本发明涉及从获得自牛奶的乳清材料分离乳清蛋白α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的方法。具体地，本发明涉及从乳清材料分离α-乳白蛋白和β-乳球蛋白，至少一种乳清蛋白已经从所述乳清材料中去除，或基本去除。发明背景牛奶是非常复杂的材料，以及工业过程使用牛奶来产生酪蛋白、乳清、乳糖、炼乳、奶粉和许多其他食品添加剂和工业产品。牛奶包含诸如蛋白质、矿物质、脂肪、糖、盐和维生素的组分的混合物。特别地，牛奶中的主要作为酪蛋白或乳清蛋白被发现的蛋白质在这些年来已经越来越多地获得关注。该增加的关注的原因在于牛奶蛋白的多样性，以及因为各蛋白具有营养的、生物的、功能的和食品成分应用的独特属性。此外，这些蛋白质与例如牛奶中的肽和酶一起构成人和动物中的主要和重要的健康和营养作用。为获得蛋白的最大可能潜能以及探索或开发蛋白，以及乳清蛋白的潜在功能及生物活性特性，通过避免可能的变性条件(如高盐条件、高或低pH条件、热或蛋白酶处理/暴露)的程序来分离天然的乳清蛋白是重要的。除了酪蛋白产品(如奶酪)以外，最常生产的牛奶蛋白产品为浓缩乳清蛋白(WPC)和分离乳清蛋白(WPI)。这些WPC和WPI产品为通过各种分离技术，如沉淀技术、膜过滤技术以及离子交换吸附程序从乳清获得的标准产品。而且，通过使用色谱支持物使得WPC蛋白或WPI蛋白分级成单独的蛋白级分，如β-乳球蛋白级分、α-乳白蛋白级分、免疫球蛋白级分、乳过氧化物酶级分和乳铁蛋白级分是可能的。由于不同乳清蛋白具有相对类似的物理化学特性，单独的乳清蛋白级分的分离已证明是困难的。技术人员了解基于乳清蛋白的分子大小(根据需要，当使用膜过滤时)提供优良的分离是困难的，并且由于待分离的乳清材料和乳清蛋白的复杂性，以该方式提供的级分导致差的收率和/或差的纯度。然而，基于乳清蛋白的等电点(pI)分离该乳清蛋白产生两个不同的组：主要蛋白，如α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、免疫球蛋白G和血清白蛋白，其在甜乳清的pH带负电荷(pH6.2-6.4)；以及次要的乳清蛋白，如乳铁蛋白和乳过氧化物酶，其在甜乳清的pH保持净正电荷。这些不同特性提供使用色谱支持物将一组和另一组选择性分离的可能性。在提供单独的级分，如包含β-乳球蛋白的蛋白级分以及包含α-乳白蛋白的级分中使用色谱支持物的此种选择性分离可以在两种条件下操作：(i)乳清蛋白从色谱支持物的选择性洗脱，或(ii)一种或多种乳清蛋白至色谱支持物的选择性吸附。在选择性洗脱中，溶液中的所有蛋白同时捕获在色谱支持物上。漂洗掉色谱支持物上的污染物和未捕获的物质。然后，由任何人使用专门设计的适合于待分离的特定蛋白质的洗脱缓冲液依序洗脱捕获的蛋白。因此，通过使用选择性洗脱技术，从同一色谱支持物获得数种纯化的蛋白级分是可能的。以此方式，生产成本在不同产物之间分摊。选择性洗脱的一些挑战为：当将乳清装载至柱时的装载容量较低，以及当洗脱各种蛋白级分时的缓冲液消耗较高。此外，由于不同蛋白级分之间的重叠洗脱条件和高盐含量(电导率)，获得的蛋白级分具有低收率、低回收率和/或低纯度。在选择性吸附中，优化工艺条件以越过一种蛋白质捕获另一种蛋白质。当捕获目标蛋白时，漂洗掉色谱支持物的污染物，随后洗脱特定蛋白。因为选择性吸附技术仅提供单一蛋白的最佳结合，所以技术人员不认为该技术具有发展成工业应用的巨大潜能。然后，来自该单一蛋白的收入必须覆盖所有生产成本以及与处理剩余的乳清蛋白有关的成本。因此，选择性洗脱技术被认为是最适用于工业应用。此外，选择性吸附在工业背景中是很难实现的，因为它需要独特的和昂贵的吸附剂设置以及精确的吸附条件的调节。因此，选择性洗脱技术被认为是最适用于工业应用。所以，提供乳清蛋白级分的改善方法是有利的，所述方法将解决上面的问题，以及将适合于工业应用。特别地，更有效的方法是可取的，所述方法导致α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的增加的收率、回收率和纯度，具有低的缓冲液消耗和高的装载容量。发明概述因此，本发明的目标是提供分离α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的改善的方法。该方法为划算的以及产生高品质的蛋白级分，提供均具有高纯度、高回收率和/或高收率的单独的α-乳白蛋白级分和单独的β-乳球蛋白级分。具体地，本发明的目标是提供解决以上提及的现有技术中分离α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的问题的方法。因此，本发明的一个方面涉及从获得自牛奶的乳清材料提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供乳清材料；(ii)使所述乳清材料与色谱支持物接触，允许β-乳球蛋白被所述色谱支持物保留；(iii)从所述色谱支持物获得包含所述α-乳白蛋白级分的透过物级分；(iv)任选地洗涤所述色谱支持物；(v)从所述色谱支持物获得包含所述β-乳球蛋白级分的保留物级分；其中步骤(i)中提供的所述乳清材料中的至少一种乳清蛋白，如至少2种乳清蛋白，例如至少3种乳清蛋白已经被耗尽或基本耗尽。本发明的另一方面涉及通过根据本发明的方法可获得的包含α-乳白蛋白的α-乳白蛋白级分和/或包含β-乳球蛋白的β-乳球蛋白级分。本发明的另一方面涉及在食物产品、饲料产品、饮料产品、美容产品、药物产品或食品补充剂中使用根据本发明的α-乳白蛋白级分和/或根据本发明的β-乳球蛋白级分。现在将在下述更详细地描述本发明。发明详述多年以来，使用乳清蛋白的应用的数目已经扩大，以及对于分离的和纯的级分的需求已经获得越来越多的关注。除了以上提及的现有技术的劣势以外，当前所述的方法面临的挑战之一为提供不同分离的级分的成本。所以，本发明的发明人惊人地发现用于提供具有高收率、高回收率和高纯度的α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法，所述方法是容易的、快速的且具有成本效率。因此，本发明的一个方面涉及通过β-乳球蛋白级分的选择性吸附从获得自牛奶的乳清材料提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供乳清材料；(ii)任选地调节乳清材料的pH；(iii)使乳清材料与色谱支持物接触，允许β-乳球蛋白被色谱支持物保留；(iv)从色谱支持物获得包含α-乳白蛋白级分的透过物级分；(v)任选地洗涤色谱支持物；(vi)使洗脱缓冲液与色谱材料接触；以及(vii)从色谱支持物获得包含β-乳球蛋白级分的保留物级分；其中色谱支持物包含一种或多种能够结合β-乳球蛋白级分的带负电荷的配体。本发明的另一方面涉及从获得自牛奶的乳清材料提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供乳清材料；(ii)使乳清材料与色谱支持物接触，允许β-乳球蛋白被色谱支持物保留；(iii)从色谱支持物获得包含α-乳白蛋白级分的透过物级分；(iv)任选地洗涤色谱支持物；(v)从色谱支持物获得包含β-乳球蛋白级分的保留物级分；其中步骤(i)中提供的乳清材料中的至少一种乳清蛋白，如至少2种乳清蛋白，例如至少3种乳清蛋白已经被耗尽或基本耗尽。在本发明的上下文中，术语“耗尽的”涉及乳清材料中存在不可检测量的给定乳清蛋白。在本发明的上下文中，术语“基本耗尽的”涉及这样的乳清材料，其中相对于乳清中乳清蛋白的最初含量，给定乳清蛋白的含量已经被降低至低于所述蛋白的最初含量的30％，如低于20％、例如低于15％、如低于10％、例如低于5％、如低于3％、例如低于1％、如低于0.5％、例如低于0.1％、如低于0.05％、例如低于0.01％的含量。从酪蛋白的去除直接获得的乳清中的乳清蛋白的“最初含量”可以通过以下测定：(a)在没有耗尽(或没有基本耗尽)下所使用的乳清的分析，或(b)如文献中所述的乳清中所述蛋白的常规的列出量。在本发明的优选实施方案中，α-乳白蛋白级分与β-乳球蛋白级分的分级通过β-乳球蛋白级分至色谱支持物的选择性吸附进行。在本发明的上下文中，术语“选择性吸附”涉及色谱支持物被设计和/或过程条件被设计成有助于来自混合物的一种组分而不是另一组分的结合的过程。关于本发明，“一种组分”为β-乳球蛋白，以及“另一组分”为α-乳白蛋白，以及“混合物”为乳清材料。在本发明的实施方案中，选择性吸附导致α-乳白蛋白级分与β-乳球蛋白的分离。该分离可以通过提供色谱支持物和/或过程条件进行，其有助于β-乳球蛋白的选择性吸附，以及允许α-乳白蛋白通过色谱支持物而不会被吸附。在本发明的上下文中，术语“保留”涉及将β-乳球蛋白保存或保持在特定位置，即在色谱支持物的行为。β-乳球蛋白可以被保留在色谱支持物中直至改变条件，以及β-乳球蛋白被从色谱支持物释放和洗脱。在本发明的实施方案中，提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法可以为中型规模生产或大规模生产。乳清根据本发明所述的方法，最初步骤涉及提供乳清材料。本发明的乳清材料为包含α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的分级乳清，其中至少一种乳清蛋白已经被耗尽或基本耗尽。在本发明的实施方案中，乳清材料可以获得自任何产乳动物，并且优选传统上用于大规模牛奶生产的动物。优选地，牛奶获得自反刍动物，如牛、山羊、绵羊、长颈鹿、牦牛、鹿、骆驼、美洲驼或羚羊。在本发明的上下文中，术语“乳清材料”涉及来自牛奶(无酪蛋白的牛奶部分)的血清材料。根据本发明的乳清材料可以为获得自乳清、酸乳清、甜乳清、分离乳清蛋白(WPI)或浓缩乳清蛋白(WPC)的分级乳清。