滤泡素抑制素样蛋白1在调节钠钾atp酶活性中的用途的制作方法

专利名称：滤泡素抑制素样蛋白1在调节钠钾atp酶活性中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及滤泡素抑制素样蛋白1(即FSTL1)在提高钠钾ATP酶活性从而用于治疗、缓解或改善相关疾病或症状(尤其是疼痛)中的用途。
背景技术：
目前的研究发现钠钾ATP酶在人体的正常代谢中具有非常重要的作用，广泛分布于各种组织器官的细胞膜上，如肾、心脏、肺和神经系统等。钠钾泵(即钠钾ATP酶)的活性与某些疾病或症状密切相关，其活性的提高或降低对这些疾病或症状产生重要的影响。例如，以下疾病或症状与钠钾泵的活性过高有关，或可通过抑制钠钾泵的活性得到缓解或治疗研究表明钠钾泵可能在肾性高血压的发病机制中有一定的作用，钠钾泵的活性增高促进离子转运，从而助长血压升高(Wang等，CurrOpin Nephrol Hypertens. 2009Sep ；18(5) :412-20 ；Ferrari 等，Cell MolBiol (Noisy-1 e-grand). 2006Dec 30 ；52(8) :15-8);有文献报道在人类的黑色素瘤细胞中钠钾泵的 a 亚基表达明显升高(Mathieu 等，J Cell Mol Med. 2009Feb 20. [Epubaheadof print]);培养的感觉神经元突起的生长以及肿瘤的生长和发生也与钠钾泵的活性过高有关，有文献报道钠钾泵的抑制剂如地高辛，可以明显抑制培养的感觉神经元突起的生长以及抑制肿瘤的生长和发生(Penniyainen 等，NeurosciBehav Physiol. 2009Mar ；39(3)301-4. ;Mijatovic 等，Expert Opin Ther Targets. 2008Nov ；12(11) :1403-17.)。有文献报道钠钾泵a I为治疗神经胶质瘤和非小细胞肺癌的治疗祀点,钠钾泵a I抑制剂有希望被用于治疗(如ー种强心苷的新型衍生物2" -oxovoruscharin(UNBS1450))治疗胶质母细胞瘤和非小细胞肺癌(KissR 等，.Neoplasia. 2008Mar ；10(3) :198-206 ；Kiss R 等，JPathol. 2007Jun ；212(2) :170-9.).以下疾病或症状与钠钾泵的活性偏低有关，或可通过提高钠钾泵的活性得到缓解或治疗在家族性偏瘫型偏头痛病人中，已发现钠钾泵上有较多缺失突变，已证实这些突 变和临床症状有密切的关系；还有ー些病人会出现癫痫症状(Aperia，J Intern Med. 2007Jan ；261(1) :44-52.);在糖尿病的动物模型中发现钠钾泵的活性和表达都有降低，其中红细胞中的C多肽也有明显的減少，外源补充C多肽会明显提高钠钾泵的活性和缓解糖尿病的症状(Vague 等，ExpDiabesity Res. 2004Jan_Mar ;5 (I) :37-50.);在ー些重症抑郁症患者中红细胞上的钠钾泵活性明显降低，给予锂盐治疗后好转；中度的抑制钠钾泵的活性也可导致躁狂的发生(Lichtstein和 Rosen, Neurochem Res. 2001 Sep ；26 (8-9) :971-8.);临床上见到的洋地黄中毒就是由于过度抑制钠钾泵的活性导致心肌过度兴奋所致(Vivo等，Am JMed Sci. 2008Nov ；336(5) :423-8.);以往研究还证实提高肺泡钠钾泵的活性可以明显改善肺损伤，肺水肿的症状(Factor 等，J Clin Invest. 1998 Oct I ；102(7) =1421-30.；Lecuona 等，J Bioenerg Biomembr. 2007Dec ；39(5-6) :391-5. ；Sznajder 等，J ApplPhysiol. 2002 Nov ；93(5) :1860-6)。
背根神经节(Dorsal Root Ganglia, DRG)的小神经元负责向脊髓传递温度觉和痛觉。当外周端受到物理或化学性刺激时，这些小神经元的传入纤维末稍在脊髄背角通过胞吐形式释放突触囊泡或大致密芯泡(LDCV)中的兴奋性递质谷氨酸和神经肽。目前认为，这种兴奋性信息传递可以被脊髄背角的中间神经元和下行通路释放的抑制性因子包括神经肽类物质阿片肽、神经递质Y-氨基丁酸(GBGA)、氨基こ酸(Glycine)和5-羟色胺(Serotonin)等调节。这种抑制性调节对于正常的躯体感觉和痛觉调制都有着功能上的重要意义。已经发现了ー些选择性高表达在背根神经节小神经元细胞膜表面的受体和通道，这加深了人们对感觉信息传递机制的理解。这些受体和通道包括ATP门控的？2も受体、瞬时受体电位通道Vl (TRPVl)和Al (TRPAl)、电压门控NavL 8通道和Mas相关G蛋白偶联受体。这些膜表面分子与初级感觉传递、感觉神经元的敏化及伤害性反应的易化过程有夫。尽管目前本领域已经发现了上述一些在感觉信息传递中起作用的分子，然而还迫切需要研究在感觉信息传递过程中还有那些分子在起作用，以推动对感觉信息传递的了 解，提出新的镇痛策略和开发新的镇痛药物。

发明内容
本发明的主要目的在于提供滤泡素抑制素样蛋白I在提高钠钾ATP酶活性从而用于治疗、缓解或改善相关疾病或症状(尤其是改善躯体感觉，特别是疼痛觉或温度觉)中的用途。本发明的另一目的在于提供一种滤泡素抑制素样蛋白I的生物活性片段，所述的活性片段具有良好的抑制躯体感觉的作用。在本发明的第一方面，提供滤泡素抑制素样蛋白I在制备组合物中的用途，所述组合物用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状。在本发明的一个实施方式中，所述疾病或症状选自疼痛、家族性偏瘫型偏头痛、糖尿病、抑郁症、洋地黄中毒、肺损伤或肺水肿。在本发明的另ー个实施方式中，所述组合物用于治疗、缓解或改善疼痛。在ー个优选例中，所述疼痛是身源性疼痛，优选神经病理性疼痛或伤害感受性疼痛。在本发明的另ー个实施方式中，所述神经病理性痛选自背根神经节神经源性痛、三叉神经节神经源性痛或坐骨神经痛。在另ー个优选例中，所述神经病理性疼痛为选自下组的由中枢或周围神经系统的损伤或病理改变引起的疼痛腰背痛、神经痛、纤维性肌痛、糖尿病相关的神经痛、多发性硬化相关的神经痛、帯状疱疹后神经痛以及与HIV有关联的神经病理性神经痛。在本发明的另ー个实施方式中，所述伤害感受性疼痛选自躯体伤害感受性疼痛或内脏伤害感受性疼痛。在一个优选例中，所述伤害感受性疼痛选自癌痛、关节炎痛、术后痛或与HIV有关联的伤害感受性疼痛。在本发明的另ー个实施方式中，所述滤泡素抑制素样蛋白I是(a) SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2所示氨基酸序列的蛋白质；(b) (a)中所限定的蛋白质的保守性变异蛋白质或其活性片段；或
