专利名称：蝉花虫草与红曲霉固体共发酵高产功效成分的方法
技术领域：
本发明属微生物发酵技术领域，涉及一种采用蝉花虫草与红曲霉固体共发酵高产功效成分的方法。
背景技术：
蝉花Cordyceps cicadae X. Q. Shing的药用已有1000多年的历史。在南北朝刘宋时代的《雷公炮炙论》中就记载了蝉花的加工；宋朝唐慎微所著《经史证类备急本草》中言“蝉花味甘寒，无毒，主小儿天吊，夜啼，心悸”。迟秋阳等(1996)将蝉花虫草菌株进行人工发酵产生蝉花虫草菌丝，从中提取蝉花虫草多糖，对小鼠进行淋巴转化试验、fe及E玫瑰花试验、特异性免疫玫瑰花试验(IR-FC)、巨噬细胞吞噬试验、抗绵羊红细胞(SRBC)抗体效价试验。结果表明蝉花虫草多糖具有明显的提高免疫功能作用(P < 0. 011 P < 0. 05)。红曲霉Monasus rubber Van Tieghem是制造红曲米的主要微生物，其色素、抑菌和遏制胆固醇合成、降血脂的生理活性成分在医药和营养保健食品方面有广泛的应用前景。红曲米自古入药，《饮膳正要》有红曲“昧甘、平、无毒”，“健脾、益气、温中”;《本草纲目》 有“甘、温、无毒，治女人血痛及产后恶血不净，擂酒饮之良”；《本草衍义补遗》有“活血、消食、健脾暖胃，治赤白痢、下水谷”;《本草备要》有“人营而破血、燥胃消食、活血和血、治赤白下痢，跌打损伤”等记载。经国内外现代科学技术深入研究认为，红曲中的洛伐他汀为主要功效成分，在治疗由高血脂诱发的心脑血管疾病的降血脂和降胆固醇药物中，洛伐他汀是公认的最安全、可靠、有效的首选药物。关于蝉花虫草和红曲霉单独培养，国内有很多报道。陈祝安等报道了蝉花的人工培养，分析了液体、固体培养蝉花的培养特性，指出蝉花对碳源的高敏感性，培养基中含碳量高(20%左右)，产孢梗束多而不易老化，分生孢子有推迟产生的现象(陈祝安等，真菌学报，1993，12 O) :138-144)。刘爱英等报道了提高红曲霉发酵产品Monacolin K含量的研究，在红曲培养过程中添加真菌激发子，能明显提高固态发酵产品Monacolin K含量达到 34. 99mg/g (刘爱英等，贵州农业科学，2007，35 (6) :5_7)。周礼红等报道了红曲霉与蛹虫草固体共发酵的方法，虫草素含量提高了 2. 5倍(周礼红等，食用菌，2008，3:40-42)。本发明充分利用蝉花虫草菌CCIC-3-1和红曲霉菌种MRUB-5固体共发酵高效转化培养基中碳源和氮源的优势，相互促进生长，使固体发酵产物的功效成分的生物合成能力显著增强。
发明内容
本发明提供了一种采用蝉花虫草与红曲霉固体共发酵高产功效成分的方法。该方法的操作步骤如下(1)生产菌株为蝉花Cordyc印s cicadae X. Q. Shing菌株CCIC-3-1 ；以及红曲霉 Monasusrubber Van Tieghem 菌株 MRUB-5 ；(2)菌种制备将步骤(1)所述菌株CCIC-3-1和MRUB-5分别接种到PDA斜面培养基，于恒温培养10d，用无菌水洗下孢子，稀释调整使孢子终浓度达到5 X IO7个/毫升；(3)固体共发酵培养基的制备固体培养基的配方为大米、玉米粉、薏仁米中的一种，含量60%，麸皮含量30%，谷糠含量5%，大豆粉含量5%。按10% -40%的培养基体积装入IOOOml三角瓶中，121°C高压灭菌60min ；(4)固体共发酵培养将步骤O)中制备好的菌种悬液按lml/100g固体培养基的量分别接入步骤(3)中各种固体培养基中，于M_28°C，静置培养15天，直到菌丝长满培养基即成固体发酵物；(5)固体发酵物后处理将步骤(4)中培养好的固体发酵物取出，50°C恒温干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末，采用HPLC法测定多糖和洛伐他汀的含量。