脂肪分解酶及其在食品工业中的应用的制作方法

专利名称：脂肪分解酶及其在食品工业中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的脂肪分解酶，特别是新的脂肪分解酶，和编码它的核苷酸序列。本发明还涉及新的脂肪分解酶的制备方法及其应用。本发明还涉及脂肪分解酶的方法及应用。
背景技术：
EP 1 193 314中教导了对糖脂有活性的脂肪分解酶在面包制作中的有益应用。教导了，发现部分水解产物溶血糖脂具有很高的乳化剂功用。可是，也发现EP 1 193 314中教导的酶对甘油三酯具有显著的非选择性活性，会造成不必要的高游离脂肪酸。EP 0 869 167中教导了来自尖镰孢(Fusarium oxysporum)的具有磷脂酶活性的脂肪分解酶。该脂肪分解酶具有高的三酰基甘油酯水解(脂肪酶)活性。该酶现在由 NovozymesA/S (丹麦)以 Lipopan F 来销售。W002/00852披露了五种脂肪酶和它们的编码多核苷酸，它们分离自Fusarium venenatum、F. sulphureum、Aspergillus berkeleyanum、黄色键抱(F. culmorum)禾口腐皮键孢(F.solani)。所有五种酶据说具有三酰甘油水解活性、磷脂酶和半乳糖脂酶活性。已经生成了带有特定氨基酸替代和融合的脂肪分解酶变体；其中一些与野生型亲本酶相比，对极性脂质具有增强的活性。W001/39602记载了这样一种变体，其称为SP979， 是Thermomyces Ianuginosus脂肪酶和EP O 869167中记载的尖镰孢脂肪酶的融合物。已经发现该变体对磷脂和糖脂具有与甘油三酯相比显著高比率的活性。W002/094123中发现了，通过选择对生面团中的极性脂质(糖脂和磷脂)有活性但对甘油三酯或ι-单-甘油酯基本上无活性的脂肪分解酶，可获得改良的功用。在共同未决的PCT申请PCT/IB2005/000875中教导了，与甘油三酯相比，对极性脂质具有更高比率活性的野生型脂肪分解酶。可是，该文献没有教导来自链霉菌属 (Str印tomyces)、喜热裂孢菌属(Thermobifida)或棒杆菌属(Corynebacterium)物种的月旨肪分解酶。在本发明之前，没有公开过来自链霉菌属菌种的对糖脂具有活性或显著活性的脂肪分解酶。同样，没有公开过来自喜热裂孢菌属物种或棒杆菌属物种的对糖脂具有活性或显著活性的脂肪分解酶。尽管已经从链霉菌属菌种中分离到了脂肪酶，即三酰甘油水解酶 (参见例如Vujaklija等，ArchMicrobiol (2002) 178 1M-130)，这些酶从未鉴定为具有糖脂水解活性。

发明内容
本发明依据来自链霉菌属的具有显著半乳糖脂活性的脂肪分解酶的重大发现。具
4体而言，来自链霉菌属的脂肪分解酶具有显著的半乳糖脂水解活性和/或显著的半乳糖脂酰基转移酶活性，特别是在应用于根据本发明的方法和用途时。另外，本发明依据来自喜热裂孢菌属或棒杆菌属的具有显著半乳糖脂活性的脂肪分解酶的重大发现。具体而言，来自喜热裂孢菌属或棒杆菌属的脂肪分解酶具有显著的半乳糖脂水解活性和/或显著的半乳糖脂酰基转移酶活性，特别是在应用于本发明的方法和用途时。在一个广的方面，本发明涉及至少能水解糖脂和/或至少能将酰基从糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶是可从，优选就是从链霉菌属菌种得到的。在另一方面，本发明涉及至少能水解半乳糖脂和/或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶由选自下组的核酸编码a)包含SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列的核酸；b)因遗传密码简并而与SEQ ID No. 3的核苷酸序列相关的核酸；和c)包含与SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列具有至少70%同一性的核苷酸序列的核酸。本发明还进一步提供包含SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列或与其具有至少60%同一性的氨基酸序列的脂肪分解酶。在另一方面，本发明提供至少能水解半乳糖脂和/或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶包含SEQID No. 4所示的氨基酸序列或与其具有至少60%同一性的氨基酸序列。在另一方面，本发明提供编码脂肪分解酶的核酸，该脂肪分解酶包含SEQ ID No. 4 所示的氨基酸序列或与其具有至少60%同一性的氨基酸序列。SEQ ID No. 3 如图 3 所示，而 SEQ ID No. 4 如图 4 所示。本发明还进一步提供编码脂肪分解酶的核酸，该核酸选自下组a)包含SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列的核酸；b)因遗传密码简并而与SEQ ID No. 3的核苷酸序列相关的核酸；和c)包含与SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列具有至少70%同一性的核苷酸序列的核酸。本发明还进一步提供根据本发明的脂肪分解酶在用于制备溶血糖脂，例如二半乳糖苷甘油单酯(DGMG)或单半乳糖苷甘油单酯(MGMG))的底物(优选食品)中的应用，其用根据本发明的脂肪分解酶处理糖脂(如二半乳糖苷甘油二酯(DGDG)或单半乳糖苷甘油二酯(MGDG))来产生部分水解产物，即溶血糖脂。在另一方面，本发明提供根据本发明的脂肪分解酶在用于制备溶血磷脂，例如溶血卵磷脂的底物(优选食品)中的应用，其用根据本发明的酶处理磷脂(如卵磷脂)来产生部分水解产物，即溶血磷脂。在一个广的方面，本发明涉及制备食品的方法，该方法包括将本发明的脂肪分解酶与食品的一种或多种成分混合。本发明的另一个广的方面涉及由生面团制备焙烤品的方法，该方法包括将本发明的脂肪分解酶与生面团混合。
