因子。在某些实施方案中， 所述表达水平是mRNA表达水平。在一个实施方案中，mRNA表达在肿瘤细胞中。在某些实 施方案中，所述血管生成因子的mRNA表达水平与VEGF-A的mRNA表达水平之间的比率变化 是增加。在一个实施方案中，血管生成因子是VEGF-C。在另一个实施方案中，血管生成因子 是VEGF-D。在再一个实施方案中，血管生成因子是bFGF。在再一个实施方案中，血管生成因子是VEGFR3。在某些实施方案中，血管生成因子是VEGF-C且所述方法还包括确定样品中 VEGF-D表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中样品中VEGF-D表达水平和VEGF-A 表达水平之间的比率与参照样品中VEGF-D表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比增 加。在一个实施方案中，与参照样品相比，所述样品中增大的比率表明该患者可以除受益于 VEGF拮抗剂以外还受益于抗癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治 疗反应和/或该患者除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在某 些实施方案中，所述表达水平是mRNA表达水平。在某些实施方案中，所述表达水平是蛋白 表达水平。在某些实施方案中，血管生成因子是VEGF-C和所述方法还包括确定样品中bFGF 表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中样品中bFGF表达水平和VEGF-A表达水平之 间的比率与参照样品中bFGF表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比增加。在一个实 施方案中，与参照样品相比，所述样品中增大的比率表明该患者可以除受益于VEGF拮抗剂 以外还受益于抗癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗反应和/或 该患者除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在某些实施方案中， 所述表达水平是mRNA表达水平。在某些实施方案中，所述表达水平是蛋白表达水平。在某些实施方案中，血管生成因子是VEGF-D和所述方法还包括确定样品中 VEGF-C表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中样品中VEGF-C表达水平和VEGF-A 表达水平之间的比率与参照样品中VEGF-C表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比增 加。在一个实施方案中，与参照样品相比，所述样品中增大的比率表明该患者可以除受益于 VEGF拮抗剂以外还受益于抗癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治 疗反应和/或该患者除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在某 些实施方案中，所述表达水平是mRNA表达水平。在某些实施方案中，所述表达水平是蛋白 表达水平。在某些实施方案中，血管生成因子是VEGF-D和所述方法还包括确定样品中bFGF 表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中样品中bFGF表达水平和VEGF-A表达水平之 间的比率与参照样品中bFGF表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比增加。在一个实 施方案中，与参照样品相比，所述样品中增大的比率表明该患者可以除受益于VEGF拮抗剂 以外还受益于抗癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗反应和/或 该患者除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在某些实施方案中， 所述表达水平是mRNA表达水平。在某些实施方案中，所述表达水平是蛋白表达水平。在某些实施方案中，血管生成因子是bFGF和所述方法还包括确定样品中VEGF-C 表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中样品中VEGF-C表达水平和VEGF-A表达水平 之间的比率与参照样品中VEGF-C表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比增加。在一 个实施方案中，与参照样品相比，所述样品中增大的比率表明该患者可以除受益于VEGF拮 抗剂以外还受益于抗癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗反应 和/或该患者除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在某些实施 方案中，所述表达水平是mRNA表达水平。在某些实施方案中，所述表达水平是蛋白表达水 平。
在某些实施方案中，血管生成因子是bFGF和所述方法还包括确定样品中VEGF-D 表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中样品中VEGF-D表达水平和VEGF-A表达水平 之间的比率与参照样品中VEGF-D表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比增加。在一 个实施方案中，与参照样品相比，所述样品中增大的比率表明该患者可以除受益于VEGF拮 抗剂以外还受益于抗癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗反应 和/或该患者除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在某些实施 方案中，所述表达水平是mRNA表达水平。在某些实施方案中，所述表达水平是蛋白表达水 平。在一方面，提供这样的方法，其包括确定可以除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于 抗癌治疗的患者，包括确定获自患者的样品中的基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的 比率，其中所述基因的表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率为0. 1以上表明该患者可以 除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于抗癌治疗。在一个实施方案中，所述基因的表达水平 和VEGF-A表达水平之间的比率为0. 25以上。在另一个实施方案中，所述基因的表达水平 和VEGF-A表达水平之间的比率为0.5以上。在再一个实施方案中，所述基因的表达水平和 VEGF-A表达水平之间的比率为1.0以上。在某些实施方案中，所述基因是VEGF-C。在某些 实施方案中，所述基因是VEGF-D。在某些实施方案中，所述基因是bFGF。在某些实施方案 中，所述基因是VEGFR3。在一方面，提供这样的方法，其包括预测患者对抗血管生成治疗的反应，包括确定 获自患者的样品中的基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率，其中所述基因的表达 水平和VEGF-A表达水平之间的比率为0. 1以上表明该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对 抗血管生成治疗反应。在一个实施方案中，所述基因的表达水平和VEGF-A表达水平之间的 比率为0.25以上。在另一个实施方案中，所述基因的表达水平和VEGF-A表达水平之间的 比率为0.5以上。在再一个实施方案中，所述基因的表达水平和VEGF-A表达水平之间的比 率为1.0以上。在某些实施方案中，所述基因是VEGF-C。在某些实施方案中，所述基因是 VEGF-D。在某些实施方案中，所述基因是bFGF。在某些实施方案中，所述基因是VEGFR3。在一方面，提供这样的方法，其包括确定除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床 受益的可能性，包括确定获自患者的样品中的基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比 率，其中所述基因的表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率为0. 1以上表明该患者除由 VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在一个实施方案中，所述基因的 表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率为0. 25以上。在另一个实施方案中，所述基因的表 达水平和VEGF-A表达水平之间的比率为0.5以上。在再一个实施方案中，所述基因的表达 水平和VEGF-A表达水平之间的比率为1.0以上。在某些实施方案中，所述基因是VEGF-C。 在某些实施方案中，所述基因是VEGF-D。在某些实施方案中，所述基因是bFGF。在某些实 施方案中，所述基因是VEGFR3。在一方面，提供确定样品中的基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率的方 法，其中所述方法包括(a)确定所述样品中所述基因的相对表达；(b)确定参照样品中所述基因的相对表达；(c)确定所述样品中所述基因的标准化相对表达，包括使所述样品中所述基因的相对表达除以参照样品中所述基因的相对表达；(d)确定所述样品中VEGF-A的相对表达；(e)确定参照样品中VEGF-A的相对表达；(f)确定所述样品中VEGF-A的标准化相对表达，包括使所述样品中VEGF-A的相对 表达除以参照样品中VEGF-A的相对表达；和(g)通过使所述基因的标准化表达除以VEGF-A的标准化表达来确定所述基因的 表达水平和VEGF-A的表达水平之间的比率。