在本发明的实施方案中，乳清材料包含小于5g酪蛋白/L乳清材料、如小于2g酪蛋白/L乳清材料、例如小于1g酪蛋白/L乳清、如小于0.5g酪蛋白/L乳清、如小于0.2g酪蛋白/L乳清材料、例如小于0.1g酪蛋白/L乳清、如小于0.05g酪蛋白/L乳清材料、例如小于0.01g酪蛋白/L乳清。根据本发明的如步骤(i)中提供的乳清材料中的至少一种乳清蛋白，如至少2种乳清蛋白，例如至少3种乳清蛋白已经被耗尽或基本耗尽。在本发明的实施方案中，至少一种蛋白可以选自免疫球蛋白G、血清白蛋白、乳铁蛋白、乳过氧化物酶和糖巨肽。在本发明的优选实施方案中，至少一种蛋白可以选自免疫球蛋白G、血清白蛋白和糖巨肽。在本发明的实施方案中，相对于乳清材料中的蛋白总量，乳清材料包含按干物质计小于30％(w/w)的选自免疫球蛋白G、血清白蛋白和糖巨肽中的至少一种蛋白，更优选地，小于20％，甚至更优选地，小于15％，甚至更优选地，小于10％，甚至更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。在优选实施方案中，步骤(i)中提供的乳清材料可以耗尽或基本耗尽免疫球蛋白G。优选地，相对于乳清材料中的蛋白总量，乳清材料可以包含按干物质计小于8％(w/w)的免疫球蛋白G，更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。在本发明的优选实施方案中，步骤(i)中提供的乳清材料可以耗尽或基本耗尽血清白蛋白。优选地，相对于乳清材料中的蛋白总量，乳清材料可以包含按干物质计小于5％(w/w)的血清白蛋白，更优选地，小于4％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。如果通过沉淀或使用凝乳酶凝结去除酪蛋白，则可以产生糖巨肽(GMP)，其将保持在乳清中(作为“乳清蛋白”)，并且提供甜乳清。在本发明的上下文中，当乳清材料由甜乳清提供时，糖巨肽(GMP)的耗尽或基本耗尽才会应用。在本发明的进一步优选实施方案中，步骤(i)中提供的乳清材料中的糖巨肽已经被耗尽或基本耗尽。优选地，相对于乳清材料中的蛋白总量，乳清材料可以包含按干物质计小于20％(w/w)的糖巨肽，更优选地,小于15％，甚至更优选地，小于10％，甚至更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。在本发明的实施方案中，提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法可以为分批法或连续法。中型规模生产和/或工业规模生产可以以分批法进行。优选地，此类分批法涉及处理至少50升乳清/周期，如至少100升乳清/周期，例如250升乳清/周期，如至少500升乳清/周期，例如750升乳清/周期，如至少1,000升乳清/周期，例如2,500升乳清/周期，如至少5,000升乳清/周期，例如7,500升乳清/周期，如至少10,000升乳清/周期，例如25,000升乳清/周期，如至少50,000升乳清/周期，例如75,000升乳清/周期，如至少100,000升乳清/周期，例如250,000升乳清/周期。可选地，大规模生产(工业规模生产)可以以连续法进行。在选择性分离，如选择性吸附中，该过程最后需要吸附的蛋白，例如β-乳球蛋白的洗脱。通过提供至少两个色谱支持物并且将它们平行放置，在乳清材料的流动可以从一个色谱支持物(当该色谱材料被装载并且准备好洗脱时)移动至另一个色谱支持物的情况下，可以提供此类连续的选择性吸附过程。可选地，可以使用移动床色谱、模拟移动床色谱等。在本发明的实施方案中，连续的选择性吸附过程可以具有至少5,000升乳清材料/小时、如至少10,000升乳清材料/小时、例如至少12,000升乳清/小时，如至少15,000升乳清材料/小时、例如至少18,000升乳清/小时，如至少20,000升乳清材料/小时、例如至少25,000升乳清/小时，如至少50,000升乳清材料/小时、例如至少100,000升乳清/小时的容量。为了实现β-乳球蛋白的期望分离，可以提供有利的过程条件。因此，乳清材料可以在20℃具有至少3.0mS/cm、如至少3.5mS/cm、例如至少4.0mS/cm、如至少4.5mS/cm、例如至少5mS/cm、如至少5.5mS/cm、例如至少6、如至少7mS/cm、例如至少7.5mS/cm、如在4.5-15mS/cm范围内、如在5.0-14mS/cm范围内、例如在5.5-13mS/cm范围内、如在6.0-12.5mS/cm范围内、例如在6.5-12mS/cm范围内、如在7.0-11.5mS/cm范围内、例如在7.5-11mS/cm范围内、如在8.0-10.5mS/cm范围内、例如约9.0mS/cm的电导率。优选地，不调节乳清材料的电导率。在本发明的另一实施方案中，乳清材料可以在20℃具有小于7mS/cm、如小于5、例如小于3的电导率，以及可以具有在4.6-6.5范围内的pH-值，如在4.7-6.4范围内的pH-值，例如在4.8-6.3范围内的pH-值，如在4.9-6.2范围内的pH-值，例如在4.9-6.1范围内的pH-值，如在5.0-6.0范围内的pH-值，例如在5.2-5.8范围内的pH-值。在本发明的实施方案中，乳清材料可以包含矿物质。在本发明的优选实施方案中，乳清材料未进行矿物质的去除。具体地，乳清材料未进行钙的去除。优选地，矿物质选自钙、磷、碘、镁、锌和钾。优选地，乳清材料中存在的矿物质为乳清材料中天然存在的。在本发明的上下文中，术语“天然存在的”涉及这样的矿物质，其存在于乳清材料中，并且不是单独添加的化合物，但可见于步骤(i)中提供的乳清材料中。pH调节根据提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的乳清材料的类型，乳清材料可以进行pH的调节。在本发明的优选实施方案中，可以调节乳清材料的pH以便促进β-乳球蛋白至色谱支持物的最佳吸附。在本发明的优选实施方案中，在步骤(ii)中，将乳清材料的pH调节至pH大于4.5、如pH大于4.6、例如pH大于4.7、如pH大于4.8、例如pH大于4.9、如pH大于5.0、例如pH大于5.1、如pH大于5.2、例如pH大于5.3、如pH大于5.4、例如pH大于5.5、如在pH4.5-6.5范围内，如在pH4.5-6.0范围内、例如在pH4.6-5.5范围内，如在pH4.7-5.0范围内。如果乳清材料的pH变得太低，低于4.0，则蛋白或部分蛋白可能变性以及天然功能可能丧失的风险增加。调节pH优选通过添加酸并降低pH进行。优选地，可以使用低成本的矿物酸，如盐酸、磷酸、硫酸。然而，食品级有机酸，如乙酸、柠檬酸和乳酸也可以为特别优选的。可选地，可以经由使乳清材料通过强阳离子交换剂(酸性形式)来调节乳清材料的pH值。阳离子交换剂结合来自乳清材料的盐并释放H+-离子，从而将pH降低至预期值。适合于降低pH值的阳离子交换剂和过程为技术人员众所周知的。在本发明的实施方案中，将乳清材料以1-50cm/min范围内；优选5-30cm/min范围内；更优选10-25cm/min范围内；甚至更优选地，15-20cm/min范围内的流速装载至色谱支持物。色谱支持物如以上所述，本发明教导色谱支持物的用途，其允许β-乳球蛋白被保留(步骤(v))。在本发明的上下文中，术语“色谱支持物”涉及包含吸附剂的任何种类的容器，其可以被提供有用于乳清材料应用的至少一个入口以及当经历洗脱缓冲液时用于获得α-乳白蛋白级分和/或β-乳球蛋白级分的至少一个出口。待使用的色谱支持物可以为膜色谱支持物，优选带电的膜色谱支持物或柱色谱支持物。优选地，柱色谱支持物包括填充床色谱、搅拌罐吸附、移动床色谱、模拟移动床色谱、流化床色谱和/或膨胀床色谱。膨胀床色谱(EBA)技术通常可以与非澄清的原材料一起有效地起作用的事实使其成为实施生物分子物质，如来自乳清材料的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的分离和分级的吸引人的解决方案。与基于填充床色谱的过程相比，膨胀床色谱可以提供包含较少步骤，以及因此导致增加的收率和改善的过程经济性的稳健过程。由于实行EBA过程期间吸附床的膨胀，EBA柱可以被进一步按比例放大至工业规模，而没有关于由于系统堵塞而引起的增加的背压或过程故障(当使用填充床柱时，其常常为一种问题)的任何显著的注意事项。所以，根据本发明，膨胀床色谱可以为优选的柱色谱支持物。通常，膨胀床吸附为本领域技术人员众所周知的，并且可以将本发明中所述的方法修改成WO92/00799、WO92/18237、WO97/17132、WO00/57982或WO98/33572中所述的方法。吸附剂在本发明的优选实施方案中，色谱支持物可以包含吸附剂。该吸附剂可以被用于选自以下的技术：离子交换吸附、疏水性相互作用吸附、亲和吸附、混合模式配体吸附、金属螯合吸附、反相吸附以及它们的任何组合。在本发明的优选实施方案中，吸附剂可以被用于离子交换吸附，优选地，用于阳离子交换吸附中。在乳清材料可以与吸附剂接触之前，本发明方法中的最初但任选步骤可以涉及吸附剂的平衡。可以通过使用平衡液来进行此类平衡。在优选实施方案中，平衡液可以被用于阳离子交换吸附，并且可以为pH大于4.5、如pH大于4.6、例如pH大于4.7、如pH大于4.8、例如pH大于4.9、如pH大于5.0、例如pH大于5.1、如pH大于5.2、例如pH大于5.3、如pH大于5.4、例如pH大于5.5、如在pH4.5-6.5范围内、如在pH4.5-6.0范围内、例如在pH4.6-5.5范围内、如在pH4.7-5.0范围内的含水液体。吸附剂的平衡可以优选地通过使用酸进行。优选地，阳离子交换吸附中使用的平衡液可以包含低成本的矿物酸，如盐酸、磷酸、硫酸。