免疫治疗和诊断结核病的化合物和方法

专利名称：免疫治疗和诊断结核病的化合物和方法
技术领域：
本发明一般涉及检测，治疗和预防结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)感染。本发明更特别地涉及包含结核分枝杆菌抗原，或者其部分或其其它变体的多肽，以及这样的多肽对结核分枝杆菌感染进行诊断和接种疫苗的用途。
背景技术：
结核病是慢性感染病，其一般是由结核分枝杆菌感染引起的。其是发展中国家的一种主要的疾病，而且在世界的发展地区出现越来越多的问题，每年大约8百万新的病例和3百万死亡。尽管感染可能在相当一段时间是无症状的，但是该疾病最通常表现为肺部急性炎症，导致发烧和干咳。如果不加以治疗，一般导致严重的并发症和死亡。
尽管结核病一般可以使用扩大的抗生素治疗来控制，但是这样的治疗不足以防止疾病的蔓延。感染的个体可能是无症状的，但是在一定时间是接触传染的。另外，尽管治疗方案的顺应性是严格的，但是患者的行为是难以监控的。一些患者不完成治疗期，这导致没有效果的治疗和产生抗药性。
抑制结核病的蔓延需要有效的疫苗接种和疾病的准确，早期的诊断。最近，用活细菌接种是诱导保护性免疫的最有效的方法。用于该目的的最普通的分枝杆菌是芽孢杆菌Calmette-Guerin(BCG)，一种牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)的减毒株。但是BCG的安全性和效力是争论之话题，而且在一些国家，例如在美国，一般公众不接种。诊断一般用皮试完成，其涉及真皮内暴露给结核菌素PPD(蛋白质纯化的衍生物)。注射后48-72小时在注射点抗原特异性T细胞应答产生可测的硬结，其表明暴露在分枝杆菌抗原之下。但是该试验的问题是敏感性和特异性，并且接种BCG的个体不能和感染的个体区分开来。
巨噬细胞表现出作为结核分枝杆菌免疫的主要效应子而起作用，而T细胞是这样的免疫的主要的诱导物。T细胞在抗结核分枝杆菌感染的保护中的主要作用通过由于与人免疫缺陷病毒(HIV)感染相关的CD4 T细胞的缺失而在AIDS患者中频繁发生结核分枝杆菌来说明。分枝杆菌-反应性CD4 T细胞表现出是γ-干扰素(IFN-γ)的潜在的生产者，而后者接着表现出在小鼠内触发巨噬细胞的抗分枝杆菌作用。尽管IFN-γ在人体内的作用尚不十分清楚，但是研究表明1，25-二羟基-维生素D3，单独地或者与IFN-γ或者α-肿瘤坏死因子组合，激活人巨噬细胞抑制结核分枝杆菌感染。此外，已知IFN-γ刺激人巨噬细胞产生1，25-二羟基-维生素D3。类似地，IL-12表现出在刺激对结核分枝杆菌感染的抗性中起作用。关于结核分枝杆菌感染免疫学的综述参见Chan和Kaufmann，结核病发病机理，保护和治疗Tuberculosis；Pathogenesis，Protect and Control，Bloom(编著)，ASM出版，华盛顿，DC，1994。
因此，本领域存在对于改进的疫苗和预防，治疗和诊断结核病的方法的需要。本发明满足了这些需要，并且进一步提供了其它相关的优点发明概述简要地说，本发明提供用于预防和诊断结核病的化合物和方法。一方面，提供的多肽包含可溶性结核分枝杆菌抗原或者这样的抗原的变体的免疫原性部分，所述抗原的变体只是在保守性替换和/或修饰上不同。在该方面的实施方案中，该可溶性抗原具有下面N-末端序列之(a)Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu；(SEQ ID No.120)(b)Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser；(SEQ ID No.121)(c)Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg；(SEQ ID No.122)(d)Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro；(SEQ ID No.123)
(e)Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val；(SEQ ID No.124)(f)Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro；(SEQ IDNo.125)(g)Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser；(SEQ ID No.126)(h)Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly；(SEQ ID No.127)(i)Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn；(SEQ ID No.128)(j)Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser；(SEQ ID No.134)(k)Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp；(SEQ ID No.135)或(l)Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly；(SEQ ID No.136)其中Xaa可以是任何氨基酸。