在某些实施方案中，所述基因是血管生成因子或其受体。在一些实施方案中，血管 生成因子包括但不仅限于，血管生成因子和其受体，如本文中定义部分所定义地。在某些实施方案中，基因或血管生成因子的表达水平是mRNA表达水平。在某些实 施方案中，基因或血管生成因子的表达水平是蛋白表达水平。在某些实施方案中，基因或血管生成因子的mRNA表达水平利用qRT_PCR或qPCR 测量。在另一个实施方案中，mRNA表达水平利用微阵列测量。在另一个实施方案中，mRNA 表达水平利用ISH(原位杂交)测量。在某些实施方案中，基因或血管生成因子的蛋白表达 水平利用IHC测定来测量。在某些实施方案中，血管生成因子的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表达水平之 间的比率的变化是增加。在一个实施方案中，血管生成因子是VEGF-C。在另一个实施方案 中，血管生成因子是VEGF-D。在再一个实施方案中，血管生成因子是bFGF。在再一个实施 方案中，血管生成因子是VEGFR3。在一个实施方案中，来自患者的样品中基因的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表 达水平之间的比率为至少0. 5且所述基因是VEGF-C。在另一个实施方案中，来自患者的样 品中基因的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表达水平之间的比率为至少1且所述基因是 VEGF-C。在一个实施方案中，来自患者的样品中基因的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表 达水平之间的比率为至少0. 1且所述基因是VEGF-D。在一个实施方案中，来自患者的样品 中基因的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表达水平之间的比率为至少0. 25且所述基因是 VEGF-D。在另一个实施方案中，基因的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表达水平之间的比 率为至少0. 5且所述基因是VEGF-D。在一个实施方案中，来自患者的样品中基因的mRNA表 达水平和VEGF-A的mRNA表达水平之间的比率为至少0. 5且所述基因是bFGF。在另一个实 施方案中，来自患者的样品中基因的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表达水平之间的比率 为至少1且所述基因是bFGF。在再一个实施方案中，来自患者的样品中基因的mRNA表达水 平和VEGF-A的mRNA表达水平之间的比率为至少2且所述基因是bFGF。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂治疗包括施用抗VEGF抗体。在某些实施方案中， VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体，VEGF-Trap (例如，VEGF受体-Fc融合)或抗VEGF受体抗体。 在某些实施方案中，VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。在某些实施方案中，抗VEGF抗体是人或 人源化抗VEGF抗体。在一个实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐珠单抗(bevacizumab)。在某些实施方案中，本发明的方法还包括除施用VEGF拮抗剂以外还向患者施用 有效量的抗癌治疗剂。在某些实施方案中，抗癌治疗剂是VEGF-C拮抗剂。在某些实施方案 中，VEGF-C拮抗剂是抗VEGF-C抗体。在某些实施方案中，除施用VEGF拮抗剂以外还将有 效量的抗VEGF-C抗体施用于患者。在某些实施方案中，除施用抗VEGF抗体以外还将有效量的抗VEGF-C抗体施用于患者。在某些实施方案中，将抗VEGF-C抗体和抗VEGF抗体同时 施用于患者。在某些实施方案中，提供用于治疗患者中癌症的方法。例如，所述方法包括确定获 自患者的样品中基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率与参照样品中所述基因表达 水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比已发生变化，和还向所述患者施用不同于VEGF拮 抗剂的有效量的抗癌治疗，由此治疗癌症。在某些实施方案中，癌症是抗性肿瘤。在某些实 施方案中，患者由包括VEGF拮抗剂的抗癌治疗复发或对包括VEGF拮抗剂的抗癌治疗而言 是难治的。在某些实施方案中，患者由包括抗VEGF抗体的抗癌治疗复发或对包括抗VEGF 抗体的抗癌治疗而言是难治的。在某些实施方案中，患者由包括贝伐珠单抗的抗癌治疗复 发或对包括贝伐珠单抗的抗癌治疗而言是难治的。在某些实施方案中，提供用于治疗患者中细胞增殖病症的方法。例如，所述方法包 括确定获自患者的样品中基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率与参照样品中所述 基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比已发生变化，和还向所述患者施用不同 于VEGF拮抗剂的有效量的抗癌治疗，由此治疗细胞增殖病症。在某些实施方案中，提供用于抑制患者中血管生成的方法。所述方法包括确定获 自患者的样品中基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率与参照样品中所述基因表达 水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比已发生变化，和还向所述患者施用不同于VEGF拮 抗剂的有效量的抗癌治疗。在某些实施方案中，提供用于抑制患者中淋巴血管生成的方法。所述方法包括确 定获自患者的样品中基因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率与参照样品中所述基 因表达水平和VEGF-A表达水平之间的比率相比已发生变化，和还向所述患者施用不同于 VEGF拮抗剂的有效量的抗癌治疗。在某些实施方案中，所述抗癌试剂或抗血管生成剂，包括但不仅限于抗VEGF抗体 和抗VEGF-C抗体，根据标签或包装说明书上提供的指示施用于患者。在一个实施方案中，所述比率的变化增加。在另一个实施方案中，所述比率的变化 是减小。在某些实施方案中，所述基因是血管生成因子。在某些实施方案中，所述表达水平 是mRNA表达水平。在一个实施方案中，mRNA表达在肿瘤细胞中。在某些实施方案中，所述 血管生成因子的mRNA表达水平和VEGF-A的mRNA表达水平之间的比率变化是增加。在一个 实施方案中，血管生成因子是VEGF-C。在另一个实施方案中，血管生成因子是VEGF-D。在 再一个实施方案中，血管生成因子是bFGF。在再一个实施方案中，血管生成因子是VEGFR3。在某些实施方案中，获自患者的样品是组织、血液、血清或其任意组合。在某些实 施方案中，获自患者的样品是组织样品。在某些实施方案中，本发明的方法可以还包括确定免疫组织化学(IHC)分数，其 包括对基因进行IHC测定，其中IHC分数为至少1+。在一个实施方案中，IHC分数为至少 2+。在再一个实施方案中，IHC分数为3+。在某些实施方案中，本发明的方法可以还包括确定样品是否包含表达VEGFR3的 肿瘤细胞，其中VEGFR3表达的存在表明该患者可以除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于抗 癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗反应和/或该患者除由VEGF 拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。
在一个实施方案中，VEGFR3表达是mRNA表达。在另一个实施方案中，VEGFR3 mRNA 表达的存在利用qRT-PCR或qPCR来确定。在另一个实施方案中，VEGFR3蛋白表达的存在 利用IHC测定来确定。在某些实施方案中，本发明的方法可以进一步包括测量VEGFR3的表达水平，其中 样品中VEGFR3的表达水平与参照样品相比增加。在一个实施方案中，VEGFR3的表达水平 是mRNA表达水平。在另一个实施方案中，增加的VEGFR3 mRNA表达水平在肿瘤细胞中。在某些实施方案中，本发明的方法可以进一步包括确定免疫组织化学(IHC)分 数，其包括对基因进行IHC测定和确定样品是否包含表达VEGFR3的肿瘤细胞，其中IHC分 数为至少1+和VEGFR3表达的存在表明该患者可以除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于抗 癌治疗，该患者可能对抗血管生成治疗反应和/或该患者除由VEGF拮抗剂以外还由抗癌治 疗临床受益的增加的可能性。在一个实施方案中，IHC分数是至少2+。在再一个实施方案 中，IHC分数是3+。在一个实施方案中，VEGFR3的表达水平是mRNA表达水平。在另一个实 施方案中，增加的VEGFR3 mRNA表达水平在肿瘤细胞中。在某些实施方案中，本发明的方法可以进一步包括确定样品是否包含表达VEGF-D 的肿瘤细胞，其中VEGF-D表达的存在表明该患者可以除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于 抗癌治疗，该患者可能除对VEGF拮抗剂以外还对抗血管生成治疗反应和/或该患者除由 VEGF拮抗剂以外还由抗癌治疗临床受益的增加的可能性。在一个实施方案中，VEGF-D表达 是mRNA表达。在另一个实施方案中，VEGF-D mRNA表达的存在利用qRT-PCR或qPCR来确 定。在另一个实施方案中，VEGF-D表达是蛋白表达。在另一个实施方案中，VEGF-D蛋白表 达的存在利用IHC测定来确定。