(c)将(a)中氨基酸序列经过1-20个(优选1-10个，更优选1_5个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有提高钠钾ATP酶活性的由(a)衍生的蛋白质。在本发明的另ー个实施方式中，所述(b)选自(I)具有SEQ ID NO : I中第156-173氨基酸序列的多肽；
(2)具有SEQ ID NO 2中第158-175位氨基酸序列的多肽；(3)由SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失滤泡素抑制素结构域(即FS结构域)所形成的多肽；(4)由 SEQ ID NO :1 或 SEQ ID NO 2 的氨基酸序列缺失 Von Willebrand 型 C 结构域(即VWC结构域)所形成的多肽；(5)由SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失EF手型II结构域所形成的多肽；或(6)由SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失EF手型连接结构域所形成的多肽。在本发明的第二方面中，提供了一种分离的多肽，所述多肽选自(I)具有 SEQ ID NO 1 中第 156-173 位氨基酸序列 NGDSHLDSSEFLKFVEQN 的多肽，条件是该多肽不是SEQ ID NO :I所示的蛋白质；(2)具有 SEQ ID NO 2 中第 158-175 位氨基酸序列的 NGDSRLDSSEFLKFVEQN 的多肽，条件是所述多肽不是SEQ ID NO :2所示的蛋白质；(3)由SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失滤泡素抑制素结构域(即FS结构域)所形成的多肽；(4)由 SEQ ID NO :1 或 SEQ ID NO 2 的氨基酸序列缺失 Von Willebrand 型 C 结构域(即VWC结构域)所形成的多肽；(5)由SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失EF手型II结构域所形成的多肽；或(6)由SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失EF手型连接结构域所形成的多肽。在本发明的第三方面中，提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码本发明如上所述的多肽或SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2所示的蛋白质。在本发明的第四方面中，提供了ー种载体，所述载体含有本发明如上所述的多核苷酸。在本发明的第五方面中，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，所述宿主细胞含有本发明如前所述的载体；或其基因组中整合有本发明如前所述的多核苷酸。在本发明的第六方面中，提供了本发明如前所述的多肽或SEQ ID NO :1或SEQ IDNO 2的蛋白质的制备方法，该方法包含(a)在适合表达的条件下，培养本发明如前所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出本发明如前所述的多肽或SEQID及NO :1或SEQID和NO 2的蛋白质。在本发明的第七方面中，提供了ー种通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状的药物组合物，它含有(a)安全有效量的本发明的多肽、SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2的蛋白质；以及(b)药学上可接受的载体。在本发明的一个实施方式中，本发明的药物组合物用于治疗、缓解或改善选自下组的疾病或症状家族性偏瘫型偏头痛、糖尿病、抑郁症、洋地黄中毒、肺损伤、肺水肿或疼痛。在一个优选例中，所述的疼痛是身源性疼痛，优选伤害感受性疼痛或神经病理性疼痛。在本发明的另ー个实施方式中，所述的神经病理性痛选自背根神经节神经源性痛、三叉神经节神经源性痛或坐骨神经痛。在本发明的另ー实施方式中，所述神经病理性疼痛为选自下组的由中枢或周围神经系统的损伤或病理改变引起的疼痛腰背痛、神经痛、纤维性肌痛、糖尿病相关的神经痛、多发性硬化相关的神经痛、帯状疱疹后神经痛以及与HIV有关联的神经病理性神经痛。 在本发明的另ー个实施方式中，所述伤害感受性疼痛选自躯体伤害感受器性疼痛和内脏伤害感受器性疼痛。在本发明的一个优选例中，所述伤害感受性疼痛选自癌痛、关节炎痛、术后痛或与HIV有关联的伤害感受性疼痛。在本发明的第八方面中，提供了本发明的多肽、SEQ ID NO :1所示的蛋白质和/或SEQ ID NO :2所示的蛋白质在制备用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状的药物组合物中的用途。在本发明的一个实施方式中，所述药物组合物用于治疗、缓解或改善选自下组的疾病或症状家族性偏瘫型偏头痛、糖尿病、抑郁症、洋地黄中毒、肺损伤、肺水肿或疼痛。在一个优选例中，所述的疼痛是身源性疼痛，优选伤害感受性疼痛或神经病理性疼痛。在本发明的另ー个实施方式中，所述的神经病理性痛选自背根神经节神经源性痛、三叉神经节神经源性痛或坐骨神经痛。在本发明的另ー实施方式中，所述神经病理性疼痛为选自下组的由中枢或周围神经系统的损伤或病理改变引起的疼痛腰背痛、神经痛、纤维性肌痛、糖尿病相关的神经痛、多发性硬化相关的神经痛、帯状疱疹后神经痛以及与HIV有关联的神经病理性疼痛。