反刍动物用饲料添加组合物及其制造方法与流程

本发明涉及反刍动物用饲料添加组合物及其制造方法。更具体来说，本发明涉及含有水溶性低的生物活性物质、具备在瘤胃中的高保护性、且在下消化道中的溶出性也良好的反刍动物用饲料添加组合物及其制造方法。

背景技术：

给予反刍动物的饲料被第一胃(瘤胃)内的微生物群消化分解，消化残渣和微生物群被送至第四胃(皱胃)以后，在反刍动物的肠内被消化吸收。例如，纤维中的纤维素被微生物消化，生成反刍动物可用作能量源的脂肪酸。

另一方面，即使口服给予具生理活性的物质，也会在第一胃被微生物群消化，因此难以对反刍动物发挥其生理活性。于是，开发出了在反刍动物的瘤胃中稳定地保护生物活性物质，在通过瘤胃后的第四胃以后使生物活性物质溶出而让消化道吸收的饲料添加组合物。

专利文献1中揭示了将溶解度比盐酸赖氨酸低的甲硫氨酸、高熔点油脂和低熔点油脂熔融混合并在水中使其冷却固化的方法，实施例中记载了在水中显示缓释性。

专利文献2中示出通过将极度氢化(極度硬化)植物油、卵磷脂和盐酸赖氨酸熔融混合并在水中将分散型的制剂进行造粒，从而以40～60%的高浓度含有在水中的溶解度高的盐酸赖氨酸，同时可赋予较高的瘤胃保护性。此外，还揭示了通过以特定浓度添加卵磷脂，可抑制盐酸赖氨酸在瘤胃的溶出速度，提高瘤胃保护性。

作为制造瘤胃保护制剂的方法，报道有使作为保护剂的氢化油脂高温熔化，向其中大致均匀地分散主剂并使其冷却固化成粒状的分散法(基质型)。分散法中向熔化的保护剂中加入主剂并大致均匀地混合，所以主剂的每一粒结晶粒子都完全被保护剂覆盖，因而即使是像盐酸赖氨酸这样水溶性高的物质也可充分获得瘤胃保护性，而且即使是直径2mm以上的造粒物或颗粒也具有在下消化道溶出的性能。

在此，非专利文献1中报道了瘤胃保护甲硫氨酸制剂和瘤胃保护赖氨酸制剂在给予至乳牛的情况下均具有改善产乳量的效果，但记载了使用溶解度比甲硫氨酸高的赖氨酸来开发瘤胃保护制剂存在挑战性。

此外，上述的专利文献1中记载了仅用高熔点油脂制造瘤胃保护甲硫氨酸制剂的情况下，甲硫氨酸在水中容易溶出而含量难以达到20%以上；专利文献2中揭示了在专利文献1记载的方法中使用盐酸赖氨酸代替甲硫氨酸的情况下，瘤胃保护性低，赖氨酸在瘤胃中溶出，对于物性不同的生物活性物质难以适用同样的制造方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利特公昭49-45224号公报

专利文献2：日本专利特许第5040919号公报

非专利文献

非专利文献1：k.watanabe等,animalsciencejournal,77,p495-502(2006)。

技术实现要素：

发明所要解决的技术问题

本发明人等发现生物活性物质在20℃的100g水中的溶解度为0.001g以上且60g以下的情况下，使用保护剂等来避免生物活性物质在瘤胃中的分解、即提高在瘤胃中的保护性比较容易实现，但这样的饲料制剂难以在小肠等下消化道中高效地释放生物活性物质。

本发明是鉴于上述的情况而完成的发明，其要解决的技术问题在于提供含有水溶性低的生物活性物质、具备在瘤胃中的高保护性、且在下消化道中的溶出性也良好的反刍动物用饲料添加组合物的制造方法。

解决技术问题所采用的技术方案

本发明人等对上述技术问题进行了认真研究，结果意外地发现，通过对含有(a)选自熔点高于50℃且低于90℃的氢化植物油及氢化动物油中的至少一种、(b)卵磷脂和(c)在20℃的100g水中的溶解度为0.001g以上且60g以下的生物活性物质的熔融混合物在水中进行造粒，使所得的造粒物的粒径在特定范围内，从而可制造具备在瘤胃中的高保护性、且在下消化道中的溶出性也良好的反刍动物用饲料添加组合物，通过基于该发现进一步进行研究而完成了本发明。

