本发明涉及一种具有结肠靶向功能的空心胶囊的应用,属于功能食品加工技术领域。
背景技术:
空心胶囊是指可容纳各种药粉、液体、半固体和药片的,由帽、体两节组成的胶囊壳,其发展历史悠久。因具有外观整洁,美观,易吞服,可掩盖内容物令人不愉快的苦味、腥臭等其它不良气味,口感好,使消费者更易接受等众多优点,市场份额在不断扩大。结肠近端容易产生病变,如便秘、克罗黑氏病、溃疡性结肠炎和结肠癌等,常规制剂口服后,药物在到达结肠前就会被吸收进入体循环,无法特异性地作用于病变部位。而结肠靶向胶囊服用后药物在上消化道不释放,到回盲部或结肠才开始崩解或溶蚀释放出来,发挥局部或全身治疗作用,可以有效增加药物的利用度,减少对胃的刺激和胃肠系统吸收代谢所产生毒副作用,目前也已逐渐推向市场。
淀粉是日常生活中常见的碳水化合物,通常认为其能够在小肠中被完全消化吸收,后来englyst等人(1993)在定量分析膳食纤维时发现包埋在不溶性膳食纤维中的淀粉,即抗性淀粉(rs)。根据联合国粮农组织(fao)1992年的定义,抗性淀粉是指不能被健康人体小肠所分解利用的淀粉及其降解物的总称(tester等,2004)。近年来,抗性淀粉已经成为国内外营养和功能性食品专家的研究热点,具有减肥、降低血糖、治疗便秘、预防结肠癌等多种生理功能。
现代研究表明,肠道菌群是影响人体健康的重要因素。肠道菌群与人体在长期的共同进化过程中,形成了相互依赖、相互作用的关系,人体的健康离不开肠道菌群的帮助。rs不能在小肠中消化吸收,可进入大肠被生理性细菌发酵,产生多种短链脂肪酸和气体,降低大肠中ph值,抑制致病菌生长繁殖,促进肠道有益菌丛生长繁殖。方建东(2014)研究了rs对小鼠肠道菌群的影响,结果表明rs可以明显促进乳酸杆菌和双歧杆菌增殖,抑制大肠杆菌和肠球菌生长,其中高含量rs作用效果更明显。
对于癌症病人,放化疗过程中肠道益生菌会大量降低,最直接的方法是通过口服益生菌来补充,但是直接服用的话,由于胃酸作用,存活量有限,而且益生菌成本昂贵。补充抗性淀粉价格也是一条很好的途径,但是抗性淀粉价格也较高,而且通常在加工温度超过80℃时就会失去抗性功能。淀粉资源丰富,价格低廉,开发一种方法将淀粉利用起来,不被小肠消化到达结肠后被发酵,起到改善肠道菌群的作用,具有重要意义。
技术实现要素:
本发明针对现有技术存在的问题,提供一种具有结肠靶向功能的空心胶囊的应用,使用普通淀粉即可达到抗性淀粉的效果,能有效调节肠道菌群健康,方法简单,成本低廉。
为了解决上述问题,本发明所采用的技术方案是:
一种具有结肠靶向功能的空心胶囊的应用,具体方法是:将0.2-0.3g淀粉装入具有结肠靶向功能的空心胶囊中,封口食用。
用法与用量:口服,每次1粒,每天2次。
本发明的有益效果是:
(1)采用具有结肠靶向功能的空心胶囊封装后淀粉可以不被小肠消化而到达结肠,被结肠吸收后,肠道内有益菌大量增长,而有害菌含量显著降低,实现了调节肠道菌群结构,改善肠道健康的作用,尤其适用于非健康人群。
(2)淀粉来源丰富,价格低廉,该应用方法能大幅提高其应用价值。
(3)使用普通淀粉即可达到抗性淀粉的效果,能有效调节肠道菌群健康,方法简单,成本低廉。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明,这些实施例仅用来说明本发明,并不限制本发明的范围。
实施例1
一种具有结肠靶向功能的空心胶囊的应用:将0.2g淀粉装入空心胶囊中,封口食用。
所述的空心胶囊指中国专利zl201410313574.4方法制备的具有结肠靶向功能的空心胶囊。
实施例2
一种具有结肠靶向功能的空心胶囊的应用:将0.3g淀粉装入空心胶囊中,封口食用。
所述的空心胶囊指中国专利zl201410313574.4方法制备的具有结肠靶向功能的空心胶囊。
实施例3
一种具有结肠靶向功能的空心胶囊的应用:将0.25g淀粉装入空心胶囊中,封口食用。
所述的空心胶囊指中国专利zl201410313574.4方法制备的具有结肠靶向功能的空心胶囊。
实施例3
对于实施例制备的淀粉胶囊进行了验证。采用动物实验,选择体重相近的spf级雄性sd大鼠,分为4组:正常对照组,玉米淀粉组,玉米抗性淀粉组,玉米淀粉胶囊组;淀粉喂养量2g/kg,连续喂养4周。环境温度20~25℃,室内湿度保持在40%~70%,自由饮水,昼夜规律。
