一种复合涂膜结合气调包装保鲜河豚鱼的方法与流程

本发明涉及一种河豚鱼的保鲜方法，尤其是一种复合涂膜结合气调包装保鲜河豚鱼的方法。

背景技术：

河豚鱼又称泡泡鱼、豪猪鱼，是我国沿海地区的传统美食，广泛分布于东海、黄海、渤海和长江流域，为“长江三鲜”之一鱼种。河豚鱼不仅味道鲜美，而且营养丰富，含有8种必需氨基酸和10种非必需氨基酸，必需氨基酸与非必需氨基酸的比值（wteaa/wtneaa）为68.34%，高于fao/who的理想模式，是优质的蛋白来源，同时含有较高含量的钾、钙、锌等矿物质元素，而脂肪含量相对较低，深受人们喜爱。然而，新鲜的河豚鱼在外源微生物和内源酶的作用下极易腐败变质，从而缩短了河豚鱼的货架期，造成资源浪费和环境负担，所以探索一种有效的保鲜方式对于河豚鱼产业具有重要意义。目前水产品常用的保鲜技术有低温贮藏、减菌化处理、真空包装、气调包装、生物保鲜剂等。气调包装保鲜（modifiedatmospherepackaging,map）技术通过调整食品贮藏环境中的气体组成能有效地抑制微生物生长繁殖，降低蛋白质降解和脂肪氧化的速率，从而延长货架期，已被广泛应用于水产品保鲜领域。聚赖氨酸（ε-polylysine，ε-pl）是由生物发酵产生的一种可生物降解的抗菌剂，并被美国食品及药物管理局（fda）列为安全制剂，它能通过静电作用吸附到阴离子微生物细胞表面导致细胞外膜破裂，细胞质破坏，最终导致细胞死亡，由于消费者越来越注重保鲜剂的天然绿色特征，ε-pl因其抗菌效果好、可生物降解而被重视，生物活性涂膜近年来也被广泛应用于食品保鲜领域，添加ε-pl的生物活性涂膜已被li,cai,na等人证明可有效延长水产品的货架期，因此本专利是将ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合活性涂膜与map两种保鲜方式结合，发明了一种有效的河豚鱼保鲜方法。

jia等在《foodmicrobiology》发表文章《effectofε-polylysineandicestorageonmicrobiotacompositionandqualityofpacificwhiteshrimp(litopenaeusvannamei)storedat0℃》（2019,83:27-35.），实验证明经ε-pl溶液浸泡处理有效延缓了太平洋白对虾的品质劣变速率，延长了货架期，但ε-pl溶液质地稀薄，无法在整个贮藏过程附着于虾体起持续抑菌作用，所以研究人员常选取合适的载体作为ε-pl的递送系统，以持续发挥其抑菌作用。

张涵等在《食品科技》发表文章“聚赖氨酸复合涂膜协同气调包装对金鲳鱼保鲜作用研究”（2018,43(11):166-171.），实验证明ε-pl/海藻酸钠复合涂膜协同气调包装组金鲳鱼在冷藏9d后，挥发性盐基氮（tvbn）、硫代巴比妥酸值（tba）均属于一级鲜度，而未经任何处理的样品在冷藏5d后已出现腐败现象，证明ε-pl复合涂膜协同气调包装能有效维持金鲳鱼的品质，但海藻酸钠存在亲水性强、热稳定性低等缺点，研究人员通常使用羧甲基纤维素、明胶、壳聚糖等聚合物改善海藻酸钠的性能。

ε-pl是一种可生物降解的天然生物保鲜剂，能够通过静电作用破坏微生物细胞从而有效抑制水产品中微生物的生长繁殖，降低了品质劣变速率，气调包装是水产行业中常用的一种物理保鲜方式，能有效延长水产品的货架期，所以本发明将两种保鲜方式结合运用到河豚鱼的保鲜过程以达到协同增效的保鲜效果，从而延长河豚鱼的货架期，同时满足了消费者追求绿色健康产品的理念。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种复合涂膜结合气调包装保鲜河豚鱼的方法，通过ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合活性涂膜对河豚鱼涂膜处理后进行map包装并于4℃贮藏，证明该技术可以有效抑制样品中菌落总数的上升（totalviablecounts，tvc），维持挥发性盐基氮（totalvolatilebasicnitrogen,tvb-n）、鲜度值（kvalue）、硫代巴比妥酸值（thiobarbituricacidreactivesubstances，tbars）、离心损失（centrifugalloss）处于相对较低水平，并减缓硬度值（hardness）和感官评分（sensoryscores）的下降，显著延长了河豚鱼的货架期。

