血液样品中的物质的测定法
【专利摘要】本发明提供通过简便的操作来回避胆红素和血红蛋白这两者的影响的血液样品中的物质的测定法。该血液样品中的物质的测定法是基于使用了被氧化性显色试剂的酶法进行的血液样品中的物质的测定法，其特征在于，(1)使非离子性表面活性剂与血液样品接触，接着(2)使甜菜碱型两性表面活性剂与该样品接触，在接触的同时或接触后进行酶反应和利用被氧化性显色试剂的显色反应。
【专利说明】血液样品中的物质的测定法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基于使用了被氧化性显色试剂的酶法进行的血液样品中的物质的测 定法。
【背景技术】
[0002] 测定血液样品中的各种物质的浓度对各种疾病的诊断、治疗进展的判定是重要 的。例如，血液中的胆固醇、尿酸、血糖、甘油三酯、磷脂、胆碱、肌酸、肌酐、游离胆固醇、胆固 醇酯等物质的测定是重要的，作为其测定法，广泛采用如下方法：使氧化酶与这些成分或这 些成分的衍生物作用，使由该酶反应直接或间接产生的过氧化氢与作为其发色试剂的被氧 化性显色试剂作用并对该显色定量的方法（使用了被氧化性显色试剂的酶法）。
[0003] 然而，血液样品中存在胆红素、血红蛋白、抗坏血酸等还原物质，由于这些物质的 存在使上述血液样品中的物质的测定值受很大影响，有时测定值产生误差。另外，已知胆红 素、血红蛋白等也作为色素发挥作用，因此根据测定波长而成为误差的原因，因光和测定试 剂中的成分等使这些色素自身的吸收在测定中经时变化，对测定结果造成影响。
[0004] 作为回避这些成分中的胆红素的影响的方法，已知有向测定试剂中添加两性表面 活性剂的方法。例如，专利文献1中，记载了出于回避胆红素的影响的目的向第1试剂中添 加两性表面活性剂。专利文献2中，记载了在用过氧化物酶和被氧化性发色剂检测由酶反 应生成的过氧化氢的生物体成分测定法中，使两性表面活性剂和亚铁氰化物存在于第一试 剂或第一试剂和第二试剂两者中的生物体成分测定方法。
[0005] 另外，专利文献3中，记载了出于回避体液中存在的血红蛋白和/或胆红素的影 响的目的，在测定体系中使两性表面活性剂（作为实施例，仅为烷基甜菜碱氧化物（产品 名AMPHITOL 20N))与第一试剂或第二试剂共存的体液中的底物或酶活性的测定方法。但 是，专利文献3中，没有在两性表面活性剂的存在下，同时研究试剂中的总血红蛋白和胆红 素这两者的影响的实施例。另外，专利文献4中，记载了作为回避血红蛋白和胆红素两者的 影响的方法，使用过氧化物以及非离子表面活性剂和/或两性离子表面活性剂的方法。但 是，专利文献4中，需要对表面活性剂进行光照射等处理，或者需要调整过氧化物浓度使其 达到一定量等，试剂调整繁琐。
[0006] 现有技术文献
[0007] 专利文献
[0008] 专利文献1 :日本特开平7-039394号公报 [0009] 专利文献2 :日本特开平7-155196号公报 [0010] 专利文献3 :日本特开平3-010696号公报
[0011] 专利文献4 :日本特开2006-081471号公报
【发明内容】
[0012] 本发明人等发现出于回避胆红素的影响的目的像专利文献1、2那样在测定用试 剂中使用两性表面活性剂时，有时在溶血检体中测定值与期待值偏离。对该机制进行研究， 结果发现两性表面活性剂使血红蛋白的吸收光谱变化。
[0013] 因此，本发明的课题在于提供通过简便的操作而同时回避胆红素和血红蛋白这两 者的影响的血液样品中的物质的测定法。
[0014] 为了解决上述课题对各种表面活性剂的添加效果进行了研究，结果发现胆红素和 血红蛋白的影响回避效果根据表面活性剂的种类而有很大不同，并且根据在测定体系添加 表面活性剂的时期也有很大不同。基于上述见解进一步进行了研究，结果发现首先使非离 子性表面活性剂与血液样品接触，接着在酶反应时使甜菜碱型两性表面活性剂接触，此时 能够同时回避胆红素和血红蛋白这两者的影响，从而完成了本发明。
[0015] 即，本发明提供血液样品中的物质的测定法，其特征在于，是基于使用了被氧化性 显色试剂的酶法进行的血液样品中的物质的测定法，（1)使非离子性表面活性剂与血液样 品接触，接着（2)使甜菜碱型两性表面活性剂与该样品接触，在接触的同时或接触后进行 酶反应和利用被氧化性显色试剂的显色反应。
[0016] 另外，本发明提供酶法测定试剂，包含（A)含有非离子性表面活性剂的第1试剂、 (B)甜菜碱型两性表面活性剂、（C)对测定对象物或其衍生物具有特异性的氧化酶和（D)被 氧化性显色试剂。
[0017] 根据本发明的测定法，仅分别添加2种表面活性剂，就能够同时回避血液样品中 广泛存在的胆红素和血红蛋白的影响，能够准确地测定血液样品中的各种物质。
【专利附图】
【附图说明】
[0018] 图1表示向添加有血红蛋白的血清中添加不含表面活性剂的缓冲液，在37°C反应 5分钟后，添加含有两性表面活性剂的缓冲液，在37°C反应5分钟时的血红蛋白的吸收光谱 的经时变化。
[0019] 图2表示向添加有血红蛋白的血清中添加含有两性表面活性剂的缓冲液，在37°C 反应5分钟后，添加不含表面活性剂的缓冲液，在37°C反应5分钟时的血红蛋白的吸收光谱 的经时变化。