然而，食品级有机酸，如乙酸、柠檬酸和乳酸也可以是特别优选的。在本发明的优选实施方案中，吸附剂可以被用于离子交换吸附，优选地，用于离子交换吸附。在优选实施方案中，平衡液可以被用于离子交换吸附，并且可以为pH大于6.5、如pH大于7.0、例如pH大于7.5、如pH大于8.0、例如pH大于8.5、如pH大于9.0、如在pH7.0-9.0范围内的含水液体。在本发明的实施方案中，可以用于离子交换吸附的平衡液可以包含氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵、磷酸钾、磷酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、碳酸钠或它们的任何组合。优选地，包含氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵或它们的任何组合的洗脱缓冲液为优选的。在本发明的上下文中，术语“吸附剂”涉及色谱支持物中存在的整个床，并且负责保留β-乳球蛋白。在本发明的实施方案中，吸附剂可以包含单独的颗粒。在本发明的上下文中，术语“吸附剂颗粒”与术语“颗粒”可交换地使用，并且涉及构成吸附剂的单独的单一颗粒。在本发明的另一实施方案中，吸附剂可以包含装载能够结合β-乳球蛋白级分的带负电荷的配体的膜。如果吸附剂被用于膨胀床吸附，则数种特征，如流速、颗粒大小和颗粒密度均对流化床的膨胀和蛋白的分离具有影响。以使吸附剂颗粒保持在柱内，但同时优化流速的方式控制膨胀度是重要的。膨胀度可以被确定为H/H0，其中“H0”为填充床模式中床的高度，以及“H”为膨胀模式中床的高度。在本发明的实施方案中，膨胀度H/H0在1.0-10范围内，例如1.0-6、如1.2-5、例如1.3-5、如1.5-4、例如4-6、如3-5、例如3-4、如4-6。在本发明的另一实施方案中，膨胀度H/H0为至少1.0、如至少1.5、例如至少2、如至少2.5、例如至少3、如至少3.5、例如至少4、如至少4.5、例如至少5、如至少5.5、例如至少6、如至少10。此外，关于典型的EBA柱内部可能的吸附床的最大膨胀度(例如H/H0max3-5)，发现EBA吸附剂颗粒的密度对于可应用的流速是高度重要的，并且必须为至少1.3g/ml、更优选地至少1.5g/ml、更优选地至少1.8g/ml、甚至更优选地至少2.0g/ml、最优选地至少2.3g/ml，以便使方法的高生产率成为可能。EBA吸附剂颗粒的密度意指吸附剂颗粒在其完全溶剂化(例如水合)状态的密度，与干燥的吸附剂颗粒的密度相对。在本发明的实施方案中，吸附剂颗粒具有至多250μm、如至多200μm、例如至多180μm、特别地如至多160μm、例如至多150μm、如至多140μm、例如至多130μm、如至多120μm、例如至多110μm、如至多100μm的平均颗粒大小。甚至更通常地，吸附剂颗粒具有在90-250μm范围内，例如100-200μm、如120-180μm、例如140-160μm的平均颗粒大小。应理解，本发明也覆盖小于100μm，如小于90μm、例如小于80μm、如小于70μm、例如小于60μm、如小于50μm、例如小于40μm、如小于30μm、例如小于20μm、如小于10μm的平均颗粒大小。然而，与使用平均颗粒大小为或大于100μm的吸附剂颗粒相比，使用平均颗粒大小小于100μm的吸附剂颗粒导致较低的生产率。在很大程度上，可以通过包含某一比例的致密无孔芯材(优选具有至少4.0g/ml、如至少10g/ml、例如至少16g/ml、如至少25g/ml的密度)来实现吸附剂颗粒的高密度。通常，无孔芯材具有在约4.0-25g/ml范围内的密度，如约4.0-20g/ml、例如约4.0-16g/ml、如12-19g/ml、例如14-18g/ml、如约6.0-15.0g/ml、例如约6.0-16g/ml。根据本发明，使用的吸附剂颗粒对乳清材料中存在的蛋白可以是至少部分可透过的，以便确保重要的结合能力，这与仅可以在其表面结合靶分子，导致相对低的结合能力的不可渗透的颗粒相反。吸附剂颗粒可以为不同结构、组成和形状的阵列。吸附剂颗粒可以由许多化学衍生的具有必需密度和结合能力的多孔材料构成以在给定流速下自身操作。颗粒可以为如WO92/00799中所述的具有被多孔聚合物基体基质包围的至少两个无孔芯的聚集物类型，或具有被多孔聚合物基体基质包围的单个无孔芯的薄膜类型。在本发明的上下文中，术语“聚集物类型”涉及微粒材料的颗粒，其包含具有通过多孔聚合物基体基质保持在一起的不同类型和大小的芯材的高密度无孔芯珠，例如由通过周围的琼脂糖(多孔聚合物基体基质)保持在一起的两个或更多个高密度颗粒组成的芯颗粒。在本发明的上下文中，术语“薄膜类型”涉及颗粒的复合物，其中各个颗粒仅由涂覆有一层多孔聚合物基体基质的一个高密度芯材，例如涂覆有琼脂糖的高密度不锈钢珠组成。因此，术语“至少一个高密度无孔芯”涉及包含单个高密度无孔颗粒的薄膜芯，或者其涉及包含多于一个高密度无孔颗粒的聚集物芯。在本发明的上下文中，术语“芯”涉及吸附剂内部存在的芯颗粒。芯颗粒可以附带地分布在多孔聚合物基体基质内且不限于位于吸附剂的中心。无孔芯通常构成吸附剂的总体积的至多50％、如至多40％、例如至多30％、如至多25％、例如至多20％、如至多10％、例如至多5％。本领域技术人员了解各种无孔芯材和各种多孔聚合物基体基质。无孔芯材和多孔聚合物基体基质的实例可以见于WO2010/037736。技术人员也了解根据本发明制备吸附剂的方法，此类制备吸附剂的方法可以描述在WO2010/03776、EP0538350或WO97/17132中。在操作期间，乳清材料可以与吸附剂接触，以及β-乳球蛋白可以被吸附或固定至吸附剂，然而α-乳白蛋白级分不结合色谱支持物，并且流过吸附剂。该吸附可以在压力下进行。在任选洗涤期间，从柱中任选去除微粒材料和可溶性杂质。当使乳清材料与吸附剂接触时，可以优化吸附剂与乳清材料之间的比率以便提供吸附剂的高容量，以及获得分离的α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的高纯度、高收率和/或高回收率。因此，在本发明的实施方案中，β-乳球蛋白相对于吸附剂的装载比为至少2mg装载的β-乳球蛋白/ml吸附剂，如至少5mg、例如至少10mg、如至少12mg、例如至少15mg、如至少20mg、例如至少25mg、如至少30mg、例如至少35mg、如至少40mg、例如至少50mg、如至少75mg、例如至少100mg、如至少125mg、例如至少150mg。在本发明的另一实施方案中，乳清相对于吸附剂的装载比为至少10mg装载的蛋白/ml吸附剂，如至少12mg、例如至少15mg、如至少20mg、例如至少25mg、如至少30mg、例如至少35mg、如至少50mg、例如至少75mg、如至少100mg、例如至少150mg、如至少175mg、例如至少200mg。配体为了使吸附剂在β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的选择性吸附中起作用，吸附剂可以包含配体。在本发明的优选实施方案中，吸附剂可以包含对β-乳球蛋白具有亲和力的一种或多种配体。在本发明的上下文中，术语“配体”涉及共价连接吸附剂且具有吸附β-乳球蛋白的功能的化合物。配体可以为低分子量化合物，以及在本发明的实施方案中，配体的分子量可以为至多500道尔顿、如至多250道尔顿、例如至多100道尔顿、例如至多50道尔顿。在本发明的优选实施方案中，配体可以在pH6.5或以下、如pH6.0或以下、例如pH5.5或以下是带负电荷的。在本发明的进一步实施方案中，带负电荷的配体选自诸如丙烷磺酸或丁烷磺酸的磺酸配体和/或诸如氯乙酸的羧酸配体。在本发明的实施方案中，配体可以在pH大于6.5、如pH大于7.0、例如pH大于7.5、如pH大于8.0、例如pH大于8.5、如pH大于9.0、如pH7.0-9.0范围内是带正电荷的。在本发明的实施方案中，带正电荷的配体选自诸如季铵阴离子的Q-阴离子交换配体、或诸如二乙氨乙基的DEAE-阴离子交换配体。为了改善容量、纯度和回收率，配体浓度也是重要的。所以，在本发明的优选实施方案中，配体浓度在30-300微摩尔/ml沉降的吸附剂范围内，例如50-200微摩尔/ml沉降的吸附剂、如75-175微摩尔/ml沉降的吸附剂、例如100-160微摩尔/ml沉降的吸附剂、如120-145微摩尔/沉降的吸附剂。在本发明的上下文中，术语“沉降的吸附剂”或“吸附剂颗粒”意指在其完全溶剂化(例如水合)状态的吸附剂，与干燥的吸附剂的密度相对。洗涤在乳清材料已经与色谱支持物接触，以及β-乳球蛋白级分已经被允许结合吸附剂之后，根据本发明的方法还可以涉及使用洗涤缓冲液的任选洗涤步骤。所以，提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法可以进一步包括以下步骤：(iv)任选地洗涤色谱支持物。洗涤色谱支持物的步骤可以通过使用洗涤缓冲液进行，由此可以获得洗涤级分。一旦乳清材料已经与色谱支持物接触，可以使用具有如先前针对β-乳球蛋白级分与阳离子交换吸附或阴离子交换吸附的最佳吸附所概述的pH值的洗涤缓冲液洗涤色谱支持物。优选地，洗涤缓冲液的pH值为6.5或以下、如pH6.0或以下、例如pH5.5或以下、如pH5.0或以下、例如pH4.7或以下、如pH4.6或以下。在本发明的优选实施方案中，可应用于调节洗涤缓冲液的pH值的酸可以选自先前针对调节乳清材料的pH值所概述的酸。在本发明的实施方案中，用于洗涤步骤的流速可以选自先前用于将乳清材料装载至色谱支持物所概述的范围。α-乳白蛋白级分本发明的发明人惊人地发现以下方法：其中乳清材料与色谱支持物接触，允许β-乳球蛋白被色谱支持物保留，以及其中包含α-乳白蛋白的透过物级分获得自色谱支持物。