本发明“一种复合涂膜结合气调包装保鲜河豚鱼的方法”包括选购鱼样、制备涂膜、处理鱼样、涂膜处理、包装入袋、气调包装、冰箱冷藏，其特征操作步骤如下：

（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室。

（2）制备活性涂膜：向100份水中加入2份壳聚糖并使用搅拌器搅拌1min，在700~900r/min的转速下边搅拌边向上述溶液中以0.1ml/s的速度逐滴滴加1份浓度为100%的乙酸溶液，并于35~45℃条件下按1600~2400r/min的转速搅拌5~15min至充分混匀，形成浓度为1%的壳聚糖涂膜液；向100份水中加入1份海藻酸钠，并使用搅拌器于45~75℃条件下按1600~2400r/min的转速搅拌3~5h至混合均匀，再向充分混匀的100份海藻酸钠溶液中以1ml/s的速度添加100份0.1%的cacl2溶液，并于45~75℃条件下按2500~2700r/min的转速继续搅拌0.5~1.5h得海藻酸钙预凝胶；取1~10份海藻酸钙预凝胶，在2700~3000r/min的转速条件下以1ml/s的速度添加至10~20份1%的壳聚糖溶液中，在45~75℃条件下继续搅拌0.5~1.5h形成壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜；称取0.02~0.06份ε-pl加入至壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜中，并于30~40℃条件下按2700~3000r/min的转速搅拌1~3h至充分混匀分别制得浓度为0.1%，0.2%，和0.3%的ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液；将上述复合涂膜液置于超声波均质器中，并以600~1000w的功率超声均质10~60min。

优选的方案为：制备壳聚糖涂膜液的顺序为先向水中加入壳聚糖，搅拌1min混匀后再加入1份浓度为100%的乙酸溶液，向壳聚糖的水溶液中加入1份乙酸能使壳聚糖在30s内迅速溶解形成壳聚糖涂膜液，若将壳聚糖直接加入浓度为1%的乙酸溶液需搅拌1h才能完全溶解。

优选的方案为：制备壳聚糖涂膜液的温度为40℃，转速为2000r/min，搅拌时长10min，在此温度条件下可避免温度过高影响壳聚糖性能并可加速溶解，在此转速及搅拌时间条件下可使涂膜液质地最为均匀。

优选的方案为：制备海藻酸钠涂膜液的温度为60℃，转速为2000r/min，搅拌时长4h；

在此温度条件下可避免温度过高影响海藻酸钠性能并可加速溶解，在此转速及搅拌时间条件下可使涂膜液质地最为均匀。

优选的方案为：制备海藻酸钙预凝胶的温度为60℃，转速为2600r/min，搅拌时长1h；

在此温度条件下可避免温度过高影响海藻酸钙预凝胶性能并可加速溶解，在此转速及搅拌时间条件下可使预凝胶质地最为均匀。

优选的方案为：取3份海藻酸钙预凝胶，在2800r/min的转速条件下以1ml/s的速度添加至17份1%的壳聚糖溶液中，在60℃条件下继续搅拌1h形成壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜；在此温度条件下可避免温度过高影响膜液性能并可加速溶解，在此添加速度、转速及搅拌时间条件下可使壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液质地最为均匀。

优选的方案为：添加ε-pl后，在35℃条件下按2800r/min的转速搅拌2h至充分混匀制得ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液，在此温度条件下可避免温度过高影响ε-pl性能并可加速溶解，在此转速及搅拌时间条件下可使ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液质地最为均匀；

优选的方案为：复合涂膜液超声波均质过程，调至功率800w并超声均质20min，在此功率及超声时间条件下可进一步均质膜液并除去气泡。

（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼。

（4）涂膜处理：将（3）宰杀并清洗干净的河豚鱼放入质量比为1：2~1：4的涂膜液中浸泡8~15min进行涂膜处理，将涂膜后的河豚鱼置于4℃通风室晾干10~40min。