即，本发明如下所述，

[1]一种反刍动物用饲料添加组合物的制造方法，其中，包含对熔融混合物在水中进行造粒的工序，并且粒径为0.5mm以上且2mm以下，

所述熔融混合物含有：

(a)选自熔点高于50℃且低于90℃的氢化植物油及氢化动物油中的至少一种、

(b)卵磷脂、和

(c)在20℃的100g水中的溶解度为0.001g以上且60g以下的生物活性物质；

[2]根据[1]所述的制造方法，其中，生物活性物质在20℃的100g水中的溶解度为0.01g以上且20g以下；

[3]根据[1]或[2]所述的制造方法，其中，反刍动物用饲料添加组合物中的生物活性物质的含量为0.5重量%以上且70重量%以下；

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的制造方法，其中，反刍动物用饲料添加组合物中的卵磷脂的含量为0.05重量%以上且6重量%以下；

[5]根据[1]～[4]中任一项所述的制造方法，其中，熔融混合物在水中的造粒通过将熔融混合物浸渍于水中来进行；

[6]根据[1]～[5]中任一项所述的制造方法，其中，生物活性物质为选自氨基酸及其盐、以及维生素中的至少一种；

[7]根据[1]～[6]中任一项所述的制造方法，其中，包含对熔融混合物的造粒物进行粉碎的工序；

[8]一种反刍动物用饲料添加组合物，其中，该组合物由水中造粒物形成，并且粒径为0.5mm以上且2mm以下，

所述水中造粒物含有：

(a)选自熔点高于50℃且低于90℃的氢化植物油及氢化动物油中的至少一种、

(b)卵磷脂、和

(c)在20℃的100g水中的溶解度为0.001g以上且60g以下的生物活性物质；

[9]根据[8]所述的组合物，其中，生物活性物质在20℃的100g水中的溶解度为0.01g以上且20g以下；

[10]根据[8]或[9]所述的组合物，其中，反刍动物用饲料添加组合物中的生物活性物质的含量为0.5重量%以上且70重量%以下；

[11]根据[8]～[10]中任一项所述的组合物，其中，反刍动物用饲料添加组合物中的卵磷脂的含量为0.05重量%以上且6重量%以下；

[12]根据[8]～[11]中任一项所述的组合物，其中，生物活性物质为选自氨基酸及其盐、以及维生素中的至少一种；

[13]根据[8]～[12]中任一项所述的组合物，其中，所述水中造粒物是水中造粒物的粉碎物。

发明的效果

如果采用本发明，可提供含有水溶性低的生物活性物质、具备在瘤胃中的高保护性、且在下消化道中的溶出性也良好的反刍动物用饲料添加组合物的制造方法。

以下，有时将反刍动物用饲料添加组合物在瘤胃中的保护性简称为“保护性”，将反刍动物用饲料添加组合物在下消化道中的溶出性简称为“溶出性”。

附图的简单说明

图1是表示实施例1及比较例1的组合物的保护率及溶出率的图；

图2是表示实施例2及比较例2的组合物的保护率及溶出率的图；

图3是表示实施例3、4及比较例3的组合物的保护率及溶出率的图；

图4是表示实施例5、6及比较例4的组合物的保护率及溶出率的图；

图5是表示比较例5～8的组合物的保护率及溶出率的图；

图6是表示比较例9～11的组合物的保护率及溶出率的图。

具体实施方式

本发明的反刍动物用饲料添加组合物的制造方法(以下也称“本发明的制造方法”)的特征之一是包含对熔融混合物在水中进行造粒的工序，所述熔融混合物含有：(a)选自熔点高于50℃且低于90℃的氢化植物油及氢化动物油中的至少一种(以下也称“成分a”)、(b)卵磷脂(以下也称“成分b”)、和(c)在20℃的100g水中的溶解度为0.001g以上且60g以下的生物活性物质(以下也称“成分c”)。

本发明中，“反刍动物用饲料添加组合物”是指通常添加于反刍动物用饲料中，在反刍动物摄取该饲料的同时被摄取的组合物。但是，只要可被反刍动物摄取，并不一定要添加于饲料中，例如本发明的组合物可单独被反刍动物摄取。

以下，对本发明的制造方法中使用的熔融混合物所含有的成分a、成分b及成分c进行说明。

[成分a]

被用作成分a的氢化植物油及氢化动物油是通过对常温(25℃)下呈液态的植物油或动物油进行加氢而使其固化而得，是还包含极度氢化油在内的概念。本发明中所用的氢化植物油及氢化动物油的熔点通常高于50℃，由于可以提高在瘤胃中的保护性，因而较好是55℃以上，更好是60℃以上。此外，该熔点通常低于90℃，由于可以提高溶出性，因而较好是80℃以下，更好是70℃以下。

