专利名称：用于制备嗅鞘细胞的装置的制作方法
技术领域：
本发明 公开了用于制备嗅鞘细胞的装置，属于生物技术与组织工程领域。
背景技术：
嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells, OECs)是在功能上介于许旺细胞和少突胶质细胞之间的一种特殊的胶质细胞，具有神经营养、抑制胶质增生、瘢痕形成、成鞘作用等。为轴突生长提供了适宜的微环境及较强的迁移的特性。嗅鞘细胞是目前所发现的极少数中枢神经系统可以再生的细胞之一。其特点为终身具有神经再生功能，还能够释放多种神经营养因子、神经粘附分子，被认为是髓鞘化能力最强的胶质细胞。嗅鞘细胞与胶质细胞、许旺细胞在表现型上有共同点，它们都能促进轴突的再生，主要区别在于嗅鞘细胞不但存在于中枢神经系统，也存在于外周神经中。嗅黏膜中的神经元是唯一生后才生长并在成年时继续分化的神经元，寿命为4 12周，随着新细胞的生长，又建立了新的神经支配关系。嗅鞘细胞存在于嗅神经及嗅球的神经层上，沿嗅神经的全长，从周围神经系统到中枢神经分布。嗅鞘细胞和嗅上皮均来源于嗅基板，而嗅球与其它中枢神经系统结构均起源于神经管，因此在胚胎发育过程中嗅上皮与嗅球发育是两种不同的方向，原始嗅觉神经元伴随大量基板细胞从嗅上皮传出轴突向端脑泡方向迁移，其中嗅鞘细胞引导嗅神经轴突到达端脑泡，这些细胞形成早期的嗅球，接着嗅球发生外翻，迁移细胞覆在其表面形成一薄层，接着它们穿透胶质界膜引导形成嗅神经层和小球层，成为覆盖在嗅球表面新的胶质界膜，不同于中枢神经系统和其它组织的是:在成人阶段嗅鞘细胞依然可穿过这种胶质界膜。嗅鞘细胞是一种嗅神经的支持细胞，它包被神经轴突迁徙入脑，在颅底它和嗅球的僧帽细胞相结合。分布于嗅神经的全长，从嗅上皮基底膜一直到嗅球，主要位于嗅神经的纤维层。嗅鞘细胞具有雪旺氏细胞和星形胶质细胞的特性，但总的表现更趋于前者，它有两个独特的特征。第一，它不仅存在于外周神经(雪旺氏细胞)，而且存在于中枢神经(星形胶质细胞)；第二，嗅粘膜具有终生再生能力，包括人类的嗅鞘细胞，这种再生是嗅鞘细胞参与高效调控的过程，尽管现在不清楚具体的机制。嗅鞘细胞不同于星形细胞和雪旺氏细胞，但同时兼有这两种细胞的特性，有象雪旺氏细胞有助于轴突生长的作用，但比雪旺氏细胞更能使轴突长距离生长，即具有更强的迁徙性；也有象星形胶质细胞一样对神经元的存活及轴突的生长具有营养作用，但嗅鞘细胞还能够包裹神经元形成髓鞘，支持神经突起的生长。正是这两种特性使得嗅鞘细胞成为神经修复的最佳选择。目前，嗅鞘细胞的研究大多集中于组织工程领域，细胞需求量大。因此，结合生物工程的灌流培养系统，降低制备过程中的污染机率，提高扩增速度具有重要的指导意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供用于制备嗅鞘细胞的装置。本发明提供的用于细胞培养的灌流装置，包括灌流瓶和废液瓶，还包括设置在灌流瓶和废液瓶之间的灌流反应器，所述灌流反应器的一端设有进液口，另一端设有出液口，所述灌流瓶通过管道与所述灌流反应器的进液口相连通，所述废液瓶通过管道与所述灌流反应器的出液口相连通；所述 灌流反应器包括细胞培养板，所述细胞培养板包括进液口与出液口，所述细胞培养板的底部是孔径能阻止待培养细胞穿过但能实现细胞培养液通过的半透膜。上述灌流瓶与废液瓶的瓶盖上均设有穿过所述瓶盖的气体滤头。这样可以使得罐流瓶以及废液瓶内的压强与外界相同，并且可以隔绝外界空其中的细菌污染。上述管道上设置有至少一个蠕动泵。这样控制培养基液体在灌流装置中的流速以适应细胞的营养需求，可控制液体的流速是0.02-0.45ml/h。具体地讲，所述灌流瓶与灌流反应器的进液口之间的管道上设置一个蠕动泵；所述灌流反应器的出液口和废液瓶之间的管道上设置一个蠕动泵。所述灌流反应器的进液口和与所述管道的连接处设有管道夹；所述灌流反应器的出液口和与所述管道的连接处设有管道夹，这样可以加固连接。本发明的用于制备嗅鞘细胞的装置，可以缩减操作步骤，减少污染机率，防止代谢物累计，提高扩增效率。
图1为本发明实施例1的结构示意图。图号说明:1灌流瓶，2和8气体滤头，3输入管，4和6蠕动泵，5灌流反应器，7输出管，9废液瓶。