在另一方面，本发明涉及制备乳制品的方法，该方法包括将本发明的脂肪分解酶与乳制品的一种或多种成分混合。在另一方面，本发明涉及本发明的脂肪分解酶在制备乳制品中的应用，以降低一种或多种以下有害效应臭味和/或异味和/或油腻口味。在本发明的另一方面，提供根据本发明的脂肪分解酶在处理蛋或基于蛋的产品中的应用，以产生溶血磷脂。在本发明的另一方面，提供根据本发明的脂肪分解酶在处理蛋或基于蛋的产品中的应用，以产生溶血糖脂。本发明的另一方面提供植物或食用油的酶促脱胶方法，其包括用根据本发明的脂肪分解酶处理所述食用或植物油，从而水解极性脂质(如磷脂和/或糖脂)的主要部分。在另一方面，本发明提供根据本发明的脂肪分解酶在包括处理磷脂从而水解脂肪酰基的方法中的应用。在另一方面，本发明提供根据本发明的脂肪分解酶在用于降低食用油中磷脂含量的方法中的应用，其包括用根据本发明的脂肪分解酶处理所述油，从而水解磷脂的主要部分，并将含水解磷脂的水相与油分开。还提供了制备根据本发明的脂肪分解酶的方法，该方法包括用包含编码脂肪分解酶的核苷酸序列的重组核酸转化宿主细胞，该宿主细胞能表达编码脂肪分解酶多肽的核苷酸序列，在核酸表达的条件下培养经转化宿主细胞并收获脂肪分解酶。在另一方面，本发明涉及根据本发明的脂肪分解酶在生物转化极性脂质(优选糖脂)以制造高价值产品，诸如碳水化合物酯和/或蛋白质酯和/或蛋白质亚基酯和/或羟酸酯中的应用。本发明的另一方面涉及根据本发明的脂肪分解酶在植物或食用油的酶促脱胶方法中的应用，其包括用所述脂肪分解酶处理所述食用或植物油，从而水解极性脂质的主要部分。本发明的另一方面涉及根据本发明的脂肪分解酶在包括处理磷脂从而水解脂肪酰基的方法中的应用。本发明还进一步涉及根据本发明的固定化的脂肪分解酶。本发明的另一方面涉及制备溶血糖脂的方法，其包括用至少一种脂肪分解酶处理含糖脂的底物来产生所述溶血糖脂，其中所述脂肪分解酶具有糖脂酶活性，且其中所述脂肪分解酶可从以下属之一得到链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明的另一方面涉及制备溶血磷脂的方法，其包括用至少一种脂肪分解酶处理含磷脂的底物来产生所述溶血磷脂，其中所述脂肪分解酶具有磷脂酶活性，且其中所述脂肪分解酶可从以下属之一得到链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明的另一方面涉及植物或食用油的酶促脱胶方法，其包括用可从以下属之一得到的能水解极性脂质主要部分的脂肪分解酶处理所述食用或植物油链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明还涉及生物转化极性脂质以制造高价值产品的方法，其包括用可从以下属之一得到的脂肪分解酶处理所述极性脂质来产生所述高价值产品链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属，其中所述脂肪分解酶能水解所述极性脂质。
本发明的另一方面涉及制备食品的方法，其包括将至少一种脂肪分解酶与食品的一种或多种成分混合，其中所述脂肪分解酶能将存在的糖脂和/或磷脂水解进或成至少一种所述成分，且其中所述脂肪分解酶可从以下属之一得到链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明的另一方面涉及脂肪分解酶在用于制备溶血磷脂的底物中的应用，其中所述脂肪分解酶具有磷脂酶活性，且其中所述脂肪分解酶可从以下属之一得到链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明另外涉及可从以下属之一得到的脂肪分解酶用于植物或食用油的酶促脱胶从而水解极性脂质主要部分的应用链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明的另一方面涉及可从以下属之一得到的脂肪分解酶在包括处理磷脂从而水解脂肪酰基的方法中的应用链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明的另一方面涉及脂肪分解酶在生物转化极性脂质以制造高价值产品中的应用，其中所述脂肪分解酶能水解所述极性脂质，且其中所述脂肪分解酶可从以下属之一得到链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明的另一方面涉及可从以下属之一得到的脂肪分解酶在制备食品中的应用， 其中所述脂肪分解酶能水解糖脂和/或磷脂链霉菌属、棒杆菌属和喜热裂孢菌属。本发明的各方面出现在权利要求中以及以下注释中。关注可用于本发明的核苷酸序列的其它方面包括包含本发明的序列的构建物； 包含本发明中应用的序列的载体；包含本发明中应用的序列的质粒；包含本发明中应用的序列的转化细胞；包含本发明中应用的序列的转化组织；包含本发明中应用的序列的转化器官；包含本发明中应用的序列的转化宿主；包含本发明中应用的序列的转化生物体。本发明还涵盖利用本发明中应用的核苷酸序列来表达它的方法，诸如在宿主细胞中表达；包括转移它的方法。本发明进一步涵盖分离核苷酸序列的方法，诸如从宿主细胞分离。关注可用于本发明的氨基酸序列的其它方面包括编码本发明中应用的氨基酸序列的构建物；编码本发明中应用的氨基酸序列的载体；编码本发明中应用的氨基酸序列的质粒；表达本发明中应用的氨基酸序列的转化细胞；表达本发明中应用的氨基酸序列的转化组织；表达本发明中应用的氨基酸序列的转化器官；表达本发明中应用的氨基酸序列的转化宿主；表达本发明中应用的氨基酸序列的转化生物体。本发明还涵盖利用本发明中应用的氨基酸序列来纯化它的方法，诸如在宿主细胞中表达；包括转移它且然后纯化所述序列的方法。为了便于参考，现在在合适的小节标题下论述本发明的这些和其它方面。可是，每个小节下的教导不必局限于每个特定的小节。
具体实施例方式适宜地，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是包含SEQ ID No. 4、 5、7、8、12、14或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70 % ,75% ,80% ,85 % ,90% ,95 %, 96%、97%或98%同一性的氨基酸序列之任一，或由SEQ ID No. 3、6、9、13、15或17所示的核苷酸序列或与其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%或98%同一性的核苷酸序列之任一编码的脂肪分解酶。