在本发明的另ー个实施方式中，所述伤害感受性疼痛选自躯体伤害感受器性疼痛和内脏伤害感受器性疼痛。在本发明的一个优选例中，所述伤害感受性疼痛选自癌痛、关节炎痛、术后痛或与HIV有关联的伤害感受性疼痛。在本发明的第九方面中，提供了本发明的多肽在制备用于治疗类风湿性关节炎和/或缺血性心脏病的药物组合物中的用途。在本发明的第十方面中，提供了一种筛选可通过提高钠钾ATP酶活性治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状的潜在物质的方法，所述方法包括(I)将候选物质与表达滤泡素抑制素样蛋白I的体系接触；(2)检测候选物质对滤泡素抑制素样蛋白I的影响；若所述候选物质可提高滤泡素抑制素样蛋白I的表达、活性和/或分泌，则表明该候选物质是可用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状的潜在物质。在一个优选例中，所述疾病或症状选自家族性偏瘫型偏头痛、糖尿病、抑郁症、洋地黄中毒、肺损伤、肺水肿或疼痛。在另ー优选例中，所述的疼痛是神经病理性痛，优选背根神经节神经源性痛或三叉神经节神经源性痛。在本发明的一个实施方式中，步骤(I)包括在测试组中，将候选物质加入到表达滤泡素抑制素样蛋白I的体系中；和/或步骤(2)包括检测测试组的体系中滤泡素抑制素样蛋白I的表达、活性和/或分泌，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的表达滤泡素抑制素样蛋白I的体系；如果测试组中滤泡素抑制素样蛋白I的表达、活性和/或分泌在统计学上高于(优选显著高干，如高20%以上，较佳的高50%以上；更佳的高80%以上)对照组，就表明该候选物质是可用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状的潜在物质。在另ー优选例中，所述的体系选自细胞体系(如小神经元细胞)(或细胞培养物体系)、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。在另ー优选例中，所述方法还包括对获得的潜在物质进行进ー步的细胞实验和/或动物试验，以从候选物质中进ー步选择和确定有用的物质。

在本发明的第i^一方面中，提供了一种筛选治疗或缓解疼痛的潜在物质的方法，所述的方法包括(I)将候选物质与钠钾ATP酶的体系接触；(2)检测候选物质对钠钾ATP酶的影响；若所述候选物质可提高钠钾ATP酶的活性，则表明该候选物质是可用于治疗或缓解疼痛的潜在物质。在本发明的第十二方面中，提供了滤泡素抑制素样蛋白I的抑制剂在制备通过降低钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状的组合物中的用途。在本发明的一个实施方式中，所述疾病或症状选自肾性高血压、肿瘤(优选黒色素瘤、胶质母细胞瘤或非小细胞肺癌)。在本发明的另ー个实施方式中，所述抑制剂选自抗滤泡素抑制素样蛋白I或其活性片段的抗体；针对滤泡素抑制素样蛋白I编码序列的反义寡核苷酸或小干扰RNA ;或来源于钠钾ATP酶的肽段。在本发明的另ー个实施方式中，所述抑制剂选自(i)具有 SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 或 SEQ ID NO 8 所示的氨基酸序列的多肽；(ii) (i)中所限定的多肽的保守性变异多肽或其活性片段；或(iii)⑴或(ii)中任意多肽或活性片段的组合。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。


图I. FSTLl在DRG小神经元中高表达图1A.通过基因芯片检测的候选基因在成年大鼠组织中的表达谱和背根神经节信号強度与其他组织信号強度的比值。图中，在各种组织中基因信号与DRG中比值的log2比例范围用不同的色调显示。AvilK—advillin;CalcaK—CGRPa ;Htr3a代表5_羟色胺受体3A (5-hydroxytryptamine receptor 3A) ;Plekha4代表含血小板同源性结构域的豕族 A 的成贝 4、pleckstrin homologydomain containing, family A member 4)；Mpz代表髓鞘蛋白O (myelin proteinzero) ；P2rx3代表P2X3受体；Prphl代表外周蛋白I (peripherin I) ;Nef3代表神经微丝3 (neurofilament 3) ;Scn7a代表钠离子通道电压门控型 VII a (sodiumchannel, voltage-gated type VII, a);背根神经节 GAPDH 信号强度为阳性对照。图IB. RNA印迹法检测FstllmRNA在大鼠成年神经系统中的表达情況，以核糖体18s RNA作为上样量对照；图1C.免疫印迹检测FSTLl蛋白( 37kD)在大鼠成年神经系统中的表达情況，以肌动蛋白作为上样量对照；图1D.免疫组化和免疫印迹显示大鼠在胚胎期、出生后和成年时期背根神经节中 FSTLl的表达情況。FSTLl的表达在胚胎15天开始，在出生后28天达到最高水平。以肌动蛋白作为上样量对照；图1E.免疫荧光双标法检测在背根神经节和脊髓背角中，FSTLl分别与CGRP或IB4的共定位情況，FSTLl存在于CGRP阳性或IB4阳性的神经元中。其中，绿色表示FSTLl表达；红色表示CGRP或IB4表达；图1F.免疫荧光检测FSTLl与NavL 8通道蛋白的表达情況，FSTLl表达在含有NavL 8通道蛋白的DRG神经元中。其中上图中绿色表达FSTLl表达，中图中红色表示NavL 8通道蛋白表达，下图为上图和中图的叠加(merge)。图1G. FSTLl在不同DRG神经元类型中的分布情况；图1H.背根节神经元总数情況，以及背根节FSTLl阳性的神经元情況。图II.免疫荧光双标法检测FSTLl与P物质的表达和共定位情況。绿色表示FSTLl表达，红色表示P物质表达，箭头所指为FSTLl表达的囊泡；图1J.免疫荧光双标法检测FSTLl分别与TRPVl或P2X3的共定位情況。其中，红色表示FSTLl表达；绿色表示TRPVl或P2X3表达；图IK. RNA印迹法检测FstlI mRNA在大鼠各组织中的表达情況，以核糖体18s RNA作为上样量对照。