在相关的方面，提供的多肽包含结核分枝杆菌抗原或者这样的抗原的变体的免疫原性部分，所述抗原的变体只是在保守性替换和/或修饰上不同。抗原具有下面N-末端序列之一(m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID No.137)或(n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe；(SEQ ID No.129)其中Xaa可以是任何氨基酸。
在另一个实施方案中，该可溶性结核分枝杆菌抗原包含选自SEQID Nos.1，2，4-10，13-25，52，99和101列出的序列，所述序列的互补序列和在中等严格条件下与SEQ ID Nos.1，2，4-10，13-25，52，99和101列出的序列或其互补序列杂交的DNA序列的DNA序列编码的氨基酸序列。
在相关的方面，该多肽包含结核分枝杆菌抗原或者这样的抗原的变体的免疫原性部分，所述抗原的变体只是在保守性替换和/或修饰上不同，其中抗原包含选自SEQ ID Nos.26-51，138，139，163-183和201列出的序列，所述序列的互补序列和在中等严格条件下与SEQ ID Nos.26-51，138，139，163-183和201列出的序列或其互补序列杂交的DNA序列的DNA序列编码的氨基酸序列。
在相关的方面，也提供了编码上述多肽的DNA序列，包含这些DNA序列的表达载体和用这样的表达载体转化或转染的宿主细胞。
另一方面，本发明提供融合的蛋白质，其包含第一和第二本发明多肽，或者本发明多肽和已知的结核分枝杆菌抗原。
在其它方面，本发明提供含有一种或多种上述多肽，或者编码这样的多肽的DNA分子，和药学可接受载体的药物组合物。本发明还提供包含一种或多种如上所述多肽和非特异性免疫应答增强剂的疫苗，以及含有一种或多种编码这样的多肽的DNA序列和非特异性免疫应答增强剂的疫苗。
在又一方面，提供诱导患者保护性免疫的方法，包括给予患者有效量的一种或多种上述多肽。
在本发明又一方面，提供检查患者结核病的方法和诊断盒。该方法包括用一种或多种上述多肽接触患者的皮细胞，并且检查患者皮肤上的免疫反应。诊断盒包括一种或多种上述多肽和足以使多肽接触患者的皮细胞的设备。
另外方面中，提供检查患者结核病的方法，该方法包括用选自SEQID Nos.3，11，12，140，141，156-160，189-193，199，200和203的序列，所述序列的互补序列，和与SEQ ID Nos.3，11，12，140，141，156-160，189-193，199，200和203列出的序列杂交的DNA序列编码的一种或多种多肽接触患者皮细胞；并且检查患者皮肤上的免疫反应。也提供了在这样的方法中使用的诊断盒。
参照下面的详细描述和附图，本发明的这些和其它方面将变得显而易见。这里所公开的全部参考其全部引作参考，好象其各自引作参考一样。
附图和序列鉴定的简要说明

图1A和B详细说明实施例1描述的14Kd，20Kd和26Kd抗原分别对来自第一和第二结核分枝杆菌免疫供者的T细胞的增殖和干扰素-γ产生的刺激作用。
图2详细说明两种代表性多肽TbRa3和TbRa9对来自结核分枝杆菌免疫个体的T细胞中的增殖和干扰素-γ产生的刺激作用。
图3A-D详细说明结核分枝杆菌裂解物(泳道2)，结核分枝杆菌分泌蛋白(泳道3)，重组体Tb38-1(泳道4)，重组体TbH-9(泳道5)和重组体85b(泳道5)分别抗分泌性结核分枝杆菌蛋白，已知的结核分枝杆菌抗原85b和本发明抗原Tb38-1和TbH-9抗血清反应性。
图4A详细说明分泌性结核分枝杆菌蛋白，重组体TbH-9和对照抗原TbRa11对TbH-9-特异性T细胞克隆增殖的刺激作用。
图4B详细说明分泌性结核分枝杆菌蛋白，PPD和重组体TbH-9对TbH-9-特异性T细胞克隆中干扰素-γ产生的刺激作用。
图5A和B详细说明融合蛋白TbH9-Tb38-1对TbH-9-特异性T细胞中增殖和干扰素-γ产生的刺激作用。
图6A和B详细说明融合蛋白TbH9-Tb38-1对Tb38-1-特异性T细胞增殖和干扰素-γ产生的刺激作用。