优选地，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶是至少能水解半乳糖脂和 /或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶是可从，优选就是从链霉菌属菌种得到的。在一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶优选是至少能水解半乳糖脂和/或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶由选自下组的核酸编码a)包含SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列的核酸；b)因遗传密码简并而与SEQ ID No. 3的核苷酸序列相关的核酸；和c)包含与SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列具有至少70%同一性的核苷酸序列的核酸。在一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶优选是包含 SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列或与其具有至少60%同一性的氨基酸序列的脂肪分解酶。在另一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶优选是至少能水解半乳糖脂和/或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶包含SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列或与其具有至少60%同一性的氨基酸序列。优选地，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶是至少能水解半乳糖脂和 /或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶是可从，优选就是从喜热裂孢菌属物种，优选褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)得到的。优选地，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶是至少能水解半乳糖脂和 /或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶是可从，优选就是从棒杆菌属物种，优选Corynebacterium efficiens得到的。在另一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是包含SEQ ID No. 4、5、7、8、12、14或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70%、75%、80%、 85%、90%、95%、96%、97%或98%同一性的氨基酸序列之任一，或由SEQ ID No. 3、6、9、 13,15或17所示的核苷酸序列或与其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、 97%或98%同一性的核苷酸序列之任一编码的脂肪分解酶。在另一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是用于本文所述用途的包含SEQ ID No. 5、7、8、14或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70%、 75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%或98%同一性的氨基酸序列之任一的脂肪分解酶。在另一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是用于本文所述用途的包含SEQ ID No. 5、7或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70%、75%、 80%、85%、90%、95%、96%、97%或98%同一性的氨基酸序列之任一的脂肪分解酶。更优选地，在一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是包含SEQ. ID. No. 16所示的氨基酸序列或与其具有至少70 %、75 %、80 %、85 %、90 %、 95^^96^^97%或98%同一性的氨基酸序列的脂肪分解酶。在另一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是包含 SEQ. ID. No. 12或14所示的氨基酸序列或与其具有至少80%,85%,90%,95%,96%,97% 或98%同一性的氨基酸序列的脂肪分解酶。
在另一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是包含 SEQ ID No. 8所示的氨基酸序列或与其具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、 97 %或98 %同一性的氨基酸序列的脂肪分解酶。在一个实施方案中，用于根据本发明的方法和用途中的脂肪分解酶可以是至少能水解半乳糖脂和/或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶由选自下组的核酸编码a)包含SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列的核酸；b)因遗传密码简并而与SEQ ID No. 3的核苷酸序列相关的核酸；和c)包含与SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列具有至少70%同一性的核苷酸序列的核酸。在一个实施方案中，根据本发明的脂肪分解酶可以是可从，优选就是从链霉菌属菌株L130或L131得到的，根据国际承认的用于专利程序的微生物保藏的布达佩斯条约， 它们于 2004 年 6 月 23 日由 Danisco A/S(Langebrogade 1, DK-1001 Copenhagen K，丹麦)保藏于国家工业、海洋和食品细菌保藏中心(NCIMB) (23 St Machar Street，Aberdeen Gotland，GB)，编号分别为 NCIMB 412 和 NCIMB 41227。优选地，根据本发明的脂肪分解酶至少作用于糖脂，诸如例如二半乳糖苷甘油二酯(D⑶G)。适宜地，根据本发明的脂肪分解酶还可作用于一种或多种其它极性脂质底物，诸如磷脂，例如卵磷脂，如磷脂酰胆碱。本文中所用的术语“能水解糖脂”的可选表述方式可以说成脂肪分解酶具有糖脂水解活性。优选地，根据本发明的脂肪分解酶水解糖脂，诸如例如二半乳糖苷甘油二酯 (DGDG)，而且也水解磷脂，诸如卵磷脂，如磷脂酰胆碱。优选地，根据本发明的脂肪分解酶作用于糖脂，诸如DGDG或MGDG。在一个方面，根据本发明的脂肪分解酶将DGDG水解成DGMG和/或将MGDG水解成 MGMG。在一个方面，根据本发明的脂肪分解酶将卵磷脂水解成溶血卵磷脂。在脂肪分解酶至少能将酰基从糖脂转移至供体底物的情况中，极性脂质底物在本文中可称为“脂质酰基供体”。在一个实施方案中，根据本发明的酶既具有磷脂酶和/或糖脂酶活性(根据国际生物化学和分子生物学联盟命名委员会的酶命名法建议(199 ，通常归入E. C. 3. 1. 1. 26 ； E. C. 3. 1. 1. 4或E. C. 3. 1. 1. 32)，又具有酰基转移酶活性(通常归入E. C. 2. 3. 1. χ)，由此该酶能将酰基从脂质酰基供体转移至一种或多种受体底物，诸如以下一种或多种留醇；甾烷醇(stanol)；碳水化合物；蛋白质；蛋白质亚基；甘油。共同未决的国际专利申请PCT/IB2004/000655中教导了脂质酰基转移酶及其应用。将该文件引入本文作为参考。可是，PCT/IB2004/000655中没有教导根据本发明来自链霉菌属的脂肪分解酶。在有些方面，应用于本发明的方法和/或应用中的脂肪分解酶可能能将酰基从极性脂质(如本文所定义的)转移至一种或多种以下酰基受体底物留醇、留烷醇、碳水化合物、蛋白质或其亚基、或甘油。
