专利名称：蝉花新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及蝉花的新用途。
背景技术：
骨质疏松是一种常见的与增龄密切相关的代谢性骨病，现代医学认为骨质疏松症的发生与成骨细胞((osteoblast，0B)和破骨细胞的偶联失衡有关。OB具有合成、分泌组成骨基质胶原和糖蛋白的作用，在维持机体内环境稳定，生理机制调节和骨代谢疾病中发挥主要作用。促进成骨细胞增殖是中药防治骨质疏松症的主·要途径，体外培养成骨细胞是药效评价和新药开发的重要研究手段。中药蝶花(Cordycepes cicadea),是一种与冬虫夏草类似的药用虫生真菌,为蝶拟青霉(Paecilomyces cicadae)寄生在某些蝶若虫上形成的菌虫复合体,为我国传统名贵中药材，在我国的认识和利用已有悠久的历史。医家认为蝉花是一种与冬虫夏草相近的珍贵药材。现代研究表明，蝉花具有多方面药理作用，能够增强机体免疫功能，调节神经系统，解热镇痛，改善肾功能，调节脂类代谢，抗疲劳、抗应激，抗肿瘤作用等。但无论是天然蝉花还是人工培养的蝉花，均未有其治疗骨质疏松的研究与报道。
发明内容
本发明的目的是提供蝉花(Cordyc^pes cicadea)或蝉花的子实体在制备骨细胞增殖药物中的用途。进一步的，所述骨细胞增殖药物为治疗骨质疏松症的药物。所述蝉花可以为天然蝉花或人工蝉花。天然蝉花也称蝉菌蝉蛹草，是一种具有动物和植物特征的奇妙生物，根是蝉蛹或山蝉的幼虫体，花是从单个或是2-3个蝉幼虫头部生长出来的，约一寸多长，从顶端开花分枝。据有关的研究提出，蝉花属于生物病态现象，是一种虫菌相依的组合体。秋季来临，蝉钻入土中，逐渐变成蝉蛹，在羽化前被冬虫夏草菌类寄生，当生活备件适宜时，就开始萌发成菌丝体，吸收虫体的营养，最终虫体被菌丝体完全占有而只剩下一个躯壳。万物复苏时节，菌丝体又从营养阶段转化为有性阶段，渐渐从顶端开花分枝，故而得名蝉花。人工蝉花是将从天然蝉花中分离出来的蝉拟青霉经发酵获得的发酵产物，包括菌质和子实体，成分及功效与天然蝉花近似。本发明所述蝉花或蝉花的子实体是指即可以为完整的蝉花，也可以仅为蝉花的子实体。本发明所指蝉花或蝉花的子实体在制药中的用途，既可以将蝉花或蝉花的子实体直接入药，也可以将蝉花或蝉花的子实体采用常规的方法提取有效成分后(如常规的煎煮、水提醇沉法、醇提水沉法、盐析法等)入药。本发明经研究发现,蝉花或其子实体对骨细胞具有增殖的功效，该实验意味着蝉花可以被用于治疗骨质疏松症。蝉花用于治疗骨质疏松症的剂量可以为50mg-100mg/kg，本发明为蝉花的应用开辟了新的途径。
具体实施例方式实施例I蝉花及蝉花子实体对MG63骨细胞增殖的作用I、实验材料与方法I. I实验材料体外培养人骨细胞MG63(中国细胞库典藏细胞中心)；DMEM培养基(Gibco，美国)；胎牛血清(天津灏洋生物制品)；胰蛋白酶(Amresco，美国)；地塞米松、β —甘油磷酸钠、磷酸化抗坏血酸(ASAP)、噻唑兰(Mrrr)、胰蛋白酶、II型胶原酶、一萘基磷酸钠(Sigma公司)；蝉花(天然蝉花)及蝉花子实体(为人工培养的蝉花)(上海泛亚生命科学 研究院提供)。实验前用适量水提取，过滤，浓缩成lg/ml的浓度，使用前进行稀释。I. 2 方法I. 2. 1MG63细胞的培养从液氮中取出冻存的MG63细胞，迅速放人37°C温水中，轻轻摇动冻存管令其内容物尽快融化。用吸管吸出细胞悬液至离心管，加入新鲜培养基10mL，轻吹悬浮细胞，1000r/min离心5min，去上清，再用培养液重复洗I次。将MG63细胞以5 X 10个/mL密度接种于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100IXg/mL链霉素的DMEM培养基中，置于含5% 0)2、371、饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养，2411后换液I次。当细胞生长状态良好，至覆盖培养瓶底80%时，以0. 25%胰蛋白酶消化，进行传代。I. 2. 2细胞增殖的测定将成骨细胞按5 X 10接种于96孔板，每孔接种0. 2mL。待细胞贴壁后，吸弃培养液，分别加入IOOmL终浓度为0. 1,0. 3、lmg/mL的蝉花水提物，蝉花子实体水提物，阴性对照液加入等体积的DMEM培养基，继续培养48h。吸出培养液，用MTT法测定细胞增殖情况，酶联免疫检测仪测定各孔的吸光度值(OD)，测定波长为570nm。I. 2. 3统计学处理应用SPSSlI. O软件包对实验数据进行统计学分析，组间比较采用单因素方差分析，实验组与对照组比较采用Dunnett-t检验。2结果见下表
权利要求
1.蝉花或蝉花的子实体在制备骨细胞增殖药物中的用途。
2.如权利要求I所述蝉花或蝉花的子实体的用途，其特征在于，所述骨细胞增殖药物为治疗骨质疏松症的药物。
3.如权利要求I所述蝉花或蝉花的子实体的用途，其特征在于，所述蝉花为天然蝉花或人工蝉花。
全文摘要
本发明涉及蝉花的新用途，具体为蝉花或蝉花的子实体在制备骨细胞增殖药物中的用途。本发明为蝉花的应用开辟了新的研究方向，为骨质疏松患者带来了福音。
文档编号A61K36/066GK102846675SQ20111017827
公开日2013年1月2日 申请日期2011年6月28日 优先权日2011年6月28日
发明者王玉芹, 谭悠久, 盖悦, 金赵燕, 孙长胜 申请人:上海泛亚生命科技有限公司