本发明涉及保健食品领域，具体是一种增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品及其制备方法。
背景技术：
据世界卫生组织调查表明，约有75%的人处于亚健康状态，并且这一数据在许多国家和地区逐年呈上升趋势。而针对我国16个省市人群进行的健康状况调查表明，北京、上海和广东人处于“亚健康”状态的比例分别是75.3%、73.49%和73.4l%。而引起亚健康最主要、最本质原因的是人体自身免疫功能降低。
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等）；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应。人体内执行这一功能的是免疫系统。然而，随着生活节奏的加快，人们面临家庭、事业、社会等各方面压力，经常出现体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。如果出现上述症状，就是免疫力低下所造成的。
导致免疫力低下的原因除了压力外还有很多，如：年龄的增长、睡眠不足、缺少锻炼、饮水少、作息不规律、周围环境嘈杂等都可能造成免疫低下。轻度的免疫低下，通过一段时间的调理机体能自然的恢复，而严重的免疫低下不仅需要药物治疗的介入，甚至有导致癌变的可能。
随着人们生活水平的提高，人们更愿意花更多的精力在疾病的预防，而不是等到疾病发生后的治疗。保健食品应运而生，面对一些保健食品质量不过关、效果虚假、价格昂贵等问题，研究和开发一种能安全、有效、经济实惠的中药保健类产品具有广泛而深远的意义。
现有技术如授权公告号为cn101637258b的中国发明专利，公开了一种用于增强免疫力的保健食品，其主要由以下重量份数的物质制成：人参提取物：2-6份；枸杞子提取物：3-9份；制何首乌提取物：0.5-1.5份；乌鸡提取液：90-270份；根据该配方制成的口服液剂型，食用安全，服用方便，经过口味调配，依从性良好。但该保健食品采用昂贵的中草药作为原料，成本较高，且分子量较大，人体对其的吸收消化率不高。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种分子量小，易被人体吸收，能增强体质，提高免疫力且成份低廉的增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品及其制备方法。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品，成份及其重量份为：鲟鱼鱼鳔多肽70~85份、十四酸异丙酯0.0002~0.0004份、灵芝多糖10~20份、维生素c0.5~3份、聚磷酸酯0.0001~0.0003份、大豆磷脂1~10份。成分搭配科学合理，对细胞免疫、体液免疫、巨噬细胞吞噬功能和nk细胞活性均有良好的促进作用，且组合物增强免疫力的效果要远优于单一成份；绿色安全、无毒副作用，并且免疫增强作用显著，对老年人、体弱多病者和术后病人具有良好的保健作用。十四酸异丙酯和聚磷酸酯可增加人体细胞对鲟鱼鱼鳔多肽保健食品的消化吸收率，提高本发明产品的利用率，提高产品品质。
鲟鱼鱼鳔的平均分子量为750.0~815.0da，脯氨酸的含量为11.29~13.16%，羟脯氨酸的含量为7.86~8.71%，谷氨酸的含量为7.65~8.73%，天冬氨酸的含量为4.87~5.59%，精氨酸的含量为4.15~5.36%。
一种增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，制备步骤为：
1）将鲟鱼鱼鳔匀浆后，按照1g：21~25ml的重量体积比加入ph为9.5~10.5的甘氨酸-naoh缓冲液，混合均匀后，调节ph至9.0~10，得到混合液；
2）将混合液温度升至45~50℃搅拌预热5~10分钟，按原料质量的2.0~2.5%加入碱性蛋白酶（酶活力≥1.9×104u/g），酶解温度为45~50℃，酶解时间6~8h。酶解结束后将所得的酶解产物升温至90~95℃，并于此温度保持10~15min，再冷却至室温，然后离心，取上清液；
3）将上清液进过截留分子量为1~2kda的超滤膜，取滤过液，并将其制成浓度5~10mg/ml的溶液，进行大孔树脂脱盐；脱盐后的酶解液在≤40℃的温度下进行真空浓缩，最后经喷雾干燥得鲟鱼鱼鳔多肽；