对于有些方面，根据本发明的“酰基受体”可以是包含羟基(-0H)的任何化合物， 诸如例如多元醇，包括甘油；留醇；留烷醇；碳水化合物；羟酸，包括果酸、柠檬酸、酒石酸、 乳酸和抗坏血酸；蛋白质或其亚基，诸如例如氨基酸、蛋白质水解产物和肽(部分水解的蛋白质)；及其混合物和衍生物。在有些方面，根据本发明的“酰基受体”可优选不是水。在一个实施方案中，酰基受体优选不是甘油单酯和/或甘油二酯。在一个方面，优选该酶能将酰基从脂质转移至留醇和/或留烷醇。在一个方面，优选该酶能将酰基从脂质转移至碳水化合物。在一个方面，优选该酶能将酰基从脂质转移至蛋白质或其亚基。适宜地，蛋白质亚基可以是以下一种或多种氨基酸、蛋白质水解产物、肽、二肽、寡肽、多肽。适宜地，在蛋白质或蛋白质亚基中，酰基受体可以是一种或多种以下蛋白质或蛋白质亚基成分丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、或半胱氨酸。当蛋白质亚基是氨基酸时，适宜地，氨基酸可以是任何合适的氨基酸。适宜地，氨基酸可以是例如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、或半胱氨酸中的一种或多种。在一个方面，优选该酶能将酰基从脂质转移至甘油。在一个方面，优选该酶能将酰基从脂质转移至羟酸。在一个方面，优选该酶能将酰基从脂质转移至多元醇。在一个方面，脂肪分解酶可能既能将酰基从脂质转移至留醇和/或留烷醇，又能将酰基从脂质转移至以下一种或多种碳水化合物、蛋白质、蛋白质亚基、甘油。本文中所用的术语卵磷脂涵盖磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油。对于有些方面，优选脂质底物至少是糖脂，诸如例如D⑶G。对于有些方面，优选脂质底物也可以是磷脂，诸如卵磷脂，例如磷脂酰胆碱。根据本发明的其它磷脂底物可以是N酰基磷脂酰乙醇胺(APE)或N酰基溶血磷脂酰乙醇胺 (ALPE)中的一种或多种。优选脂质底物是食物脂质，也就是说是食品的脂质成分。对于有些方面，优选根据本发明的脂肪分解酶不能或基本不能作用于甘油三酯和 /或1-甘油单酯和/或2-甘油单酯。在一个实施方案中，根据本发明的脂肪分解酶对甘油三酯和/或1-甘油单酯和/ 或2-甘油单酯无活性或无显著活性。适宜地，脂质底物或脂质酰基供体可以是一种或多种以下底物中存在的一种或多种脂质脂肪，包括猪油、牛脂和黄油脂肪；油，包括提取自或衍生自棕榈油、向日葵油、大豆油、红花油、棉籽油、落花生油、玉米油、橄榄油、花生油、椰子油和油菜籽油的油。来自大豆、油菜籽或蛋黄的卵磷脂也是合适的脂质底物。脂质底物可以是燕麦脂质或其它基于植物的含半乳糖脂的材料。在一个方面，脂质底物或脂质酰基供体优选是蛋黄中的卵磷脂(诸如磷脂酰胆碱)。对于本发明的有些方面，脂质可以选自具有8至22个碳的脂肪酸链长度的脂质。对于本发明的有些方面，脂质可以选自具有16至22个碳的脂肪酸链长度的脂质，更优选16至20个碳。对于本发明的有些方面，脂质可以选自具有不超过14个碳的脂肪酸链长度的脂质，适宜地选自具有4至14个碳的脂肪酸链长度的脂质，适宜地4至10个碳，适宜地4至 8个碳。适宜地，根据本发明的脂肪分解酶至少展现糖脂酶活性(E. C. 3. 1. 1.沈)。适宜地， 根据本发明的脂肪分解酶也可展现磷脂酶A2活性(E.C. 3.1.1.4)和/或磷脂酶Al活性 (E. C. 3. 1. 1. 32)。对于有些方面，根据本发明的脂肪分解酶可只具有糖脂酶活性(E. C. 3. 1. 1. 26)。对于有些方面，根据本发明的脂肪分解酶是半乳糖脂酶(E.C.3. 1. 1. 26) 0可是， 酶定为半乳糖脂酶的事实并不妨碍其具有其它附带活性，诸如针对例如其它极性脂质的活性。本文中所用的术语“糖脂酶活性”和“半乳糖脂酶活性”可互换使用。适宜地，对于有些方面，根据本发明的脂肪分解酶可能能将酰基从糖脂和/或磷脂转移至一种或多种受体底物。适宜地，受体底物可以是一种或多种以下底物留醇、留烷醇、碳水化合物、蛋白质、甘油。本文中所用的术语“极性脂质”指磷脂和/或糖脂。在有些方面，术语极性脂质优选至少指糖脂。酶的糖脂酶活性；磷脂酶活性和/或三酰甘油脂肪酶活性可用下文介绍的测定法来测定。半乳糖脂酶活性的测定(糖脂酶活性测定法(GLU-7))底物将0. 6 % 二半乳糖苷甘油二酯(Sigma D 4651) ,0. 4 % Triton-X IOO(SigmaX-IOO)和 5mM CaCl2 溶于 pH 7 的 0. 05M HEPES 缓冲液。测定流程将400 μ L底物加到1. 5mL Eppendorf管中并在Eppendorf热混合器中于37°C放置5分钟。在时间t = 0分钟时，加入50yL酶溶液。用水代替酶来进行空白分析。将样品在Eppendorf热混合器中于37°C以IOxlOOrpm混合10分钟。在时间t = 10分钟时，将 Eppendorf管在另一个热混合器中于99°C放置10分钟，以终止反应。使用WAKO GmbH的NEFA C试剂盒来分析样品中的游离脂肪酸。根据在测定条件下每分钟产生的脂肪酸微摩尔量，计算在pH 7的酶活性GLU。磷脂酶活性的测定(磷脂酶活性测定法(PLU-7))底物将0.6 % L-α 磷脂酰胆碱，95 % 植物(Avanti#441601)、0. 4 % Triton-X 100 (Sigma X-100)和 5mM CaCl2 散布于 pH 7 的 0. 05M HEPES 缓冲液。测定流程将400 μ L底物加到1. 5mL Eppendorf管中并在Eppendorf热混合器中于37°C放置5分钟。在时间t = 0分钟时，加入50yL酶溶液。用水代替酶来进行空白分析。将样品在Eppendorf热混合器中于37°C以IOxlOOrpm混合10分钟。