图2.证明FSTLl由小清亮囊泡分泌的实验结果图2A.免疫荧光双标法检测在大鼠DRG的肽能神经元和IB4阳性小神经元中FSTLl的囊泡分布(箭头所示)，FSTLl不在含CGRP的大致密芯泡(LDCV)中，大部分也不在突触孔蛋白(synaptoporin, Synpr)阳性的囊泡中。其中，绿色表示FSTLl表达,红色表示 CGRP、IB4 或 Synpr 表达；图2B.免疫金标记检测DRG小神经元胞体中FSTLl的定位情況，FSTLl位于高尔基网外侧附近的小清亮囊泡(箭头)中；图2C.用蔗糖密度梯度离心分离亚细胞组分的方法分离大鼠脊髄背角不同囊泡群，免疫印迹法检测分离出的囊泡群中FSTLUSynpr和CGRP的表达情況。FSTLl主要存在于含有Synpr的囊泡群中，但不存在于含CGRP的囊泡群中；图2D.免疫金标记检测背根的传入纤维及脊髄背角I、II层的传入纤维末梢中含FSTLl囊泡的情況。FSTLl位于背根的传入纤维及脊髄背角1、11层的传入纤维末梢的小清亮囊泡(箭头所示)中，箭头所示含FSTLl的囊泡位于突触前膜附近。三角标识指示突触后致密带；
图2E.小鼠的后根结扎的示意图。结扎小鼠的后根24小时以阻断囊泡顺向运输，会导致传入纤维靠近DRG —端FSTLl的积聚；图2F.免疫印迹实验检测在无刺激条件下培养的大鼠DRG神经元分泌FSTLl的情况。以细胞裂解液中FSTLl的总表达情况作为上样量对照，其中柱形图是对各泳道FSTLl分泌情况的定量分析。可以看到在大鼠DRG神经元的培养液中FSTLl分泌量随时间而增加。与对照组相比，*P < 0. 05广P < 0. 01 ;图2G.免疫印迹实验检测在高钾刺激(55mM KCl，Ih)和有无细胞外钙条件下培养的大鼠DRG神经元分泌FSTLl的情況。以细胞裂解液中FSTLl的总表达情况作为上样量对照，其中柱形图是对各泳道FSTLl分泌情况的定量分析。与未加高钾刺激的对照组相比，*P < 0. 05(高钾加钙刺激(即柱2)与未加高钾但加钙刺激(即柱I)的对照组相比)，sP< 0. 05 (高钾加钙刺激(即柱2)与加高钾未加钙刺激(即柱4)的对照组相比)；图2H.免疫印迹检测在高钾刺激(55mM KCl，15min)条件下大鼠脊髓脑片FSTLl的分泌情況。高钾刺激使FSTLl在脊髄薄片中的分泌量显著增加，以细胞裂解液中肌动蛋白的表达作为上样量对照。在相同的样品中，通过免疫印迹和HPLC检测方法显示CGRP和谷氨酸(Glu)水平升高。与未加高钾刺激的对照组相比，*P < 0. 05 ；图21.免疫印迹检测在高钾刺激和有无细胞外钙条件下大鼠脊髄背角的突触球中FSTLl的分泌情況。高钾刺激使FSTLl在脊髓背角的突触球中的分泌量显著增加，以细胞裂解液中肌动蛋白的表达作为上样量对照，其中柱形图是对各泳道FSTLl分泌情况的定量分析，同时也表示经免疫印迹检测FSTLl与CGRP存在共分泌。与未加高钾刺激的对照组相比，*P < 0. 05，**P < 0.01(加钙的高钾刺激组(即柱3和柱4))；图2J.免疫印迹实验检测在KC1、辣椒素(Capsaicin，Cap)和/或capsaizepine (CPZ)存在下，用年轻大鼠DRG培养的神经元细胞分泌的FSTLl水平。以细胞裂解液中FSTLl的总表达情况作为上样量对照，其中柱形图是对各泳道分泌情况的定量分析。与未加刺激的对照组相比，#P < 0.01(仅加KCl或Cap刺激与未加任何刺激的对照组相比)，##P < 0. 01 (仅加Cap刺激与加Cap和CPZ刺激相比)。图3. FSTLl对于感觉传递的抑制作用图3A. FSTLl及其突变体Ml (EF手型结构域缺失)和M2 (第165位由E变为A)的表达质粒构建示意图，FSTLl及其突变体的C端与Myc和His标签融合；图3B.在成年大鼠脊髄薄片上进行全细胞记录，记录了 31个脊髓II层神经元在嵌制电压_70mV(VH)下的sEPSC。在16个神经元中，重组FSTLl同时降低了自发性兴奋性突触后电流(sEPSC)的频率和幅度。兔抗全长FSTLl抗体(I 1000)可增强sEPSC的电流频率和幅度，免疫前血清(I 1000)用作对照。所有定量分析采用3min内灌流FSTLl收集的数据。与未加FSTLl的对照组或免疫前血清组相比，*P < 0. 05，**P < 0. 01 ；图3C. 0. 2Hz (强度210-650 U A)刺激背根诱导了 C纤维的谷氨酸能单突触eEPSC，平均幅度166±23pA(37-459pA ；VH = -70mV)。在24个被记录的脊髓II层神经元中，C纤维激发的单突触诱发性兴奋性突触后电流(eEPSC)被FSTLl (60nM，n = 14 ；300nM,n = 5)抑制，但不被Ml (n = 4)和M2 (n = 5)抑制。当标准化为对照eEPSCs的峰电流水平后，被抑制的eEPSCs的衰减时间常数无显著变化。FSTLl抗体(I 1000)也增强C纤维的eEPSC(n = 5)。与未加FSTLl的对照组或免疫前血清组相比，*P < 0. 05, **P < 0. 01 ；、
图3D. FSTLl (60nM)仅降低微小性兴奋性突触后电流(mEPSC)的频率。与未加FSTLl的对照组相比，**P < 0. 01 ；图3E.免疫印迹检测FSTLl、Ml和M2重组蛋白的表达情况；图3F.纯化的人重组滤泡素抑制素对成年大鼠脊髄薄片上记录的sEPSC没有影响。加了 FSTLl的实验组，与未加FSTLl的对照组相比广P < 0. 01 ;与加FSTLl的组相比，flP < 0. 05。图4.在DRG神经元中条件性敲除Fstll基因图4A. Fstll条件性基因敲除小鼠的构建示意图。用两个IoxP序列(灰色三角，Fstllp)来将编码FSTLl信号肽的外显子2删除。在内含子区域的neo也被IoxP删除。PCR检测显示含单拷贝Fstll的杂合子(Fstl 1F/+)包括399bp和505bp两个条带；纯合子 (Fstl 1F/F)仅有ー个505bp条带；而野生型(Fstll+/+)有399bp —个条带。通过与SNS-Cre小鼠杂交，neo和外显子2被去除；图4B.免疫印迹检测Fstll+/+、Fstll+/_、Fstll+小鼠DRG中FSTLl的表达情况。显示FSTLl在Fstll+DRG中基本不存在；图4C.