在一方面，本发明提供包括阵列的试剂盒，所述阵列包括能够与一种或多种基因 或与VEGF-A特异性杂交的多核苷酸，其中所述试剂盒还包括用于使用所述阵列确定更多 所述基因之一和VEGF-A的表达水平之间的比率从而预测患者对抗血管生成治疗或抗癌治 疗的反应性的说明书，其中样品中至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之 间比率与参照样品中相同基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之间比率相比的变化表示 该患者除受益于VEGF拮抗剂以外还可以受益于抗血管生成治疗或抗癌治疗。在某些实施方案中，样品中至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水平 之间的比率为0. 1以上表明该患者除受益于VEGF拮抗剂以外还可以受益于抗血管生成治 疗或抗癌治疗。在某些实施方案中，至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之 间的比率为0. 25以上表明该患者除受益于VEGF拮抗剂以外还可以受益于抗血管生成治疗 或抗癌治疗。在某些实施方案中，至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之间 的比率为0.5以上表明该患者除受益于VEGF拮抗剂以外还可以受益于抗血管生成治疗或 抗癌治疗。在某些实施方案中，至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之间的 比率为1以上表明该患者除受益于VEGF拮抗剂以外还可以受益于抗血管生成治疗或抗癌 治疗。在某些实施方案中，至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之间的比率 为2以上表明该患者除受益于VEGF拮抗剂以外还可以受益于抗血管生成治疗或抗癌治疗。在一方面，本发明提供一组化合物，其能够检测一种或多种基因的表达水平和 VEGF-A的表达水平，从而确定获自患者的样品中一种或多种基因的表达水平和VEGF-A的 表达水平之间的比率，其中所述样品中至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之间的比率与参照样品中相同基因的表达水平和VEGF-A的表达水平之间的比率相比的 变化表明该患者可以除受益于VEGF拮抗剂以外还受益于抗癌治疗。在某些实施方案中，所 述化合物是多核苷酸。在某些实施方案中，所述化合物是蛋白。在一个实施方案中，所述蛋 白是抗体。在一方面，本发明提供一组化合物，其能够检测一种或多种基因的表达水平和 VEGF-A的表达水平，从而确定获自患者的样品中一种或多种基因的表达水平和VEGF-A的 表达水平之间的比率，其中所述样品中至少一种所述基因的表达水平和VEGF-A的表达水 平之间的比率为0. 1以上表明该患者除受益于VEGF拮抗剂以外还可以受益于抗-血管生 成或抗癌治疗。在某些实施方案中，所述比率是0.25以上。在某些实施方案中，所述比率 是0.5以上。在某些实施方案中，所述比率是1以上。在某些实施方案中，所述比率是2以 上。在某些实施方案中，所述化合物是多核苷酸。在某些实施方案中，所述化合物是蛋白。 在一个实施方案中，所述蛋白是抗体。在某些实施方案中，诊断患者患有癌症。在某些实施方案中，所述癌症是 癌(carcinoma)，淋巴瘤(lymphoma)，母细胞瘤(blastoma)，肉瘤(sarcoma)，禾口白血 病(leukemia)。所述癌症的更具体实例包括但不仅限于，鳞状细胞癌(squamous cell cancer)，月市■ (lung cancer) (^llf舌小细Ifi月市■ (small—cell lung cancer),
月市癌(non-small cell lung cancer)，月市腺癌(adenocarcinoma of the lung)，禾口月市的 售舞状癌(squamous carcinoma of the lung))，月复月莫癌(cancer of the peritoneum), M M M ^ (hepatocellular cancer),胃 (gastric or stomach cancer)(^ll f舌胃 肠癌(gastrointestinal cancer)),胰腺癌(pancreatic cancer),成胶质细胞瘤 (glioblastoma),宫颈癌(cervical cancer)，卵巢癌(ovarian cancer)，月干癌(liver cancer)，膀胱癌(bladder cancer)，肝瘤(h 印 atoma)，乳腺癌(breast cancer)，结肠癌 (colon cancer),结肠直肠癌(colorectal cancer),子宫内膜癌或子宫癌(endometrial or uterine carcinoma),唾液腺癌(salivary gland carcinoma),肾癌或肾癌(kidney or renal cancer), H1Flg (liver cancer)，ft]"歹(prostate cancer)，夕卜阴· (vulval cancer),甲状腺癌(thyroid cancer),月干癌(hepatic carcinoma)禾口多种类型的头颈 癌(head and neck cancer)，以及B细胞淋巴瘤(B_cell lymphoma)(包括低度/滤泡 性非霍奇金淋巴瘤(low grade/follicular non-Hodgkin ‘ s lymphoma) (NHL)；小淋巴 细胞(SL)NHL(small Iymphocytic(SL)NHL)；中度 / 滤泡性 NHL(intermediate grade/ follicular NHL)；中度弥漫性 NHL (intermediate grade diffuse NHL);高度成免疫 细胞性 NHL (high grade immunoblastic NHL)；高度成淋巴细胞性 NHL (high grade lymphoblastic NHL) ； 1 ] ^Ifift NHL(high grade small non-cleaved cell NHL)；巨块型 NHL(bulky disease NHL)；套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma) ；AIDS 相 关淋巴瘤(AIDS-related lymphoma)；和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom' s Macroglobulinemia))；个曼个生淋巴细胞个生白血病(chronic lymphocytic leukemia) (CLL)； 急性成淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia) (ALL)；多毛细胞白血病 (Hairy cell leukemia)；个曼性成髓细胞白血病(chronic myeloblastic leukemia)；禾口 移植后淋巴增生性障碍(post-transplant lymphoproliferative disorder) (PTLD)，以 及与瘢痣病(Phakomat0ses)Jjai1 (edema)(诸如与脑瘤有关的水肿)或梅格斯氏综合征(Meigs' syndrome)有关的异常血管增殖。在某种实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌，非 小细胞肺癌，乳腺癌，成胶质细胞瘤或肾癌。在某些实施方案中，本发明的方法可以使用抗血管生成疗法进行，其包括施用抗 血管生成剂诸如，但不仅限于，VEGF-A或VEGF-A受体(例如，KDR受体或Flt-I受体)的抗 体或拮抗剂和VEGF-C的抗体或拮抗剂。在某些实施方案中，本发明的方法还包括除VEGF 拮抗剂以外施用一种或多种抗血管生成剂和/或抗癌试剂。在某些实施方案中，VEGF拮抗 剂是抗VEGF抗体。在一个实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐珠单抗。在某些实施方案中，除 VEGF拮抗剂以外施用的抗抗血管生成剂是VEGF-C的抗体或拮抗剂。在一个实施方案中，抗 血管生成剂是抗VEGF-C抗体。抗血管生成剂的另外的列表可以参见本文中的定义和血管 生成抑制剂部分。上述任何实施方案或其任意组合适用于本文中所述的发明的任何和全部方法。附图简述图IA和IB 显示肿瘤异种移植物模型的相对VEGF-A mRNA表达的图表。图IB显 示与图IA的相同的数据，但针对两种持家基因标准化并具有增加数量的肿瘤样品/模型。图2A和2B 显示肿瘤异种移植物模型的相对VEGF-C mRNA表达的图表。图2B显 示与图2A的相同的数据，但针对两种持家基因标准化并具有增加数量的肿瘤样品/模型。图3A和;3B 显示肿瘤异种移植物模型的相对VEGF-D mRNA表达的图表。图显 示与图3A的相同的数据，但针对两种持家基因标准化并具有增加数量的肿瘤样品/模型。图4A和4B 显示肿瘤异种移植物模型的相对VEGFR3 mRNA表达的图表。图4B显 示与图4A的相同的数据，但针对两种持家基因标准化并具有增加数量的肿瘤样品/模型。图5 显示肿瘤异种移植物模型的相对bFGF mRNA表达的图表。图6A和6B 显示功效增加和VEGF-C与VEGF-A相对mRNA表达比之间相关性的图。 图6B显示与图6A的相同的数据，但针对两种持家基因标准化，具有备选的△ % TGD计算， 和增加数量的肿瘤样品/模型。图7A和7B 显示功效增加和VEGF-D与VEGF-A相对mRNA表达比之间相关性的图。 图7B显示与图7A的相同的数据，但针对两种持家基因标准化，具有备选的△ % TGD计算， 和增加数量的肿瘤样品/模型。图8 显示功效增加和bFGF与VEGF-A相对mRNA表达比之间相关性的图。图9 显示功效和VEGF-C/VEGF-A及VEGF-D/VEGF-A相对mRNA表达比之间相关性 的图。

