专利名称：樟芝子实体与破壁灵芝孢子粉的组合物及其在免疫调节中的应用的制作方法
樟芝子实体与破壁灵芝孢子粉的组合物及其在免疫调节中的应用技术领域
本发明属于食品医药技术领域，具体涉及一种含有樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉的组合物，以及所述组合物在制备免疫调节用药物或保健食品中的应用。
背景技术：
几十年来，我国国民经济以前所未有的速度发展，社会生活已经并继续发生着深刻的变化。在经济高速发展、生活条件显著改善的社会条件下，身体健康逐渐成为全社会关注的焦点。一些与健康相关的影响因素受到广泛关注:例如，随着社会经济的发展，社会生活节奏迅速加快，公民教育水平和知识技能显著提升，社会竞争由此加剧；而由于生活水平的提高、健康意识普及以及医药技术的发展，人口老龄化的趋势也随之出现。与竞争压力相关联的“亚健康”状态及其与人口老龄化趋势相关联的老年健康已经成为健康保健医疗的重要议题。
免疫系统是机体防卫病原体入侵的有效武器，它能发现并清除异物、外来病原微生物等引起内环境波动。免疫系统功能失调会影响人体健康。免疫功能低下的人易受病原体侵害、感染；免疫系统自我稳定能力异常，可引发自身免疫疾病；免疫监视功能降低，则易发某些慢性疾病以及肿瘤。
“亚健康”以及老年性健康问题均与免疫功能降低密切相关。所谓“亚健康”状态是介于健康与疾病之间的机体功能低下的一种健康状态，西方国家称之为第三状态。处于“亚健康”状态的人群多伴有免疫功能降低。亚健康状态具有很高的发生率，社会竞争加剧和生活压力增加是亚健康的重要诱因。除了运动、心理调节外，健康/功能饮食是改善亚健康人群的健康状态、预防疾病发生的重要途径之一。
在现代医学中，随着感染性疾病等急性病症的诊疗措施日渐成熟，慢性疾病成为影响人类身体健康的危险因素，这些疾病重在预防，预防医学由此成为重要的医学分支。中医药传统医学素有预防疾病的传承，所谓“上工不治已病治未病”就是强调高明的医生不在于治疗已发疾病而在于预防疾病发生，其中，食疗保健是预防疾病的重要途径之一，由食疗发展而来的保健功能食品已经成为广为接受的调节身体状态的保健手段。
灵芝(Ganoderma Lucidum)又称“仙草”、“长生草”、“灵草”，在我国是享有盛誉和具有悠久药用历史的补益类药食两用品种`。古人认为灵芝是一种神药仙草，《神农本草经》将其列为上品，《本草纲目》记载灵芝“甘温无毒” “益精气，坚筋骨，好颜色，疗虚劳”。现代研究则将灵芝的补益作用主要归结为免疫调节活性。灵芝孢子是灵芝的精华，如子实体一样，其富含大量生物活性物质，其多种功效成分含量高于子实体。资料显示灵芝孢子粉具有广泛的医用功效，例如，心血管保护、肝损伤保护、调节血糖、调节免疫功能等，其中以免疫调节活性的研究资料最为丰富，且与灵芝补益作用的传统认识相一致(张伟，等.中西医结合学报.2004; 2 (6):463-465 ;陈亚非，陈金显.中国食品添加剂，2002; (4):36-41 ;林志彬，王鹏云.北京大学学报(医学版).2006; 138 (5): 541-547)。
樟芝(Antrodia camphorata)别名牛樟芝、牛樟燕,是台湾地区习用的珍稀药食两用真菌。资料显示，樟芝疗效流传甚久，早期台湾原住民发现生长于牛樟树上的樟芝由解毒护肝和强健体魄的作用。现代研究资料显示，樟芝具有解毒保肝、消除肿瘤、补肾强心、增强免疫等作用，其中仍以免疫调节作用的相关研究较为深入和系统，并且，一般认为其护肝、抗肿瘤等功效作用源于其免疫调节活性或与免疫调节活性密切相关(陈菲，等.中药材.2011;34(11):1804-1807 ;浦跃武，等.中国医院药学杂志.2004; 24 (7): 430-432 ；Madamanchi GeethangiIi and Yew-Min Tzeng.Evidence-Based Complementaryand Alternative Medicine.2011，2011:1-17;Huang CC,et al.Evidence-BasedComplementary and Alternative Medicine.2012;2012:1-9.X灵芝和樟芝均为具有补益功效的药食两用真菌，前者是传统中医药学上传承数千年、被称之“神药仙草”、可以“补气安神”、“益精气、坚筋骨”的经典品种，后者则为台湾地区习用、被称之“药中之王”、可以“解毒保肝、补肾强心”的地方品种。现代研究表明，灵芝和樟芝均具有抗氧化、护肝抗毒、调节代谢、抗癌抗炎等功效活性，而其“调节免疫”功效活性则是研究深入、特点明确，能够体现补益功效的典型功效特点。而功效成分研究表明，灵芝和樟芝均含有丰富的功效和营养成分，其中与免疫调节活性相关的功效成分均主要包括多糖类和三職类(Madamanchi Geethangili and Yew-Min Tzeng.