以这种方式，β-乳球蛋白级分和α-乳白蛋白级分可以通过简单、廉价和容易的方式以高收率、高回收率和/或高纯度提供。在本发明的上下文中，术语“透过物”涉及当乳清材料与色谱支持物接触，并且保留β-乳球蛋白时流过色谱支持物的级分。在本发明的实施方案中，除α-乳白蛋白之外，获得的包含α-乳白蛋白级分的流过级分还可以包含一种或多种选自以下的组分：碳水化合物、脂肪、盐、肽和乳清材料中存在的痕量的其他蛋白。如果乳清材料为甜乳清材料，则α-乳白蛋白级分可以包含糖巨肽(GMP)，除非乳清材料(甜乳清)中的GMP已经被耗尽或基本耗尽。如果色谱支持物超载，则一些β-乳球蛋白级分也可以存在于流过级分中，并且“污染”α-乳白蛋白级分。在本发明的实施方案中，步骤(iv)中获得的α-乳白蛋白级分在20℃具有至少3.0mS/cm、如至少3.5mS/cm、例如至少4.0mS/cm、如至少4.5mS/cm、例如至少5mS/cm、如至少5.5mS/cm、例如至少6、如至少7mS/cm、例如至少7.5mS/cm、如在4.5-15mS/cm范围内、如在5.0-14mS/cm范围内、例如在5.5-13mS/cm范围内、如在6.0-12.5mS/cm范围内、例如在6.5-12mS/cm范围内、如在7.0-11.5mS/cm范围内、例如在7.5-11mS/cm范围内、如在8.0-10.5mS/cm范围内、例如约9.0mS/cm的电导率。优选地，在获得自步骤(iv)的α-乳白蛋白级分上直接测定电导率。期望获得具有高纯度的α-乳白蛋白的α-乳白蛋白级分。所以，相对于所述α-乳白蛋白级分中的蛋白总量，α-乳白蛋白级分中α-乳白蛋白的量可以为至少25％、如至少30％、例如40％、如至少50％、例如60％、如至少70％、例如至少80％。如先前所提及的，根据本发明，α-乳白蛋白级分不被色谱支持物保留，但流过色谱支持物。在本发明的优选实施方案中，α-乳白蛋白级分和流过级分是相同的。如果洗涤缓冲液被用于去除未吸附的组分以获得洗涤级分，则此类洗涤级分可以与α-乳白蛋白级分/流过级分混合以便改善来自乳清材料的α-乳白蛋白的回收率。在本发明的实施方案中，α-乳白蛋白级分具有基本上类似于装载至色谱支持物的乳清材料的pH值的pH值。优选地，α-乳白蛋白级分包含在4.5-6.5范围内，如4.6-6.0、例如4.7-5.5、如4.8-5.2、例如4.9-5.1的pH值。由于α-乳白蛋白级分可类似于如上文所提及的流过级分，α-乳白蛋白级分中其他组分的存在可能取决于与色谱材料接触的乳清材料的类型。在本发明的实施方案中，α-乳白蛋白级分还包含乳糖、维生素和/或矿物质。在本发明的另一实施方案中，α-乳白蛋白级分还包含矿物质。优选地，矿物质可以选自钙、磷、碘、镁、锌和钾。甚至更优选地，矿物质可以为钙和选自磷、碘、镁、锌和钾的第二矿物质。α-乳白蛋白级分中的矿物质可以为来自乳清材料的矿物质。优选地，α-乳白蛋白级分中100％的矿物质来自乳清材料，例如α-乳白蛋白级分中至少98％的矿物质来自乳清材料，如α-乳白蛋白级分中至少95％的矿物质来自乳清材料，例如α-乳白蛋白级分中至少92％的矿物质来自乳清材料，如α-乳白蛋白级分中至少90％的矿物质来自乳清材料，例如α-乳白蛋白级分中至少75％的矿物质来自乳清材料，如α-乳白蛋白级分中至少50％的矿物质来自乳清材料。在本发明的实施方案中，相对于乳清材料中矿物质的总量，乳清材料中存在的至少20％(w/w)的矿物质，如至少30％、例如至少40％、如至少50％例如至少70％、如至少80％、例如至少90％、如至少95％、例如至少98％、如至少99％、例如至少99.5％、如至少99.9％(w/w)的矿物质存在于α-乳白蛋白级分中。由于β-乳球蛋白的致敏效果，由于α-乳白蛋白的各种用途例如食物成分和婴儿配方，在工业中对限制α-乳白蛋白级分中β-乳球蛋白的量存在兴趣。在本发明的进一步实施方案中，相对于α-乳白蛋白级分中的蛋白总量，α-乳白蛋白级分包含小于20％的非-α-乳白蛋白的蛋白，更优选地，小于10％，甚至更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。在本发明的实施方案中，非-α-乳白蛋白的蛋白包含一种或多种选自以下的蛋白：β-乳球蛋白、免疫球蛋白G、血清白蛋白、乳铁蛋白、乳过氧化物酶和GMP。在本发明的进一步实施方案中，相对于α-乳白蛋白级分中的蛋白总量，α-乳白蛋白级分包含小于20％的β-乳球蛋白，更优选地，小于10％，甚至更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。乳清材料可以包含一种或多种其他蛋白，如免疫球蛋白G、血清白蛋白、乳铁蛋白、乳过氧化物酶和/或糖巨肽(GMP)，以及与色谱支持物接触的乳清材料的类型可以影响α-乳白蛋白级分的组成。优选地，仅一小部分的免疫球蛋白G、血清白蛋白、乳铁蛋白和/或乳过氧化物酶可以见于α-乳白蛋白级分中。优选地，非显著量的免疫球蛋白G、血清白蛋白、乳铁蛋白和/或乳过氧化物酶可以见于α-乳白蛋白级分中。在本发明的实施方案中，相对于α-乳白蛋白级分中的蛋白总量，α-乳白蛋白级分包含小于5％的免疫球蛋白G，更优选地，小于4％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。在本发明的实施方案中，相对于α-乳白蛋白级分中的蛋白总量，α-乳白蛋白级分包含小于15％的糖巨肽，如小于10％、例如小于5％、如小于2％、例如小于1％、如小于0.5％、例如小于0.1％、如小于0.05％。在本发明的优选实施方案中，可以提供过程条件，其中与免疫球蛋白G、血清白蛋白、乳铁蛋白和/或乳过氧化物酶相反，糖巨肽(GMP)可能不被色谱支持物保留，但可以跟随流过级分进入α-乳白蛋白级分。在此类实施方案中，相对于α-乳白蛋白级分中的蛋白总量，α-乳白蛋白级分可以包含至少5％的糖巨肽，如至少7％、例如至少10％、如至少15％、例如至少20％、如至少25％、例如至少30％、如至少40％。在本发明的实施方案中，获得的α-乳白蛋白级分可以经历第一浓缩步骤。此类第一浓缩步骤可以包括超滤、纳滤、微滤、离心或它们的任何组合。第一浓缩步骤可以导致包含α-乳白蛋白级分的第一浓缩的保留物级分以及包含水、乳糖和矿物质的第一浓缩的透过物级分。在本发明的实施方案中，第一浓缩的透过物级分可以经历纳滤和/或微滤，提供水透过物以及包含乳糖和矿物质的乳糖-保留物，所述水透过物可以优选地在本发明的方法中重复使用。在本发明的实施方案中，α-乳白蛋白级分是液体、浓缩液或粉末。β-乳球蛋白的洗脱为了从色谱支持物获得包含β-乳球蛋白级分的保留物级分，可以使色谱支持物经历洗脱缓冲液。在本发明的上下文中，术语“洗脱缓冲液”涉及能够改变β-乳球蛋白的特异性吸附至β-乳球蛋白级分的释放和洗脱的色谱支持物的条件的组合物。在本发明的优选实施方案中，用于提供β-乳球蛋白级分的洗脱缓冲液的量相当于色谱支持物的体积的至多5倍、如色谱支持物的体积的至多4倍、例如色谱支持物的体积的至多3倍、如色谱支持物的体积的至多2倍、例如色谱支持物的体积的至多1倍。与工业和现有技术中的期望相反，本发明的发明人惊人地发现：通过提供如本发明中所述的选择性吸附的方法，制备或分离特异性乳清蛋白级分的成本显著低于使用传统上使用的特异性洗脱分离的乳清蛋白级分，同时可以获得较高收率和较高纯度。如果假定3个柱体积对于提供来自色谱支持物的期望乳清蛋白级分(例如α-乳白蛋白级分或β-乳球蛋白级分)的足够的洗脱是必需的。通过使用选择性洗脱分级乳清材料，1个柱体积的吸附剂可以被用于捕获1kgα-乳白蛋白和1kgβ-乳球蛋白。为了获得蛋白级分，3个柱体积被用于洗脱α-乳白蛋白级分，以及3个柱体积被用于洗脱β-乳球蛋白级分，导致总共消耗6个柱体积的洗脱缓冲液。通过使用选择性吸附以分离例如β-乳球蛋白级分和α-乳白蛋白级分，可以提供两种色谱支持物，一种色谱支持物用于每种蛋白级分。所述两种色谱支持物各自包含1/2个柱体积吸附剂，其可以分别被用于捕获1kgα-乳白蛋白级分和1kgβ-乳球蛋白级分。为了获得蛋白级分，1.5个柱体积(3×1/2个柱体积)被用于洗脱α-乳白蛋白级分，以及1.5个柱体积(3×1/2个柱体积)被用于洗脱β-乳球蛋白级分，导致总共消耗3个柱体积的洗脱缓冲液。所以，通过使用如本发明中所述的选择性吸附，将洗脱缓冲液溶液减少50％是可能的。在本发明中，可以甚至进一步减少洗脱缓冲液的消耗，因为α-乳白蛋白级分可以见于从色谱支持物直接获得的透过物级分，因此获得α-乳白蛋白级分无需任何洗脱缓冲液。因此，获得α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的洗脱缓冲液的消耗可以甚至进一步减少，优选减少约50％。因此，这可以导致洗脱缓冲液消耗总共减少约75％。在本发明的优选实施方案中，用于提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的洗脱缓冲液的量相当于色谱支持物的体积的至多5倍、如色谱支持物的体积的至多4倍、例如色谱支持物的体积的至多3倍、如色谱支持物的体积的至多2倍、例如色谱支持物的体积的至多1倍。在本发明的上下文中，术语“柱体积”和“色谱支持物的体积”可互换使用，并且涉及色谱支持物中存在的吸附剂的体积，所述色谱支持物例如吸附剂能够分离β-乳球蛋白和α-α-乳白蛋白并且保留β-乳球蛋白。