图10 显示功效和VEGF-C/VEGF-A及bFGF/VEGF-A相对mRNA表达比之间相关性 的图。图11 显示功效和VEGF-D/VEGF-A及bFGF/VEGF-A相对mRNA表达比之间相关性 的图。图12 人卵巢腺癌的VEGF-C IHC分数的图示。图13 :H460和AM9肿瘤的VEGF-C IHC染色切片。图14A和14B 显示功效增加和VEGF-C IHC分数之间相关性的图。图14B显示与 图14A的相同的数据，但具有备选的Δ % TCD计算。发明详述
本文所述或参考的技术和方法通常是充分了解的，并且由本领域技术人员使用常 规方法一般应用，如例如，在下述参考文献中所述广泛使用的方法Sambrook等.，分子克 隆实验室手册(Molecular Cloning =A Laboratory Manual)，第 3版(2001)冷泉港实验室 出版社，冷泉港，N. Y.在分子生物学中目前使用的方法(⑶RRENT PROTOCOLS IN MOLE⑶LAR BIOLOGY) (F. Μ. Ausubel，等.编辑，(2003))；酶学方法(Methods IN ENZYM0L0GY)系列 (学术出版社公司):PCR 2 实用方法(PCR 2 :A PRACTICAL APPROACH) (Μ. J. MacPherson, B. D. Hames 和 G. R. Taylor 编辑(1995))，Harlow 和 Lane,编辑(1988)抗体，实验室手 册，和动物细胞培养(ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE) (R. I. Freshney，编辑(1987))；寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis) (Μ. J. Gait, 编辑，1984)；分子生物学方法(Methods in Molecular Biology)，Humana出版社；细胞生物 学实验室笔记(Cell Biology :A Laboratory Notebook) (J. Ε. Cellis，编辑，1998)学术出 版社；动物细胞培养(Animal Cell Culture) (R. I. Freshney)，编辑，1987)；细胞和组织培 养介绍(Introduction to Cell and Tissue Culture) (J. P. Mather禾口P. E. Roberts, 1998) Plenum出版社；细胞和组织培养实验室方法(Cell and Tissue Culture laboratory Procedures) (A. Doyle, J. B. Griffiths，和 D. G. Newell，编辑，1993-8) J. Wiley 和 Sons ；实 验室免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology) (D. Μ· Weir 禾口 C. C. Blackwel 1， 编辑)；哺乳动物细胞基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells) (J. M. Miller 和 Μ. P. Calos,编辑，1987) ；PCR 聚合酶链式反应(PCR :The Polymerase Chain Reaction), (Mullis 等.，编辑，1994)；免疫学目前使用的方法(Current Protocols in Immunology) (J. Ε. Coligan等.，编辑，1991)；分子生物学中的简便方法(Short Protocols in Molecular Biology) (Wiley 禾口 Sons, 1999)；免疫生物学(Immunobiology) (C. A. Janeway 和 P. Travers, 1997)；抗体(Antibodies) (P. Finch, 1997)；抗体实用方 法(Antibodies :A Practical Approach)(D. Catty. ， H 车t， IRL 出片反 ±,1988-1989)； 单克隆抗体实用方法(Monoclonal Antibodies :A Practical Approach(P. Shepherd 和C. Dean，编辑，牛津大学出版社，2000)；使用抗体实验室手册(Using Antibodies A Laboratory Manual) (Ε. Harlow 和 D. Lane (冷泉港实验室出版社，1999)；抗体(The Antibodies) (Μ. Zanetti 和 J. D. Capra，编辑，Harwood 学术出版社，1995)；和癌症肿瘤学 的原理和实践(Cancer principles and Practice of Oncology) (V. T. DeVita 等·，编辑， J. B. Lippincott 公司，1993)。除非另有说明，本文所用的技术和科技术语具有与本发明所属领域技术人员通常 所知相同的含义。Singleton等.，微生物和分子生物学字典(Dictionary of Microbiology and Molecular Biology)，第 2 版，J. Wiley & Sons (纽约，N. Y. 1994)，和 March，高级有 机化学反应、机制禾口结构(Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Mructure)，第 4 版，John Wiley & Sons (New York, N. Y. 1992)，向技术人员提供了本申请 所用的许多术语的一般指导。在本文提及的所有参考文献，包括专利申请和出版物，完整结 合在本文作为参考。^X出于解释本说明书的目的，应用下面的定义，并且只要适合，以单数使用的术语也 包括复数形式，并且反之亦然。当在下面提出的任何定义与作为参考结合在本文中的任何文献冲突时，以下面的定义为准。“个体”、“受试者”、或“患者”是脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物是哺乳动 物。哺乳动物包括，但不仅限于，家畜(诸如牛)，运动型动物，宠物(诸如猫、狗和马)，灵 长类动物，小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物是人。术语“样品”或“测试样品”用于本文中时，指从目标受试者获得或得到的组合物， 其包含意欲例如基于物理、生化、化学和/或生理特征表征和/或鉴定的细胞和/或其它分 子实体。在一个实施方案中，该定义包括血液和生物起源的其它液体样品，和组织样品如活 组织检查样本或组织培养物或来自其中的细胞。组织样品的来源可以是来自新鲜、冷冻和/ 或保存的器官或组织样品或活组织检查样品或抽吸物的实体组织；血液或任何血液成分； 体液；和来自受试者妊娠或发育的任何时候的细胞，或血浆。在另一个实施方案中，该定义包括在获得它们后已经以任何方式进行处理的生物 学样品，所述方式如通过用试剂处理，溶解，或富集某些成分，如蛋白或多核苷酸，或包埋在 半固体或固体基质中用于切片目的。在本文中目的，组织样品的“切片”意为组织样品的单 一部分或块，例如自组织样品切下的组织或细胞的薄切片。样品包括，但不限于，原代或培养的细胞或细胞系，细胞上清液，细胞裂解物，血小 板，血清，血浆，玻璃体液(vitreous fluid)，淋巴液，滑液，滤泡液，精液，羊膜液，乳，全血， 尿液，脑脊液，口水(saliva)，痰(sputum)，泪液，汗液，粘液，肿瘤裂解物，和组织培养基， 以及组织提取物如勻化的组织，肿瘤组织，和细胞提取物。在一个实施方案中，所述样品是临床样品。在另一个实施方案中，所述样品用在诊 断测定中。在一些实施方案中，所述样品获自原代或转移肿瘤。组织活组织检查通常用于 获得肿瘤组织的代表块。备选地，肿瘤细胞可以以已知或被认为包含目的肿瘤细胞的组织 或流体形式间接获得。例如，肺癌病灶的样品可以通过切除术、支气管镜检、细针抽吸活检 (fine needle aspiration)、支气管刷检(bronchial brushings)获得,或来自痰、胸膜液 或血液。在一个实施方案中，样品获自抗血管生成疗法之前的受试者或患者。在另一个实 施方案中，样品获自在VEGF拮抗剂疗法之前的受试者或患者。在另一个实施方案中，样品 获自抗-VEGF抗体疗法之前的受试者或患者。在某些实施方案中，样品在癌症已经转移后 获得。“参照样品”用于本文时，指用于比较目的的任何样品、标准或水平。在一个实施方 案中，参照样品获自相同受试者或患者的身体的健康和/或非患病部分。在另一个实施方 案中，参照样品获自相同受试者或患者的身体的未处理的组织和/或细胞。在某些实施方案中，参照样品是在与获得测试样品的时间不同的一个或多个时间 点获得的来自相同受试者或患者的单一样品或组合的多个样品。例如，参照样品在比获得 测试样品时更早的时间点从相同的受试者或患者获得。如果参照样品在开始诊断癌症时获 得，并且测试样品随后在癌症已经转移时获得，所述参照样品可以是有用的。在一个实施方案中，参照样品获自非-受试者或患者的个体的身体的健康和/或 非患病部分。在另一个实施方案中，参照样品获自非-受试者或患者的个体的身体未处理 的组织和/或细胞部分。在某些实施方案中，参照样品包括获自非-受试者或患者的一个或多个个体，在上述术语“样品”下定义的所有类型的生物学样品。在某些实施方案中，参照样品获自 非-受试者或患者的患有癌症的一个或多个个体。在某些实施方案中，参照样品是来自非-受试者或患者的一个或多个健康个体的 合并的多个样品。在某些实施方案中，参照样品是来自非-受试者或患者的一个或多个患 有癌症的个体的合并的多个样品。在某些实施方案中，参照样品是来自非-受试者或患者 的一个或多个个体的正常组织的合并的RNA样品。在某些实施方案中，参照样品是来自 非-受试者或患者的一个或多个患有癌症的个体肿瘤组织的合并的RNA样品。基因或生物标志的表达水平/量可以基于本领域已知的任何适合的标准定性和/ 或定量地确定，包括但不限于mRNA，cDNA，蛋白，蛋白质片段和/或基因拷贝数。在某些实 施方案中，与在第二样品中的表达/量比较，在第一样品中的基因或生物标志的表达/量增 加。