在Fstllv-小鼠的DRG中，FSTLl免疫反应阳性的神经元降低到约10%，而ー些主要分子的表达没有改变。图5. FSTLl的缺失诱导躯体感觉超敏图5A.全细胞记录脊髓II层神经元的sEPSC，显示由15mM KCl (Imin)诱导的sEPSC频率增加在Fstll+小鼠中比在Fstl 1+/+小鼠中更显著。以不加KCl刺激作为对照，**P< 0.01 (Fstll+小鼠)；图5B.在体记录小鼠脊髓背角的广动カ神经元反应(WDR), Fstll+小鼠(n = 6)的脊髄背角的WDR神经元对于热刺激(左)和机械刺激(右)更敏感(与Fstll+/+小鼠相比，*P < 0. 05)。鞘内给予(i. t.) FSTLl可逆转Fstll+小鼠这种增强的WDR神经元反应(n = 3，*P く 0. 05)；图5C. Fstl 1+/\ Fstl 1F/F, Fstll+小鼠的温度刺激缩足反应延后时间(左)和机械刺激缩足阈值(右)的比较。Fstll+对于热(左)和机械刺激(右)更敏感(n = 12 ;与 Fstll+/+ 小鼠和 FstllF/F 小鼠相比，**P < 0. 01)；图5D. Fstl 1+/\ Fstl 1F/F, Fstll+小鼠在加速旋转试验中跌落延后时间的比较结果(n = 6);图5E. Fstl 1+/\ Fstl 1F/F, Fstll+小鼠后脚掌注射福尔马林诱导炎性痛模型中小鼠舔足时间的比较。Fstll+小鼠显示更明显的疼痛反应(n = 6，与Fstll+/+小鼠和FstllF/F小鼠比较，*P < 0. 05)；图5F. Fstll+小鼠鞘内注射(i. t.)不同浓度FSTLl后对热刺激的缩足延后时间的影响，对照组注射载体(0. OlM PBS)。FSTLl降低Fstll+小鼠对热刺激的反应。与注射载体的 Fstir,-小鼠相比，*P < 0. 05，< 0. 01 ;图5G.成年大鼠鞘内注射抗FSTLl全长蛋白的抗体(I 100，20 yl)或免疫前血清，观察大鼠对热刺激的缩足延后时间的变化。给予抗体后大鼠对热刺激更敏感(n = 6，与注射免疫前血清的小鼠相比，*P < 0. 05，**P < 0. 01)。图6. FSTLl表达的下降对神经源性痛有贡献
图6A.原位杂交显示Fstll mRNA水平，坐骨神经切断14天后大鼠腰4-5节段DRG中含有Fstll mRNA的小神经元数目显著減少，以大鼠未切断的对照侧为对照，**P <0.01；图6B.免疫印迹显示大鼠坐骨神经切断后背根节不同时间FSTLl的变化。以GAPDH作为上样量对照；图6C.免疫标记显示在坐骨神经切断14天后FSTLl阳性DRG数量減少。免疫荧光双标法显示，在损伤的DRG神经元[以活化转录因子3(ATF3)标记]中FSTLl缺失。坐骨神经切断14天后，在腰5节段中传入纤维(以三角箭头标示)中FSTLl显著下降；图6D.由坐骨神经分支切断引起的神经源性痛模型中，切断14天后腰OTRG中FSTLl阳性神经元的数目显著下降。以大鼠未切断的对照侧为对照，**P <0.01 ；图6E.在坐骨神经分支切断引起的神经源性痛模型中，鞘内注射FSTLl蛋白对于大鼠机械刺激缩足阈值的影响； 图7. FSTLl蛋白与a I钠-钾ATP酶(NKA)亚基的结合图7A.用重组的FSTL l_myC孵育培养的大鼠背根节神经元，同时加入了不透膜的交联剂(BS3)，用myc抗体检测到FSTLl在近150kD处可见一条带，实验重复3次；图7B.与图7A同样处理的样品用a INKA亚基的单克隆抗体检测，可见部分a INKA亚基分子量从IlOkD增加到150kD，a 3NKA亚基未见此现象，实验重复3次；图7C.免疫组化染色显示a INKA亚基主要定位于背根节神经元的小细胞中，与FSTLl有共定位；图7D.大鼠背根节的免疫共沉淀实验显示，用FSTLl抗体免疫共沉淀下来的蛋白质中可以检测到a INKA亚基，实验重复3次；图7E.在C0S7细胞中共转带flag标签的a INKA亚基和FSTLl_myc (在f lag抗体免疫共沉淀下来的蛋白质中可以检测到FSTLl-myc (实验重复3次))；图7F.斯卡查德分析显示125I-FSTLl剂量依赖性地结合共表达a INKA亚基和3 I亚基的C0S7细胞(Kd = 43nM)；图7G.在表达FSTLl-myc和a INKA亚基的C0S7细胞中，免疫共沉淀实验显示在flag抗体免疫共沉淀下来的蛋白质中存在FSTLl-myc，在共表达FSTLl-myc和a INKA亚基E314G-flag或a INKA亚基T889N-flag或a INKA亚基lag的细胞中，flag抗体免疫共沉淀下来的蛋白质中存在的FSTLl-myc显著下降，FSTLl-myc不与a 3NKA亚基结合，但与a 3NKA亚基G_’N879T-fiag结合，实验重复3次。图8. FSTLl 激活 a INKA 亚基图8A.在C0S7细胞中共转a INKA-flag和带myc标签的P I亚基，可以检测到FSTLl剂量依赖性地上调NKA的活性，共转a 3NKA-flag时则不能。在培养的背根节神经元中也可以检测到FSTLl呈剂量依赖性地上调NKA的活性；图8B. FSTLl 在共转 a INKA 亚基 E314G-flag 或 a INKA 亚基 T889N-flag 或 a INKA 亚基ran i889N_flag和0 I亚基的⑶S7细胞中不能增加NKA的活性，FSTLIe165a不能提高共表达a INKA亚基和P I亚基的C0S7细胞中NKA的活性。与共表达a INKA亚基和P I亚基的 C0S7 细胞相比，*P < 0. 05，**P < 0. 01 ；图8C. C0S7全细胞记录观察到FSTLl (30nM)对共转a INKA-flag和P I-myc亚基的细胞(n = 15)显著降低细胞膜电位，对不转染的细胞(n = 12)或共转a 3NKA_f lag和3 I-myc亚基的细胞(n = 8)膜电位没有影响。与不转染的细胞相比，**P < 0. Ol ；图8D.在共表达a INKA亚基和P I亚基的C0S7细胞中，预孵育M3M4 (EC5tl =3. 6 u M)或M7M8 (EC5tl = 2. 9 ii M)肽段可以使1251-FSTL1的结合率显著下降，M1M2肽段不能降低；图8E.