在时间t = 10分钟时，将Eppendorf管在另一个热混合器中于99°C放置10分钟，以终止反应。使用WAKO GmbH的NEFA C试剂盒来分析样品中的游离脂肪酸。根据在测定条件下每分钟产生的脂肪酸微摩尔量，计算在pH 7的酶活性PLU-7。三酰甘油酯脂肪酶活性的测定基于甘油三酯(三丁精)作为底物的的测定法 (LIPU)基于三丁精的脂肪酶活性根据R)od Chemical Codex (第四版，NationalAcademy Press, 1996,ρ 803)来测量。其中的改变是，将样品溶于去离子水来代替甘氨酸缓冲液，而 PH计设置点为5. 5来代替7。ILIPU定义为在测定条件下每分钟能释放出1微摩尔丁酸的酶量。在一个实施方案中，优选根据本发明的脂肪分解酶是野生型脂肪分解酶。本文中所用的术语“天然”和“野生型”指天然存在的酶。也就是说是，由内源遗传密码表达和从其内源宿主生物体中分离的酶，和/或与内源产生的成熟蛋白质序列(在共翻译和翻译后切割事件之后)相比尚未突变(即不含氨基酸删除、添加或替代)的异源产生的酶。本发明的天然和野生型蛋白质可由为了异源表达而优化了密码子的多核苷酸编码，而且也可包含为了在该宿主中表达而选择的非内源信号肽。本文中所用的术语“变体”指由非内源遗传密码表达的蛋白质，其造成与天然或野生型序列相比成熟蛋白质序列内的一个或多个氨基酸改变(即氨基酸删除、添加或替代)。优选地，根据本发明的脂肪分解酶是可从(适宜地，可以是从)细菌得到的。优选地，根据本发明的脂肪分解酶可以是可从(优选从)链霉菌属菌种得到的。优选地，根据本发明的脂肪分解酶可以是可从(优选从)链霉菌属菌株L131或链霉菌属菌株 L130得到的。优选地，根据本发明的脂肪分解酶包含与SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列具有至少70%、优选至少75%、优选至少80%、优选至少90%、优选至少95%、优选至少98%、优选至少99%同一性的氨基酸序列。优选地，编码根据本发明的脂肪分解酶的核酸包含与SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列具有至少75%、优选至少80%、优选至少85%、优选至少90%、优选至少95%、优选至少98%、优选至少99%同一性的核苷酸序列。在一个实施方案中，酶对半乳糖脂底物的最优pH适宜地是约6-8，优选约 6. 5-7. 5，更优选约7。适宜地，根据本发明的脂肪分解酶可不受小麦粉中存在的脂肪酶抑制剂的抑制或显著抑制。本文中所用的术语“不受显著抑制”指根据本文中定义的标准磷脂酶(PUU-T)测定法，与Lip0panFTM(N0V0ZymeSA/S，丹麦)的等效剂量(PLU)相比，酶对小麦粉中存在的脂肪酶抑制剂较不敏感。适宜地，根据本发明的脂肪分解酶能将底物(即例如食品如生面团中的)中的至少10%半乳糖脂二酯水解成单酯。优选地，酶能将至少20%、更优选至少30%、至少40%、 至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %或至少90 %半乳糖脂二酯水解成单酯。适宜地， 半乳糖脂二酯可以是MGDG或D⑶G中的一种或多种，而单酯可以分别是MGMG或DGMG中的一种或多种。适宜地，根据本发明的脂肪分解酶可分离自链霉菌属菌株L131或链霉菌属菌株
12L130的发酵液。适宜地，酶可通过液相色谱来纯化。纯化的脂肪分解酶的氨基酸序列可通过Edman降解、LC-MS和MALDI-T0F分析来测定。适宜地，本文中所定义的酶可催化一种或多种以下反应酯交换 (interesterification)、酉旨转移(transesterification)、醇角军、/K角军。术语“酯交换”指酶促催化的酰基在脂质供体和脂质受体间的转移，其中脂质供体不是游离酰基。本文中所用的术语“酯转移”指酶促催化的酰基从脂质供体(除了游离脂肪酸)至酰基受体(除了水)的转移。本文中所用的术语“醇解”指通过与醇ROH反应来酶促切割酸衍生物的共价键，使得产物之一与醇的H结合而另一种产物与醇的OR基团结合。 本文中所用的术语“醇”指含羟基的烃基化合物。本文中所用的术语“水解”指酶促催化酰基从脂质至水分子OH基团的转移。水解造成的酰基转移需要解离水分子。本文中所用的术语“食品”指适合人和/或动物消费的物质。适宜地，本文中所用的术语“食品”可指做好消费准备的形式的食品。可是，或者 /另外，本文中所用的的术语食品可指用于制备食品的一种或多种食物材料。仅作为示例， 术语食品涵盖由生面团产生的焙烤品以及用于制备所述焙烤品的生面团。在一个优选的方面，本发明提供上文定义的食品，其中所述食品选自以下一种或多种蛋，基于蛋的产品，包括但不限于蛋黄酱，色拉调味品，沙司，冰激凌，蛋粉，改良蛋黄及其制成品；焙烤品，包括面包，蛋糕，甜面团(sweet dough)产品，叠层面团产品 (laminated doughs)，液态奶蛋糊，松饼，油炸圈饼，饼干，薄脆饼干和曲奇饼；糖果，包括巧克力，糖果，饴糖，halawa，胶皮糖(gum)，包括无糖和加糖胶皮糖，泡泡糖，软泡泡糖，口香糖和布丁 ；冷冻产品，包括冰糕，优选冷冻乳制品，包括冰激凌和牛奶冻；乳制品，包括奶酪， 黄油，牛奶，稀奶油，生奶油，乳蛋糕乳脂，乳饮料和酸牛奶；慕思，生植物奶油，肉制品，包括经加工的肉制品；食用油和脂肪，搅打起泡和不起泡的产品，水包油乳状液，油包水乳状液， 人造黄油，起酥油和涂抹物，包括低脂肪的和极低脂肪的涂抹物；调味品，蛋黄酱，蘸料，基于奶油的沙司，基于奶油的汤，饮料，香料乳状液和沙司。适宜地，根据本发明的食品可以是“精制食物”，包括蛋糕、面粉糕饼、糖果、巧克力、奶油软糖等。在一个方面，根据本发明的食品可以是生面团产品或焙烤产品，诸如面包、油炸产品、小吃、蛋糕、馅饼、核仁巧克力饼、小甜饼、面条、零食诸如薄脆饼干、全麦薄脆饼干、椒盐脆饼干、和薯片、和意大利面制品。在另一方面，根据本发明的食品可以是植物衍生的食物产品，诸如面粉、预混合料、油、脂肪、可可油、人造稀奶油、色拉调味品、人造黄油、涂抹物、花生酱、起酥油、冰激凌、 烹调油。在另一方面，根据本发明的食品可以是乳制品，包括黄油，牛奶，奶油，奶酪诸如各种形式的(包括切碎的、整块的、切片的或搓碎的)天然的、经加工的、和人造的干酪，奶油