在本发明的实施方案中，测定为干燥的β-乳球蛋白级分的洗脱缓冲液的消耗/kgβ-乳球蛋白级分优选为小于250L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、如小于200L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、例如小于150L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、如小于100L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、例如小于90L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、如小于80L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、例如小于75L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、如小于70L/kg干燥的β-乳球蛋白级分、例如小于60L/kg干燥的β-乳球蛋白级分。根据本发明用于提供两种级分，即α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的洗脱缓冲液的消耗的显著降低是现有技术中所述的技术的显著改善。为了控制洗脱，使用pH的改变、添加盐或者它们的组合是可能的。在本发明中，可以通过改变pH提供β-乳球蛋白级分。可选地，如果数种蛋白和β-乳球蛋白一起被吸附至色谱支持物，则可以将选择性洗脱用于吸附至所述色谱支持物的β-乳球蛋白和剩余蛋白的顺序洗脱。优选地，可以通过改变pH洗脱β-乳球蛋白级分。在本发明的优选实施方案中，洗脱缓冲液的pH可以促进吸附至色谱支持物的β-乳球蛋白的最佳解吸。在本发明的优选实施方案中，洗脱缓冲液的pH大于6.5，例如pH为至少7.0、如至少8.0、例如至少9.5、如至少10.5、例如至少11.5、如至少12.0。在本发明的实施方案中，洗脱缓冲液的pH值在7.0-13.0范围内、如在8.0-12.5范围内、例如在9.0-12.0范围内、如在10.0-11.5范围内、例如在10.5-11.0范围内、优选在11.5-12.5范围内。在本发明的实施方案中，洗脱缓冲液可以包含氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵、磷酸钾、磷酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、碳酸钠或它们的任何组合。优选地，包含氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵或它们的任何组合的洗脱缓冲液为优选的。β-乳球蛋白级分获得的保留物级分可以优选地包含β-乳球蛋白级分，并且取决于与色谱材料接触的乳清材料的类型和/或洗脱缓冲液的组成，β-乳球蛋白级分可以包含其他组分。在本发明的实施方案中，步骤(v)中获得的β-乳球蛋白级分在20℃具有低于50mS/cm、如低于40mS/cm、例如低于30mS/cm、如低于25mS/cm、例如低于20mS/cm、如低于15mS/cm、例如低于10mS/cm、如低于8mS/cm、例如低于5mS/cm、如低于3mS/cm、例如低于2mS/cm、如低于1mS/cm、例如低于0.5mS/cm的电导率。优选地，直接在获得自步骤(v)的β-乳球蛋白级分上测定电导率。在本发明的另一实施方案中，β-乳球蛋白级分的pH值大于4.5、例如至少5.5、如至少6.5、例如pH为至少7.0、如至少8.0、例如至少9.5、如至少10.5、例如至少11.5、如至少12.0。本发明的发明人惊人地发现本发明的优势之一为从乳清材料中回收的大量的β-乳球蛋白。在本发明的实施方案中，乳清材料中存在的大于80％的β-乳球蛋白在β-乳球蛋白级分中，例如乳清材料中存在的大于90％的β-乳球蛋白、如至少91％、例如至少92％、如至少93％、例如至少94％、如至少95％、例如至少96％、如至少97％、例如至少98％、如至少99％、例如至少99.5％的β-乳球蛋白在β-乳球蛋白级分中。β-乳球蛋白级分的高回收率可以优选地获得自乳清材料与色谱支持物之间的单次接触。在本发明的上下文中，术语“单次接触”涉及使乳清材料与色谱支持物仅接触一次，并且没有使透过物级分或保留物级分再循环至色谱支持物以改善分离。取决于使用的乳清材料的类型或使用的洗脱缓冲液，例如如果使用选择性洗脱，则可以进一步改善β-乳球蛋白级分的纯度。在本发明的实施方案中，相对于所述β-乳球蛋白级分中的蛋白总量，β-乳球蛋白级分中β-乳球蛋白的量为至少75％、如至少80％、例如90％、如至少91％、例如92％、如至少93％、例如至少94％、如至少95％、例如至少96％、如至少97％、例如至少98％、如至少99％、例如至少99.5％。相对于β-乳球蛋白级分中的蛋白总量，β-乳球蛋白级分可以优选地包含小于25％(w/w)的非-β-乳球蛋白的蛋白，优选地，相对于β-乳球蛋白级分中的蛋白总量，β-乳球蛋白级分可以包含小于15％(w/w)的非-β-乳球蛋白的蛋白，更优选地，小于10％，甚至更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。优选地，非-β-乳球蛋白的蛋白包含选自α-乳白蛋白、免疫球蛋白G、血清白蛋白、乳铁蛋白、乳过氧化物酶和糖巨肽中的一种或多种蛋白。在本发明的进一步实施方案中，相对于β-乳球蛋白级分中的蛋白总量，β-乳球蛋白级分包含小于15％的α-乳白蛋白，优选地，小于10％，更优选地，小于8％，甚至更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于1％。在本发明的实施方案中，相对于β-乳球蛋白级分中的蛋白总量，β-乳球蛋白级分包含小于10％的免疫球蛋白G，更优选地，小于5％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。如果乳清中耗尽或基本耗尽的乳清蛋白不是免疫球蛋白G，则β-乳球蛋白级分可以包含较高量的免疫球蛋白G，相对于β-乳球蛋白级分中的蛋白总量，如小于60％的免疫球蛋白、如小于50％、例如小于40％、例如小于30％、如小于20％、例如小于10％、如小于5％。在本发明的进一步实施方案中，相对于β-乳球蛋白级分中的蛋白总量，β-乳球蛋白级分包含小于5％的糖巨肽，更优选地，小于4％，甚至更优选地，小于3％，甚至更优选地，小于2％，甚至更优选地，小于1％，甚至更优选地，小于0.5％，甚至更优选地，小于0.1％，甚至更优选地，小于0.05％。在本发明的实施方案中，β-乳球蛋白级分可以包含矿物质。优选地，矿物质可以选自钙、磷、碘、镁、锌和钾。甚至更优选地，矿物质可以为钙以及选自磷、碘、镁、锌和钾的第二矿物质。即使β-乳球蛋白级分可以包含矿物质，但矿物质的主要部分可以在流过级分中，并且终止于α-乳白蛋白级分中。所以，相对于乳清材料中矿物质的总量，β-乳球蛋白级分可以包含小于20％的矿物质、如小于15％的矿物质、例如小于10％的矿物质、如小于5％的矿物质、例如小于1％的矿物质。在本发明的实施方案中，可以使获得的β-乳球蛋白级分经历第二浓缩步骤。此类第二浓缩步骤可以包括超滤、纳滤、微滤、离心或它们的任何组合。第二浓缩步骤可以产生包含β-乳球蛋白级分的第二浓缩的保留物级分以及主要包含水的第二浓缩的透过物级分。在本发明的实施方案中，可以将在第二浓缩的透过物级分中获得的水优选地再用于根据本发明的方法中。在本发明的实施方案中，β-乳球蛋白级分为液体、浓缩物或粉末。其它实施方案在大多数现有技术中，乳清蛋白的变性并不被认为是问题，并且实施可损害天然乳清蛋白的功能的过程条件。本发明可以从乳清蛋白的非常温和的处理中受益，并且可优选地期望可以保持α-乳白蛋白级分和/或β-乳球蛋白级分的天然功能，更优选地，可以保持α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的天然功能。不同的条件可以引起乳清蛋白的变性，以及乳清材料中的一些蛋白可能比其他蛋白更敏感。可引起变性的条件的实例可以为暴露于小于3以及大于12的pH值；高盐浓度；高温；和化学品。因此，为了避免乳清蛋白的变性，优选地使牛奶不经历巴氏灭菌。同样地，优选地使乳清材料不经历巴氏灭菌。虽然应避免高温以便不会使乳清蛋白处于变性的风险，但根据本发明的方法可以在高于环境温度的温度有利地进行。在本发明的进一步实施方案中，步骤(ii)至(v)中的至少一个可以在高于25℃、如高于27℃、例如高于30℃、如高于35℃、例如高于40℃、如高于45℃、例如约50℃、如在25-80℃范围内、例如在30-70℃范围内、如在35-65℃范围内、例如在40-60℃范围内、如在45-55℃范围内的温度进行。如本发明中所述的从乳清材料获得的α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的纯度、收率和回收率可以由乳清材料通过色谱支持物的单个循环提供。在本发明的上下文中，术语“单个循环”涉及色谱支持物与乳清材料之间仅具有一次接触。透过物级分或保留物级分并没有再循环至色谱支持物以便提供α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的进一步分离。在本发明的优选实施方案中，可以将根据本发明的α-乳白蛋白级分和/或根据本发明的β-乳球蛋白级分用作食物产品、饲料产品、饮料产品、美容产品、药物产品或食品补充剂中的成分。可以将本发明的α-乳白蛋白级分优选地用于婴儿配方中。可以将本发明的β-乳球蛋白级分用于数个应用中，特别是数个食品应用中。优选地，可以将本发明的β-乳球蛋白级分用作饮料中的稳定剂，其中β-乳球蛋白可以使饮料中的其他蛋白稳定，否则，其他蛋白可在酸性环境中沉淀，导致饮料变得不澄清和无吸引力的。在另一实施方案中，可以将本发明的β-乳球蛋白级分用作维生素的载体，因为β-乳球蛋白包含针对例如维生素的结合性能。在实施方案中，本发明的β-乳球蛋白级分已经显示具有强的发泡性能，并且可以优选地用作例如取代蛋白的发泡剂。