4）取配方量维生素c溶解于90~95%乙醇水溶液中备用，取配方量鲟鱼鱼鳔多肽、十四酸异丙酯、灵芝多糖、大豆磷脂和聚磷酸酯于双蒸水中混合均匀，加入维生素c的乙醇溶液，混合均匀，喷雾干燥，即得增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品。鲟鱼鱼鳔多肽保健食品为片剂、分散片、速溶片、散剂、颗粒剂或胶囊。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明工艺科学合理，操作简单，通过碱性蛋白酶酶解并融合大孔树脂脱盐和喷雾干燥等手段进行制备，酶解过程易监控，使增强免疫力的鲟鱼鱼鳔多肽有效释放；2）成分搭配科学合理，对细胞免疫、体液免疫、巨噬细胞吞噬功能和nk细胞活性均有良好的促进作用，且组合物增强免疫力的效果要远优于单一成份；3）绿色安全、无毒副作用，并且免疫增强作用显著，对老年人、体弱多病者和术后病人具有良好的保健作用。
具体实施例
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品，成份及其重量份为：鲟鱼鱼鳔多肽70~85份、十四酸异丙酯0.0002~0.0004份、灵芝多糖10~20份、维生素c0.5~3份、聚磷酸酯0.0001~0.0003份、大豆磷脂1~10份。成分搭配科学合理，对细胞免疫、体液免疫、巨噬细胞吞噬功能和nk细胞活性均有良好的促进作用，且组合物增强免疫力的效果要远优于单一成份；绿色安全、无毒副作用，并且免疫增强作用显著，对老年人、体弱多病者和术后病人具有良好的保健作用。十四酸异丙酯和聚磷酸酯可增加人体细胞对鲟鱼鱼鳔多肽保健食品的消化吸收率，提高本发明产品的利用率，提高产品品质。
鲟鱼鱼鳔的平均分子量为750.0~815.0da，脯氨酸的含量为11.29~13.16%，羟脯氨酸的含量为7.86~8.71%，谷氨酸的含量为7.65~8.73%，天冬氨酸的含量为4.87~5.59%，精氨酸的含量为4.15~5.36%。
一种增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，制备步骤为：
1）将鲟鱼鱼鳔匀浆后，按照1g：21~25ml的重量体积比加入ph为9.5~10.5的甘氨酸-naoh缓冲液，混合均匀后，调节ph至9.0~10，得到混合液；
2）将混合液温度升至45~50℃搅拌预热5~10分钟，按原料质量的2.0~2.5%加入碱性蛋白酶（酶活力≥1.9×104u/g），酶解温度为45~50℃，酶解时间6~8h。酶解结束后将所得的酶解产物升温至90~95℃，并于此温度保持10~15min，再冷却至室温，然后离心，取上清液；
3）将上清液进过截留分子量为1~2kda的超滤膜，取滤过液，并将其制成浓度5~10mg/ml的溶液，进行大孔树脂脱盐；脱盐后的酶解液在≤40℃的温度下进行真空浓缩，最后经喷雾干燥得鲟鱼鱼鳔多肽；
4）取配方量维生素c溶解于90~95%乙醇水溶液中备用，取配方量鲟鱼鱼鳔多肽、十四酸异丙酯、灵芝多糖、大豆磷脂和聚磷酸酯于双蒸水中混合均匀，加入维生素c的乙醇溶液，混合均匀，喷雾干燥，即得增强免疫能力的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品。鲟鱼鱼鳔多肽保健食品为片剂、分散片、速溶片、散剂、颗粒剂或胶囊。
实施例2：
1）以史氏鲟（acipenserschrenckii）鱼鳔作为原料，匀浆后与ph为10的甘氨酸-naoh缓冲液按照1g：25ml的重量体积比混合、匀浆，然后调节ph值至10，得混合液；
2）将混合液温度升至50℃搅拌预热10分钟，按原料质量的2.2%加入碱性蛋白酶（酶活力≥1.9×104u/g），酶解温度为50℃，酶解时间7h。将所得的酶解产物升温至90℃，并于此温度保持15min，再冷却至室温，然后离心取上清液；
3）上清液过截留分子量为1kda的超滤膜，收集小于1kda组分制成浓度5mg/ml的溶液，按照大孔树脂柱体积的1:15将超滤酶解液加入到大孔树脂柱，用双蒸水洗脱2个体积后，然后用75%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，在35℃进行真空浓缩，最后浓缩液经喷雾干燥得鱼鳔多肽；
4）所得的鱼鳔多肽经sec-hplc试验表明：酶解产物平均分子量为775.3da，脯氨酸(pro)的含量为10.83%，羟脯氨酸(hyp)的含量为8.35%，谷氨酸(glu)的含量为8.19%，天冬氨酸(asp)的含两位5.38%，精氨酸(arg)的含量为4.69%；
5）取20g维生素c溶解于95%乙醇水溶液中备用，取800g鲟鱼鱼鳔多肽、0.006g十四酸异丙酯、130g灵芝多糖、50g大豆磷脂和0.004g聚磷酸酯于双蒸水中混合均匀，加入维生素c的乙醇溶液，混合均匀，喷雾干燥，粉末上胶囊填充机进行充填，制成0.5g/粒的胶囊。经包装、成品检验，得到产品。产品成分搭配科学合理，对细胞免疫、体液免疫、巨噬细胞吞噬功能和nk细胞活性均有良好的促进作用，且组合物增强免疫力的效果要远优于单一成份；绿色安全、无毒副作用，并且免疫增强作用显著，对老年人、体弱多病者和术后病人具有良好的保健作用。十四酸异丙酯和聚磷酸酯可增加人体细胞对鲟鱼鱼鳔多肽保健食品的消化吸收率，提高本发明产品的利用率，提高产品品质。