13干酪，冰激凌，冷冻甜品，酸奶，酸奶饮料，黄油脂肪，脱水乳脂肪，其它乳制品。根据本发明的酶可提高乳制品中的脂肪稳定性。在奶酪中使用根据本发明的酶是特别有益的。所以，根据本发明的脂肪分解酶可有利地用于生产奶酪。脂肪分解酶催化牛奶中磷脂的水解，这有助于增加奶酪产量。优选地，在奶酪生产过程前或期间，可将根据本发明的脂肪分解酶加到牛奶(称为干酪用乳) 中。在另一方面，根据本发明的食品可以是含有动物衍生成分的食物产品，诸如经加工的肉制品、烹调油、起酥油。在另一方面，根据本发明的食品可以是饮料、水果、水果什锦、蔬菜或葡萄酒。在有些情况中，饮料可含多达20g/l外加的植物甾醇。在另一方面，根据本发明的食品可以是动物饲料。动物饲料可强化了植物留醇和 /或植物留烷醇，优选强化了谷留醇/留烷醇。适宜地，动物饲料可以是家禽饲料。当食品是家禽饲料时，本发明可用于降低以根据本发明的食品喂养的家禽所产蛋的胆固醇含量。在一个方面，优选食品选自以下一种或多种蛋，基于蛋的产品，包括蛋黄酱，色拉调味品，沙司，冰激凌，蛋粉，改良蛋黄及其制成品。优选地，根据本发明的食品是含水食品。适宜地，食品可包含10-98%的水，适宜地14-98 %，适宜地18-98 %的水，适宜地20-98 %，适宜地40-98 %，适宜地50-98 %，适宜地 70-98%，适宜地 75-98% ο对于有些方面，根据本发明的食品可以不是纯的植物衍生油，诸如例如橄榄油、向日葵油、花生油、油菜籽油。为了免除猜疑，在本发明的有些方面，根据本发明的食品可包含油，但该食品不是主要由油或油混合物构成的。对于有些方面，优选食品包含少于95%的脂质，优选少于90%的脂质，优选少于85%，优选少于80%的脂质。所以，对于本发明的有些方面，油可以是食品的成分，但优选食品本身不是油。专利申请W02004/064987，W02004/064537，PCT/IB2004/004374 和 GB0513859. 9 中
教导了在食物应用中使用能转移酰基的脂肪分解酶的优势，将它们引入本文作为参考。游离脂肪酸的产生对食品可能是有害的。在食品中，游离脂肪酸与臭味和/或异味以及其他有害效应(包括诸如例如奶酪的乳制品中的油腻口味)有关。适宜地，在本发明的有些实施方案中，脂肪分解酶能将脂肪酸从脂质转移至酰基受体，例如留醇和/或甾烷醇。因此，食品中游离脂肪酸的整体水平不增加或仅仅增加到不显著的程度。所以，在奶酪生产中，根据本发明的能转移酰基的脂肪分解酶可提供一种或多种以下出乎预料的技术效果减少奶酪中的溢油(oiling-ofT)效应；增加奶酪产量；增强香味；降低恶臭；降低 “油腻” 口味。本文教导的能将酰基转移至碳水化合物以及留醇和/或留烷醇的脂肪分解酶的应用对于含蛋食品是特别有益的。具体而言，在蛋和蛋制品中，糖，特别是葡萄糖的存在常常视为是不利的。蛋黄可包含多达的葡萄糖。根据本发明，该不想要的糖可方便地通过 “酯化”糖以形成糖酯来去除。食用油中存在甘油二酯是不利的。具体而言，食用油(特别是棕榈油)中的甘油二酯可导致油的品质低。适宜地，在本发明的有些实施方案中，本文教导的脂肪分解酶能将脂肪酸从脂质转移至酰基受体，这降低油中甘油二酯的水平，而不增加或显著增加游离脂肪酸的水平。本文教导的脂肪分解酶能水解食用或植物油中的磷脂的主要部分。这在植物或食用油的酶促脱胶中是高度有益的。适宜地，在本发明的有些实施方案中，脂肪分解酶可能能将脂肪酸从脂质转移至酰基受体。因此，有利的是，油中的游离脂肪酸的整体水平不增加或仅仅增加到不显著的程度。游离脂肪酸的产生对食用油可能是有害的。优选地，根据本发明的方法导致食用油脱胶，其中游离脂肪酸的积聚降低和/或消除。本发明的权利要求将解释为包括上文所列每种食品。在本文提及的有些应用中，特别是食物应用，诸如面包房应用，根据本发明的脂肪分解酶可以与一种或多种常规乳化剂一起使用，包括例如甘油单酯、脂肪酸甘油单酯和二酯的二酰基酒石酸酯、糖酯、硬脂酰乳酸钠(SSL)和卵磷脂。另外/或者，根据本发明的酶可以与一种或多种其它合适的食用级酶一起使用。 所以，除了本发明的脂肪分解酶，可将至少一种其它酶加到焙烤品和/或生面团中，这在本发明的范围之内。这样的其它酶包括淀粉降解酶诸如内切或外切淀粉酶，支链淀粉酶，脱支酶，半纤维素酶包括木聚糖酶，纤维素酶，氧化还原酶如葡萄糖氧化酶，吡喃糖氧化酶，巯基氧化酶或碳水化合物氧化酶诸如氧化麦芽糖的，例如己糖氧化酶(HOX)，脂肪酶，磷脂酶和己糖氧化酶，蛋白酶，和酰基转移酶(诸如例如PCT/IB2004/000575中所述的那些)。本发明涵盖食物酶组合物，包括包含根据本发明的酶的面包和/或生面团改良组合物，且任选还包含其它酶，诸如一种或多种其它合适的食用级酶，包括淀粉降解酶诸如内切或外切淀粉酶，支链淀粉酶，脱支酶，半纤维素酶包括木聚糖酶，纤维素酶，氧化还原酶如葡萄糖氧化酶，吡喃糖氧化酶，巯基氧化酶或碳水化合物氧化酶诸如氧化麦芽糖的，例如己糖氧化酶(Η0Χ)，脂肪酶，磷脂酶和己糖氧化酶，蛋白酶，和酰基转移酶(诸如例如PCT/ IB2004/000575中所述的那些)。在本文提交的有些应用中，特别是食物应用，诸如面包房应用，根据本发明的脂肪分解酶可以与一种或多种酶底物联合或顺序加入。仅作为示例，根据本发明的脂肪分解酶可以与一种或多种极性脂质底物和/或一种或多种酰基受体底物一起加入。在本文提及的有些应用中，特别是食物应用，诸如面包房应用，根据本发明的脂肪分解酶可以与一种或多种羟酸一起使用，包括例如酒石酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸或抗坏血酸。本文中所用的术语“改良的特性”指可通过本发明脂肪分解酶的作用改良的任何性质。具体而言，根据本发明的脂肪分解酶的应用导致一种或多种以下特征增加焙烤品体积；改善焙烤品团粒结构(crumb structure)；焙烤品中的抗走味(anti-staling)特性；对生面团增加强度、增加稳定性、减少粘性和/或改善切削加工性。通过与不添加根据本发明的脂肪分解酶而制备的生面团和/或焙烤品进行比较， 评估了改良的特性。本文中所用的术语“焙烤品”包括由生面团制备的产品。可通过本发明有利地制备的焙烤品(无论是白色、浅色或深色类型的)的例子包括以下一种或多种典型地块或卷形式的面包(包括白、粗面粉和黑面包)，蒸汽小圆面包，法国棍子面包，比塔饼，玉米面豆卷， 玉米粉圆饼，小麦粉圆饼，蛋糕，薄烤饼，饼干，脆面包，意大利面制品，面条等。