在共表达a INKA亚基和P I亚基的C0S7细胞中，预孵育M3M4或M7M8肽段可以减弱FSTLl引起的NKA活性增强作用。与不加FSTLl的对照相比，**P < 0. 01 ；图8F.全细胞记录急性分离的成年大鼠背根节小神经元，FSTLl (30nM)降低动作电位的频率，并且诱导膜超极化(记录16个细胞有7个有作用)，这种影响当同时给予NKA的特异性抑制剂哇巴因(OB IOOiiM)时被翻转，FSTLl引起的膜超极化的效应可被哇巴因翻转，也可以被预孵育a INKA的第2个胞外环M3M4肽段所拮抗。图8G.在脊髓背角中a INKA的表达情況，免疫组化显示a INKA与FSTLl共存于初级传入末梢中； 图8H.脊髓脑片II层神经元全细胞记录显示FSTLl (60nM)降低sEPSC的频率，这种影响当同时给予NKA的特异性抑制剂哇巴因(OB IOOiiM)时被翻转。与不加FSTLl的对照相比，** P < 0. 01(n = 5)；图81.脊髓脑片II层神经元全细胞记录显示M3M4(20iiM，3min)肽段孵育增加sEPSC的频率。与不加肽段的对照相比，*P < 0. 05 (n = 6)；图8J.脊髓脑片II层神经元全细胞记录显示M3M4(20iiM，3min)肽段孵育增加C纤维刺激引起的eEPSC幅度。与不加肽段的对照相比，*P < 0. 05 (n = 5)。图9. FSTLl蛋白的各功能区域对于细胞内钙和a INKA酶活性的影响分别得到去除FS、VffC, EF手型结构域和第165位氨基酸突变成丙氨酸的真核表达的重组蛋白，在急性分离的初级感觉神经元上用钙成像的方法检测蛋白质对辣椒素(Capsaicin, Cap)引起的DRG神经元细胞内I丐升高的影响,全长FSTLl显著降低Cap引起的细胞内钙升高，缺失FS和VWC结构域对FSTLl的作用没有影响，但缺失EF手型结构域和第165位突变均显著影响FSTLl的功能。在稳定转染a INKA和P INKA亚基的C0S7细胞上检测a INKA酶活性，FSTLl全长可以显著激活a INKA酶的活性，EFl手型结构域中第156-173位氨基酸序列合成多肽(SP76)也能显著激活a INKA酶的活性。
具体实施例方式本发明人经过广泛而深入的研究，首次论证了滤泡素抑制素样蛋白I (Follistatin-Like
I,FSTL1)或其生物活性片段可提高钠钾ATP酶的活性，从而可用于治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状。例如，在感觉信息传递过程，下调FSTLl使得钠钾ATP酶活性下降会导致痛觉敏感性増加，这种调节作用是ー种全新的感觉信息传递调节机制。因此，FSTLl其本身或其上调剂能够通过提高钠钾ATP酶活性而用于抑制哺乳动物躯体感觉(如減少哺乳动物的痛觉)。如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
如本文所用，“与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状”是指通过调节(包括上调或下调)钠钾ATP酶活性可获得治疗、缓解或改善的疾病或症状。与钠钾ATP酶活性降低或过低相关的疾病或症状包括但不限于家族性偏_型偏头痛(Familial hemiplegicmigraine)、糖尿病(diabetes)、抑郁症(depression)、洋地黄中毒(digoxin toxicity) >肺损伤(lung injury)、肺水肿(lung edema)或哺乳动物躯体感觉(如痛觉或温度觉过明显)，这些疾病或症状可通过提高钠钾ATP酶活性(在本发明中可通过例如増加FSTLl数量或提高FSTLl活性实现)而得到治疗、缓解或改善。与钠钾ATP酶活性提高或过高相关的疾病或症状包括但不限于肾性高血压、肿瘤(优选黑色素瘤、胶质母细胞瘤和非小细胞肺癌)，这些疾病或症状可通过降低钠钾ATP酶活性(在本发明中可通过例如减少FSTLl数量、降低FSTLl活性、抑制FSTL激活钠钾ATP酶或阻断FSTL与钠钾ATP酶结合而实现)而得到治疗、缓解或改善。如本文所用，所述的“躯体感觉”是指哺乳动物对于外在刺激(如机械损伤)或内在刺激产生的感觉反应，其通常由神经系统(包括背根神经节)传递。所述的感觉包括(但不限于)疼痛觉、温度觉。所述的疼痛包括神经源性痛，如背根神经节神经源性痛或三叉神经节神经源性痛。所述的温度觉是指对躯体接触到高温或低温后的感觉反应。就疼痛而言,其可分为身源性(somatogenic)疼痛和心因性(psychogenic)疼痛。身源性疼痛又可分伤害感受性疼痛(nociceptive pain)与神经病理性疼痛(NeuropathicPai)。神经病理性疼痛是由于中枢或周围神经系统的损伤或病理改变引起，包括但不限于腰背痛(lower back pain)、神经痛(neuralgia)、纤维性肌痛(Fibromyalgia)、糖尿病相关的神经痛(diabetic neuropathic pain, DNP)、多发性硬化相关的神经痛(painassociated with multiple sclerosis)、带状疱疫后神经痛(PHN)和HIV有关联的(神经病理性)神经痛(HIVNP)等。伤害感受器性疼痛是由于人体内的伤害感受器受到机械、热、化学刺激或损伤引起，可分为躯体伤害感受器性疼痛和内脏伤害感受器性疼痛，包括但不限于癌痛(cancer-relatedpain)、关节炎痛(arthritic pain)、术后痛(post-operativepain)和HIV有关联的(伤害感受器性)神经痛(HIVNP)等。其中，神经痛(neuralgia)包括但不限于三叉神經痛(Trigeminal neuralgia)、坐骨神经痛(sciatic neuralgia)等。如本文所用，“含有”、“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由......构成”、“基
本上由......构成”、和“由......构成”;“主要由......构成”、“基本上由......构成”