急性毒理试验：实验动物：spf级icr小鼠和sd大鼠；实验环境条件：spf屏障级；试验方法：通过小鼠急性毒性试验、ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验以及30天喂养试验来进行毒理学评定。
试验结果：
1、急毒经口毒性试验结果：实施例2所制鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对雌性、雄性icr小鼠的最大耐受剂量（mtd）均大于20.0g/kg·bw，属无毒级。
2、遗传毒性试验结果：ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果，实施例所制鱼鳔多肽保健食品为阴性。
3、30天喂养试验结果：实施例所制鲟鱼鱼鳔多肽保健食品试验期间，动物生长发育良好，各剂量组体重、增重、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器湿重及脏器/体重比值与对照组比较，无明显差异（p>0.05）。大体解剖和组织病理检查未见与样品有关的异常改变。
功能试验：
试验目的：检验鲟鱼鱼鳔多肽保健食品是否具有增强免疫力的功能；
试验材料：
样品：实施例2制得的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品胶囊，人体口服推荐量为0.5g/粒，每日2次，每次4粒。成人体重按60kg计算，折合剂量0.0667g/kg·bw。取胶囊内容物进行试验。
试验动物：spf级雌性icr小鼠，体重为19-21g。
试验环境条件：spf屏障系统。
剂量选择及样品处理：设低、中、高剂量分别为0.33g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.0g/kg·bw（分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍）。低、中、高剂量受试液配置时，分别取软胶囊内容物1.65g、3.35g、10.0g加生理盐水定容至50ml，对照组予以等体积的生理盐水，每天灌胃一次，灌胃体积为0.1ml/10g·bw，连续30天。
试验方法：通过迟发型变态反应、淋巴细胞转化实验、抗体生成细胞检测、半数溶血值的测定、小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、nk细胞活性的测定实验进行功能评定。
试验结果：
经口给与小鼠0.33g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.0g/kg·bw剂量的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品胶囊内容物30天。实验结果（表1-7）表明，低、中、高剂量组均能提高小鼠的脾淋巴细胞增殖能力、血清溶血素水平、小鼠的抗体生成细胞数和小鼠的nk细胞活性。根据《保健食品检验与评价技术规范》判定鲟鱼鱼鳔多肽保健食品具有增强免疫力的功能。
具体试验结果数据如下表所示：
表1鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠迟发型变态反应（dth）的影响
表2鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠脾淋巴细胞转化能力实验的影响
表3鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠抗体生成细胞数的影响
表4鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠血清溶血素的影响
表5鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清吞噬指数的影响
表6鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力的影响
表7鲟鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠nk细胞活性的影响
本发明的鲟鱼鱼鳔多肽保健食品工艺科学合理，操作简单，具有较强的工业实施性。本发明的鱼鳔多肽类保健食品可作为老年人和体弱多病者的日常保健产品，亦可作为术后病人的医用食品。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。