作为氢化植物油的具体例子，可列举：氢化大豆油、氢化棕榈油、氢化菜籽油、氢化橄榄油、氢化杏仁油、氢化鳄梨(avocado)油、氢化花生油、氢化棉籽油、氢化玉米油、氢化红花籽油、氢化葵花籽油、氢化红花油、氢化米糠油、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、米蜡、木蜡、蜂蜡等，由于在工业上可容易获得，因而较好是氢化大豆油、氢化棕榈油、氢化菜籽油。作为氢化动物油的具体例子，可列举：氢化牛油、氢化猪油、鲸蜡等，由于在工业上可容易获得，因而较好是氢化牛油、氢化猪油。这些氢化植物油及氢化动物油可单独使用，也可两种以上并用。

熔融混合物中的成分a的含量通常为23重量%以上，由于可以提高在瘤胃中的保护性，因而较好是30重量%以上，更好是35重量%以上。此外，该含量通常为60重量%以下，由于可以在熔融混合物中以高浓度含有生物活性物质，因而较好是55重量%以下，更好是50重量%以下。

[成分b]

被用作成分b的卵磷脂被认为作为表面活性剂起作用，对生物活性物质的表面进行改性，使该活性物质在熔融的保护剂中不会聚集于局部而是均匀地分散。

作为卵磷脂的具体例子，可列举：大豆卵磷脂、油菜卵磷脂、菜籽卵磷脂、向日葵卵磷脂、红花卵磷脂、棉籽卵磷脂、玉米卵磷脂、亚麻籽卵磷脂、芝麻卵磷脂、橄榄卵磷脂、米卵磷脂、椰子卵磷脂、棕榈卵磷脂等植物性卵磷脂；蛋黄卵磷脂等，由于可尽可能地抑制过敏的发生，因而较好是植物性卵磷脂，更好是大豆卵磷脂。这些卵磷脂可以是例如氢化物、酶处理物、酶分解物、卵磷脂分离物等。此外，这些卵磷脂可单独使用，也可两种以上并用。

熔融混合物中的成分b的含量通常为0.05重量%以上，由于可以提高在瘤胃中的保护性，因而较好是0.5重量%以上，更好是1重量%以上。此外，该含量通常为6重量%以下，由于可以提高在瘤胃中的保护性，因而较好是5重量%以下，更好是3重量%以下，特别好是2重量%以下。

[成分c]

被用作成分c的生物活性物质是指被反刍动物摄取时可在该生物体内显示生理活性功能的物质，可列举例如氨基酸及其盐、维生素、酶、蛋白质、肽、脂肪酸、核酸、类固醇等。

成分c较好是在20℃的100g水中的溶解度在特定范围内。如果采用本发明，可提供一种反刍动物用饲料添加组合物的制造方法，其中，即使使用在20℃的100g水中的溶解度在特定范围内的水溶性低的生物活性物质，也具备在瘤胃中的高保护性、且在下消化道中的溶出性也良好。

具体来说，成分c在20℃的100g水中的溶解度较好是0.001g以上，更好是0.005g以上，特别好是0.01g以上。此外，该溶解度较好是60g以下，更好是20g以下。

作为成分c的具体例子，可列举：组氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、半胱氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、鸟氨酸、胱氨酸、瓜氨酸、苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸、羟基色氨酸等氨基酸或其盐；维生素b12(氰基钴胺)、叶酸、烟酸、硫胺素、核黄素、泛酸、生物素等维生素(较好是水溶性维生素)；黄嘌呤、鸟嘌呤等。这些成分c可单独使用，也可两种以上并用。

氨基酸可使用l-型、d-型、dl-型中的任一种。

氨基酸的盐较好是生理学上允许的盐，可列举例如：与无机碱的盐、与无机酸的盐、及与有机酸的盐等。作为与无机碱的盐，可列举例如：与钠、钾、锂等碱金属的盐，与钙、镁等碱土金属的盐，铵盐等。作为与无机酸的盐，可列举例如：与氢卤酸(盐酸、氢溴酸、氢碘酸等)、硫酸、硝酸、磷酸等的盐。作为与有机酸的盐，可列举例如：与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、柠檬酸等的盐。

成分c可以是从天然存在的动植物等中提取并纯化而得的成分，或者通过化学合成法、发酵法、酶法或基因重组法得到的成分中的任一种。此外，可直接使用市售品或将市售品粉碎后使用。

熔融混合物中的成分c的含量通常为40重量%以上，从可使成分c在熔融混合物中为高浓度的观点来看，较好是45重量%以上，更好是50重量%以上。此外，该含量通常为70重量%以下。

除含有成分a～c之外，本发明的制造方法中所用的熔融混合物还可含有除此以外的其他成分。该其他成分只要不损害本发明的目的则无特别限定，可列举例如：碳酸钙、二氧化硅等赋形剂；硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石等润滑剂；碳酸氢钠、柠檬酸等ph值调节剂；硅酸钙、铝硅酸钠等防结块剂；等。该其他成分可单独使用，也可两种以上并用。