和“由......构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。FSTLl蛋白或其生物活性片段在寻找特异性表达在DRG神经元上的新功能分子的过程中，本发明人发现FSTLl在DRG小神经元上选择性高表达。 FSTLl是ー种糖蛋白，最早被发现是ー种转化生长因子(TGF) P I诱导蛋白。FSTLl属于滤泡素抑制素基因家族，拥有滤泡素抑制素样结构域和ー对EF-手型结构，但是不能与激活素(Activin)结合。FSTLl可以抑制肿瘤细胞的生长，而且是类风湿性关节炎自身免疫抗体的靶蛋白。尽管已知包括DRG在内的神经系统中存在Fstll mRNA，但是以往FSTLl在神经系统中的生理功能仍不为人知。本发明人在深入研究中意外发现，FSTLl可与钠-钾ATP酶(Na+，K+-ATPase)结合，且其中结合的关键点在于钠-钾ATP酶a INKA亚基第二个胞外环M3M4和第四个胞外环M7M8中。并且，FSTLl与钠-钾ATP酶结合之后，可激活钠-钾ATP酶的活性，从而可用于治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性降低或过低相关的疾病或症状。反之，研究还证明了来源于钠钾ATP酶的肽段或它们的同源序列，包括但不限于SEQ ID NOs 5和6所示的M3M4肽段、SEQ ID NOs 7和8所示的M7M8肽段)，通过抑制FSTLl与钠-钾ATP酶结合，可降低钠钾ATP酶的活性，从而可治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性提闻或过闻相关的疾病或症状。本发明中利用上调或下调FSTLl来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状的方法，在同时存在FSTLl和钠钾ATP酶的组织或细胞(例如背根神经节、心脏、肺、肾脏等)中尤为有效。钠钾ATP酶a INKA亚基的序列在本领域中是已知的，或可通过本领域常规方法确定。例如，大鼠和人的钠钾ATP酶a INKA亚基的氨基酸序列分别如SEQ I D NO 3(1023Aa)和SEQ ID NO 4(1023Aa)所示，它们的序列相同性达到96%。大鼠和人钠钾ATP酶a INKA亚基中的关键胞外环如下表I所示表I.钠钾ATP酶a INKA亚基和关键胞外环
权利要求
1.滤泡素抑制素样蛋白I在制备组合物中的用途，所述组合物用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状。
2.如权利要求I所述的用途，其特征在于，所述疾病或症状选自疼痛、家族性偏瘫型偏头痛、糖尿病、抑郁症、洋地黄中毒、肺损伤或肺水肿。
3.如权利要求I所述的用途，其特征在于，所述组合物用于治疗、缓解或改善疼痛。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述疼痛是身源性疼痛。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述身源性疼痛选自神经病理性疼痛或伤害感受性疼痛。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述神经病理性痛选自背根神经节神经源性痛、三叉神经节神经源性痛或坐骨神经痛。
7.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述神经病理性疼痛为选自下组的由中枢或周围神经系统的损伤或病理改变引起的疼痛腰背痛、神经痛、纤维性肌痛、糖尿病相关的神经痛、多发性硬化相关的神经痛、帯状疱疹后神经痛以及与HIV有关联的神经病理性神经痛。
8.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述伤害感受性疼痛选自躯体伤害感受性疼痛或内脏伤害感受性疼痛。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述伤害感受性疼痛选自癌痛、关节炎痛、术后痛或与HIV有关联的伤害感受性疼痛。
10.如权利要求I所述的用途，其特征在于，所述滤泡素抑制素样蛋白I是 (a)SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2所示氨基酸序列的蛋白质； (b)(a)中所限定的蛋白质的保守性变异蛋白质或其活性片段；或 (C)将(a)中氨基酸序列经过1-20个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有提高钠钾ATP酶活性的由(a)衍生的蛋白质。
11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述(C)是将(a)中氨基酸序列经过1-10个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有提高钠钾ATP酶活性的由(a)衍生的蛋白质。
12.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述(C)是将(a)中氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有提高钠钾ATP酶活性的由(a)衍生的蛋白质。
13.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述(b)选自 (1)具有SEQID NO :I中第156-173氨基酸序列的多肽； (2)具有SEQID NO 2中第158-175位氨基酸序列的多肽； (3)由SEQID NO :1或SEQ ID NO :2的氨基酸序列缺失滤泡素抑制素结构域，即FS结构域，所形成的多肽； (4)由SEQID NO :1或SEQ ID NO :2的氨基酸序列缺失Von Willebrand型C结构域，即VWC结构域，所形成的多肽； (5)由SEQID NO 1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失EF手型II结构域所形成的多肽；或 (6)由SEQID NO :1或SEQ ID NO :2的氨基酸序列缺失EF手型连接结构域所形成的多肽。