在某些实施方案中，与在第二样品中的表达/量比较，在第一样品中的基因或生物标志 的表达/量减少。在某些实施方案中，所述第二样品是参照样品。在某些实施方案中，术语“增加”指与参照样品比较，通过标准的本领域已知方法 如本文提及的那些检测的在蛋白水平或核酸水平上的5 %，10 %，20 %，25 %，30 %，40 %， 50%，60%，70%，80%，85%，90%，95%，96%，97%，98%，99% 以上的总的增加。在某些实 施方案中，术语增加指基因或生物标志的表达水平/量在样品中的增加，其中增加是参照 样品中各个基因或生物标志的表达水平/量的至少约1. IX，1. 2X，1. 3X，1. 4X，1. 5X，1. 6X， 1. 7X,1. 75X,1. 8X,1. 9X,2X,3X,4X,5X,6X,7X,8X,9X,10X,25X,50X,75X,或 IOOX0在某些实施方案中，术语“减少”在本文指与参照样品比较，通过标准的本领域 已知方法如本文所述的那些检测的、在蛋白或核酸水平上的5 %，10 %，20 %，25 %，30 %， 40%，50%，60%，70%，80%，85%，90%，95%，96%，97%，98%，99% 以上的总的减少。在 某些实施方案中，术语减少指样品中基因或生物标志的表达水平/量的减少，其中减少是 参照样品中各个基因或生物标志的表达水平/量的至少约0. 9X，0. 8X，0. 7X，0. 6X，0. 5X， 0. 4X, 0. 3X, 0. 2X, 0. IX，0. 05X,或 0. 01X。用于确定基因的表达水平/量的另外的公开内容在本文中本发明的方法下描述。“比率”用于本文中时，指表示一种量相对于另一种量的比例量或量级的量。比率 在它们涉及相同尺度(dimension)的量时通常无单位。分数和百分比是比率的两种具体应 用。分数涉及部分(分子)和整体(分母)，而百分比表示份数/100份。用于确定样品中和参照样品中基因的表达水平/量和VEGF-A的表达水平之间的 比率或该比率变化的另外的公开内容在本文中本发明的方法下描述。“检测”包括任何检测方式，包括直接和间接检测。在某些实施方案中，所谓“相关(correlate) ”或“相关(correlating) ”意味着以 任何方式比较第一分析或流程的性能和/或结果与第二分析或流程的性能和/或结果。例 如，可以使用第一分析或流程的结果进行第二流程和/或可以使用第一分析或流程的结果 来确定是否应该进行第二分析或流程。关于基因表达分析或流程的实施方案，可以使用基 因表达分析或流程的结果来确定是否应该进行具体的治疗方案。词语“标记”当用于本文时，指直接或间接与试剂如核酸探针或抗体缀合或融合并 且有利于检测与其缀合或融合的试剂的化合物或组合物。所述标记本身可以是可检测的 (例如放射性同位素标记或荧光标记)，或在酶促标记的情形中，可以催化可检测的底物化合物或组合物的化学变化。“小分子”在本文被定义为具有低于约500道尔顿的分子量。“多核苷酸”或“核酸”可以在本文互换使用，指任何长度的核苷酸的聚合物，并包 括DNA和RNA。所述核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基，和/ 或它们的类似物，或可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应结合到聚合物中的任何底 物。多核苷酸可以包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和它们的类似物。“寡核苷酸，”用于本文时，一般指短的、一般为单链的，一般为合成的多核苷酸，其 一般，但不是必需地少于约200个核苷酸的长度。术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”不相互 排斥。上面关于多核苷酸的描述等同地并且充分地可应用于寡核苷酸。在某些实施方案中，多核苷酸能够在多种严格性条件下与基因特异性杂交。杂交 反应的“严格性”是本领域中技术人员可以容易确定的，且通常是取决于探针长度、洗涤温 度、和盐浓度的经验计算。一般地，较长的探针需要较高的温度来进行适当退火，而较短的 探针需要较低温度。杂交通常取决于当互补链存在于低于它们的融化温度的环境中时，变 性的DNA再退火的能力。探针和可杂交序列之间的所需同源性程度越高，则可以使用的相 对温度越高。结果，遵循较高相对温度会倾向于使得反应条件更严格，而较低温度使得反应 条件更不严格。关于杂交反应严格性的另外的详细信息和解释参见Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology ( % zF Φ. ^ 白勺 Μ^ Τ ^), Wiley Interscience Publishers, (1995)。严格条件或高严格性条件可以通过以下来确定(1)使用低离子强度和高温来洗 涤，例如例如0. 015M氯化钠/0. 0015M柠檬酸钠/0. 1 %十二烷基硫酸钠，在50°C ； (2)在杂 交过程中使用变性剂，诸如甲酰胺，例如，具有0. 牛血清清蛋白/0. 1% Ficoll/0. 聚 乙烯吡咯烷酮/具有750mM氯化钠，75mM柠檬酸钠的pH 6. 5的50mM磷酸钠缓冲液的50% (ν/ν)甲酰胺，在42°C ；或⑶使用50%甲酰胺，5x SSC(0. 75Μ NaCl，0. 075Μ柠檬酸钠)， 50mM磷酸钠(pH 6. 8)，0. 焦磷酸钠，5x Denhardt溶液，超声波处理的鲑精DNA (50 μ g/ ml)，0. 1%505，和10%硫酸葡聚糖，在42°〇，其在0.& SSC (氯化钠/柠檬酸钠)中以42°C 洗涤和在50%甲酰胺中以55°C洗涤，随后在55°C进行由含有EDTA的0. Ix SSC组成的高严 格性洗涤。适度严格条件可以如所述通过Sambrook 等，Molecular CloninR :A Laboratory Manual (分子克隆实验室手册)，New York (纽约)Cold Spring Harbor Press (冷泉港 出版社)，1989来确定，并包括严格性低于上述的洗涤溶液和杂交条件(例如，温度、离子强 度和％ SDQ。适度严格条件的实例是在包含以下各项的溶液中，在37°C过夜温育20%甲 酰胺，5x SSC(150mM NaCl，15mM 柠檬酸三钠)，50mM 磷酸钠(pH 7. 6)，5x Denhardt 溶液， 10%硫酸葡聚糖，和20mg/ml变性的剪切鲑精DNA，随后在Ix SSC中，以约37_50°C洗涤滤 器。技术人员应该认识到如何将温度、离子强度等调节为对适应因子诸如探针长度等是必 要的。“分离的”核酸分子是这样的核酸分子，其从至少一种污染核酸分子中鉴定和分 离，核酸分子与所述污染核酸分子一般在多肽核酸的天然来源中缔合。分离的核酸分子不 同于其中其以天然发现的形式或设置。因此，分离的核酸分子与存在于天然细胞中的核酸 分子区分开来。然而，分离的核酸分子包括包含在正常表达多肽的细胞中的核酸分子，其中例如，核酸分子以不同于天然细胞的染色体定位定位在染色体上。“引物”通常为短的单链多核苷酸，一般具有游离的3' -OH基团，其通过与靶序列 杂交结合于可能存在于目的样品中的靶标，并且随后促进与靶标互补的多核苷酸的聚合。术语“持家基因”指编码其活性对于维持细胞功能是必要的蛋白的一组基因。这 些基因典型地在所有的细胞类型中类似地表达。在某些实施方案中，使用一种或多种持家 基因来确定基因的相对表达水平。术语“生物标志”用于本文时一般指，这样的分子，其包括，基因、蛋白、碳水化合物 结构或糖脂，所述分子在哺乳动物组织或细胞中或在其上的表达可以通过标准方法(或本 文公开的方法)检测，并且是对哺乳动物细胞或组织对基于抑制血管生成的治疗方案的敏 感性的预测、诊断和/或预后，所述基于抑制血管生成的治疗方案，例如抗-血管生成药剂 如VEGF-特异性抑制剂。在某些实施方案中，生物标志是基因。在某些实施方案中，确定所 述生物标志的表达高于或低于针对参照样品观察到的。所述生物标志的表达可以利用高通 量多种免疫测定法诸如可商购自Rules Based Medicine, Inc.或Meso Scale Discovery 的那些来确定。生物标志的表达还可以利用例如，PCR或FACS测定，免疫组织化学测定或 基于基因芯片的测定来确定。术语“阵列”或“微阵列”，用于本文时，指可杂交的阵列元件，优选地多核苷酸探针 (例如，寡核苷酸)在基底上的有序排列。基底可以是固体基底，如玻璃载玻片，或半固体基 底，如硝化纤维素膜。核苷酸序列可以是DNA、RNA或其任何变换。“靶基因”、“靶生物标志”、“靶序列”、“靶核酸”或“靶蛋白”用于本文中时，是目的
多核苷酸或蛋白，需要对其检测。一般地，“模板”用于本文中时，是含有靶核苷酸序列的多 核苷酸。在一些实例中，术语“靶序列”、“模板DNA”、“模板多核苷酸”、“靶核酸”、“靶多核苷 酸”及其变体可交换使用。“扩增”用于本文中时，一般指生成所需序列的多个拷贝的过程。“多个拷贝”意指 至少2个拷贝。“拷贝”不必然意指与模板序列互补性或同一性的完美序列。例如，拷贝可 以包括核苷酸类似物诸如脱氧肌苷，有意的序列改变(诸如通过引物引入的序列改变，其 包括可与模板杂交但不互补的序列)，和/或在扩增过程中发生的序列错误。“天然序列”多肽包含与来自自然的多肽具有相同的氨基酸序列的多肽。因此，天 然序列多肽可以具有来自任何哺乳动物的天然存在的多肽的氨基酸序列。所述天然序列多 肽可以从自然分离或可以通过重组或合成方式产生。术语“天然序列”多肽具体地包括多 肽的天然存在的截短或分泌形式(例如，细胞外结构域序列)，天然存在的变体形式(例如， 可变剪接形式)和多肽的天然存在的等位基因变体。“分离的”多肽或“分离的”抗体指已经鉴定且与其天然环境的成分分离和/或从其 回收的多肽或抗体。多肽的天然环境的污染性成分指将会干扰其诊断或治疗用途的物质， 可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在某些实施方案中，将多肽纯 化至(1)根据Lowry法的测定，多肽重量超过95%或重量超过99%，(2)足以通过使用转 杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或C3)根据使用考马 斯蓝或银染色的还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然多肽的天然环境的 至少一种成分不会存在，那么分离的多肽包括重组细胞内的原位多肽。然而，分离的多肽通 常通过至少一个纯化步骤来制备。