实验结束后,收集大鼠的粪便,并取结肠内容物测定ph值,并对结肠微生物进行分析。
(1)粪便细菌总dna提取
取5份新鲜粪便样本,各200mg,使用粪便基因组dna提取试剂盒进行dna的提取,按试剂盒说明书进行操作,将提取的总dna放置于-20℃冰箱中进行保存。
(2)总dna纯度及浓度测定
配制1%琼脂糖凝胶,加热融化后,冷却到65℃左右,并加入0.8μlgoldenview,混匀后倒槽,形成胶层。吸取5μl粪便细菌总dna进行加样,立即通电电泳,80v电压30分钟,在紫外灯下观察,dna存在则显示出荧光条带,并与marker样品进行对比,检测总dna的纯度与完整性。
取5μldna样品以te缓冲液稀释,采用紫外分光光度计测定总dna在260nm和280nm处的吸光度,得到总dna的浓度,并计算两者的比值(od260/od280)。
(3)pcr引物设计及常规pcr反应
根据乳酸杆菌属、双歧杆菌属、拟杆菌属、肠杆菌属和肠球菌属基因序列,设计相应的pcr引物,所选用的引物序列见表1,引物由华大基因科技有限公司合成。
表1肠道目的菌群pcr引物
随机选取新鲜粪便提取的细菌基因组dna为模板,进行常规pcr扩增。
50μlpcr反应体系:2×taqmastermix25μl,10umol/lpcrforwardprimer210umol/lpcrforwardprimer2μl,10umol/lpcrreversprimer2μl,dna模板6μl,ddh2o补充至50μl。
扩增反应程序:94℃预变性2min;94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸50s,循环35次,72℃延伸2min。
以上反应在pcr热循环仪中进行,所有产物反应完全后于-20℃条件下保存。
(4)pcr产物纯化回收
pcr产物经琼脂糖凝胶电泳后,使用康为世纪生物科技有限公司的dna纯化回收试剂盒进行pcr产物的回收,根据试剂盒说明书步骤进行操作。
(5)制备质粒标准品
将上述纯化回收后的乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌、肠杆菌和肠球菌的pcr扩增产物作为目的dna片段,连接至puc-tsimple载体上,重组质粒转化至大肠杆菌dh5α感受态细胞中,经蓝白斑筛选,得到阳性克隆后,构建重组质粒,质粒经琼脂糖凝胶电泳分析及测序后,即可作为标准品。同时测定分离出的质粒dna的浓度,换算出各种细菌的拷贝数。
(6)实时荧光定量pcr反应
分别将乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌、肠杆菌和肠球菌的质粒标准品连续5倍系列稀释,形成107-103拷贝/μl后作为阳性模板,进行实时荧光定量pcr反应,根据各标准品反应时的荧光扩增信号得到标准曲线。其中横坐标代表不同阳性模板细菌拷贝数的对数值(lgc0),纵坐标代表pcr反应中出现荧光信号的初始循环数(ct)。
反应体系20μl:sybrpremix(2×)10μl,10μmol/l上下游引物各0.5μl,待测dna样品或标准品2μl,ddh2o7μl。
反应条件:(1)预变性:95℃30s;(2)pcr反应,循环40次:95℃变性10s,60℃退火30s,72℃延伸30s;(3)融解:95℃15s,60℃1min,95℃15s;(4)冷却:60℃15s。
同时按此反应体系和反应条件,将粪便细菌dna样品也进行实时荧光定量pcr反应,并且每个样品做一个复孔,做阴性对照和阳性对照。最后由标准曲线和样品在pcr反应中出现荧光信号的初始循环数的ct值,可得出样品中所含乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌、肠杆菌和肠球菌的数量。
表2各组大鼠肠道菌群的比较
注:与正常对照组比较,ap<0.05;与抗性淀粉组比较,bp<0.05。
由表2可知,淀粉胶囊组大鼠的双歧杆菌显著增加(p<0.05),有害菌含量也相对较低,说明具有结肠靶向功能的空心胶囊封装淀粉后食用,淀粉较抗性淀粉更有利于结肠微生物的发酵利用,调节肠道菌群的健康。