本发明的关键点在于蝉花虫草与红曲霉固体共发酵培养基中选择适宜的碳源， 固体培养基的培养基体积和培养温度的控制，以上关键点如能把握好，可以显著高产蝉花虫草与红曲霉固体共发酵培养物功效成分的含量。本发明操作简便，效果良好，可应用到大规模蝉花虫草与红曲霉固体共发酵的实际生产过程中。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不是对本发明的限制。实施例1 不同碳源对蝉花虫草与红曲霉固体共发酵产功效成分的效果(1)菌种制备将菌株CCIC-3-1和MRUB-5分别接种到PDA斜面培养基，于恒温培养10d，用无菌水洗下孢子，稀释调整使孢子终浓度达到5 X IO7个/毫升；(2)固体共发酵培养基的制备固体培养基的配方为大米、玉米粉、薏仁米中的一种，含量60 %，麸皮含量30 %，谷糠含量5 %，大豆粉含量5 %。按20 %的培养基体积装入 IOOOml三角瓶中，121 °C高压灭菌60min ；(3)固体共发酵培养将制备好的菌种悬液分别按anl/瓶的量接入三角瓶固体培养基中，于^rc,静置培养15天，直到菌丝长满即成固体发酵物；(4)固体发酵物后处理将培养好的固体发酵物取出，50°C恒温干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末，采用HPLC法测定多糖和洛伐他汀的含量，其结果见表1。表1不同碳源对蝉花虫草与红曲霉固体共发酵产功效成分的效果
权利要求
1. 一种采用蝉花虫草与红曲霉固体共发酵高产功效成分的方法，其特征在于该方法的操作步骤包括(1)菌种制备>|f蝶花 Cordyc印s cicadae X. Q. Shing 禾口红曲霄 Monasus rubber Van Tieghem菌株分别接种到PDA斜面培养基，于恒温培养10d，用无菌水洗下孢子，稀释调整使孢子终浓度达到5 X IO7个/毫升；(2)固体共发酵培养基的制备固体培养基的配方为大米、玉米粉、薏仁米中的一种， 含量60 %，麸皮含量30 %，谷糠含量5 %，大豆粉含量5 %。按10 % -40 %的培养基体积装入IOOOml三角瓶中，121 °C高压灭菌60min ；(3)固体共发酵培养将制备好的菌种分别按lml/100g固体培养基的量接入三角瓶固体培养基中，于20-30°C，静置培养15天，直到菌丝长满培养基，即成固体发酵物；(4)固体发酵物后处理将培养好的固体发酵物取出，50°C恒温干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末，采用HPLC法测定多糖和洛伐他汀的含量。
全文摘要
本发明涉及一种采用蝉花虫草与红曲霉固体共发酵高产功效成分的方法。其操作步骤主要包括(1)蝉花虫草与红曲霉菌种的制备；(2)蝉花虫草与红曲霉固体共发酵培养基的制备；(3)蝉花虫草与红曲霉固体共发酵培养条件；(4)蝉花虫草与红曲霉固体共发酵培养物后处理和主要功效成分检测。使用本发明所提出的蝉花虫草与红曲霉固体共发酵的方法，可导致蝉花虫草产虫草多糖和红曲霉产洛伐他汀的能力增强。本发明操作简便，效果良好，可进行大规模推广应用。
文档编号C12P17/06GK102329848SQ201010226738
公开日2012年1月25日 申请日期2010年7月15日 优先权日2010年7月15日
发明者曾文波, 葛峰, 虞泓, 陈自宏 申请人:云南云百草生物技术有限公司