多肽“变体”指与天然序列多肽具有至少约80%氨基酸序列同一性的生物学活性 多肽。此类变体包括例如其中在多肽的N末端或C末端添加或删除一个或多个氨基酸残基 的多肽。通常，变体将会与天然序列多肽具有至少约80%氨基酸序列同一性，更优选至少约 90%氨基酸序列同一性，和甚至更优选至少约95%氨基酸序列同一性。术语“抗体”以最广义使用，具体地涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克 隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学 活性。术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成 群体的各个抗体是相同的，除了可以以极小量存在的可能突变(例如天然存在突变)夕卜。 因此，修饰语“单克隆”表明抗体不是不同抗体混合物的特征。在某些实施方案中，所述单 克隆抗体典型地包括包含结合靶标的多肽序列的抗体，其中靶标结合多肽序列是通过包括 从众多多肽序列中选择单一靶标结合多肽序列在内的过程得到的。例如，选择方法可以是 从众多克隆(诸如杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆的集合)中选择独特克隆。应 当理解，所选择的靶标结合序列可进一步改变，例如为了提高对靶标的亲和性、将靶标结合 序列人源化、提高其在细胞培养物中的产量、降低其在体内的免疫原性、创建多特异性抗体 等，而且包含改变后的靶标结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型地包含针对 不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每种单克 隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除它们的特异性之外，单克隆抗体制备物的优点在于它 们典型地未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”表明抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通 过任何特定方法来生产抗体。例如，依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成， 包括例如杂交瘤法(例如Kohler 和Milstein，自然(Nature) 256 :495-97(1975) ；Hongo 等， 杂交瘤(Hybridoma)，14 (3) =253-260(1995) ；Harlow 等，抗体实验室手册(Antibodies A Laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社，第2版.1988 ;Hammerling等，于单克隆 抗体禾口 T-细胞杂交瘤(Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas)，563—681， Elsevier, N. Y.，1981)、重组DNA法(参见例如美国专利No. 4，816，567)、噬菌体展示技 术(参见例如Clackson等，自然(Nature) 352 :624-628 (1991) ；Marks等，分子生物学杂 志(J. Mol. Biol.) 222 :581-597 (1992) ；Sidhu 等，分子生物学杂志(J. Mol. Biol.) 338 (2) 299-310(2004) ；Lee 等，分子生物学杂志(J. Mol. Biol.) 340 (5) :1073-1093(2004)； Fellouse，美国国家科学院学报(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) 101 (34) :12467-12472(2004)； 及 Lee 等，免疫学方法杂志(J. Immunol. Methods) 284 (1-2) 119-132 Q004))、及用于在具 有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人 样抗体的技术(参见例如 WO 1998/24893 ；WO 1996/34096 ；WO 1996/33735 ；W01991/10741 ； Jakobovits 等，美国国家科学院学报(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) 90 :2551(1993)； Jakobovits 等，自然(Nature) 362 :255-258 (1993) ；Bruggemann 等，Year in Immuno. 7 33 (1993)；美国专禾Ij No. 5，545，807 ；5，545，806 ；5，569，825 ；5，625，126 ；5，633，425 和 5，661，016 ；Marks 等，生物 / 技术(Bio/technology) 10 :779-783 (1992) ；Lonberg 等，自 然(Nature) 368 :856-859(1994) ；Morrison,自然(Nature) 368 :812-813 (1994) ；Fishwild 等，自然生物技术(Nature Biotechnol.) 14 :845-851 (1996) ；Neuberger,自然生物技术(Nature Biotechnol.) 14 :826(1996)；及 Lonberg 禾口 Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93(1995))。单克隆抗体在本文中具体地包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍 生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部 分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此 类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(参见，例如美国专利No. 4，816，567和 Morrison 等，美国国家科学院学报(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) USA 81 :6851-6855 (1984))。 嵌合抗体包括PRIMATIZED 抗体，其中该抗体的抗原结合区源自通过，例如，使用目的抗原 免疫短尾猴(macaque monkey)产生的抗体。除非另有说明，表述“多价抗体”表示包含三个或更多抗原结合位点的抗体。在某 种实施方案中，多价抗体被改造成具有三个或更多抗原结合位点，而且一般不是天然序列 IgM或IgA抗体。非人(例如鼠)抗体的“人源化式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序 列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的 HVR残基用具有期望特异性、亲和性和/或能力的非人物种(供体抗体)(诸如小鼠、大鼠、 兔或非人灵长类动物)的HVR的残基替换。在有些情况中，将人免疫球蛋白的FR残基用相 应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有发现的残 基。可以进行这些修饰来进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含基本上全部 的至少一个、典型地两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋 白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含 至少部分的免疫球蛋白恒定区(Fe)，典型地是人免疫球蛋白的。更多细节参见例如Jones 等，自然(Nature) 321 :522-525(1986) ；Riechmann 等，自然(Nature) 332 :323-329(1988)； 及 Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593-596(1992)。还可参见例如 Vaswani 禾口 Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol.1 :105-115(1998) ；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23 :1035-1038(1995) ；Hurle 禾口 Gross，Curr. Op. Biotech. 5 :428-433(1994)；及美国专利 号 6，982，321 和 7，087，409。“人抗体”指这样的抗体，其具有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序 列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术产生。人抗体的这种定义明确排除 包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术，包括噬菌体 展示文库来生成。Hoogenboom和Winter，分子生物学杂志(J. Mol. Biol.) 227 =381 (1991)； Marks et al. ,J. Mol. Biol.，222 :581 (1991)。制备人单克隆抗体还可以利用的是Cole等， 单克隆抗体禾口癌症治疗(Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy), Alan R. Liss, p. 77 (1985) ；Boerner 等，免疫学杂志(J. Immunol.) 147 (1) :86-95 (1991)中所述的方 法。还可参见 van Dijk 和 van de Winkel，Curr. Opin. Pharmacol.(当前药理学观点)， 5 :368-74(2001)。人抗体可以如下制备，即将抗原施用于转基因动物，其经修饰而产生应 答于抗原激发的此类抗体，但是其内源基因座已经失去能力，例如经免疫的异种移植小鼠 (xenomice)(参见例如美国专利号6，075，181和6，150，584，关于XEN0M0USE 技术)。还 参见例如 Li 等，美国国家科学院学报(Proc. Natl. Acad. Sci. USA)，103 :3557-3562 (2006)， 关于经人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体。