优选的方案为：河豚鱼与涂膜液的质量比为1：3，浸泡时间为10min。

优选的方案为：将涂膜后的河豚鱼置于4℃通风室晾干30min。

（5）包装入袋：将晾干后的河豚鱼分别装入规格为28cm×28cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中。

（6）气调包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“气调包装”模式，设置气体比例范围40~60%co2、0~10%o2和30~40%n2，气体体积（ml）与河豚鱼的重量（g）比为2:1~4:1，抽真空5~15s，充气3~5s，热封口125~150℃，保鲜气体源压力4~6kg/cm²，动力气体源压力7~8kg/cm²，包装机按照该参数运行稳定后，将盛有河豚鱼的气调包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“气调包装”按钮进行气调包装。

优选的方案为：气调包装气体比例为60%co2、5%o2和35%n2，气体体积（ml）与河豚鱼的重量（g）比为3:1。

优选的方案为：气调包装机参数为抽真空10s，充气4s，热封口150℃，保鲜气体源压力5kg/cm²，动力气体源压力7.5kg/cm²。

（7）冰箱冷藏：将处理好的河豚鱼样品迅速移入4.0±0.1℃的冰箱中进行贮藏。

本发明选用的气调包装袋为高阻性聚偏氯乙烯包装袋，所有样品贮藏于4±0.1℃条件下。本发明通过制备ε-pl复合活性涂膜对河豚鱼进行涂膜处理后能够抑制样品微生物生长繁殖，使处理组样品在贮藏过程中的菌落总数处于相对较低水平，同时气调包装中的高浓度co2和低浓度o2进一步抑制了微生物的生长繁殖，二者的协同作用有效延缓了河豚鱼的蛋白质降解和脂肪氧化等品质劣变反应，延长了河豚鱼的货架期，同时该复合技术安全环保、生产成本相对较低，是一种极具商业价值的河豚鱼冷藏保鲜手段。

图1为ε-pl复合涂膜结合气调包装的河豚鱼菌落总数（tvc）的变化。

图2为ε-pl复合涂膜结合气调包装的河豚鱼挥发性盐基氮含量（tvb-n）的变化。

图3为ε-pl复合涂膜结合气调包装的河豚鱼鲜度值（kvalue）的变化。

图4为ε-pl复合涂膜结合气调包装的河豚鱼硫代巴比妥酸值（tbavalue）的变化。

图5为ε-pl复合涂膜结合气调包装的河豚鱼离心损失（centrifugalloss）变化。

图6为ε-pl复合涂膜结合气调包装的河豚鱼硬度值（hardness）的变化。

图7为ε-pl复合涂膜结合气调包装的河豚鱼感官评分（sensoryscores）的变化。

具体实施方式

为更详细阐述本发明的操作流程与创作特征，便于使用者更好的理解与运用，下面结合具体实施方式做进一步详细说明。

实施例1

（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室；

（2）制备活性涂膜：先向100份水中加入2份壳聚糖并使用搅拌器搅拌1min，在800r/min的转速下边搅拌边向上述溶液中以0.1ml/s的速度逐滴滴加1份浓度为100%的乙酸溶液，并于40℃条件下按2000r/min的转速搅拌10min至充分混匀，形成浓度为1%的壳聚糖涂膜液；

制备壳聚糖涂膜液的顺序为先向100份水中加入2份壳聚糖，搅拌1min后再加入1份浓度为100%的乙酸溶液，向壳聚糖的水溶液中加入乙酸能使壳聚糖在30s内迅速溶解形成壳聚糖涂膜液；

向100份水中加入1份海藻酸钠，并使用搅拌器于60℃条件下按2000r/min的转速搅拌4h至混合均匀，再向充分混匀的100份海藻酸钠溶液中以1ml/s的速度添加100份0.1%的cacl2溶液，并于60℃条件下按2600r/min的转速继续搅拌1h得海藻酸钙预凝胶；

取3份海藻酸钙预凝胶，在2800r/min的转速条件下以1ml/s的速度添加至17份1%的壳聚糖溶液中，在60℃条件下继续搅拌1h形成壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜；

分别称取0.02，0.04，0.06份ε-pl加入至壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜中，并于35℃条件下按2800r/min的转速搅拌2h至充分混匀制得浓度为0.1%，0.2%，和0.3%的ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液；

