一种富镁蝉花的人工培养方法
【专利摘要】本发明涉及一种富镁蝉花的人工培养方法，该方法包括如下步骤：步骤1，蝉花菌种在液体培养基中进行扩增；步骤2，将步骤1扩增后的菌种接种到固体培养基中进行固体培养；步骤3，对孢梗束进行采收；其特征在于，在步骤2所述固体培养基中加入镁盐，其加入量为7～15％。本发明人工培养方法采用在蝉花液体和固体培养基中添加定量的镁盐，通过微生物转化后，制成富镁蝉花，食用安全、方便，可满足各类人群对镁元素的要求。
【专利说明】
一种富镁蝉花的人工培养方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种蝉花的人工培养方法，具体涉及一种富镁蝉花的人工培养方法，属于生物领域。
【背景技术】
[0002]镁是人体细胞内的主要阳离子，浓集于腺粒体中，仅次于钾和磷，在细胞外液仅次于钠和钙居第三位。镁是多种酶的激活剂，在能量和物质代谢中起重要作用。近年研究发现镁与第二信使cAMP的生成，与激素及生长因子、心肌细胞和阳离子通道等多种生理功能有关。
[0003]镁离子作为酶的辅助因子参与体内所有能量代谢，激活和催化约350多种酶系统，包括葡萄糖的利用，脂肪、蛋白质和核酸的合成，三磷酸腺苷代谢及膜离子运转等，并与线粒体细胞及所有膜结构和功能完整性有关。镁离子通过激活膜上的酶，保持细胞内的稳定，镁离子的改变也影响钙的代谢所以镁具有维持心肌、神经、肌肉的正常功能的特殊作用。现有研究表明缺镁可引起各种心律失常如心室性早搏、房性早搏、心动过速甚至房颠；使蛋白质合成下降，降低机体抵抗力及免疫功能，人体肿瘤发生率增加；形成支气管哮喘高敏综合症。常见的胃肠道疾病如胃溃疡、十二指肠溃疡和胃炎等多是由于胃酸分泌过多引起的，镁盐作为抗酸药具有较强的缓冲能力，能快速持续中和胃酸而不会引起碱中毒及继发性酸分泌增加的现象；镁剂既能维护肝细胞膜的稳定性，促进肝细胞功能恢复，又能促进胆汁代谢。镁能促进糖原和能量贮存，改善胃肠功能，、术后早期应用镁剂使患者的肠道功能恢复时间明显提前，患者的营养状况改善较快，术后恢复较快。镁可治疗腹泻与便秘。
[0004]镁也是组成骨的主要成分，镁促进骨、牙齿及细胞形成，是正常骨的细胞间质的形成所需要的。镁在骨的矿质代谢中有关键的调节作用，与ca凋激素也有关系。镁不足可刺激甲状旁腺素(PTH)分泌，促进骨吸收。有研究表明，轻微的镁缺乏能损害矿物质平衡，是骨质疏松的危险因素。镁缺乏和骨质疏松经常同时出现，治疗骨质疏松不仅需补钙应同时补镁。
[0005]镁代谢与糖代谢相互影响，血糖浓度往往与血镁浓度呈负相关，糖尿病人血清镁比正常人低，尿镁比正常人高，血镁水平与胰岛素敏感性呈负相关，补镁可改善胰岛素敏感性和胰岛素分泌。糖尿病并发视网膜病变与血镁呈负相关，低血镁症被认为是视网膜病变的危险因素。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种富镁蝉花的培养方法。
[0007]本发明的目的是通过如下方案实现的:
[0008]—种富镁蝉花的人工培养方法，该方法包括如下步骤:
[0009]步骤1，蝉花菌种在液体培养基中进行扩增；
[0010]步骤2，将步骤I扩增后的菌种接种到固体培养基中进行固体培养；
[0011]步骤3，对抱梗束进彳丁米收；
[0012]其特征在于，在步骤2所述固体培养基中加入镁盐，其加入量为7?15%。
[0013]进一步，固体培养基中镁盐的加入量为7?11% ;更进一步，为9?11%。
[0014]进一步，在步骤I液体培养基加入镁盐，其加入量为I?3%。
[0015]进一步，所述镁盐为柠檬酸镁、醋酸镁、硫酸镁、氯化镁。更进一步，所述镁盐为柠檬酸镁。
[0016]进一步，步骤2接种量为15 %?30 %;更进一步，接种量为20 %?25 %;更进一步为 25%。
[0017]进一步，步骤2固体培养过程中，在菌丝体生长阶段采用遮光培养；从孢梗束始发至采收阶段采用光照培养。
[0018]本发明所述固体培养基为本领域常规固体培养基，如谷物培养基，农作物秸杆培养基，农作物皮壳培养基，经济林木树枝培养基，植物茎杆培养基等；其中优选谷物培养基；所述谷物可选自小麦、玉米、大米、小米、黄豆粉、荞麦、大麦、燕麦、糙米、粳米中的任意一种或几种。更进一步，所述固体培养基为小麦培养基或荞麦培养基。
[0019]本发明步骤I所述液体培养过程以菌种扩增为目的，可采用常规的菌种扩培方法，包括斜面培养、摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养中的任意一种或几种方法的组合；所用培养基为本领域常规的液体培养基，如马铃薯-蔗糖-琼脂培养基(PSA)、马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(PDA)、马铃薯-葡萄糖-水培养基(PSB)、酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基(SAAY)、酵母浸出粉-白砂糖-大豆水解蛋白培养基，麸皮煮汁-白砂糖培养基中的任意一种或几种。
[0020]本发明中所述蝴花(Isaria cicadae Miquel)是广布种，广泛分布在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的6-8月，按照一般中药材的采集方法都可采到，是现有技术中已知菌种，并可以从商业途径购买获得。
[0021]本发明所用的蝉花菌株已经在第CN201110178274.6号专利中公开(保藏号为CGMCC N0.3453)。
[0022]本发明人工培养方法采用在蝉花液体和固体培养基中添加定量的镁盐，通过微生物转化后，制成富镁蝉花，食用安全、方便，可满足各类人群对镁元素的要求。
【具体实施方式】
:
[0023]以下实施例中，实施例1-9及对照实施例采用保藏号为CGMCC N0.3453的蝉拟青霉菌株[Paecilomyces cicadae (Miq.) Samson];实施例10-13采用实施例14制备蝴花菌株。
[0024]以下实施例中，镁元素含量测定参照“GB/T5009.90-200食品中铁、镁、锰的测定”方法进行；氨基酸含量测定参照“GB/T 5009.124-2003食品中氨基酸的测定”方法进行；HEA含量测定参照“《蛹虫草子实体中N6- (2-羟乙基)-腺苷的分离纯化及抗肿瘤作用》，食用菌学报2013.20(1):62?65”方法进行。
[0025]实施例1
[0026]斜面培养:将蝉花菌种接种于斜面试管中，再将接种菌种的斜面试管放入22°C培养箱，培养时间为7天，待菌丝长满试管；
[0027]液体培养:在500ml三角瓶中装入200ml液体培养基，在0.1 IMpa压力下高压灭菌30分钟，待冷却至室温，将I支斜面试管的菌种接种到500ml三角瓶培养基上，并置于恒温振荡培养箱，温度22±1°C，150转/分钟条件下培养，培养时间为3天；
[0028]固体培养:按25%的接种量接种种子培养得到的菌种，接种后的容器放入培养室培养，培养室温度为22-24°C，空气相对湿度65% -70% ;首先要将培养室遮光，使发菌室基本黑暗。待菌丝体长满料面时(室内培养3?5天)，转入光照培养。接种后定期检查，及时剔除生长势差、感染杂菌的培养容器。此后为诱导形成孢梗束时期，保持培养室温度为20-22°C，相对空气湿度65%?70%，保证有散射光(10Lx?200Lx)诱导孢梗束形成。培养室要适时通风换气，保持发菌室空气新鲜；
[0029]采收及处理:采收孢梗束；
[0030]液体培养基:SAAY培养基(酵母浸出粉0.5 %，复合氨基酸I %，白砂糖3.5 %，水95% )，加入3%的柠檬酸镁；
[0031]固体培养基:小麦培养基，加入7%的梓檬酸镁。
[0032]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为300.llmg/100g，达到了中国营养学会推荐居民每日摄入镁的参考值(NRV);与安利钙镁片相比，镁含量提高了 152% ;
[0033]另外，该富镁蝉花中其他有效成分也明显提高，如氨基酸总量为18.81g/100g，较NRV提高2.7% ;HEA(即N6_(2_羟乙基)腺苷，又名茧草菌素，是虫草的特有成分，已作为虫草制品的质量控制指标之一)含量为0.078 %，较NRV提高56 %。
[0034]实施例2
[0035]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0036]液体培养基:SAAY培养基，加入3 %的醋酸镁；
[0037]固体培养基:玉米培养基，加入7.5%的醋酸镁；
[0038]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为157.01mg/100g。
[0039]实施例3
[0040]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0041 ] 液体培养基:SAAY培养基，加入3 %的氯化镁；
[0042]固体培养基:大麦培养基，加入8%的氯化镁；
[0043]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为163.21mg/100g。
[0044]实施例4
[0045]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0046]液体培养基:SAAY培养基，加入3 %的硫酸镁；
[0047]固体培养基:黄豆培养基，加入9%的硫酸镁；
[0048]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为125.26mg/100g。
[0049]实施例5
[0050]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0051 ]液体培养基:SAAY培养基，加入3 %的朽1檬酸镁；
[0052]固体培养基:荞麦培养基，加入10%的朽1檬酸镁；
[0053]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为265.66mg/100go
[0054]实施例6
[0055]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0056]液体培养基:SAAY培养基，不加梓檬酸镁；
[0057]固体培养基:小麦培养基，加入9%的梓檬酸镁；
[0058]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为295.34mg/100g。
[0059]实施例7
[0060]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0061]液体培养基:SAAY培养基，不加梓檬酸镁；
[0062]固体培养基:玉米培养基，加入9.5%的朽1檬酸镁；
[0063]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为275.17mg/100g。
[0064]实施例8
[0065]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0066]液体培养基:SAAY培养基，加入I %的朽1檬酸镁；
[0067]固体培养基:大麦培养基，加入10%的梓檬酸镁；
[0068]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为225.62mg/100g。
[0069]实施例9