含有成分a～c的熔融混合物的制备方法无特别限定，可列举例如使用市售的挤压机(较好是双螺杆挤压机)等对成分a～c(可根据需要含有其他成分)进行加热的方法等。向挤压机的料筒中添加成分a～c的顺序无特别限定，为了用成分b被覆成分c的表面，可将该成分b及c预先用混合机等混合后添加，或者为了提高生产效率，可以几乎同时添加成分a～c。或者，通过在先将成分a及c于室温附近混合后，添加剩余的成分进行加热，也可获得熔融混合物。成分c可粉碎后使用，例如可使用粉碎机粉碎至平均粒径(中值粒径)较好是150μm以下、更好是75μm以下，根据需要进行筛分后使用。

加热成分a～c时的温度只要是成分a的熔点以上，则无特别限定，较好是比成分a的熔点高5～15℃左右。例如，成分a采用极度氢化大豆油(熔点：67～68)℃的情况下，在72～85℃进行加热即可。这时，除成分a以外的成分并非必须熔融，例如成分c在非熔融的状态下分散，熔融混合物可以是浆料状态。此外，不需要从加热开始就以成分a的熔点以上的温度进行加热，例如，如果先以比成分a的熔点低5～10℃的温度进行预加热，再通过挤压机的料筒内的螺杆运送原料后，以成分a的熔点以上的规定温度进行加热，则可有效地获得稳定的熔融混合物。

应予说明，可用于熔融混合物的制备的设备并不限于挤压机，只要能够制备自由落下时可形成液滴的熔融混合物，则可适当使用。

对含有成分a～c的熔融混合物在水中进行造粒的方法无特别限定，可通过将熔融混合物浸渍于水中来进行，具体来说，例如通过将熔融混合物贮存于具有规定直径的孔(洞)的容器中并使其从该孔落下至水中等来进行。如果使熔融混合物从规定直径的孔落下(较好是自由落下)，则在落下中因表面张力的作用而截断，各自形成独立的液滴。如果使该液滴落下至规定温度的水槽中，则液滴在水中瞬间被冷却而固化，获得规定形状的固体物(造粒物)。液体固化而形成固体物时，水槽中的水被包入固体物，但该水可通过其后的加热干燥处理(后述)而减少。应予说明，如果将熔融混合物浸渍于水中，则一部分生物活性物质可能会溶出至水中，但其量极少。

贮存熔融混合物的容器所具有的孔的直径根据所得的造粒物(熔融混合物的液滴固化而得的产物)的大小等适当选择即可，通常为0.1～5mm，较好是0.5～3mm。

贮存熔融混合物的容器只要具有规定直径的孔，则无特别限定，但由于可有效地增加生产量，故较好是使用多孔喷射器(shooter)。在此，“多孔喷射器”是指在底部具有多个(例如2～10000个)穿孔的容器，是临时贮存熔融混合物的设备。此外，贮存熔融混合物的容器较好是具备加温设备以使贮存的熔融混合物不会变冷。

熔融混合物的落下距离(例如自多孔喷射器的底面至水面的距离)无特别限定，通常为10mm～1.5m，较好是30mm～1.0m。通过调整熔融混合物的落下距离，可改变所得的造粒物(固体物)的形状。例如，使加热至65℃左右的熔融混合物落下至水中的情况下，如果将落下距离设为50～150mm，则可获得从球形至近似于橄榄球的形状的造粒物。此外，如果进一步加长落下距离，则与水面的撞击能量增大，因此可获得平坦的麦片状的造粒物，例如落下距离若为0.5m左右，则可获得周边有起伏的麦片状的造粒物。

使其落下至水中时的熔融混合物的温度无特别限定，通常为65～90℃，从熔点的观点来看，较好是70～80℃。

只要熔融混合物能瞬间固化，则使熔融混合物落下的水的温度无特别限定，通常为0～30℃。水温较好是保持恒定，例如通过连续补充规定温度的水等方式，可保持使熔融混合物落下的水的温度恒定。

捕获在水中固化的混合物(造粒物)的方法无特别限定，通过连续地补充水而保持水温恒定的情况下，将固化的混合物(比重：约1.1)使用网、网容器等收集即可。

使含有成分a～c的熔融混合物在水中固化而得的造粒物(本说明书中也称“水中造粒物”)较好是实施加热干燥处理。通过该加热干燥处理，可调节造粒物的水分含量。加热干燥处理例如可通过将造粒物暴露于设定为比造粒物所含的成分a的熔点低的温度的氛围(例如热水、蒸气、热风等)中约数分钟～数十分钟等方式来进行。加热干燥处理的时间基于加热干燥处理的温度、成分a的种类及造粒物的量等适当设定即可，例如可将造粒物长时间(例如0.5～24小时)暴露于设定为比造粒物所含的成分a的熔点低的温度的氛围中。