根据本发明的生面团可以是经过发酵的生面团或将进行发酵的生面团。生面团可以以各种方式发酵，诸如通过加入碳酸氢钠等，或通过加入合适的酵母培养物，诸如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(面包酵母)培养物。本发明还涉及根据本发明的脂肪分解酶用于生产意大利面制品生面团的应用，优选由硬质小麦粉或相当品质的面粉制备而来。根据本发明的脂肪分解酶适合用于植物或食用油的酶促脱胶。在加工植物或食用油中，用根据本发明的脂肪分解酶处理食用或植物油，从而水解极性脂质(如磷脂)的主要部分。优选由极性脂质水解得到脂肪酰基。由于水解了极性脂质，如磷脂的主要部分(即超过50% )，脱胶过程通常导致食用油中极性脂质，特别是磷脂的含量降低。典型地，将含水解极性脂质(如磷脂)的水相与油分离。适宜地，食用或植物油可最初(用根据本发明的酶处理前)具有50-250ppm的磷含量。在一个实施方案中，本发明涉及根据本发明的脂肪分解酶在生物转化极性脂质 (优选糖脂)以制造高价值产品，诸如碳水化合物酯和/或蛋白质酯和/或蛋白质亚基酯和/或羟酸酯中的应用。PCT/IB2004/004374中详述了脂肪分解酶，特别是能将酰基从极性脂质底物(优选糖脂)转移至酰基受体的脂肪分解酶在生物转化极性脂质中的应用及其优势，引入本文作为参考。在一个实施方案中，用于本发明方法中的脂肪分解酶可以是固定化的。在酶是固定化的情况中，可使包含酰基供体、任选的酰基受体、和任选的水的混合物通过柱子，例如包含固定化酶的柱子。通过固定酶，有可能容易地重新使用它。适宜地，固定化酶可用在流动反应器或间歇反应器中，其装有包含溶于水中的脂质酰基供体和任选的酰基受体的反应混合物。当存在酰基受体时，供体和受体处在两相系统或乳状液中。反应混合物可任选经搅拌或经超声波处理。例如，一旦反应达到平衡，可以分离反应混合物和固定化酶。适宜地，可以分馏反应产物，例如通过疏水相互作用层析、结晶或高真空度蒸馏。固定化脂质酰基转移酶可利用本领域已知的固定技术来制备。有许多制备固定化酶的方法，这对于本领域技术人员来说是显然的(例如EP 0 746608 ；或Balcao V. M.等，Enzyme Microb Technol. 1996 年 5 月 1 H, 18(6) :392-416 ；或 Retz 等，Chem Phys Lipids, 1998 $ 6 ^,93(1-2) 3-14 ；Bomscheuer 等，Trends Biotechnol. 2002 年 10 月，20 (10) 433-7 ；Plou 等，Biotechnology，92 (2002) :55-66 ；Warmuth 等，1992， Bio Forum 9 :282-283 ；Ferrer ^,2000, J. Chem. Technol. Biotechnol. 75 1. 8 ； ■ Christensen 等，1998, Nachwachsende Rohstoff 10 :98-105 ；Petersen 禾口 Christenen, 2000,AppliedBiocatalysis,Harwood Academic Publishers,Amsterdam 中提至丨J的技术，将每篇文献引入本文作为参考)。可用于本文的技术包括例如与Eupergit C共价偶联、吸附到聚丙烯上和硅造粒。根据本发明的脂肪分解酶用于根据本发明的应用和/或本文所述方法的脂肪分解酶优选是至少能水解半乳糖脂和/或至少能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中该酶由选自下组的核酸编码a)包含SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列的核酸；
b)因遗传密码简并而与SEQ ID No. 3的核苷酸序列相关的核酸；和c)包含与SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列具有至少70%同一性的核苷酸序列的核酸。优选用于根据本发明的应用和/或本文所述方法的脂肪分解酶是包含SEQ ID No. 4所示的氨基酸序列或与其具有至少60%同一性的氨基酸序列的脂肪分解酶。可是，用于根据本发明的应用和/或本发明方法的脂肪分解酶可以是可从链霉菌属菌种得到的任何脂肪分解酶，其至少能水解半乳糖脂和/或能将酰基从半乳糖脂转移至一种或多种酰基受体底物。用于根据本发明的应用和/或本发明方法的具有半乳糖脂酶活性的合适脂肪分解酶可包含以下氨基酸序列之任一和/或由以下核苷酸序列编码ThermobifidaXfusca GDSx 548 aaSEQ ID No. 5ZP 000587171 mlphpagerg evgaffallv gtpqdrrlrl echetrplrg rcgcgerrvp pltlpgdgvl61 cttsstrdae tvwrkhlqpr pdggfrphlg vgcllagqgs pgvlwcgreg crfevcrrdt121 pglsrtrngd ssppfragws lppkcgeisq sarktpavpr ysllrtdrpd gprgrfvgsg181 praatrrrlf lgipalvlvt altlvlavpt gretlwrmwc eatqdwclgv pvdsrgqpae241 dgeflllspv qaatwgnyya lgdsyssgdg ardyypgtav kggcwrsana ypelvaeayd301 faghlsflac sgqrgyamld aidevgsqld wnsphtslvt igiggndlgf stvlktcmvr361 vplldskact dqedairkrm akfettfeel isevrtrapd arilvvgypr ifpeeptgay421 ytltasnqrw lnetiqefnq qlaeavavhd eeiaasggvg svefvdvyha ldgheigsde481 pwvngvqlrd latgvtvdrs tfhpnaaghr avgervieqi etgpgrplya tfavvagatv541 dtlagevgSEQ ID No. 6ggtggtgaaccagaacacccggtcgtcggcgtgggcgtccaggtgcaggtgcaggttctt
61caactgctccagcaggatgcCgCCgtggCCgtgcacgatggccttgggcaggcctgtggt
121ccccgacgagtacagcacccatagcggatggtcgaacggcagcggggtgaactccagttc
181cgcgccttcgcccgcggcttcgaactccgcccaggacagggtgtcggcgacagggccgca
241gcccaggtacggcaggacgacggtgtgctgcaggctgggcatgccgtcgcgcagggcttt
301gagcacgtcacggcggtcgaagtccttaccgccgtagcggtagccgtccacggccagcag
361cactttcggttcgatctgcgcgaaccggtcgaggacgctgcgcaccccgaagtcggggga
421acaggacgaccaggtcgcaccgatcgcggcgcaggcgaggaatgcggccgtcgcctcggc
481gatgttcggcaggtaggccacgacccggtcgccggggcccaccccgaggctgcggagggc
