一种马属动物精子体外培养液的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种马属动物精子体外培养液，其中，培养液包括A液和脱脂奶，A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖单水合物、柠檬酸三钠、柠檬酸钾和HEPES。培养液的配制方法为：称取A液的各种组分放入无菌烧杯中，加双蒸水溶解后，定容、过滤、分装、灭菌、密封，即得A液，向A液加入等量的脱脂奶混合均匀后再加入青霉素和双氢链霉素即可得到培养液，其适用于马属动物精液体外培养。本发明的有益效果是：配制简单，使用方便，马属动物精液的培养效果好，并且省时省力，适于规模化生产和应用。
【专利说明】一种马属动物精子体外培养液
【技术领域】
[0001]本发明涉及动物精液保存的【技术领域】，特别涉及一种马属动物精子体外培养液。【背景技术】
[0002]体外受精是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。而精子的体外培养与这一技术密不可分。精子体外培养能够解决具有优秀遗传基因的公马因繁殖障碍性疾病不能繁衍后代的问题。
[0003]近年来，家畜精液体外培养不断取得可喜的成果，尤其是在牛、羊等反刍动物方面。马业已成为世界经济产业最新支柱，各国对马业的科研力度也日益强化。因此开发出体外培养效果好，成本低，受胎率高的精液体外培养液对马属动物人工授精而言有重要的经济效益。
【发明内容】
[0004]为了解决传统的精液体外培养液对精子培养效果差、受胎率低等问题，本发明提供了一种马属动物精液体外培养液。
[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供了一种马属动物精液体外培养液，所述培养液包括A液和脱脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖单水合物、柠檬酸三钠、柠檬酸钾和HEPES。
[0006]其中，所述A液和所述脱脂奶的混合体积比例优选为1:1。
[0007]每500ml的所述A液中，各组分的含量为:葡萄糖22~26g、棉子糖1.5^1.7g、D_乳糖单水合物1.5~1.7g、柠檬`酸三钠Na3C6H5O7.2Η20 0.2~0.25g、柠檬酸钾0.35~0.45g、HEPES
4.6~4.8g0
[0008]所述葡萄糖为无水葡萄糖，其分子式为C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式为C18H32O6.5H20 ;所述D-乳糖单水合物的分子式为C12H22O11.H2O ;所述柠檬酸钾的分子式为K3C6H5O7.H2O ;所述 HEPES 的分子式为 C8H18N2O4S15
[0009]本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是:使用本发明马属动物精液体外培养液进行精液的体外保存，效果明显优于传统的培养液，马属动物精液的体外培养效果良好，精子体外培养后的活率和精子顶体完整率较高，增强受精能力，充分提高了精液的利用率和优良公畜配种的效率；本发明的培养液配制简单，使用方便，可置于0-5°C保存，随用随取，省时省力，适于规模化生产和应用。
【具体实施方式】
[0010]下面结合实施例对本发明做进一步描述。
[0011]实施例1
称取葡萄糖24g、棉子糖1.6g、D-乳糖单水合物1.6g、柠檬酸三钠Na3C6H5O7.2H200.24g、柠檬酸钾0.4g和HEPES 4.7g，放入无菌烧杯中，加双蒸水溶解后，定容、过滤、分装、灭菌、密封，即得A液；将经过严格灭菌、密封的A液标记配制时间，置于(T5°C保存，随用随取；取适量的A液加入等量体积的脱脂奶，分别按1000单位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加双氢链霉素混合均匀后，得到本实施例1的培养液。
[0012]对比试验I
将传统的培养液葡萄糖-卵黄稀释液(对照组I)和牛奶稀释液(对照组2)，与实施例1的稀释液(实施例组I)分别进行马精液的体外培养。其中，将实施例1的稀释液置于37°C恒温水浴锅中I小时后，按体积比1:5对马的新鲜精液(活率> 0.8)进行稀释，然后将稀释后的精液置于培养箱内培养。在0-48小时内观察对照组1、对照组2和实施例组I的精子活力，每隔12个小时测定精子的活率，结果如表1所示。
[0013]表1:不同培养液对马精子体外培养的效果比较
【权利要求】
1.一种马属动物精子体外培养液，其特征在于，所述培养液包括A液和脱脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖单水合物、柠檬酸三钠、柠檬酸钾和HEPES。
2.根据权利要求1所述的马属动物精子体外培养液，其特征在于，所述A液和所述脱脂奶的混合体积比例为1:1。
3.根据权利要求1所述的马属动物精子体外培养液，其特征在于，每500ml的所述A液中，各组分的含量为:葡萄糖22~26g、棉子糖1.5^1.7g、D-乳糖单水合物1.5^1.7g、柠檬酸三钠 Na3C6H5O7.2H20 0.2~0.25g、柠檬酸钾 0.35~0.45g、HEPES 4.6~4.8g。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的马属动物精子体外培养液，其特征在于，所述葡萄糖为无水葡萄糖，其分子式为C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式为C18H32O6.5Η20 ;所述0_乳糖单水合物的分子式为C12H22O11.H2O ;所述柠檬酸钾的分子式为K3C6H5O7.H2O ;所述HEPES的分子式为C8H18N2O4S0`
【文档编号】C12N5/076GK103756958SQ201310586725
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年11月21日 优先权日:2013年11月21日
【发明者】邹敬清, 张志鹏, 李成修 申请人:青岛德瑞骏发生物科技有限公司, 伊犁德瑞骏发生物科技有限公司, 青岛德瑞鳌蓝马术有限公司