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine.2011, 2011:1-17;HuangCC, et al.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine.2012;2012:1-9)。鉴于灵芝和樟芝同属具有“补益作用”的“药食两用”真菌，现代研究显示其活性成分类型以及功效活性相近而又存在差异，根据传统中医药组方原则，“相须”、“相使”理论，“性能功效相似的药物配合应用，可增强其原有功效”，所谓“当用相须、相使者良”《神农本草经》，“有相须者，二药相宜，可兼而用之”《本草蒙筌》，“相须者，同类不可离也《本草纲目》”(姚峥燕.实用中医内科杂志.2006;20(1):95;胡小勤.中华中医药杂志.2012; 27 (7): 1896-1898)。本发明以破壁灵芝孢子粉和樟芝子实体组方，其目的在于通过相须用药的“相加”与“互补”性，增强其“补益”功效。目前，国内已获准上市的以灵芝孢子粉为主要原料并且以免疫调节为功效的保健食品已达几十种，其中不少产品已经产生良好的社会和经济效益。这些产品均以单味灵芝孢子粉或破壁灵芝孢子粉组方。樟芝类食品和保健食品主要生产和行销于我国港澳台地区，并且拥有广泛和重要的影响力；大陆地区尽管有不少单位开展了樟芝人工培养研究和实践，并且开展了一定的功效学及安全性实验研究。然而，迄今尚无以灵芝和樟芝共同组方的公开研究报告或相关产品上市的报道。
发明内容
针对现有技术中尚无以灵芝和樟芝共同组方的报道，基于灵芝和樟芝具有广泛的影响力和认可度，本发明的目的旨在以破壁灵芝孢子粉与樟芝子实体组方，利用其“相须”和“协同”功效研发保健食品，提供一种含有樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉的组合物，以及所述组合物在制备免疫调节用药物或保健食品中的应用。本发明组方新颖、特点明确，有利于获得公众认可和接受。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案:
本发明首先提供一种含有樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉组合物，所述组合物可含有药学上或食品学上可接受的辅料。
所述组合物中破壁灵芝孢子粉与樟芝子实体粉，以质量比计，两者的比例范围为1:1 至 4:1。
本发明所述破壁灵芝孢子粉为担子菌纲多孔菌科(Polyporaceae)灵芝属(Ganodelma)真菌赤芝(G.1ucidum)和/或紫芝(G.sinense)的孢子经破壁处理获得的破壁孢子粉末。未破壁的灵芝孢子具有坚硬皮壳，直接食用不易消化吸收，与之相比，破壁孢子粉所含营养活性成分则更容易被消化吸收。本发明中，所述破壁灵芝孢子粉是指破壁率不低于90%的灵芝孢子粉(NY/T1677-2008，中华人民共和国农业行业标准，破壁灵芝孢子粉破壁率的测定)。
本发明所述樟芝子实体粉是指野生和/或椴木栽培的樟芝生物子实体经粉碎加工获得的粉末状物质。樟芝又称牛樟芝，为担子菌纲多孔菌科薄孔菌属(Antrodia)的樟芝(Antrodia camphorata)。野生樟芝较稀少。目前，液体发酵以及固体培养基培养获得的樟芝菌丝体的三萜类活性成分含量较低，因此并不适合用于本发明所述组合物的制备。椴木栽培获得的樟芝子实体含有近似于野生樟芝的三萜类和多糖类活性成分，因此可选择用于本发明所述的具有免疫调节活性的组合物。本发明组合物中，采用粉碎粒度细至40目以上的樟芝子实体粉制备所述药用和/或食用组合物。
本发明所述组合物的质量控制指标为总三萜和总多糖，在所述破壁灵芝孢子粉、樟芝子实体粉以及破壁灵芝孢子粉樟芝子实体粉混合物中，以质 量计，其中总三萜和总多糖含量均分别不低于1.0%。
本发明所述组合物中，其所述破壁灵芝孢子粉、樟芝子实体粉以及破壁灵芝孢子粉一樟芝子实体粉混合物的性状为粉末状，其粉碎粒度为不低于40目，优选的粉碎粒度是不低于60目。
所述组合物中樟芝子实体来源于樟科树木的椴木栽培。
所述组合物中樟芝子实体来源于牛樟树(Cinnamomum kanehirai)的锻木栽培。栽培方法为业内技术人员所熟知,一般地,经母种菌种培养、接种、培养、采收等工艺过程。
本发明所述组合物具有确切的调节免疫活性，因此具有明确的药用或保健价值。本发明组合物可以选择胃肠给药剂型，优选为固体口服剂型，例如片剂、胶囊剂、锭剂、冲剂、袋泡剂等，其制剂制备可以按照本领域内熟知的技术方法进行。