具体实施例方式1、胚胎来源的嗅鞘细胞培养及扩增无菌条件下用眼科镊和组织剪从小鼠胚胎脑组织内分离出嗅神经球结构，适当保留嗅三角区，置于培养皿内。用DF12培养液充分冲洗，去除血污。然后用显微镊将嗅球周围包膜剥除，如组织内有淤血，应尽量清除。将剥离好的嗅球组织转移另一新的玻璃皿内，用组织剪尽量剪碎。加入少量DF12培养液，用玻璃吸管轻轻吹打。将组织块悬液转移至离心管中，离心。根据组织块数量，按10-15个组织块/cm2密度接种于右旋多聚赖氨酸(Poly-L-1ysine)处理过的灌流反应器5内。将灌流反应器5置于37°C、饱和湿度、体积分数为5%的C02培养箱中的灌流系统中，与输入管3和输出管7相连,进行培养。2、灌流装置的运行如图1所示，一种用于制备嗅鞘细胞的装置，包括灌流瓶I和废液瓶9。灌流瓶I的瓶盖与废液瓶9的瓶盖上分别设有穿过各自瓶盖的气体滤头2和8，这样可以使得罐流瓶I以及废液瓶9内的压强与外界相同，并且可以隔绝外界空其中的细菌污染。如图1所示，本发明提供的灌流装置还包括灌流反应器5，该灌流反应器5设置在灌流瓶I和废液瓶9之间。灌流瓶I通过输入管3与灌流反应器5的进液口相连通，废液瓶9通过输出管7与所述灌流反应器5的出液口相连通。为了控制培养基液体在灌流装置中的流速以适应细胞的营养需求，可在输入管3和输出管7上分别设置蠕动泵4和6，可控制液体的流速是0.02-0.45ml/h。
如图1所示，灌流反应器5包括可封闭的槽体和设置在所述槽体内的细胞培养孔板。
本发明装 置在使用时，先将分离细胞接种到灌流反应器5内，加入培养基与特定病毒载体后，放入37°C培养箱内培养，48小时后开启蠕动阀4和6，并控制液体的流速为0.02-0.45ml/h。普通培养液置于灌流瓶I中，通过蠕动泵4的运动将培养液在输入管3内输送到灌流反应器5内，流经反应器5内的细胞培养板，由输出管7输送到废液瓶9中收集；在培养基液体流速的控制过程中，液体的流速由输入管3和输出管7上的蠕动泵4和6控制，可随时根据细胞培养的需求调整培养基液体的流速。此灌流系统一方面可以使新鲜培养基不断泵入，另一方面含有代谢废产物(乳酸、氨等)的废液不断排出，通过调节灌注速率，可以使营养物质和代谢废产物与细胞之间的质量传递，降低有害代谢废物浓度积累。以上所述之实施方式为本发明的实施案例之一，并非以此限制本发明的实施范围，故凡依本发明之形状、构造及原理所做的等效变化，均应涵盖在本发明的保护范围内。
权利要求
1.用于制备嗅鞘细胞的装置，包括灌流瓶和废液瓶，其特征在于:所述灌流装置还包括设置在灌流瓶和废液瓶之间的灌流反应器，所述灌流反应器的一端设有进液口，另一端设有出液口，所述灌流瓶通过管道与所述灌流反应器的进液口相连通，所述废液瓶通过管道与所述灌流反应器的出液口相连通； 所述灌流反应器包括可封闭的槽体和设置在所述槽体内的细胞培养板所述培养孔的底部是孔径能阻止待培养细胞穿过但能实现细胞培养液通过的半透膜。
2.根据权利要求1所述的灌流装置，其特征在于:所述灌流瓶与废液瓶的瓶盖上均设有穿过所述瓶盖的气体滤头。
3.根据权利要求1-2任一所述的灌流装置，其特征在于:所述管道上设置有至少一个螺动栗。
4.根据权利要求3所述的微灌流装置，其特征在于:所述灌流瓶与灌流反应器的进液口之间的管道上设置一个蠕动泵；所述灌流反应器的出液口和废液瓶之间的管道上设置一个蠕动泵。
本发明公开了一种用于制备嗅鞘细胞的装置。该灌流装置包括灌流瓶和废液瓶，还包括设置在灌流瓶和废液瓶之间的灌流反应器，所述灌流反应器的一端设有进液口，另一端设有出液口，所述灌流瓶通过管道与所述灌流反应器的进液口相连通，所述废液瓶通过管道与所述微灌流反应器的出液口相连通；所述灌流反应器包括可封闭的槽体和设置在所述槽体内的细胞培养板，所述培养孔的底部是孔径能阻止待培养细胞穿过但能实现细胞培养液通过的半透膜。采用本发 明装置，可通过控制液体流动及时清除细胞代谢废物，防止细胞代谢物堆积导致的细胞分化，并能有效降低污染机率。
全文摘要
本发明公开了用于制备嗅鞘细胞的装置，属于生物技术与组织工程领域。其特征是利用灌流培养系统的连续性与封闭性，通过右旋多聚赖氨酸(Poly-L-lysine)处理过的灌流反应器，进行髓鞘细胞的扩增。本发明的效果和益处是及时排除细胞代谢毒物，防止细胞代谢物堆积导致的细胞分化，促进嗅鞘细胞的生长，降低污染率。
文档编号C12M1/24GK103087917SQ201110330959
公开日2013年5月8日 申请日期2011年10月27日 优先权日2011年10月27日
发明者田杰 申请人:北京清美联创干细胞科技有限公司