将上述复合涂膜液置于超声波均质器中，并以800w的功率超声均质20min；

（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼；

（4）涂膜处理：将（3）宰杀并清洗干净的河豚鱼将放入质量比为1：3的涂膜液中浸泡10min进行涂膜处理，将涂膜后的河豚鱼置于4℃通风室晾干30min；

（5）包装入袋：将晾干后的河豚鱼分别装入规格为28cm×28cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中；

（6）气调包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“气调包装”模式，设置气体比例为60%co2、5%o2和35%n2，气体体积（ml）与河豚鱼的重量（g）比为3:1，抽真空10s，充气4s，热封口150℃，保鲜气体源压力5kg/cm²，动力气体源压力7.5kg/cm²，包装机按照该参数运行稳定后，将盛有河豚鱼的气调包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“气调包装”按钮进行气调包装；

（7）冰箱冷藏：将处理好的河豚鱼样品迅速移入4.0±0.1℃的冰箱中进行贮藏。

将处理后的河豚鱼做如下性能测试：

取样检测：分别于0，3，6，9，12，15，18d进行取样检测，预留的河豚鱼进行0d检测，0d之后每次随机取样三份河豚鱼作为平行组进行检测，通过指标测定探究不同组别河豚鱼的保鲜效果。

指标测定：

（1）菌落总数（tvc）：准确称取鱼样5.00g，放入45ml灭菌生理盐水中混匀，做成1：10的均匀稀释液；再用1ml无菌移液抢吸取1：10稀释液1ml沿壁注入盛有9ml无菌生理盐水的试管中进行10倍梯度稀释，制成1:100的样品稀释液并混匀，按照此操作并根据实际情况进行10倍系列稀释；选取3个适宜稀释浓度，吸取1ml菌液于灭菌的培养皿内，每个梯度做2个平行，同时分别吸取1ml灭菌生理盐水于两个灭菌培养皿中敞口放置于超净台内做空白对照；向培养皿中倾注15ml~20ml冷却至45℃的平板计数琼脂培养基并转动平皿使其混合均匀；待琼脂凝固后，将平板倒置于30±1℃生化培养箱培养72±3h，采用平板计数法测定菌落总数并以灭菌的生理盐水为空白作对照试验；培养后选取菌落总数为30~300的平皿进行计数。

（2）挥发性盐基氮含量（tvb-n）：根据gb5009.228-2016《食品安全国家标准食品中挥发性盐基氮的测定》及半微量凯氏定氮原理进行测定。准确称取5.00g的河豚鱼样装于消化管中，加入2勺mgo粉末，利用设定好程序的凯氏定氮仪测定河豚鱼样tvb-n值，做3次平行实验，取平均值。

（3）鲜度值（kvalue）：准确称取5.00g鱼样于离心管内，加入10ml4℃体积分数为10%的高氯酸后均质，再于4℃，8000r/min条件下离心15min，取上清液；向沉淀物中加入10ml4℃体积分数为5%的高氯酸均质，于4℃，8000r/min条件下离心10min，重复2次；最后合并上清液，加入15ml超纯水，用10mol/l和1mol/l的koh溶液以及5%和10%高氯酸溶液调节上清液ph至6.5，静置30min后取上清液于50ml容量瓶中，用超纯水定容至50ml，摇匀；最后用0.22μm的膜过滤，滤液贮藏在液相进样瓶中并进行高效液相分析。每个样品做3个平行样，取平均值。高效液相分析条件：色谱柱vp-cdsc18（46mm×150mm），采用ph=6.7的0.05mol/l磷酸缓冲液平衡洗脱，样品进样量为10ul，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长254nm，按公式计算k值，其中whxr、whx、watp、wadp、wamp和wimp分别为次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸和肌苷酸的质量分数：

（4）硫代巴比妥酸值（tba）：准确称取鱼样5.00g匀浆，加入25ml的20%三氯乙酸，静置1h，于0℃、8000r/min离心10min，过滤，将滤液转移至50ml容量瓶，定容。移取5ml上述溶液于烧杯中，加入5ml的0.02mol/l的硫代巴比妥酸溶液，振荡混匀后于沸水浴中反应20min，取出并冷却至室温。以蒸馏水作为对照于532nm处读取吸光度值。tba值表示如下：。式中a为532nm处的吸光度值，tba的单位为mg/kg。