抗体的“可变区”或“可变结构域”指抗体重链或轻链的氨基端结构域。重链的可 变结构域可以称为“VH”。轻链的可变结构域可以称为“VL”。这些结构域一般是抗体最可 变的部分并包含抗原结合位点。术语“可变的”指可变结构域中的某些部分在抗体间序列差异广泛且用于每种特 定抗体对其特定抗原的结合和特异性的事实。然而，变异性并非均勻分布于抗体的整个可 变结构域。它集中于轻链和重链可变结构域中称作高变区(HVRs)的三个区段。可变结 构域中更加高度保守的部分被称作构架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含 四个FR区，它们大多采取折叠构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成折 叠结构一部分的三个HVRs连接。每条链中的HVRs通过FR区非常接近的保持在一起，并 与另一条链的HVRs —起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等，免疫目的蛋白 序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest),第 5 版，国家健康研究所 (National Institute of Health) ,Bethesda,MD. (1991))。恒定结构域不直接参与抗体与 抗原的结合，但展现出多种效应子功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞毒性中的参与。“抗体片段”包括完整抗体的一部分，优选包含其抗原结合区。抗体片段的实例包 Fab, Fab'，F(ab' )2，和Fv片段；双价抗体(diabodies)；线性抗体；单链抗体分子；和 由抗体片段形成的多特异性抗体。“Fv”是包含完整抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施方案中，双链Fv种类 由处于紧密非共价结合的一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在单链Fv(SCFV) 种类中，一个重链和一个轻链可变结构域可以通过灵活的肽连接体来共价连接，从而使轻 链和重链可以以与双链Fv种类中类似的“二聚体”结构结合。在该构型中，各可变结构域 的三个HVR相互作用以定义VH-VL 二聚体表面上的抗原结合位点。总体上，6个HVR将抗原 结合特异性赋予抗体。然而，甚至单可变结构域(或仅包括3个特异于抗原的HVR的Fv的 一半)具有识别和结合抗原的能力，尽管处于低于完整结合位点的亲和性。Fab片段包含重链和轻链可变结构域并且还包含轻链的恒定结构域和重链的第一 恒定结构域(CHl)。Fab’片段与Fab片段的区别在于在重链CHl结构域的羧基端加入少数 残基，包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中关于Fab’的命名， 其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带游离的硫醇基。F(ab’)2抗体片段最初作为Fab’片 段对生成，所述Fab’片段对之间具有铰链半胱氨酸。还已知抗体片段的其他化学偶联。术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变结构域中序列上高度 可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR:三个在VH中(HI、 H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多 样性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精细特异性中发挥独特作用。参见例如Xu等免 疫性(Immunity) 13 :37-45(2000) Johnson 和 Wu 于分子生物学中的方法(Methods in Molecular Biology) 248 :1-25 (Lo，编辑，Human 出版社，Totowa，NJ，2003)。事实上，仅由重 链组成的天然存在骆驼科动物抗体(camelid antibody)在缺乏轻链时是有功能的且稳定 的。参见例如 Hamers-Casterman 等自然(Nature) 363 :446-448 (199 ；Sheriff 等自然结 构生物学(Nature Struct. Biol.) 3 :733-736 (1996)。“构架区”或“FR”残基指除本文中所定义的HVR残基之外的那些可变结构域残基。“亲和力成熟的”抗体指在抗体的一个或多个HVR中具有一处或多处改变、导致该抗体对抗原的亲和性与没有这些改变的母体抗体相比有所提高的抗体。在一个实 施方案中，亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和性。亲和 力成熟的抗体可以利用本领域已知某些方法来生成。例如Marks等，生物/技术(Bio/ Technology) 10 :779-783(1992)记载了通过VH和VL结构域改组进行的亲和性成熟。以下 文献记载了 HVR和/或构架残基的随机诱变例如Barbas等，美国国家科学院学报(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) 91 :3809-3813 (1994) ；Schier 等，基因(Gene) 169 147-155 (1995)； Yelton 等，免疫学杂志(J. Immunol.) 155 :1994-2004(1995) Jackson 等，免疫学杂志 (J. Immunol.) 154(7) :3310-9(1995)；及 Hawkins 等，分子生物学杂志(J. Mol. Biol.) 226 889-896(1992)。术语“Fe区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和 变体Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常定义为 Fc区自Cy位置的氨基酸残基或与自ftx)230至其羧基端的一段序列。Fc区的C-末端 赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)可以例如在生产或纯化抗体的过程中去除，或者通 过对编码抗体重链的核酸进行重组工程改造而去除。因而，完整抗体的组合物可包括所有 K447残基都被去除的抗体群、无一 K447残基被去除的抗体群、以及含有有和无K447残基的 抗体混合物的抗体群。“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的“效应子功能”。例示性的“效应子功能”包 括Clq结合；⑶C ；Fc受体结合；ADCC ；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)下 调等。此类效应子功能一般要求Fc区与结合域(例如抗体可变结构域)结合，而且可使用 如例如本文中的定义中所公开的多种测定法来评估。“天然序列Fc区”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。 天然序列人Fc区包括天然序列人IgGl Fc区(非A和A同种异型)、天然序列人IgG2 Fc 区、天然序列人IgG3 Fc区、及天然序列人IgG4 Fc区，及其天然存在变体。“变体Fc区”包含由于至少一处氨基酸修饰，优选一个或多个氨基酸置换而与天 然序列Fc区有所不同的氨基酸序列。优选地，变体Fc区具有与天然序列Fc区或与母体多 肽的Fc区相比至少一处氨基酸置换，例如在天然序列Fc区中或在母体多肽的Fc区中具有 约1处至约10处氨基酸置换，优选约1处至约5处氨基酸置换。优选的是，变体Fc区在本 文中将与天然序列Fc区和/或母体多肽的Fc区具有至少约80%同源性，和最优选至少约 90%同源性，更优选至少约95%同源性。“Fe受体”或“FcR”描述结合抗体Fc区的受体。在有些实施方案中，FcR是天然 人FcR。在有些实施方案中，FcR是结合IgG抗体的FcR (γ受体)，包括Fc γ RI、Fc γ RII 和RYRIII亚类的受体，包括那些受体的等位基因变体和可变剪接形式。FcyRII受 体包括FcyRIIA( “活化受体”)和Fc y RIIB ( “抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序 列，区别主要在于其胞质结构域。活化受体Fc y RIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基 于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体Fc γ RIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于 酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见例如，Daeron，免疫学年评(Annu. Rev. Immunol). 