本发明属于酵素生产
技术领域：
，具体涉及一种红枣益生菌酵素及其制备方法。
背景技术：
酵素指通过微生物对水果蔬菜发酵，提取的一种含生物活性成分的液体。上述生物活性成分包括酶但是不限于酶，包括活性抗氧化成分、生物质化素等，来自发酵参与菌和用于发酵的食材。合理制作的酵素，所萃取的植物活性物质都是来自于食材，且发酵参与菌更是人体微生态系统的组成部分。因此，酵素的副作用几乎为零。强大的功效，极小的副作用，近年来一直呈爆炸性增长趋势。红枣中的维生素含量非常高，有“天然维生素丸”的美誉，具有滋阴补阳，补血之功效；凤梨营养丰富，其成分包括糖类、蛋白质、脂肪、多种维生素、蛋白质分解酵素及钙、磷、铁、有机酸类、尼克酸等，尤其以维生素c含量最高；葡萄柚中含有宝贵的天然维生素p和丰富的维生素c以及可溶性纤维素。红枣的进一步开发有红枣酒(cn106520461a)、红枣醋(cn103320302a)、红枣饮料(cn103919201a)等，也有将红枣做成红枣酵素(cn107279980a、cn107296266a)，但这些产品对原料的发酵都并不太充分。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种红枣益生菌酵素及其制备方法，解决了传统红枣应用途径窄的问题。本发明所采用的技术方案为：一种红枣益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：s1将红枣500-800kg、凤梨100-150kg、葡萄柚(去皮)50-100kg、当归10-50kg、赤砂糖50份加入发酵设备中；s2向发酵设备中继续加入酵母菌5-15g和发酵乳杆菌5-10g进行初发酵，发酵时间为5-7个月；初发酵结束后加入植物乳杆菌5-10g、保加利亚乳杆菌1-5g、鼠李糖乳杆菌1-5g进行第二次发酵，发酵时间7-9个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌5-10g、罗伊氏乳杆菌1-5g继续第三次发酵5-7个月，第三次发酵结束后加入醋酸菌5g继续第四次发酵3-5个月；s3四阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.8-3.7之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；s4将发酵完成的发酵液进行过滤；s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到红枣益生菌酵素原液。所述s2中初发酵时，发酵过程定期搅拌，需氧、常温发酵；第二次发酵、第三次发酵和第四次发酵时，隔绝空气进行厌氧发酵。发酵设备为发酵桶。采用以上制备方法制得的红枣益生菌酵素。红枣益生菌酵素原液进行灌装得到终产品。灌装条件：控制室内洁净度达到10万级规定要求，车间工人进入车间前必须洗手、更衣、消毒，严格按灌装机及旋盖机的操作规程进行操作，在灌装进行中随时检查灌装量，封口质量等环节，确保产品符合标准技术要求。在灌装前后将设备及管道进行彻底清洗和消毒；灌装为瓶装，瓶及瓶盖清洗：瓶子先用纯净水翻转冲洗，再用洁净压缩空气吹干，盖子用消毒柜进行消毒处理，保证达到无菌要求。优选以下技术方案：在s2中，专用发酵桶为850个，每个发酵桶容量1200升(每次加入原料总量1000kg左右)，电子称2台，每发酵桶装料量1吨，发酵温度为常温，车间密封，保持洁净，常温发酵，发酵时间为24个月。在s5中，静置纯化罐为50个，每个静置纯化罐容量为30吨，使用材质为食品级塑料材质。灌装时，灌装机的型号为td-8，灌装机的数量为2套；旋盖机的型号td-sp1，旋盖机的数量为2套，灌装速度为2000瓶/小时，瓶器为30ml玻璃瓶。瓶及瓶盖清洗时，理瓶器2台；全自动翻转冲瓶机2台，全自动翻转冲瓶机的型号为cp-15；消毒柜1台，消毒柜的型号为ztp-390。与现有技术相比，本发明的有益技术效果是：本发明以红枣、凤梨、葡萄柚、当归、赤砂糖为主要原料，原料的营养成分在科学合理的搭配上更加丰富，在益生菌的发酵作用下，同时严格控制益生菌的种类、用量以及发酵时长，保证原料的发酵更加充分，发酵过程分为四个阶段且根据不同阶段的特性分别加入不同的菌种，使发酵具有层次更加合理；特别是二次发酵阶段，自然发酵，不再增加糖源，这样可以消耗原发酵液中剩余糖分，充分消耗糖类，最终使得原料中的营养物质、活性物质、抗氧化物质能够完全释放出来，最终得到一种营养成分易于吸收、口感良好、可改善缺铁性贫血的红枣益生菌酵素，增加了红枣益生菌酵素营养价值。本发明制得的红枣益生菌酵素不含任何食品添加剂，安全健康，无毒副作用，可放心享用，适宜于各类人群；解决了传统红枣应用途径窄、产品形态单一问题。具体实施方式下面结合实施例来说明本发明的具体实施方式，但以下实施例只是用来详细说明本发明，并不以任何方式限制本发明的范围。以下实施例中原料加入发酵桶之前经过清洗、吹干、紫外消毒、粉碎。