（5）离心损失（centrifugalloss）：称取2.00g左右鱼样记为w1，用滤纸包裹后置于离心管内，以8000r/min离心10min，称取离心后鱼样的重量记为w2，按公式计算离心损失:

（6）硬度值（hardness）：切取15mm×15mm×15mm的鱼块，选择tpa模式下进行测定，设定参数为：测量前探头下降速度：2.00mm/s；测试速度：1.00mm/s；测量后探头回程速度：5.00mm/s；压缩比：40%；触发力：5.0g；探头类型p/5；数据采集速率为200.00points/s，每组样品做3次平行实验，取平均值。

（7）感官评分（sensoryscores）：

贮藏18d后本发明及各对照组各指标值如下表所示，其中本发明为ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合活性涂膜处理结合map包装（0.1ε-pl+map；0.2ε-pl+map；0.3ε-pl+map）；对照组为①不含ε-pl的壳聚糖/海藻酸钠涂膜结合空气包装组（ap）②不含ε-pl的壳聚糖/海藻酸钠涂膜结合map包装组（map）。

表1贮藏18d后各组指标对比

经过以上对比检测，用本发明的保鲜方法处理的河豚鱼各项指标均优于对照组，显著延长了河豚鱼的货架期，保鲜效果较好。

实施例2：一种复合涂膜结合气调包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：

（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室。

（2）制备活性涂膜：先向100份水中加入2份壳聚糖并使用搅拌器搅拌1min，在800r/min的转速下边搅拌边向上述溶液中以0.1ml/s的速度逐滴滴加1份浓度为100%的乙酸溶液，并于40℃条件下按2000r/min的转速搅拌10min至充分混匀，形成浓度为1%的壳聚糖涂膜液；向100份水中加入1份海藻酸钠，并使用搅拌器于60℃条件下按2000r/min的转速搅拌4h至混合均匀，再向充分混匀的100份海藻酸钠溶液中以1ml/s的速度添加100份0.1%的cacl2溶液，并于60℃条件下按2600r/min的转速继续搅拌1h得海藻酸钙预凝胶；取3份海藻酸钙预凝胶，在2800r/min的转速条件下以1ml/s的速度添加至17份1%的壳聚糖溶液中，在60℃条件下继续搅拌1h形成壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜；称取0.02份ε-pl加入至壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜中，并于35℃条件下按2800r/min的转速搅拌2h至充分混匀制得浓度为0.1%的ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液；将上述复合涂膜液置于超声波均质器中，并以800w的功率超声均质20min。

（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼。

（4）涂膜处理：将（3）宰杀并清洗干净的河豚鱼放入质量比为1：3的涂膜液中浸泡10min进行涂膜处理，将涂膜后的河豚鱼置于4℃通风室晾干30min。

（5）包装入袋：将晾干后的河豚鱼分别装入规格为28cm×28cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中。

（6）气调包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“气调包装”模式，设置气体比例为60%co2、5%o2和35%n2，气体体积（ml）与河豚鱼的重量（g）比为3:1，抽真空10s，充气4s，热封口150℃，保鲜气体源压力5kg/cm²，动力气体源压力7.5kg/cm²，包装机按照该参数运行稳定后，将盛有河豚鱼的气调包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“气调包装”按钮进行气调包装。

（7）冰箱冷藏：将处理好的河豚鱼样品迅速移入4.0±0.1℃的冰箱中进行贮藏。

实施例3：一种复合涂膜结合气调包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：

（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室。

（2）制备活性涂膜：先向100份水中加入2份壳聚糖并使用搅拌器搅拌1min，在800r/min的转速下边搅拌边向上述溶液中以0.1ml/s的速度逐滴滴加1份浓度为100%的乙酸溶液，并于40℃条件下按2000r/min的转速搅拌10min至充分混匀，形成浓度为1%的壳聚糖涂膜液；向100份水中加入1份海藻酸钠，并使用搅拌器于60℃条件下按2000r/min的转速搅拌4h至混合均匀，再向充分混匀的100份海藻酸钠溶液中以1ml/s的速度添加100份0.1%的cacl2溶液，并于60℃条件下按2600r/min的转速继续搅拌1h得海藻酸钙预凝胶；取3份海藻酸钙预凝胶，在2800r/min的转速条件下以1ml/s的速度添加至17份1%的壳聚糖溶液中，在60℃条件下继续搅拌1h形成壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜；称取0.04份ε-pl加入至壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜中，并于35℃条件下按2800r/min的转速搅拌2h至充分混匀制得浓度为0.1%的ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液；将上述复合涂膜液置于超声波均质器中，并以800w的功率超声均质20min。