本发明的反刍动物用饲料添加组合物(以下也称“本发明的组合物”)较好是粒径在特定范围内，本发明中，对于使含有成分a～c的熔融混合物在水中固化而得的造粒物(即，水中造粒物)的粒径适当进行调整，将其用作本发明的反刍动物用饲料添加组合物。本发明的组合物通过使粒径在特定范围内，如后述的实施例所示，可含有在20℃的100g水中的溶解度在特定范围内的水溶性低的生物活性物质，具备在瘤胃中的高保护性，且在下消化道中的溶出性也良好。

具体来说，本发明的组合物的粒径为0.5mm以上且2mm以下。

此外，粒径的调整方法无特别限定，例如有减小贮存熔融混合物的容器的孔的方法、对上述优选粒径以上的组合物进行粉碎及筛分的方法。

本发明的组合物的粒径通过日本工业标准的jisz8801所规定的标准筛进行筛分来规定。

本发明的组合物的粒径的调整只要通过本身公知的方法进行即可，无特别限定，例如可通过对将含有成分a～c的熔融混合物在水中造粒而得的造粒物(即，水中造粒物)进行粉碎、筛分等方式进行。造粒物的粉碎可使用例如切碎机、辊式破碎机、钉磨机、颚式破碎机、干法造粒机等进行。此外，本发明的组合物的粒径调整可通过采用日本工业标准jisz8801所规定的标准筛的筛分等方法进行。

如果将含有成分a～c的熔融混合物在水中造粒而得的造粒物(即，水中造粒物)的粒径原本就在上述特定的范围内，则可将该造粒物直接用作本发明的组合物。

本发明的组合物含有成分a～c。本发明的组合物中的成分a的含量通常超过23重量%，由于可以提高在瘤胃中的保护性，因而较好是30重量%以上，更好是35重量%以上。此外，该含量通常低于60重量%，由于能以高浓度含有生物活性物质，因而较好是55重量%以下，更好是50重量%以下。

本发明的组合物中的成分b的含量通常为0.05重量%以上，由于可以提高在瘤胃中的保护性，因而较好是0.5重量%以上，更好是1重量%以上。此外，该含量通常为6重量%以下，由于可以提高在瘤胃中的保护性，因而较好是5重量%以下，更好是3重量%以下，特别好是2重量%以下。

本发明的组合物中的成分c的含量通常为40重量%以上，由于可使其以高浓度包含于组合物中，因而较好是45重量%以上，更好是50重量%以上。此外，该含量通常为70重量%以下。

除含有成分a～c之外，本发明的组合物还可含有除此以外的其他成分。该其他成分只要不损害本发明的目的则无特别限定，可列举例如与本发明的方法中所用的熔融混合物可含有的成分同样的成分。

本发明的组合物理想的是分散型(基质型)。在此，“分散型”的组合物是指各成分大致均匀地分散的组合物，具体来说，可列举通过例如包含下述工序的制造方法得到的瘤胃保护制剂等，所述工序是：使作为保护剂的氢化油脂高温熔化后，使主剂(生物活性物质)大致均匀地分散于其中，使其呈粒状冷却固化。

本发明的组合物在瘤胃中的保护性及在消化道中的溶出性可根据通过使用溶出试验仪的体外(invitro)试验测得的生物活性物质的保护率及溶出率来进行评价。

＜用于计算保护率的生物活性物质的浓度(浓度a)的测定＞

使用溶出试验仪(富山产业株式会社制)，向加温至相当于反刍动物(例如乳牛等)体温的温度(例如39℃)的900ml超纯水(使用milliq(密理博公司制)制造)中加入约3g制剂样品并以100rpm进行搅拌，从搅拌开始起20小时后，从搅拌中的试液采集2ml用于保护率测定，对生物活性物质的浓度进行测定(浓度a，单位：mg/dl)。

＜用于计算溶出率的生物活性物质的浓度(浓度b)的测定＞

对于刚采集上述保护率测定用样品后的试液，以100rpm继续搅拌的同时，添加胆汁粉(和光纯药株式会社制)和胰酶(和光纯药株式会社制)的水溶液(胆汁粉和胰酶的浓度均为23.4g/100ml)8ml作为小肠模拟试液，从添加该水溶液起5小时后，从搅拌中的试液采集2ml用于溶出率测定，对生物活性物质的浓度进行测定(浓度b，单位：mg/dl)。

上述生物活性物质的浓度(浓度a及b)通过液相色谱法(walters公司制)进行测定。但是，生物活性物质为赖氨酸的情况下，使用生物传感器(王子计测机器株式会社制)进行测定。