在实施方案中，可以将本发明的β-乳球蛋白级分用作运动营养品，优选地，呈酒胶糖、凝胶、饮料、粉末、丸剂或糖浆的形式的运动营养品以改善从剧烈运动中的恢复，如肌肉恢复。应注意，在本发明的方面之一的上下文中所述的实施方案和特征也适用于本发明的其他方面。本申请中引用的所有专利和非专利参考据此通过引用整体并入。本发明方法的理论实例在下述中，描述根据本发明的方法的理论实例。在该理论实例中，提供用于α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的分离的乳清材料中的多种乳清蛋白中的一种已经被耗尽或基本耗尽。在本发明方法的优选实施方案的下述理论实例中，从乳清材料中最初去除或基本去除免疫球蛋白G。获得的所得透过物(第一透过物)代表经历α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的分离的耗尽的或基本耗尽的乳清材料。除非另有规定，否则在本专利申请中早前描述的定义和实施方案在此也适用于本发明的方法的理论实例中。因此，在本发明的根据理论实例的一个方面，本发明涉及由获得自牛奶的乳清材料提供免疫球蛋白G级分、α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供乳清材料；(ii)使所述乳清材料与第一色谱支持物接触，允许免疫球蛋白G被所述第一色谱支持物保留；(iii)获得包含α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的第一透过物级分；(iv)从所述第一色谱支持物获得包含所述免疫球蛋白G级分的第一保留物级分；(v)使所述第一透过物级分与第二色谱支持物接触，允许β-乳球蛋白被所述第二色谱支持物保留；(vi)从色谱支持物获得包含所述α-乳白蛋白级分的第二透过物级分；以及(vii)从色谱材料获得包含所述β-乳球蛋白级分的第二保留物级分。在本发明的优选实施方案中，可以通过免疫球蛋白G级分与第一色谱支持物的选择性吸附进行免疫球蛋白G级分与包含α-乳白蛋白级分和β-乳球蛋白级分的乳清材料的分级。在本发明的优选实施方案中，可以通过β-乳球蛋白级分与第二色谱支持物的选择性吸附进行来自第一透过物的α-乳白蛋白级分与β-乳球蛋白级分的分级。在本发明的实施方案中，选择性吸附导致免疫球蛋白G级分与α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的分离。该分离可以通过提供第一色谱支持物和/或第一过程条件进行，其有助于免疫球蛋白G的选择性吸附，并且允许β-乳球蛋白和α-乳白蛋白随着第一透过物级分一起通过第一色谱支持物，而不会被吸附。在本发明的进一步实施方案中，选择性吸附导致α-乳白蛋白级分与β-乳球蛋白级分的分离。该分离可以通过提供第二色谱支持物和/或第二过程条件进行，其有助于β-乳球蛋白的选择性吸附，并且允许α-乳白蛋白随着第二透过物级分一起通过第二色谱支持物，而不会被吸附。先前已经提及一些过程条件。在本发明的上下文中，术语“乳清材料”涉及来自牛奶、不含酪蛋白的牛奶部分的血清材料。根据本发明的乳清材料可以为乳清、酸性乳清、甜乳清、至少部分分级的乳清(只要免疫球蛋白G、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白存在于至少部分分级的乳清中)、分离乳清蛋白(WPI)或浓缩乳清蛋白(WPC)。在本发明的上下文中，术语“至少部分分级的乳清”涉及至少一种蛋白已经被去除或基本去除的乳清。这种类型的乳清的唯一要求是存在免疫球蛋白G、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。如以上所述，本发明教导使用第一色谱支持物，允许免疫球蛋白G被保留(步骤(iv))，以及使用第二色谱支持物，允许β-乳球蛋白被保留(步骤(vii))。在本发明的上下文中，术语“第一色谱支持物”涉及提供用于保留免疫球蛋白G的色谱支持物。在本发明的上下文中，术语“第二色谱支持物”涉及提供用于保留β-乳球蛋白的色谱支持物。在本发明的优选实施方案中，第一色谱支持物可以包含第一吸附剂。可以将该第一吸附剂用于选自以下的技术中：离子交换吸附、疏水性相互作用吸附、亲和吸附、混合模式配体吸附、金属螯合吸附、反相吸附以及它们的任何组合。在本发明的优选实施方案中，第一吸附剂被用于混合模式配体吸附中。在本发明的优选实施方案中，第二色谱支持物包含第二吸附剂。可以将该第二吸附剂用于选自以下的技术中：离子交换吸附、疏水性相互作用吸附、亲和吸附、混合模式配体吸附、金属螯合吸附、反相吸附以及它们的任何组合。在本发明的优选实施方案中，可以将吸附剂用于离子交换吸附，优选地，用于阳离子交换吸附中。在本发明的实施方案中，可以将第二吸附剂用于离子交换吸附，优选地，用于阴离子交换吸附中。在优选实施方案中，阴离子交换吸附中使用的平衡液可以为pH大于6.5、如pH大于7.0、例如pH大于7.5、如pH大于8.0、例如pH大于8.5、如pH大于9.0、如在pH7.0-9.0范围内的液体。在本发明的实施方案中，阴离子交换吸附中使用的平衡液可以包含氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵、磷酸钾、磷酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、碳酸钠或它们的任何组合。优选地，包含氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铵或它们的任何组合的洗脱缓冲液为优选的。在本发明的实施方案中，与第二色谱支持物中使用的吸附剂相比，第一色谱支持物中使用的吸附剂具有不同的平均颗粒大小。优选地，第一色谱支持物的平均颗粒大小在160-220μm范围内、如在170-200μm范围内、例如在175-190μm范围内、如约180μm。在本发明的另一实施方案中，第二色谱支持物的平均颗粒大小在120-159μm范围内、如在130-150μm范围内、例如在135-145μm范围内、如约140μm。在操作期间，可以使乳清材料与第一吸附剂接触，以及免疫球蛋白G可以被吸附或固定至第一吸附剂。该吸附可以在压力下进行。允许β-乳球蛋白和α-乳白蛋白通过第一色谱支持物，以及第一吸附剂不会与其结合，或基本上不会与其结合。在任选的洗涤期间，从第一吸附剂任选地去除微粒材料和可溶性杂质。当乳清材料与第一吸附剂接触时，可以优化第一吸附剂与乳清材料之间的比率以便提供高容量的第一吸附剂，以及获得高纯度和/或高回收率的免疫球蛋白G级分。在本发明的实施方案中，免疫球蛋白G相对于第一吸附剂的装载比为至少2mg装载的免疫球蛋白G/ml第一吸附剂，如至少5mg、例如至少10mg、如至少12mg、例如至少15mg、如至少20mg、例如至少25mg、如至少30mg、例如至少35mg、如至少40mg、例如至少50mg、如至少75mg、例如至少100mg、如至少125mg、例如至少150mg。在本发明的进一步实施方案中，乳清相对于第一吸附剂的装载比为至少10mg装载的蛋白/ml第一吸附剂，如至少12mg、例如至少15mg、如至少20mg、例如至少25mg、如至少30mg、例如至少35mg、如至少50mg、例如至少75mg、如至少100mg、例如至少150mg、如至少175mg、例如至少200mg。当将乳清材料装载至第一色谱支持物时，提供包含未捕获的且未结合的材料的第一透过物，如β-乳球蛋白和α-乳白蛋白。可以使第一透过物与第二吸附剂接触，以及β-乳球蛋白可以被吸附或固定至第二吸附剂。该吸附可以在压力下进行。允许α-乳白蛋白通过第二色谱支持物，以及第二吸附剂不会与其结合，或基本上不会与其结合。在任选的洗涤期间，从第二吸附剂任选地去除微粒材料和可溶性杂质。当第一透过物级分与第二吸附剂接触时，可以优化第二吸附剂与第一透过物级分之间的比率以便提供高容量的第二吸附剂，以及获得高纯度、高收率和/或高回收率的β-乳球蛋白级分和α-乳白蛋白级分。在本发明的实施方案中，β-乳球蛋白相对于第二吸附剂的装载比为至少2mg装载的β-乳球蛋白/ml第二吸附剂，如至少5mg、例如至少10mg、如至少12mg、例如至少15mg、如至少20mg、例如至少25mg、如至少30mg、例如至少35mg、如至少40mg、例如至少50mg、如至少75mg、例如至少100mg、如至少125mg、例如至少150mg。在本发明的另一实施方案中，乳清相对于第二吸附剂的装载比为至少10mg装载的蛋白/ml第二吸附剂，如至少12mg、例如至少15mg、如至少20mg、例如至少25mg、如至少30mg、例如至少35mg、如至少50mg、例如至少75mg、如至少100mg、例如至少150mg、如至少175mg、例如至少200mg。为了使吸附剂在免疫球蛋白G与β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的选择性吸附中起作用，第一吸附剂可以包含第一配体。在本发明的优选实施方案中，第一吸附剂包含对免疫球蛋白G具有亲和力的一种或多种第一配体。在本发明的上下文中，术语“第一配体”涉及共价连接第一吸附剂并且具有吸附免疫球蛋白G功能的化合物。在本发明的实施方案中，可以将第一吸附剂用于混合模式配体吸附中。在本发明的进一步实施方案中，第一配体包含酸性单环或双环的任选取代的芳族或杂芳族部分。优选地，酸性单环或双环的任选取代的芳族或杂芳族部分为苯甲酸或取代的苯甲酸。第一配体可以为低分子量化合物，并且在本发明的实施方案中，配体的分子量可以为至多500道尔顿、如至多250道尔顿、例如至多100道尔顿、例如至多50道尔顿。