因此，本发明提供一种保健食品用或药用组合物，所述组合物包括本发明所述组合物以及医药或食品行业可接受的辅料。本发明所述组合物具有强效的免疫调节活性，因此可以用于不同程度的免疫性疾病的保健和预防。因此，本发明可提供所述组合物在治疗和预防免疫性疾病的药物或保健食品制备中的应用。
现代药理学中，对于物质基础不同的功效物质，药理学效应相近、药理学机制有所差异是产生“协同作用”功效的基本条件，灵芝和樟芝的功效成分(主要包括结构近似而又有不同的“多糖类”和“三萜类”)和功效活性(“免疫调节”活性)符合产生协同功效作用的机制特点。
本发明研究发现，含有本发明所述樟芝子实体的组合物给小鼠灌胃30天后，小鼠的半数溶血值HC5tl呈现不同程度的升高，与同期正常对照组相比，具有显著性差异(p〈0.001);并且药效呈剂量性增加；提示它们具有确切的补体免疫调节作用。本发明还发现，含有本发明所述樟芝子实体的组合物能够显著地促进刀豆球蛋白(ConA)诱导的小鼠脾脏内的T淋巴细胞增殖与转化，提示它们具有较好的细胞免疫调节作用。同时，本发明惊奇的发现，以樟芝子实体和破壁灵芝孢子粉两者组合配方，由于同时具有补体免疫调节和细胞免疫调节作用，可以协同实现“调节免疫功能”的医用或保健功效。适当比例的破壁灵芝孢子粉和樟芝子实体粉配伍可产生显著的协同调节免疫作用:与单用等剂量的破壁灵芝孢子粉或樟芝子实体粉相比，适当比例使用的破壁灵芝孢子粉或樟芝子实体粉不仅可以显示增强的免疫调节活性，而且显示出更全面的调节体液免疫和细胞免疫的活性。
具体实施例方式
以下实施例用于详细说明本发明内容，而对本发明范围不构成任何限制。实施例1樟芝子实体粉的制备:选取Φ20 40cm牛樟木材，将其裁截成长度约20 30cm的锻木。将锻木装袋后，在灭菌柜中120 122°C温度下灭菌14h。在培养室中，将樟芝(Antrodia camphorata)母种无菌接种于原种培养瓶,培养基为洋菜培养基，在温度为25 29°C、湿度为75% 85%下培养7 10天。然后，将原种无菌接种于栽培种培养瓶，培养基为洋菜培养基，在温度为25 29°C、湿度为75% 85%下培养7 10天，获得栽培种；将栽培种无菌接种于牛樟椴木。接种部位为椴木表面。接种量按3-5mm的菌球200-300粒植在椴木上。已接种樟芝菌种的椴木转移至已灭菌处理的樟芝培养室内，以空间间距50 70cm排列于多层培养架。樟芝培养条件:温度25 29°C ;湿度75% 85% ;光照强度与周期:暗培养；培养周期:半年以上。环境控制与养殖管理:定期给培养室消毒，发现有感染杂菌的椴木及时清理出培养室，观察培养室的温度、湿度有无异常，是否需要调节。樟芝子实体采收时机:半年以上，子实体有一定的厚度。采收方法:用采收工具将牛樟芝从锻木上刮取下来。采收的樟芝子实体经干燥(电热恒温干燥箱40 50°C烘干)、振动式粉碎(SQW—6A型三清微粉机)，过60目筛，即得到樟芝子实体粉。实施例2樟芝子实体与破壁灵芝孢子粉组合物的制备:2.1 材料按照实施例1提供的方法制备得到的樟芝子实体粉；破壁灵芝孢子粉为市售破壁孢子粉。2.2 方法2.2.1组合物的制备精密称取破壁灵芝孢子粉三份，其质量分别为1.00g、2.0Og和4.0Og ;另精密称取樟芝子实体粉三份，其质量均为1.0Og。将破壁灵芝孢子粉三份分别于另三份樟芝子实体粉混合均匀，得到三个组方的破壁灵芝孢子粉与樟芝子实体组合物。以质量比计，破壁灵芝孢子粉与樟芝子实体粉的比例分别为:1: 1、2:1、4:1，记为LZ-1，LZ-2，LZ-4。并按照以下方法测这三个组合中的总多糖和总三萜含量。2.2.2组合物中总多糖含量检测方法选择:本发明所述组合物中的总多糖含量检测方法参考《中国药典》2010版一部，通过实验研究确认采用硫酸蒽酮法检测。检测步骤:本发明所述组合物中的总多糖含量检测步骤包括:样品处理:精密称取所述组合物2.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水90ml，至水浴中加热回流提取4小时，过滤，滤液转移至IOOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4°C放置12小时，取出，离心，弃去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。标准曲线绘制:精密称取葡萄糖对照品约IOmg,置IOOml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.0,0.2,0.4,0.6,0.8，1.0, 1.2，1.4ml，置15ml试管中，准确补充水至2.0ml，分别精密加入硫酸蒽酮溶液6ml，在旋转混匀器上混匀，置沸水浴中加热15分钟，取出，放入冰浴中冷却15分钟，取出，放置室温。