＜生物活性物质的保护率及溶出率的计算＞

生物活性物质的保护率及溶出率通过下式算出；

保护率[%]={1-(浓度a[mg/dl]×9)/(制剂样品重量[g]×1000×制剂样品中的生物活性物质的含量[重量%]/100)}×100

溶出率[%]={((浓度b[mg/dl]-浓度a[mg/dl])×9)/(制剂样品重量[g]×1000×制剂样品中的生物活性物质的含量[重量%]/100)}×100。

本发明的组合物的生物活性物质的保护率较好是50%以上，更好是70%以上，特别好是80%以上。另一方面，本发明的组合物的保护率的上限无特别限定，通常为100%。

本发明的组合物的生物活性物质的溶出率越高越好，其上限无特别限定。

关于本发明的组合物，如果不改变其组成而仅改变粒径，则粒径越小，生物活性物质的溶出率越高。例如，本发明的组合物跟组成与其相同且粒径超过2mm的饲料组合物相比，生物活性物质的溶出率更高。此外，粒径为0.5mm以上且1mm以下的本发明的组合物跟组成与其相同且粒径超过1mm且2mm以下的本发明的组合物相比，生物活性物质的溶出率更高。

此外，例如生物活性物质在水中的溶解度低的情况下，即，在20℃的100g水中的溶解度为0.001g以上且60g以下的情况下，如果将本发明的组合物跟组成与其相同且粒径超过2mm的饲料组合物的生物活性物质的溶出率进行比较，后者可能会出现溶出率为0%的情况，而粒径为0.5mm以上且2mm以下的前者与粒径超过2mm的后者相比，溶出率更高。另一方面，生物活性物质在水中的溶解度高的情况下，粒径越小，并不一定生物活性物质的溶出率就越高，甚至溶出率可能会降低。

可使用本发明的组合物的反刍动物无特别限定，可列举例如牛、绵羊、山羊、鹿、长颈鹿、骆驼和羊驼等。

本发明的组合物相对于反刍动物用饲料的添加量无特别限定，可根据生物活性物质的需要量等适当调节。本发明的组合物通常以添加于饲料而与该饲料一起被反刍动物摄取的方式使用，但只要可被反刍动物摄取，并不一定要添加于饲料中，例如本发明的组合物可单独被反刍动物摄取。

以下的实施例中对本发明更具体地进行说明，但本发明并不受这些例子的任何限定。

实施例

＜试验例1＞

[实施例1]

将盐酸组氨酸(味之素株式会社制)的结晶用微粉碎机(bepex公司制)进行微粉碎，与加热熔化的极度氢化大豆油(agp公司制)及大豆卵磷脂(adm公司制)一起以表1所示的比例连续地投入双螺杆挤压机(cosmotech公司制)。然后，在料筒内进行加热(预加热温度：65℃，正式加热温度：85℃，出口设定温度：70℃)、熔融及混合，获得熔融浆料状态的熔融混合物。将所得的熔融混合物由挤压机出口排出，投入多孔喷射器(孔数：2060个，孔直径：2mm)中，然后使该熔融混合物从多孔喷射器的孔自由落下至冷却用水槽(水温：5～15℃)中。从多孔喷射器至冷却用水槽的水面的距离设为10cm。从多孔喷射器落下的熔融混合物在落下中成为液滴，浸渍于水中后，被冷却而瞬间固化。对其进行室温送风而脱去附着的水后，通过设定为52℃的流化床干燥机(味之素株式会社制)进行7分钟的加热干燥处理，获得造粒物。接着，使用辊式破碎机(辊间距：2mm)粉碎造粒物后，使用孔径(开孔)1mm的筛进行筛分，从筛上获得反刍动物用饲料添加组合物(以下称为实施例1的组合物)。

[表1]

。

[比较例1]

除了未进行造粒物的粉碎和筛分以外，与实施例1同样地进行操作，获得粒径超过2mm的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例1的组合物)。

[实施例2]

在烧杯中加热熔化极度氢化大豆油(横关油脂工业株式会社制)，在加温的状态下以表1所示的比例投入大豆卵磷脂(adm公司制)及维生素b12(氰基钴胺)(dsm公司制)并进行混合，获得熔融浆料状态的熔融混合物。将所得的熔融混合物投入多孔喷射器(孔数：108个，孔直径：1mm)中，然后使该熔融混合物从多孔喷射器的孔自由落下至冷却用水槽(水温：0～10℃)中。从多孔喷射器至冷却用水槽的水面的距离设为10cm。从多孔喷射器落下的熔融混合物在落下中成为液滴，浸渍于水中后，被冷却而瞬间固化。将其脱水后，在室温下风干而获得造粒物。

接着，使用磨豆机(岩谷产业株式会社制millserifm-650d)粉碎造粒物后，使用孔径500μm的筛进行筛分，从筛下获得反刍动物用饲料添加组合物(以下称为实施例2的组合物)。