[0020] 图3表示向添加有血红蛋白的血清中添加含有两性表面活性剂的缓冲液，在37°C 反应5分钟后，再添加含有两性表面活性剂的缓冲液，在37°C反应5分钟时的血红蛋白的吸 收光谱的经时变化。
[0021] 图4表示向添加有血红蛋白的血清中添加含有非离子性表面活性剂的缓冲液，在 37°C反应5分钟后，添加含有两性表面活性剂的缓冲液，在37°C反应5分钟时的血红蛋白的 吸收光谱的经时变化。
【具体实施方式】
[0022] 本发明的血液样品中的物质的测定法的特征在于，（1)使非离子性表面活性剂与 血液样品接触（第1工序），接着（2)使甜菜碱型两性表面活性剂与该样品接触，在接触的 同时或接触后进行酶反应和利用被氧化性显色试剂的显色反应（第2工序），除该操作以 夕卜，是基于通常的使用了被氧化性显色试剂的酶法进行的血液样品的物质的测定法。
[0023] 作为第1工序中使用的血液样品，可举出血浆、血清、尿等，其中，更优选血红蛋白 和胆红素对测定值产生影响的可能性高的血浆、血清。
[0024] 作为被测定对象的血液样品中的物质（被检物质），可举出血红蛋白和胆红素以 外的血液样品中的物质，例如尿酸、肌酐、胆固醇、甘油三酯、多胺、胆汁酸、1，5-脱水葡萄糖 醇、丙酮酸、乳酸、磷脂、尿素、血糖、胆碱、肌酸、游离脂肪酸等，不特别限定于这些物质，通 过对由酶反应生成的过氧化氢定量而能够测定的体液成分全部都可测定。
[0025] 本发明的第1工序是使非离子性表面活性剂与对被检物质进行氧化酶反应前的 血液样品接触的工序。本发明中，第1工序中使用非离子性表面活性剂是重要的，在第1工 序使用甜菜碱型两性表面活性剂的情况、第1工序和第2工序这两者使用甜菜碱型两性表 面活性剂的情况下，无法回避血红蛋白和胆红素两者的影响。作为非离子性表面活性剂与 血液样品的接触方式，可以向血液样品中添加非离子性表面活性剂，可以使血液样品的稀 释液中含有非离子性表面活性剂，可以使用含有非离子性表面活性剂的液体作为血液样品 的前处理液。作为血液样品的前处理液（也称为第1试剂），优选使用含有非离子性表面活 性剂的液体。
[0026] 作为本发明中使用的非离子性表面活性剂，优选聚氧乙烯聚氧丙烯缩合物 (Ρ0Ε · POP缩合物）类、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯。
[0027] 作为ΡΟΕ ·Ρ0Ρ缩合物类，可举出下述式（1)?（5)表示的缩合物。（a)下述式（1) 表示的Ρ0Ε · POP缩合物。
[0028]
【权利要求】
1. 一种血液样品中的物质的测定法，其特征在于，是基于使用了被氧化性显色试剂的 酶法进行的血液样品中的物质的测定法，（1)使非离子性表面活性剂与血液样品接触，接着 (2)使甜菜碱型两性表面活性剂与该样品接触，在接触的同时或接触后进行酶反应和利用 被氧化性显色试剂的显色反应。
2. 根据权利要求1所述的测定法，其中，血液样品是血红蛋白和胆红素对测定值产生 影响的可能性高的血浆或血清。
3. 根据权利要求1或2所述的测定法，其中，血液样品中的物质是通过对由酶反应生成 的过氧化氢进行定量而能够测定的除血红蛋白和胆红素以外的血液样品中的物质。
4. 根据权利要求1?3中任1项所述的测定法，其中，非离子性表面活性剂是选自聚氧 乙烯聚氧丙烯缩合物、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基胺缩合物、聚氧乙烯聚氧丙烯二胺缩合物、聚 氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚以及聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯中的1种或2种以上。
5. 根据权利要求1?4中任1项所述的测定法，其中，非离子性表面活性剂的使用量是 与血液样品接触后的浓度成为〇. 1?lOw/v%的量。
6. 根据权利要求1?5中任1项所述的测定法，其中，甜菜碱型两性表面活性剂是选自 烧基甜菜碱、酰胺烧基甜菜碱、磺基甜菜碱以及2-烧基-N-羧甲基-N-轻乙基咪唑啉错舌甘 菜碱中的1种或2种以上。
7. 根据权利要求1?6中任1项所述的测定法，其中，酶是对测定对象物或其衍生物具 有特异性的氧化酶。
8. 根据权利要求1?7中任1项所述的测定法，其中，被氧化性显色试剂是与过氧化氢 反应而显色的1种或2种以上的成分。
9. 根据权利要求1?8中任1项所述的测定法，是用于回避血液样品中的血红蛋白和 胆红素对测定值的影响的测定法。
10. -种酶法测定试剂，其特征在于，包含：(A)含有非离子性表面活性剂的第1试剂， (B)甜菜碱型两性表面活性剂，（C)对测定对象物或其衍生物具有特异性的氧化酶，和（D) 含有被氧化性显色试剂的第2试剂。
【文档编号】C12Q1/00GK104245952SQ201380017615
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年4月1日 优先权日:2012年3月30日
【发明者】山口丰美 申请人:积水医疗株式会社