（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼。

（4）涂膜处理：将（3）宰杀并清洗干净的河豚鱼放入质量比为1：3的涂膜液中浸泡10min进行涂膜处理，将涂膜后的河豚鱼置于4℃通风室晾干30min。

（5）包装入袋：将晾干后的河豚鱼分别装入规格为28cm×28cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中。

（6）气调包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“气调包装”模式，设置气体比例为60%co2、5%o2和35%n2，气体体积（ml）与河豚鱼的重量（g）比为3:1，抽真空10s，充气4s，热封口150℃，保鲜气体源压力5kg/cm²，动力气体源压力7.5kg/cm²，包装机按照该参数运行稳定后，将盛有河豚鱼的气调包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“气调包装”按钮进行气调包装。

（7）冰箱冷藏：将处理好的河豚鱼样品迅速移入4.0±0.1℃的冰箱中进行贮藏。

实施例3：一种复合涂膜结合气调包装保鲜河豚鱼的方法包括以下步骤：

（1）选购鱼样：选购大小均一、色泽光亮、状态鲜活、体重为300±10g的河豚鱼，由泡沫箱增氧运至实验室。

（2）制备活性涂膜：先向100份水中加入2份壳聚糖并使用搅拌器搅拌1min，在800r/min的转速下边搅拌边向上述溶液中以0.1ml/s的速度逐滴滴加1份浓度为100%的乙酸溶液，并于40℃条件下按2000r/min的转速搅拌10min至充分混匀，形成浓度为1%的壳聚糖涂膜液；向100份水中加入1份海藻酸钠，并使用搅拌器于60℃条件下按2000r/min的转速搅拌4h至混合均匀，再向充分混匀的100份海藻酸钠溶液中以1ml/s的速度添加100份0.1%的cacl2溶液，并于60℃条件下按2600r/min的转速继续搅拌1h得海藻酸钙预凝胶；取3份海藻酸钙预凝胶，在2800r/min的转速条件下以1ml/s的速度添加至17份1%的壳聚糖溶液中，在60℃条件下继续搅拌1h形成壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜；称取0.06份ε-pl加入至壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜中，并于35℃条件下按2800r/min的转速搅拌2h至充分混匀制得浓度为0.1%的ε-pl/壳聚糖/海藻酸钠复合涂膜液；将上述复合涂膜液置于超声波均质器中，并以800w的功率超声均质20min。

（3）处理鱼样：用锋利的剪刀将河豚鱼腹部迅速剖开放血；鱼鳃剪断后将鱼鳃和内脏一同剔除，再用剪刀修剪残余内脏；沿河豚鱼上腹部剖线处将鱼皮撕下；用剪刀去除河豚鱼的眼睛；将河豚鱼脊柱内残留血液挤出；用冰水清洗干净河豚鱼。

（4）涂膜处理：将（3）宰杀并清洗干净的河豚鱼放入质量比为1：3的涂膜液中浸泡10min进行涂膜处理，将涂膜后的河豚鱼置于4℃通风室晾干30min。

（5）包装入袋：将晾干后的河豚鱼分别装入规格为28cm×28cm的高阻性聚偏氯乙烯包装袋中。

（6）气调包装：启动袋式气调锁鲜包装机，启动真空泵，选择“气调包装”模式，设置气体比例为60%co2、5%o2和35%n2，气体体积（ml）与河豚鱼的重量（g）比为3:1，抽真空10s，充气4s，热封口150℃，保鲜气体源压力5kg/cm²，动力气体源压力7.5kg/cm²，包装机按照该参数运行稳定后，将盛有河豚鱼的气调包装袋袋口置于气体置换及热封口处，点击“气调包装”按钮进行气调包装。

（7）冰箱冷藏：将处理好的河豚鱼样品迅速移入4.0±0.1℃的冰箱中进行贮藏。

本发明实验结果表明ε-pl复合活性涂膜结合气调包装可有效维持河豚鱼的良好贮藏品质，货架期由空气包装的7d延长至17d，且该技术方法简便快捷，健康环保，可广泛应用于企业生产和超市零售河豚鱼。