实施例1：一种红枣益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：s1将红枣700kg、凤梨150kg、葡萄柚(去皮)75kg、当归25kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；s2向发酵桶中继续加入酵母菌15g和发酵乳杆菌10g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为6个月；初发酵结束后加入植物乳杆菌10g、保加利亚乳杆菌5g、鼠李糖乳杆菌5g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间8个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌10g、罗伊氏乳杆菌5g继续第三次发酵发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间6个月，第三次发酵结束后加入醋酸菌5g继续第四次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间4个月；s3四阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.8-3.7之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；s4将发酵完成的发酵液进行过滤；s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到红枣益生菌酵素原液。实施例2：一种红枣益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：s1将红枣500kg、凤梨150kg、葡萄柚(去皮)100kg、当归50kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；s2向发酵桶中继续加入酵母菌5g和发酵乳杆菌10g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为5个月；初发酵结束后加入植物乳杆菌10g、保加利亚乳杆菌1g、鼠李糖乳杆菌5g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间9个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌5g、罗伊氏乳杆菌5g继续第三次发酵发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间5个月，第三次发酵结束后加入醋酸菌3g继续第四次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间5个月；s3四阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.8-3.7之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；s4将发酵完成的发酵液进行过滤；s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到红枣益生菌酵素原液。实施例3：一种红枣益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：s1将红枣800kg、凤梨100kg、葡萄柚(去皮)50kg、当归10kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；s2向发酵桶中继续加入酵母菌15g和发酵乳杆菌5g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为7个月；初发酵结束后加入植物乳杆菌10g、保加利亚乳杆菌1g、鼠李糖乳杆菌5g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间7个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌10g、罗伊氏乳杆菌1g继续第三次发酵发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间5个月，第三次发酵结束后加入醋酸菌1g继续第四次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间3个月；s3四阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.8-3.7之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；s4将发酵完成的发酵液进行过滤；s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到红枣益生菌酵素原液。