[比较例2]

除了未进行造粒物的粉碎和筛分以外，与实施例2同样地进行操作，获得粒径超过2mm的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例2的组合物)。

[实施例3和4]

将烟酸(dsm公司制)用微粉碎机(retsch公司制zm200)进行微粉碎，以表1所示的比例利用切碎机(retsch公司制gm300)与大豆卵磷脂(adm公司制)混合后，利用搅拌造粒机(fukae-powtec株式会社制fsgs5jd)与加热融化的极度氢化大豆油(横关油脂工业株式会社制)以表1所示的比例混合，获得原料混合物。对实验室用双螺杆挤压机(株式会社日本制钢所制)进行加热(预加热温度：65℃，正式加热温度：85℃，出口设定温度：70℃)后，向与该挤压机的料斗连接的供料器中加入原料混合物，连续地供给该原料混合物，在料筒内进行加热、熔融及混合，获得熔融浆料状态的熔融混合物。将所得的熔融混合物通过挤压机出口排出，投入多孔喷射器(孔数：108个，孔直径：1mm)中，然后使该熔融混合物从多孔喷射器的孔自由落下至冷却用水槽(水温：10℃)中。从多孔喷射器至冷却用水槽的水面的距离设为10cm。从多孔喷射器落下的熔融混合物在落下中成为液滴，浸渍于水中后，被冷却而瞬间固化。将其用离心分离机(kokusan公司制h-110a)进行脱水后，通过流化床干燥机(freund产业株式会社制flo-mini)在室温下进行10分钟的送风处理，获得造粒物。

接着，使用粉碎机(株式会社畑铁工所制hu-rg，1mm筛网)粉碎造粒物后，使用孔径500μm及1mm的筛进行筛分，从孔径1mm的筛上获得反刍动物用饲料添加组合物(以下称为实施例3的组合物)。此外，获得通过孔径1mm且滞留于孔径500μm的筛上的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为实施例4的组合物)。

[比较例3]

除了未进行造粒物的粉碎和筛分以外，与实施例3和4同样地进行操作，获得粒径超过2mm的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例3的组合物)。

[实施例5和6]

除了以表1所示的比例使用叶酸(dsm公司制)代替维生素b12(氰基钴胺)、将多孔喷射器的孔直径由1mm改为2mm以外，与实施例2同样地进行操作而获得造粒物。

接着，使用磨豆机(岩谷产业株式会社制millserifm-650d)粉碎造粒物后，使用孔径500μm及1mm的筛进行筛分，从孔径1mm的筛上获得反刍动物用饲料添加组合物(以下称为实施例5的组合物)。此外，获得通过孔径1mm且滞留于孔径500μm的筛上的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为实施例6的组合物)。

[比较例4]

除了未进行造粒物的粉碎和筛分以外，与实施例5和6同样地进行操作，获得粒径超过2mm的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例4的组合物)。

[比较例5]

将盐酸赖氨酸(味之素株式会社制)的结晶用微粉碎机(bepex公司制)进行微粉碎，与加热熔化的极度氢化大豆油(agp公司制)及大豆卵磷脂(adm公司制)一起以表1所示的比例连续地投入双螺杆挤压机(cosmotech公司制)。然后，在料筒内进行加热(预加热温度：65℃，正式加热温度：85℃，出口设定温度：70℃)、熔融及混合，获得熔融浆料状态的熔融混合物。将所得的熔融混合物通过挤压机出口排出，投入多孔喷射器(孔数：2060个，孔直径：2mm)中，然后使该熔融混合物从多孔喷射器的孔自由落下至冷却用水槽(水温：5～15℃)中。从多孔喷射器至冷却用水槽的水面的距离设为10cm。从多孔喷射器落下的熔融混合物在落下中成为液滴，浸渍于水中后，被冷却而瞬间固化。将其捕获，并进行室温送风而脱去附着的水后，通过设定为52℃的流化床干燥机(味之素株式会社制)进行12分钟的加热干燥处理，获得粒径超过2mm的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例5的组合物)。

[比较例6～8]

使用粉碎机(株式会社畑铁工所制hu-rg，1mm筛网)粉碎比较例5的组合物后，使用孔径250μm、500μm及1mm的筛进行筛分，从孔径1mm的筛上获得反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例6的组合物)。此外，获得通过孔径1mm且滞留于孔径500μm的筛上的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例7的组合物)。另外，获得通过孔径500μm且滞留于孔径250μm的筛上的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例8的组合物)。

用于实施例1～6及比较例1～8的组合物的制造的生物活性物质(盐酸组氨酸、维生素b12、烟酸、叶酸及盐酸赖氨酸)在100g水中的溶解度示于表2。

[表2]