照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)在625nm波长处以O号管溶液为参比，Icm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2.2.3组合物中总三萜含量检测方法选择:本 发明所述组合物中的总三萜含量检测方法参考《保健食品检验与技术规范》中保健食品中总皂甙的测定和DB44/T496-2008灵芝中三萜类物质的测定方法并通过实验研究确认采用香草醒一冰醋酸法检测。检测步骤:本发明所述组合物中的总三萜含量检测步骤包括:样品处理:精密称取所述组合物0.2g，置圆底烧瓶中，加30ml三氯甲烷，置60°C水浴回流提取2小时，常压过滤，滤渣加30ml三氯甲烷再提取I小时，常压过滤，合并滤液，常压水浴蒸干。加入无水乙醇40ml，70°C水浴加热，并摇动至其完全溶解。冷却至室温后用无水乙醇定容至50ml，作为皂苷测定溶液。标准曲线绘制:精密称取齐墩果酸对照品约IOmg,置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.0,0.2,0.4,0.6,0.8，1.0, 1.2，1.4ml，置15ml试管中，水浴蒸干，分别加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液，溶解后，再加入0.8ml高氯酸溶液，混匀，至60°C水浴保持15分钟，取出，冰浴放置5分钟，自来水至室温，分别加入5.0ml冰醋酸，在旋转混匀器上混匀，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在545nm波长处以O号管溶液为参比，Icm比色皿测定吸光度值。以齐墩果酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2.3 结果按照上述方法中绘制的标准曲线计算所述三种组合物中的总多糖和总三萜含量见表I。结果显示，所述组合物中总多糖和总三萜含量的均不低于1.0%。表I三种组合物中的总多糖和总三萜含量
权利要求
1.一种食用或药用组合物，由樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉的混合物以及药学或食品学上接受的辅料组成。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉的混合物中，破壁灵芝孢子粉与樟芝子实体粉以质量比例计为1:1至4:1。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉的混合物中，其总三萜含量不低于1.0%，总多糖含量不低于1.0%。
4.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉的混合物中樟芝子实体粉和破壁灵芝孢子粉的粒度均不低于40目。
5.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物中樟芝子实体为野生牛樟芝子实体或者是采用樟科椴木栽培获得的牛樟芝子实体。
6.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物中樟芝子实体粉是牛樟树椴木栽培获得的牛 樟芝子实体经粉碎加工制得的粉末状物质。
7.如权利要求1所述的组合物，其含有有效免疫调节剂量的樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉，以及医药用或保健食品用赋形剂。
8.如权利要求1或7所述的组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为固体制剂。
9.权利要求1-8任一项所述的组合物在制备调节免疫的保健食品或药物中的应用。
10.以权利要求1所述的组合物为有效成分的免疫调节剂。
全文摘要
本发明公开了一种含有樟芝子实体与灵芝孢子粉的组合物。该组合物由樟芝子实体粉与破壁灵芝孢子粉的混合物以及药学或食品学上接受的辅料组成。组合物中灵芝孢子粉与樟芝子实体，以质量比计，两者的比例范围为1:1至4:1，质量控制指标为总三萜和总多糖，以质量比例计，其中总三萜和总多糖含量均不低于1.0%，可制备成固体制剂等。本发明的组合物具有确切的体液免疫调节和细胞免疫调节作用，可用于免疫类疾病的防治和保健。
文档编号A23L1/28GK103169737SQ201310088358
公开日2013年6月26日 申请日期2013年3月19日 优先权日2013年3月19日
发明者陈永得, 吴明一 申请人:佛山市顺德区今日景艺生物科技有限公司