14.一种分离的多肽，所述多肽选自 (1)具有SEQID NO 1中第156-173位氨基酸序列NGDSHLDSSEFLKFVEQN的多肽，条件是该多肽不是SEQ ID NO :1所示的蛋白质； (2)具有SEQID NO 2中第158-175位氨基酸序列的NGDSRLDSSEFLKFVEQN的多肽，条件是所述多肽不是SEQ ID NO 2所示的蛋白质； (3)由SEQID NO :1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失滤泡素抑制素结构域，即FS结构域，所形成的多肽； (4)由SEQID NO :1或SEQ ID NO :2的氨基酸序列缺失Von Willebrand型C结构域，即VWC结构域，所形成的多肽； (5)由SEQID NO 1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失EF手型II结构域所形成的多肽；或 (6)由SEQID NO 1或SEQ ID NO 2的氨基酸序列缺失EF手型连接结构域所形成的多肽。
15.—种分离的多核苷酸,其特征在于,所述的多核苷酸编码权利要求14所述的多肽。
16.—种载体，其特征在于，它含有权利要求15所述的多核苷酸。
17.—种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求16所述的载体；或其基因组中整合有权利要求15所述的多核苷酸。
18.—种权利要求14所述的多肽的制备方法,其特征在于,该方法包含 (a)在适合表达的条件下，培养权利要求17所述的宿主细胞； (b)从培养物中分离出权利要求14所述的多肽。
19.ー种通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状的药物组合物，它含有 (a)安全有效量的权利要求14所述的多肽、SEQID NO :1或SEQ ID NO 2的蛋白质；以及 (b)药学上可接受的载体。
20.如权利要求19所述的药物组合物，其特征在于，所述疾病或症状选自家族性偏瘫型偏头痛、糖尿病、抑郁症、洋地黄中毒、肺损伤、肺水肿或疼痛。
21.如权利要求20所述的药物组合物，其特征在于，所述的疼痛是身源性疼痛。
22.如权利要求21所述的药物组合物，其特征在于，所述身源性疼痛选自伤害感受性疼痛或神经病理性疼痛。
23.如权利要求22所述的药物组合物，其特征在于，所述的神经病理性痛选自背根神经节神经源性痛、三叉神经节神经源性痛或坐骨神经痛。
24.如权利要求22所述的药物组合物，其特征在干，所述神经病理性疼痛为选自下组的由中枢或周围神经系统的损伤或病理改变引起的疼痛腰背痛、神经痛、纤维性肌痛、糖尿病相关的神经痛、多发性硬化相关的神经痛、帯状疱疹后神经痛或与HIV有关联的神经病理性神经痛。
25.如权利要求22所述的药物组合物，其特征在于，所述伤害感受性疼痛选自躯体伤害感受器性疼痛或内脏伤害感受器性疼痛。
26.如权利要求25所述的药物组合物，其特征在于，所述伤害感受性疼痛选自癌痛、关节炎痛、术后痛或与HIV有关联的伤害感受性疼痛。
27.权利要求14所述的多肽、SEQID NO :1所示的蛋白质和/或SEQ ID NO :2所示的蛋白质在制备用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状的药物组合物中的用途。
28.权利要求14所述的多肽在制备用于治疗类风湿性关节炎和/或缺血性心脏病的药物组合物中的用途。
29.—种筛选用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状的潜在物质的方法，其特征在于，所述的方法包括 (1)将候选物质与表达滤泡素抑制素样蛋白I的体系接触； (2)检测候选物质对滤泡素抑制素样蛋白I的影响； 若所述候选物质可提高滤泡素抑制素样蛋白I的表达、活性和/或分泌，则表明该候选物质是可用于通过提高钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状的潜在物质。
30.一种筛选治疗或缓解疼痛的潜在物质的方法，其特征在于，所述的方法包括 (1)将候选物质与钠钾ATP酶的体系接触； (2)检测候选物质对钠钾ATP酶的影响； 若所述候选物质可提高钠钾ATP酶的活性，则表明该候选物质是可用于治疗或缓解疼痛的潜在物质。
31.滤泡素抑制素样蛋白I的抑制剂在制备通过降低钠钾ATP酶活性来治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症状的组合物中的用途。
32.如权利要求31所述的用途，其特征在于，所述疾病或症状选自肾性高血压或肿瘤。
33.如权利要求32所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自黑色素瘤、胶质母细胞瘤或非小细胞肺癌。
34.如权利要求31所述的用途，其特征在于，所述抑制剂选自抗滤泡素抑制素样蛋白I或其活性片段的抗体；针对滤泡素抑制素样蛋白I编码序列的反义寡核苷酸或小干扰RNA ;或来源于钠钾ATP酶的肽段。
35.如权利要求31所述的用途，其特征在于，所述抑制剂选自 ⑴具有 SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 或 SEQ ID NO 8 所示的氨基酸序列的多肽； (ii)(i)中所限定的多肽的保守性变异多肽或其活性片段；或 (iii)(i)或(ii)中任意多肽或活性片段的组合。
全文摘要
本发明涉及滤泡素抑制素样蛋白1(FSTL1)在调节钠钾ATP酶活性中的用途，具体涉及FSTL1在提高钠钾ATP酶活性从而治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状的用途，或FSTL1抑制剂在降低钠钾ATP酶活性从而治疗、缓解或改善与该活性相关的疾病或症状的用途，还提供了调节钠钾ATP酶活性的药物或其筛选的新方法。本发明的多肽、核苷酸、组合物及方法在治疗、缓解或改善与钠钾ATP酶活性相关的疾病或症中具有巨大的应用前景。
文档编号C12P21/02GK102648977SQ201110046989
公开日2012年8月29日 申请日期2011年2月25日 优先权日2011年2月25日
发明者张方雄, 张旭, 李开诚, 陆莹瑾, 鲍岚 申请人:中国科学院上海生命科学研究院