[0070]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0071]液体培养基:SAAY培养基，加入I %的朽1檬酸镁；
[0072]固体培养基:黄显培养基，加入10.5%的梓檬酸镁；
[0073]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为225.34mg/100g。
[0074]实施例10
[0075]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0076]液体培养基:SAAY培养基，加入1.5%的梓檬酸镁；
[0077]固体培养基:荞麦培养基，加入11%的梓檬酸镁；
[0078]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为295.63mg/100g。
[0079]实施例11
[0080]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0081 ]液体培养基:酵母浸出粉3%，白砂糖3%，大豆水解蛋白0.5%，加入1.5%的柠檬酸镁；
[0082]固体培养基:荞麦培养基，加入11%的梓檬酸镁；
[0083]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为320.53mg/100g。
[0084]实施例12
[0085]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0086]液体培养基:麸皮煮汁4%，白砂糖3%，加入3%的硫酸镁；
[0087]固体培养基:小麦培养基，加入9%的硫酸镁；
[0088]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为315.63mg/100g。
[0089]实施例13
[0090]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0091 ] 液体培养基:PSB培养基(马铃薯20 %，葡萄糖2 % )，加入I %的柠檬酸镁；
[0092]固体培养基:小麦培养基，加入10%的梓檬酸镁；
[0093]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为300.16mg/100go
[0094]实施例14
[0095]在我国长江以南的亚热带和热带地区低洼地带，7月，按照一般中药材的方法采集。在超镜工作台上，在无菌条件下，将采来的新鲜虫草用无菌水冲洗干净，置于已灭菌的直径为15cm的培养皿中，虫草的内菌核部分(虫体)用打湿的脱脂棉包裹，以保湿。虫草的子实体下方放置一灭菌的载玻片，虫草菌核部分用小玻片垫起，以使可孕部分不要直接接触载玻片，其距离约0.5cm左右。然后将培养皿放置于20°C ±0.5°C的光照培养箱培养，待蝉花孢子弹射于载玻片上时，在孢子周围滴加刚溶化的PDA培养基少许，移出玻片，置于另一灭菌的培养皿中保湿培养，待长出菌丝后用接种针挑取少量菌丝转另一平皿(SDAY培养基)培养(同上)，直至长出单一的纯化的菌落为止。并经形态学或分子生物学方法验证，该菌株为蝴花虫草(Isaria cicadae Miquel)无性型。
[0096]对照实施例
[0097]斜面培养、液体培养、固体培养方法及基本培养基同实施例1，但培养基有以下改动:
[0098]液体培养基:SAAY培养基；不加入梓檬酸镁；
[0099]固体培养基:小麦培养基，不加入梓檬酸镁。
[0100]其培养的蝉花孢梗束镁元素含量为59.2mg/100g。
【主权项】
1.一种富镁蝉花的人工培养方法，该方法包括如下步骤: 步骤1，蝉花菌种在液体培养基中进行扩增； 步骤2，将步骤I扩增后的菌种接种到固体培养基中进行固体培养； 步骤3，对孢梗束进行采收； 其特征在于，在步骤2所述固体培养基中加入镁盐，其加入量为7?15%。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，固体培养基中镁盐的加入量为7?11%。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤I所述液体培养基加入镁盐，其加入量为I?3%。4.如权利要求1?3任一所述的方法，其特征在于，所述镁盐为柠檬酸镁、醋酸镁、硫酸镁、氯化镁中的任意一种。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述镁盐为柠檬酸镁。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2接种量为15%?30%。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2固体培养过程中，在菌丝体生长阶段采用遮光培养；从孢梗束始发至采收阶段采用光照培养。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固体培养基为谷物培养基；所述谷物为小麦、玉米、大米、小米、黄豆粉、荞麦、大麦、燕麦、糙米、粳米中的任意一种或几种。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述固体培养基为小麦培养基或荞麦培养基。10.如权利要求1?9任一所述方法培养的富镁蝉花。
【文档编号】A01G1/04GK105993584SQ201510562439
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2015年9月7日
【发明人】王玉芹, 纪伟, 胡建峰, 董琼, 陈奇超, 彭国杰, 陆小芳, 许静洁, 张忠亮, 路文遥, 孙长胜
【申请人】浙江泛亚生物医药股份有限公司