541cgcagcgatcgcggcggtgcgggtccgcagttctccccaggtccactcggtcaacggccg
601gagttcggacgcgtgccggatcgccacggctgatgggtcacggtcgcggaagatgtgctc
661ggcgtagttgagggtggcgccggggaaccagacggcgccgggcatggcgtcggaggcgag
721cactgtggtgtacggggtggcggcgcgcacccggtagtactcccagatcgcggaccagaa
781tccttcgaggtcggttaccgaccagcgccacagtgcctcgtagtccggtgcgtccacacc
841gcggtgctcccgcacccagcgggtgaacgcggtgaggttggcgcgttctttgcgctcctc
权利要求
1.制备溶血糖脂的方法，所述方法包括用至少一种脂肪分解酶处理含糖脂的底物来产生所述溶血糖脂，其中所述脂肪分解酶具有糖脂酶活性，且其中所述脂肪分解酶可从喜热裂孢菌属得到。
2.制备溶血磷脂的方法，所述方法包括用至少一种脂肪分解酶处理含磷脂的底物来产生所述溶血磷脂，其中所述脂肪分解酶具有磷脂酶活性，且其中所述脂肪分解酶可从喜热裂孢菌属得到。
3.植物或食用油的酶促脱胶方法，所述方法包括用可从喜热裂孢菌属得到的能水解极性脂质主要部分的脂肪分解酶处理所述食用或植物油。
4.生物转化极性脂质以制造高价值产品的方法，所述方法包括用可从喜热裂孢菌属得到的脂肪分解酶处理所述极性脂质来产生所述高价值产品，其中所述脂肪分解酶能水解所述极性脂质。
5.根据权利要求4的方法，其中所述高价值产品是以下一种或多种碳水化合物酯、蛋白质酯、蛋白质亚基酯和羟酸酯。
6.制备食品的方法，所述方法包括将至少一种脂肪分解酶与食品的一种或多种成分混合，其中所述脂肪分解酶能水解存在于至少一种所述成分中的糖脂和/或磷脂或能水解作为至少一种所述成分的糖脂和/或磷脂，且其中所述脂肪分解酶可从喜热裂孢菌属得到。
7.根据权利要求1-6之任何一项的方法，其中所述脂肪分解酶能将酰基从糖脂转移至一种或多种酰基受体底物。
8.根据权利要求1-6之任何一项的方法，其中所述脂肪分解酶包含SEQ.ID. No. 5、7或 16所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列，或包含SEQ ID No.6或17 所示的核苷酸序列或与其具有至少70%同一性的核苷酸序列。
9.根据权利要求8的方法，其中所述脂肪分解酶包含SEQ.ID. No. 5、7或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列。
10.根据权利要求6的方法，其中所述食品选自以下一种或多种蛋，基于蛋的产品，包括但不限于蛋黄酱，色拉调味品，沙司，冰激凌，蛋粉，改良蛋黄及其制成品；焙烤品，包括面包，蛋糕，甜面团产品，叠层面团产品，液态奶蛋糊，松饼，油炸圈饼，饼干，薄脆饼干和曲奇饼；糖果，包括巧克力，糖果，饴糖，halawa，胶皮糖，包括无糖和加糖胶皮糖，泡泡糖，软泡泡糖，口香糖和布丁 ；冷冻产品，包括冰糕，优选冷冻乳制品，包括冰激凌和牛奶冻；乳制品， 包括奶酪，黄油，牛奶，稀奶油，生奶油，乳蛋糕乳脂，乳饮料和酸牛奶；慕思，生植物奶油，肉制品，包括经加工的肉制品；食用油和脂肪，搅打起泡和不起泡的产品，水包油乳状液，油包水乳状液，人造黄油，起酥油和涂抹食品，包括低脂肪的和极低脂肪的涂抹物；调味品，蛋黄酱，蘸料，基于奶油的沙司，基于奶油的汤，饮料，香料乳状液和沙司。
11.根据权利要求10的方法，其中所述食品是焙烤品，且至少一种所述成分是生面团。
12.根据权利要求10的方法，其中所述食品是蛋或基于蛋的产品。
13.根据权利要求10的方法，其中所述食品是乳制品。
14.脂肪分解酶在用于制备溶血糖脂的底物中的应用，其中所述脂肪分解酶具有糖脂酶活性，且其中所述脂肪分解酶可从喜热裂孢菌属得到。
15.脂肪分解酶在用于制备溶血磷脂的底物中的应用，其中所述脂肪分解酶具有磷脂酶活性，且其中所述脂肪分解酶可从喜热裂孢菌属得到。
16.可从喜热裂孢菌属得到的脂肪分解酶用于植物或食用油的酶促脱胶从而水解极性脂质主要部分的应用。
17.可从喜热裂孢菌属得到的脂肪分解酶在包括处理磷脂从而水解脂肪酰基的方法中的应用。
18.脂肪分解酶在生物转化极性脂质以制造高价值产品中的应用，其中所述脂肪分解酶能水解所述极性脂质，且其中所述脂肪分解酶可从喜热裂孢菌属得到。
19.根据权利要求18的应用，其中所述高价值产品是以下一种或多种碳水化合物酯、 蛋白质酯、蛋白质亚基酯和羟酸酯。
20.可从喜热裂孢菌属得到的脂肪分解酶在制备食品中的应用，其中所述脂肪分解酶能水解糖脂和/或磷脂。
21.根据权利要求14至20之任何一项的应用，其中所述脂肪分解酶能将酰基从糖脂转移至一种或多种酰基受体底物。
22.根据权利要求14至21之任何一项的应用，其中所述脂肪分解酶包含SEQ. ID. No. 5、7或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列，或包含SEQ ID No. 6或17所示的核苷酸序列或与其具有至少70%同一性的核苷酸序列。
23.根据权利要求22的应用，其中所述脂肪分解酶包含SEQ.ID. No. 5、7或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70%同一性的氨基酸序列。
24.根据权利要求14的应用，其中所述溶血糖脂是DGMG或MGMG。
25.根据权利要求20的应用，其中所述食品是乳制品。
26.根据权利要求25的应用，其中所述食品是蛋或基于蛋的产品，且其中所述脂肪分解酶能将酰基转移至一种或多种酰基受体底物以降低一种或多种以下有害效应臭味和/ 或异味和/或油腻口味。
27.根据权利要求20的应用，其中所述食品是焙烤品。
28.根据权利要求14的应用，其中所述底物是食用油。
全文摘要
本发明涉及可从喜热裂孢菌属(Thermobifida)得到的脂肪分解酶在各种方法和用途中的应用，其中所述脂肪分解酶能水解糖脂或磷脂或者将酰基从糖脂或磷脂转移至酰基受体。优选地，应用于这些方法和用途中的脂肪分解酶包含SEQ.ID.No.5、7或16所示的氨基酸序列或与其具有至少70％同一性的氨基酸序列，或包含SEQ ID No.6或17所示的核苷酸序列或与其具有至少70％同一性的核苷酸序列。
文档编号C12P7/64GK102154391SQ20101015113
公开日2011年8月17日 申请日期2005年7月18日 优先权日2004年7月16日
发明者乔恩·B·索, 乔恩·D·米凯尔森, 安德雷·米亚斯尼科夫, 弗夫·皮特卡南, 米拉·波夫莱南 申请人:丹尼斯科公司