在本发明的优选实施方案中，取代的苯甲酸选自2-氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、2-巯基苯甲酸、2-巯基烟酸、4-氨基-2-氯苯甲酸、2-氨基-5-氯苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸、4-氨基水杨酸、5-氨基水杨酸、3,4-二氨基苯甲酸、3,5-二氨基苯甲酸、5-氨基间苯二甲酸、4-氨基邻苯二甲酸，优选地，取代的苯甲酸为4-氨基苯甲酸。为了改善容量、纯度和回收率，第一配体浓度可能也很重要。所以，在本发明的优选实施方案中，第一配体浓度在以下范围内：30-300微摩尔/ml沉降的吸附剂、例如50-200微摩尔/ml沉降的第一吸附剂、如75-175微摩尔/ml沉降的第一吸附剂、例如100-160微摩尔/ml沉降的第一吸附剂、如120-145微摩尔/沉降的第一吸附剂。为了使第二吸附剂在β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的选择性吸附中起作用，第二吸附剂可以包含第二配体。在本发明的优选实施方案中，第二吸附剂包含对β-乳球蛋白具有亲和力的一种或多种第二配体。在本发明的上下文中，术语“第二配体”涉及共价连接第二吸附剂，并且具有吸附β-乳球蛋白功能的化合物。第二配体可以为低分子量化合物，以及在本发明的实施方案中，配体的分子量可以为至多500道尔顿、如至多250道尔顿、例如至多100道尔顿、例如至多50道尔顿。在本发明的优选实施方案中，第二配体可以在pH6.5或以下、如pH6.0或以下、例如pH5.5或以下是带负电荷的。在本发明的进一步实施方案中，第二配体可以选自诸如丙烷磺酸或丁烷磺酸的磺酸配体和/或诸如氯乙酸的羧酸配体。在本发明的实施方案中，第二配体可以在pH大于6.5、如pH大于7.0、例如pH大于7.5、如pH大于8.0、例如pH大于8.5、如pH大于9.0、如pH7.0-9.0范围内是带正电荷的。在本发明的实施方案中，第二配体可以选自诸如季铵阴离子的Q-阴离子交换配体、或诸如二乙氨乙基的DEAE-阴离子交换配体。为了改善容量、纯度和回收率，第二配体浓度可能也很重要。所以，在本发明的优选实施方案中，第二配体浓度可以在以下范围内：30-300微摩尔/ml沉降的吸附剂、例如50-200微摩尔/ml沉降的第二吸附剂、如75-175微摩尔/ml沉降的第二吸附剂、例如100-160微摩尔/ml沉降的第二吸附剂、如120-145微摩尔/沉降的第二吸附剂。在本发明的实施方案中，第一透过物级分可以包含矿物质。在本发明的优选实施方案中，第一透过物级分未进行矿物质的去除。具体地，第一透过物级分未进行钙的去除。优选地，矿物质选自钙、磷、碘、镁、锌和钾。优选地，第一透过物级分中存在的矿物质天然存在于乳清材料中。优选地，可以使第一色谱支持物经历第一洗脱缓冲液来洗脱免疫球蛋白G级分。在本发明的优选实施方案中，第一洗脱缓冲液的pH可以促进吸附至第一色谱支持物的免疫球蛋白G的最佳解吸。在本发明的优选实施方案中，第一洗脱缓冲液的pH大于6.5，例如pH为至少7.0、如至少8.0、例如至少9.5、如至少10.5、例如至少11.5、如至少12.0。在本发明的实施方案中，第一洗脱缓冲液的pH值在7.0-13.0范围内、如在8.0-12.5范围内、例如在9.0-12.0范围内、如在10.0-11.5范围内、例如在10.5-11.0范围内、优选地在11.5-12.5范围内。优选地，用于提供免疫球蛋白G级分的第一洗脱缓冲液的量相当于第一色谱支持物的体积的至多3倍、如第一色谱支持物的体积的至多2倍、例如第一色谱支持物的体积的至多1倍、如第一色谱支持物的体积的至多0.5倍、例如第一色谱支持物的体积的至多0.25倍。在本发明的实施方案中，相对于免疫球蛋白G级分中蛋白的总量，免疫球蛋白G级分中免疫球蛋白G的量可以为至少40％、如至少50％、例如60％、如至少70％、例如80％、如至少85％、例如至少87％、如至少89％、例如约90％。在本发明的进一步实施方案中，相对于免疫球蛋白G级分中蛋白的总量，免疫球蛋白G级分包含小于60％的非免疫球蛋白G蛋白，更优选地，小于50％，甚至更优选地，小于40％，甚至更优选地，小于30％，甚至更优选地，小于25％，甚至更优选地，小于20％，甚至更优选地，小于15％，甚至更优选地，小于10％。优选地，非免疫球蛋白G蛋白包含选自α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白、乳铁蛋白、乳过氧化物酶和糖巨肽的一种或多种蛋白。在本发明的上下文中，术语“第二透过物级分”涉及当第一透过物级分与第二色谱支持物接触并且保留β-乳球蛋白时，流过第二色谱支持物的级分。由于α-乳白蛋白级分可能类似于获得自如以上所提及的第二色谱支持物的流过级分，α-乳白蛋白级分中其他组分的存在可能取决于与色谱材料接触的乳清材料的类型。在本发明的实施方案中，α-乳白蛋白级分还包含乳糖、维生素和/或矿物质。早前已经在本专利申请中描述α-乳球蛋白级分中乳清蛋白的含量，并且其也适用于本发明方法的该优选实施方案。为了从第二色谱支持物获得包含β-乳球蛋白级分的第二保留物级分，可以使第二色谱支持物经历第二洗脱缓冲液。术语“第二洗脱缓冲液”可以涉及这样的组合物，其能够将第二色谱支持物从特异性吸附β-乳球蛋白的状态改变至释放和洗脱β-乳球蛋白。在本发明的优选实施方案中，用于提供β-乳球蛋白级分的第二洗脱缓冲液的量可以相当于第二色谱支持物的体积的至多5倍、如第二色谱支持物的体积的至多4倍、例如第二色谱支持物的体积的至多3倍、如第二色谱支持物的体积的至多2倍、例如第二色谱支持物的体积的至多1倍。早前已经在本专利申请中描述β-乳球蛋白级分中乳清蛋白的含量，并且其也适用于本发明方法的该优选实施方案。实施例实施例1在pH范围为pH3.5-6.6的不同pH-值下，在中试规模中，使用88l乳清材料，使用膨胀床色谱，从酸乳清中分离乳清蛋白以示出不同乳清蛋白的结合如何随着pH的变化而变化，以及显示有利的pH-范围，在该pH-范围中使用选择性吸附分离α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。β-乳球蛋白被吸附至色谱支持物，允许“纯的”α-乳白蛋白流过色谱支持物而不会结合。原材料在本实施例中使用的乳清材料是从生鲜乳(牛科动物)获得的、未经巴氏灭菌的，其是从当地农民获得的。通过离心从生鲜乳中去除奶油。用盐酸将所得脱脂乳的pH调节至pH4.5。通过使乳清材料通过100μm滤网去除沉淀的酪蛋白级分，从而保留酪蛋白凝乳。收集上清液(酸乳清材料)，并将其用于实验中。在吸附之前，分别用1M盐酸将酸乳清材料的pH调节至pH-值低于pH4.5，以及用1MNaOH将酸乳清材料的pH调节至pH-值高于pH4.5。下表显示在各个pH-值下乳清材料的测试的不同pH-值和电导率。pH电导率,mS/cm3.510.003.89.784.09.184.29.044.28.404.58.144.67.914.88.585.09.315.29.995.410.756.011.186.611.40吸附剂使用FastLineSP，包含磺基的强阳离子交换剂。吸附剂基于5％的琼脂糖和掺入的10％的碳化钨颗粒，密度为大约2.9g/ml，以及颗粒大小在40-250μm范围内。吸附剂与表氯醇交联，并且与1,4-丁烷磺内酯偶联。配体浓度：174mmol磺基/L吸附剂。过程参数将8.8升吸附剂(FastLineSP)填充在直径为15cm的色谱柱中。填充模式的床高为50cm。用多达50升10mM柠檬酸钠平衡吸附剂以达到期望pH-参见上表。将88升pH-调节的酸乳清材料装载至色谱柱。流速，重力：15cm/min，导致两倍的床膨胀(至100cm膨胀床高度)。用50升水洗涤吸附剂。用40升20mMNaOH洗脱蛋白。用1M盐酸中和洗出液。在室温(20-25℃)进行实验。不同级分中蛋白的测定用SDS-PAGE技术估算洗出液中不同蛋白的收率。根据下述通用程序进行SDS-PAGE凝胶电泳：将25μL样品与25μLtris-甘氨酸样品缓冲液(LC2676,NovexbyLifeTechnologies,USA)混合。在非还原条件下，将所得溶液在水中煮沸5min。将20μL煮沸的样品上样至预制的SDS-PAGE凝胶夹盒(4-20％tris-甘氨酸梯度凝胶(1mm),(EC6025,NovexbyLifeTechnologies,USA)中。将凝胶在200V，400mA下运行1小时。用考马斯蓝染色剂对凝胶进行染色过夜(SimplyBlueTMSafeStain,LC6060)。结果下表显示在将乳清材料添加至色谱柱之后从色谱柱获得的洗出液中α-乳白蛋白的相对收率。收率显示为原材料中存在的蛋白与装载至针对β-乳球蛋白(β-LG)和α-乳白蛋白(α-LA)的柱的蛋白的百分比。用SDS-PAGE技术估算收率：结果显示：在4.5-4.8的pH范围内，α-乳白蛋白与β-乳球蛋白的分离是最佳的，其中较多部分的β-乳球蛋白结合阳离子交换剂，随后使用40升20mMNaOH洗脱(导致洗出液中有85->90％的β-乳球蛋白)，并且在流过物中回收较多部分的α-乳白蛋白(导致洗出液中仅存在<5-20％的α-乳白蛋白)。预期甚至用包含所有乳清蛋白的乳清材料(未进行乳清蛋白的耗尽)进行该实验与当使用耗尽一种或多种乳清蛋白的乳清材料进行该实验的结果类似。实施例2使用选择性吸附从耗尽免疫球蛋白(IgG)、乳铁蛋白(LF)和乳过氧化物酶(LP)的酸乳清材料中分离α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。β-乳球蛋白被吸附至色谱支持物，允许“纯的”α-乳白蛋白流过色谱支持物而不会结合。在pH4.5和pH4.7进行实验。原材料乳清材料为从生鲜乳(牛科动物)获得的、未经巴氏灭菌的、由当地农民收集的酸乳清材料。