15 203-234(1997)) ο FcR 的综述参见例如 Ravetch 和 Kinet,免疫学年评(Annu. Rev. Immunol.)9 :457-492(1991) ；Capel 等，免疫方法(Immunomethods)4 :25-34(1994)；及 de Haas等，实验室临床医学杂志(J. Lab. Clin. Med. 126) :330-41 (1995)。术语“FcR”在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。术语“Fe受体”或“FcR”还包括新生儿受体，FcRn,它负责将母体IgG转移 给胎儿(Guyer等，免疫学杂志(J. Immunol. ) 117 =587(1976)和Kim等，免疫学杂志 (J. Immunol.) 24 :249(1994))并调节免疫球蛋白的体内稳态。测量对Fcfoi的结合的方法是 已知的(参见例如 Ghetie 和 Ward.，今日免疫学(Immunol. Today) 18(12) :592-598(1997)； Ghetie 等，自然生物技术(Nature Biotechnology), 15(7) :637-640(1997) ；Hinton 等，生 物化学杂志(J. Biol. Chem. )279(8) :6213-6216(2004) ；WO 2004/92219 (Hinton 等))。可测定人Fcfoi高亲和性结合多肽与人Fcfoi的体内结合和血清半衰期，例如在表 达人Fcfoi的转基因小鼠或经转染人细胞系中，或者在施用了具有变异Fc区的多肽的灵长 类动物中。W000/42072 (Presta)记载了对FcR的结合提高或降低的抗体变体。还可参见例 如 Shields 等，生物化学杂志(J. Biol. Chem. )9(2) :6591-6604(2001) “人效应细胞”指表达一种或多种FcR并行使效应子功能的白细胞。在某些实施方 案中，该细胞至少表达Fc YRIII并行使ADCC效应子功能。介导ADCC的人白细胞的实例包 括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细 胞。效应细胞可以从天然来源，例如从血液分离。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指其中结合到某些细胞毒性细 胞(例如NK细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上的分泌型Ig使 得这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细 胞的细胞毒性形式。介导ADCC的主要细胞即NK细胞只表达Fc y RIII，而单核细胞表达 Fc YRI、Fc YRII 禾口 Fc γ RIII。Ravetch 禾口 Kinet，免疫学年评(Annu. Rev. Immunol.) 9 457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估感兴趣分子的ADCC 活性，可进行体外ADCC测定法，诸如美国专利号5，500, 362或5，821，337或美国专利号 6, 737, 056 (Presta)中所记载的。可用于此类测定法的效应细胞包括PBMC和NK细胞。备 选地/另外地，可在体内评估目的分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynes等， PNAS (USA) 95 :652-656(1998)中所披露的。“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”指存在补体时对靶细胞的溶解。经典补体途径 的激活是由补体系统第一组分(Clq)结合抗体(适宜亚类的)起始的，该抗体已结合至其 关联抗原。为了评估补体激活，可进行CDC测定法，例如如(iazzano-SantOTo等，免疫方法 杂志(J. Immunol. Methods) 202 :163(1996)中所记载的。具有更改的Fc区氨基酸序列(具 有变异Fc区的多肽)及提高或降低的Clq结合能力的多肽变体记载于例如美国专利号 6，194，551B1 和 W01999/51642。还可参见例如 Idusogie 等，免疫学杂志(J. Immunol.) 164 4178-4184(2000)。术语“包含Fc区的抗体”指包括Fc区的抗体。Fc区的C端赖氨酸(根据EU编号 系统的残基447)可以在例如，抗体纯化过程中或通过重组改造编码该抗体的核酸去除。因 此，根据本发明包括具有Fc区的抗体的组合物可以包括具有K447的抗体，K447全部去除 的抗体，或具有和不具有K447残基的抗体的混合物。“阻断性”抗体或“拮抗性”抗体指抑制或降低其所结合的抗原的生物学活性的抗 体。例如，VEGF特异性拮抗性抗体结合VEGF并抑制VEGF诱导血管内皮细胞增殖或血管通 透性的能力。某些阻断性抗体或拮抗性抗体充分地或完全地抑制抗原的生物学活性。
术语“VEGF”或“VEGF-A”用于本文中时，指165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因 子及相关的121个、189个和206个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如Leung等(1989) 科学(Science)，246 :1306 ；和 Houck 等(1991)分子内分泌学(Mol. Endocrin.) ,5 :1806 所 记载的，及其天然存在等位基因形式和加工形式。术语“VEGF”还指来自非人物种诸如小鼠、 大鼠或灵长类动物的VEGF。有时，来自特定物种的VEGF用如下术语表示，诸如hVEGF表示 人VEGF或mVEGF表示鼠VEGF，等。术语“ VEGF”还用于指包含165个氨基酸的人血管内皮 细胞生长因子的氨基酸第8-109位或第1-109位的多肽截短形式。任何所述VEGF形式的参 考符号在本申请中，例如，通过“VEGF(8-109)，，，"VEGF(1-109) ”或"VEGF165”来识别。“截短 的”天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示的编号。例如，截短的天然VEGF中的 第17位氨基酸(甲硫氨酸)也是天然VEGF中的第17位(甲硫氨酸)。截短的天然VEGF 具有与天然VEGF相当的对KDR和Flt-I受体的结合亲和性。"VEGF生物学活性”包括与任何VEGF受体的结合或任何VEGF信号传导活性如调节 正常和异常血管生成和血管发生(Ferrara和Davis-Smyth (1997)内分泌综述(Endocrine Rev.) 18 4-25 ；Ferrara(1999)分子医学杂志(J. Mol. Med.) 77 :527-543)；促进胚胎血管 发生和血管生成(Carmeliet 等· (1996)自然(Nature) 380 :435-439 ；Ferrara 等· (1996) 自然(Nature) 380 :439-442)；和调节雌性生殖道的周期性血管增殖，以及骨生长和软骨形 成(Ferrara 等.(1998)自然医学(Nature Med.) 4 :336-340 ；Gerber 等.(1999)自然医学 (Nature Med.) 5 =623-628) 0除了作为血管生成和血管发生中的血管生成因子之外，VEGF 还作为多效生长因子在其它生理过程中显示了多种生物学效应，如内皮细胞存活，血管通 透性和血管舒张，单核细胞趋化作用和钙流入O^errara和Davis-Smyth (1997)，见上文，和 Cebe-Suarez 等，细胞分子生命科学(Cell. Mol. Life. Sci). 63 :601-615(2006)。而且，最近 的研究已经报道了 VEGF对于数种非内皮细胞类型，如视网膜色素上皮细胞、胰管细胞和许 旺细胞的促有丝分裂作用。Guerrin等.(1995)细胞生理学杂志(J. Cell Physiol.) 164 385-394 ；Oberg-WeIsh 等(1997).分子细胞内分泌学(Mol. Cell. Endocrinol). 126 125-132 ；Sondell 等·神经科学杂志(J. Neurosci.) 19 :5731-5740(1999)。“VEGF拮抗剂”或“VEGF特异性拮抗剂”指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰 VEGF活性(包括但不仅限于其与一种或多种VEGF受体的结合)的分子。VEGF拮抗剂包括 但不仅限于抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特异性结合VEGF由此使其隔绝与一种或多种 受体结合的受体分子及衍生物、抗VEGF受体抗体和VEGF受体拮抗剂诸如VEGFR酪氨酸激 酶的小分子抑制剂。术语“VEGF拮抗剂”用于本文中时，特别包括结合VEGF并能够中和、 阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF活性的分子，包括抗体、抗体片段、其他结合多肽、肽、和 非肽小分子。因此，术语“VEGF活性”特别包括VEGF介导的VEGF生物学活性。在某些实 施方案中，VEGF拮抗剂将VEGF的表达水平或生物学活性降低或抑制至少10%、20%、30%、 40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多。“抗VEGF抗体”是以足够亲和性和特异性结合VEGF的抗体。在某些实施方案中，所 选择的抗体通常具有针对VEGF的足够的结合亲和性，例如所述抗体可以以介于IOOnM-IpM 之间的Kd值结合hVEGF。抗体亲和性可以通过例如基于表面等离振子共振的测定法(诸 如BIAcore测定法，如PCT申请
发明者迈克·施密特, 阿尼尔·D·巴格里 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司