实施例4：一种红枣益生菌酵素的制备方法，包括以下步骤：s1将红枣600kg、凤梨120kg、葡萄柚(去皮)80kg、当归20kg、赤砂糖50kg加入发酵桶中；s2向发酵桶中继续加入酵母菌10g和发酵乳杆菌8g进行初发酵，发酵过程每天搅拌，需氧、常温发酵，发酵时间为6个月；初发酵结束后加入植物乳杆菌8g、保加利亚乳杆菌3g、鼠李糖乳杆菌3g进行第二次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间8个月；第二次发酵结束后加入嗜酸乳杆菌8g、罗伊氏乳杆菌3g继续第三次发酵发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间6个月，第三次发酵结束后加入醋酸菌3g继续第四次发酵，发酵过程发酵桶覆膜，隔绝空气进行厌氧发酵，发酵时间4个月；s3四阶段发酵结束后，检测ph稳定在2.8-3.7之间，酒精度＜0.5％时，发酵完成；s4将发酵完成的发酵液进行过滤；s5静置纯化：将过滤后的发酵液静置纯化，当酒精度＜0.5％、乳酸菌总数≥1×106cfu/ml时纯化完成，得到红枣益生菌酵素原液。实施例1-4得到红枣益生菌酵素原液后，需按国标gb/t31121检测微生物指标、重金属指标达标，其他指标达到行业标准t/cbfia08003-2016，然后红枣益生菌酵素原液经专用管道输送至灌装车间，灌装得到红枣益生菌酵素成品。效果实验：对实施例1-4所制得的红枣益生菌酵素改善缺铁性贫血的效果评价。建立缺铁性贫血大鼠模型实验样本：选用sd大鼠，4周龄，雌性断乳大鼠，体重60-80g，hgb≥130g/l。实验建模：低铁饲料加多次少量放血法。低铁饲料参照aoac配方配制，采用edta浸泡处理以去除饲料中的铁，饲料中的含铁量是诱导sd大鼠形成缺铁性贫血模型的关键，饲喂含铁量<15.63mg/kg的饲料35天，sd大鼠出现典型ida表现，而饲喂含铁40.30mg/kg的饲料sd大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响。少量多次放血主要用于模拟反复多次小量失血导致的铁丢失，还可以加速贫血的形成。放血一般在低铁饲料饲喂2周后进行，采用尾静脉放血法，1～1.5ml/次，2次/周。模型指标：(1)hgb≤100g/l；(2)血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，mcv减小、mchc降低；(3)血清铁(si)降低，小于10μmol/l。通过实验建模方法饲养并筛选符合模型指标的大鼠100只，测定全部大鼠的体重及血红蛋白含量。恢复实验：筛选出的100只符合缺铁性贫血模型的大鼠，根据贫血大鼠血红蛋白水平和体重，将其随机分为低铁对照组和四个实验组，各组均继续饲养以低铁饲料及去离子水，对照组以蒸馏水灌胃，实验组则分别以实施例1-4中制得的红枣益生菌酵素的受试样品灌胃，连续灌胃45d。血红蛋白测定(氰化高铁法)连续灌胃45d后，测量体重，股动脉取血10μl，利用氰化高铁法对血红蛋白进行测定。红细胞内游离原卟啉(fep)测定将全血滴在专用滤纸上，待干燥后存人4℃冰箱备用(时间不超过2个月)。测定时，用打孔器将带有血滴的滤纸打入玻璃试管中,加入2％硅藻土溶液,放入4℃冰箱过夜洗脱,加入乙酸乙酯：冰醋酸(4：1)混合液萃取，离心10min，取上清液加入0.5mol/l盐酸，振荡离心，取下层液体用荧光分光光度计测定。实验数据样品对大鼠血红蛋白含量的影响由下表可见，试验开始时各组大鼠血红蛋白含量基本一致。试验结束时对照组的血红蛋白含量较试验初期降低，这是低铁饲料喂养所致。实验组1-4大鼠的血红蛋白含量则均有升高，且各剂量组的血红蛋白含量及血红蛋白升高值与低铁对照组比较差异均具有非常显著性(p<0.01)，表明该样品具有提高贫血模型大鼠的血红蛋白含量的作用，且以实验组1效果最为显著。各组大鼠实验前后的血红蛋白(hb)含量(g/l，)注：实验组1-4与对照组比较，p＜0.01。样品对大鼠红细胞内游离原卟啉(fep)含量的影响由下表可见，试验结束时实验组1-4大鼠的红细胞内游离原卟啉(fep)含量均低于低铁对照组，其差异具有显著性(p<0.05或p<0.01)，表明实验组1-4样品具有降低性贫血模型大鼠的红细胞内游离原卟啉(fep)含量的作用，且以实验组1效果最为显著。各组大鼠的红细胞内游离原卟啉(fep)含量(μg/l全血，)组别n原卟啉(fep)含量p值对照组201108.3±164.9-实验组120841.7±120.30.000实验组220858.3±163.50.001实验组320920.8±154.40.011实验组420857.5±147.30.001本实验采用血红蛋白和红细胞内游离原卟啉(fep)作为检测指标，是基于这两项指标测定简单方便，结果稳定可靠，实验结束时采用实施例1-4的实验组1-4大鼠血红蛋白含量均比实验前有所升高，而对照组大鼠比实验前血红蛋白含量降低，实验组1-4组大鼠的红细胞内游离原卟啉(fep)含量均低于对照组，证明本发明实施例1-4所制得的红枣益生菌酵素能提高缺铁性贫血模型大鼠的血红蛋白含量，降低缺铁性贫血模型大鼠的红细胞内游离原卟啉(fep)的含量，说明本实验成功建立了缺铁性贫血模型，实施例1-4中制得的红枣益生菌酵素能有效增加血红蛋白水平，增强大鼠的造血功能，其中以实施例1中制得的红枣益生菌酵素效果最为显著。最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。当前第1页12