。

实施例1～6及比较例1～8的组合物的保护率及溶出率分别采用以下的步骤进行测定。

[保护率及溶出率的测定]

下述试液的生物活性物质浓度通过液相色谱法(walters公司制)进行测定。但是，对于赖氨酸使用生物传感器(王子计测机器株式会社制)进行测定。

＜用于计算保护率的生物活性物质的浓度(浓度a)的测定＞

使用溶出试验仪(富山产业株式会社制)，向加温至相当于乳牛体温的39℃的900ml超纯水(使用milliq(密理博公司制)制造)中加入约3g制剂样品并以100rpm进行搅拌，从搅拌开始起20小时后，从搅拌中的试液采集2ml用于保护率测定，对生物活性物质的浓度进行测定(浓度a，单位：mg/dl)。

＜用于计算溶出率的生物活性物质的浓度(浓度b)的测定＞

对于刚采集上述保护率测定用样品后的试液，以100rpm继续搅拌的同时，添加胆汁粉(和光纯药株式会社制)和胰酶(和光纯药株式会社制)的水溶液(胆汁粉和胰酶的浓度均为23.4g/100ml)8ml作为小肠模拟试液，从添加该水溶液起5小时后，从搅拌中的试液采集2ml用于溶出率测定，对生物活性物质的浓度进行测定(浓度b，单位：mg/dl)。

＜生物活性物质的保护率及溶出率的计算＞

生物活性物质的保护率及溶出率通过下式算出；

保护率(%)={1-(浓度a[mg/dl]×9)/(制剂样品重量[g]×1000×制剂样品中的生物活性物质的含量[重量%]/100)}×100

溶出率(%)={((浓度b[mg/dl]-浓度a[mg/dl])×9)/(制剂样品重量[g]×1000×制剂样品中的生物活性物质的含量[重量%]/100)}×100。

结果示于图1～5。

由图1～4所示的结果可知，含有在20℃的100g水中的溶解度为0.001g以上且60g以下的生物活性物质(盐酸组氨酸、维生素b12、烟酸、叶酸)的反刍动物用饲料添加组合物通过进行粉碎及筛分而使粒径在0.5～2mm的范围内，与未经粉碎的情况(比较例1～4)相比，溶出率提高(实施例1～6)。

另一方面，由图5所示的结果可知，含有在20℃的100g水中的溶解度超过60g的生物活性物质(盐酸赖氨酸)的反刍动物用饲料添加组合物如果进行粉碎及筛分而使粒径在0.5～2mm的范围内，则与未经粉碎的情况(比较例5)相比，保护率大幅下降，进而溶出率也下降(比较例6～8)。

＜试验例2＞

[比较例9～11]

将用微粉碎机(retsch公司制zm200)进行微粉碎而得的烟酸(dsm公司制)和大豆卵磷脂(adm公司制)以表1所示的比例通过高速搅拌造粒机(fukae-powtec株式会社制fsgs5jd)混合，在该混合的时候滴入加热融化的极度氢化大豆油(横关油脂工业株式会社制)，在造粒机内使包含烟酸、大豆卵磷脂及极度氢化大豆油的混合物固化，从而获得造粒物。接着，将所得的造粒物使用孔径500μm、1mm及2000μm的筛对各粒度分别进行筛分，获得粒径超过2mm的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例9的组合物)及粒径超过1mm且为2mm以下的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例10的组合物)、粒径超过0.5mm且为1mm以下的反刍动物用饲料添加组合物(以下称为比较例11的组合物)。

比较例9～11的组合物的保护率及溶出率分别采用与试验例1同样的步骤算出。结果示于表3及图6。此外，试验例1中测定的实施例3、4及比较例3的组合物的保护率及溶出率也一并记载于表3。

[表3]

。

由表3所示的结果可知，采用包含在水中造粒的工序的方法制成的反刍动物用饲料添加组合物通过进行粉碎及筛分而使粒径在0.5～2mm的范围内，与未经粉碎的情况(比较例3)相比，溶出率提高(实施例3和4)。此外，粒径低于0.5mm的组合物在分析保护率及溶出率的时候存在上浮至水溶液表面的倾向。

另一方面，采用不包含在水中造粒的工序的方法制成的反刍动物用饲料添加组合物即使进行筛分而使粒径在0.5～2mm的范围内，与包含在水中造粒的工序的方法(实施例3和4)相比，保护率及溶出率没有提高(比较例9和10、11)。

工业上的可利用性

如果采用本发明，可提供具备在瘤胃中的高保护性、且在消化道中的溶出性也良好的反刍动物用饲料添加组合物及其制造方法。

本申请以在日本提出申请的日本专利特愿2016-157711(申请日：2016年8月10日)为基础，将其内容全部纳入本说明书中。