通过离心从生鲜乳中去除奶油。用盐酸将所得脱脂乳的pH调节至pH4.5。通过使乳清材料通过100μm滤网去除沉淀的酪蛋白级分，从而保留酪蛋白凝乳。通过色谱吸附基本耗尽上清液(酸乳清材料)中的乳铁蛋白、乳过氧化物酶、免疫球蛋白G和白蛋白，并将其用于实验中。在使酸乳清材料与吸附剂接触之前，将酸乳清材料分成两个级分，一个级分保持酸乳清材料的pH-值(pH4.5)，以及用1MNaOH调节另一级分的pH-值用于提供4.7的pH-值。吸附剂FastLineSP，包含磺基的强阳离子交换剂。吸附剂基于5％的琼脂糖和掺入的10％的碳化钨颗粒，密度为大约2.9g/ml，颗粒大小在40-250μm范围内。吸附剂与表氯醇交联，并且与1,4-丁烷磺内酯偶联。配体浓度：174mmol磺基/L吸附剂。过程参数将8.8升吸附剂(FastLineSP)填充在直径为15cm的色谱柱中。填充模式的床高为50cm。相对于进行的两个实验，用多达50升10mM柠檬酸钠平衡吸附剂以分别达到pH4.5和pH4.7。将220升pH-调节的酸乳清材料装载至色谱柱。流速，重力：15cm/min，导致两倍的床膨胀(至100cm膨胀床高度)。用50升水洗涤吸附剂。用40升20mMNaOH洗脱β-乳球蛋白。用1M盐酸中和洗出液。在室温(20-25℃)进行实验。级分中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定进行单向放射免疫扩散(SRI)以便定量分别在上样pH4.5和pH4.7下来自柱的流过级分中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的相对收率百分比，如Scand.J.Immunol.Vol.17,Suppl.10,41-56,1983中所述。利用以下进行SRI：UpFrontChromatographyA/S生产的来自针对牛科动物α-乳白蛋白升高的超免疫兔血清的纯化的免疫球蛋白级分(6.5μl/cm2)，UpFrontChromatographyA/S生产的(15μl/cm2)来自针对牛科动物β-乳球蛋白升高的超免疫兔血清的纯化的免疫球蛋白级分，利用上样至柱的浓度为100％、80％、60％、40％和20％的酸乳清溶液完成标准曲线。相对于标准曲线，读取各个级分。结果下表显示上样至柱的原材料的相对收率百分比：对于两个上样pH-值，来自柱的流过级分中α-乳白蛋白的量和β-乳球蛋白的量的测定。对于两个上样pH-值，获得自柱的洗出液中α-乳白蛋白的量和β-乳球蛋白的量的测定。上样pH％的α-乳白蛋白％的β-乳球蛋白4.513904.7689推断在上样pH4.5下，在1:25的装载比(25L装载的乳清/L吸附剂)中，从酸乳清材料中去除93％的β-乳球蛋白。在pH4.7下，去除89％的β-乳球蛋白。在两个pH-值下，在获得自吸附剂的流过级分中回收主要部分的α-乳白蛋白：在pH4.5和pH4.7下，分别为87％和91％。实施例3使用选择性吸从酸乳清流中分离IgG、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。首先，IgG被吸附至第一色谱支持物，以及允许β-乳球蛋白和α-乳白蛋白流过第一色谱支持物。在第一色谱支持物之后，β-乳球蛋白被吸附至第二色谱支持物，允许“纯的”α-乳白蛋白流过第二色谱支持物而不会结合。在pH4.6进行实验。原材料乳清材料为从生鲜乳(牛科动物)获得的、未经巴氏灭菌的、由当地农民收集的酸乳清材料。通过离心从生鲜乳中去除奶油。用盐酸将所得脱脂乳的pH调节至pH4.6。通过使乳清材料通过100μm滤网去除沉淀的酪蛋白级分，从而保留酪蛋白凝乳。收集上清液(酸乳清材料)，并将其用于实验中。吸附剂第一色谱支持物的吸附剂为包含4-氨基苯甲酸的混合模式配体。第二色谱支持物的吸附剂为FastLineSP，包含磺基的强阳离子交换剂。两种吸附剂基于5％琼脂糖和掺入的10％的碳化钨颗粒，密度为大约2.9g/ml，颗粒大小在40-250μm范围内。混合模式吸附剂和FastLineSP吸附剂与表氯醇交联，并且分别与4-氨基苯甲酸和1,4-丁烷磺内酯偶联。配体浓度：分别为40mmol混合模式基团/L吸附剂和174mmol磺基/L吸附剂。过程参数将13.2升吸附剂(混合模式吸附剂)填充在直径为15cm的第一色谱柱中。填充模式的床高为75cm。用75升10mM柠檬酸钠平衡吸附剂以达到pH4.6。将330升pH-调节的酸乳清材料装载至第一色谱柱。流速，重力：15cm/min，导致两倍的床膨胀(至150cm膨胀床高度)。用75升水洗涤吸附剂。用60升20mMNaOH洗脱IgG。用1M盐酸中和洗出液。将13.2升吸附剂(FastLineSP)填充在直径为15cm的第二色谱柱中。填充模式的床高为75cm。用75升10mM柠檬酸钠平衡吸附剂以达到pH4.6。将从第一色谱柱获得的330升流过级分直接装载至第二色谱柱。流速，重力：15cm/min，导致两倍的床膨胀(至100cm膨胀床高度)。用75升水洗涤吸附剂。用60升20mMNaOH洗脱β-乳球蛋白。用1M盐酸中和洗出液。在室温(20-25℃)进行实验。级分中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定进行单向放射免疫扩散(SRI)以便定量获得自第一色谱材料的洗脱级分和流过级分以及获得自第二色谱材料的洗脱级分和流过级分中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的相对收率百分比，如Scand.J.Immunol.Vol.17,Suppl.10,41-56,1983中所述。利用以下进行SRI：UpFrontChromatographyA/S生产的来自针对牛科动物α-乳白蛋白升高的超免疫兔血清的纯化的免疫球蛋白级分(6.5μl/cm2)，UpFrontChromatographyA/S生产的来自针对牛科动物β-乳球蛋白升高的超免疫兔血清的纯化的免疫球蛋白级分(15μl/cm2)，利用上样至柱的浓度为100％、80％、60％、40％和20％的酸乳清溶液完成标准曲线。相对于标准曲线，读取各个级分。不同级分中IgG的测定用SDS-PAGE技术估算IgG的收率。根据下述通用程序进行SDS-PAGE凝胶电泳：将25μL样品与25μLtris-甘氨酸样品缓冲液(LC2676,NovexbyLifeTechnologies,USA)混合。在非还原条件下，将所得溶液在水中煮沸5min。将20μL煮沸的样品上样至预制的SDS-PAGE凝胶夹盒(4-20％tris-甘氨酸梯度凝胶(1mm),(EC6025,NovexbyLifeTechnologies,USA)中。将凝胶在200V，400mA下运行1小时。用考马斯蓝染色剂对凝胶进行染色过夜(SimplyBlueTMSafeStain,LC6060)。结果下表显示上样至各柱的原材料的相对收率百分比：在上样pH4.6下，来自第一柱的流过级分中IgG、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的量的测定。上样pH％的α-乳白蛋白％的β-乳球蛋白％的IgG4.6100995在上样pH4.6下，来自第二柱的流过级分中IgG、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的量的测定。上样pH％的α-乳白蛋白％的β-乳球蛋白％的IgG4.69155利用20mMNaOH洗脱，获得自第一柱和第二柱的洗出液中IgG、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的量的测定。洗出液％的α-乳白蛋白％的β-乳球蛋白％的IgG第一柱0195第二柱6920推断在上样pH4.6下，在1:25的装载比(25L装载的乳清/L吸附剂)中，提供基本上纯的IgG级分(基本上不含α-乳白蛋白和β-乳球蛋白)、基本上纯的α-乳白蛋白级分(基本上不含IgG和β-乳球蛋白)和基本上纯的β-乳球蛋白级分(基本上不含IgG和α-乳白蛋白)是可能的。结果显示所有的α-乳白蛋白和基本上所有的β-乳球蛋白存在于来自第一柱的流过级分中，然而来自乳清材料的95％的IgG被第一色谱支持物中存在的4-氨基苯甲酸偶联的吸附剂保留。随后，可以从第一色谱支持物将保留的IgG洗脱，产生不含α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的IgG级分。随后，将获得自第一色谱支持物的流过级分上样至第二柱，相对于最初应用至第一色谱支持物的乳清材料中存在的α-乳白蛋白的量，从第二色谱支持物产生包含多于90％的α-乳白蛋白的流过级分(α-乳白蛋白级分)。获得的α-乳白蛋白级分基本上不含β-乳球蛋白和IgG，相对于应用至第一色谱支持物的乳清材料中存在的这些化合物的总量，仅少量的这些组分(约5％的β-乳球蛋白和5％的IgG)存在于α-乳白蛋白级分中。流过级分(或乳清材料)中存在的β-乳球蛋白被第二色谱支持物中存在的SP吸附剂保留，并且从第二色谱支持物洗脱，产生β-乳球蛋白级分。相对于乳清材料中存在的量，β-乳球蛋白级分已经显示不包含IgG和基本上不含α-乳白蛋白(仅约6％)。因此，本发明的方法已经显示在获得的各个级分中高效提供高收率、回收率和纯度的IgG、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。参考WO92/00799WO92/18237WO97/17132WO00/57982WO98/33572WO2010/037736EP0538350当前第1页1 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