图7A和B详细说明融合蛋白TbH9-Tb38-1对先前表现出对TbH-9和Tb38-1两者应答的T细胞增殖和干扰素-γ产生的刺激作用图8A和B详细说明代表性多肽XP-1，RDIF6，RDIF8，RDIF10和RDIF11对来自第一结核分枝杆菌免疫个体的T细胞增殖和干扰素-γ产生的刺激作用。
图9A和B详细说明代表性多肽XP-1，RDIF6，RDIF8，RDIF10和RDIF11对来自第二结核分枝杆菌免疫个体的T细胞增殖和干扰素-γ产生的刺激作用。
SEQ.ID NO.1是TbRa1的DNA序列。
SEQ.ID NO.2是TbRa10的DNA序列。
SEQ.ID NO.3是TbRa11的DNA序列。
SEQ.ID NO.4是TbRa12的DNA序列。
SEQ.ID NO.5是TbRa13的DNA序列。
SEQ.ID NO.6是TbRa16的DNA序列。
SEQ.ID NO.7是TbRa17的DNA序列。
SEQ.ID NO.8是TbRa18的DNA序列。
SEQ.ID NO.9是TbRa19的DNA序列。
SEQ.ID NO.10是TbRa24的DNA序列。
SEQ.ID NO.11是TbRa26的DNA序列。
SEQ.ID NO.12是TbRa28的DNA序列。
SEQ.ID NO.13是TbRa29的DNA序列。
SEQ.ID NO.14是TbRa2A的DNA序列。
SEQ.ID NO.15是TbRa3的DNA序列。
SEQ.ID NO.16是TbRa32的DNA序列。
SEQ.ID NO.17是TbRa35的DNA序列。
SEQ.ID NO.18是TbRa36的DNA序列。
SEQ.ID NO.19是TbRa4的DNA序列。
SEQ.ID NO.20是TbRa9的DNA序列。
SEQ.ID NO.21是TbRaB的DNA序列。
SEQ.ID NO.22是TbRaC的DNA序列。
SEQ.ID NO.23是TbRaD的DNA序列。
SEQ.ID NO.24是YYWCPG的DNA序列。
SEQ.ID NO.25是AAMK的DNA序列。
SEQ.ID NO.26是TbL-23的DNA序列。
SEQ.ID NO.27是TbL-24的DNA序列。
SEQ.ID NO.28是TbL-25的DNA序列。SEQ.ID NO.29是TbL-28的DNA序列。SEQ.ID NO.30是TbL-29的DNA序列。SEQ.ID NO.31是TbH-5的DNA序列。SEQ.ID NO.32是TbH-8的DNA序列。SEQ.ID NO.33是TbH-9的DNA序列。SEQ.ID NO.34是TbM-1的DNA序列。SEQ.ID NO.35是TbM-3的DNA序列。SEQ.ID NO.36是TbM-6的DNA序列。SEQ.ID NO.37是TbM-7的DNA序列。SEQ.ID NO.38是TbM-9的DNA序列。SEQ.ID NO.39是TbM-12的DNA序列。SEQ.ID NO.40是TbM-13的DNA序列。SEQ.ID NO.41是TbM-14的DNA序列。SEQ.ID NO.42是TbM-15的DNA序列。SEQ.ID NO.43是TbH-4的DNA序列。SEQ.ID NO.44是TbH-4-FWD的DNA序列。SEQ.ID NO.45是TbH-12的DNA序列。SEQ.ID NO.46是Tb38-1的DNA序列。SEQ.ID NO.47是Tb38-4的DNA序列。SEQ.ID NO.48是TbL-17的DNA序列。SEQ.ID NO.49是TbL-20的DNA序列。SEQ.ID NO.50是TbL-21的DNA序列。SEQ.ID NO.51是TbH-16的DNA序列。SEQ.ID NO.52是DPEP的DNA序列。SEQ.ID NO.53是DPEP的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.54是DPV N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.55是AVGS N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.56是AAMK N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.57是YYWC N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.58是DIGS N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.59是AEES N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.60是DPEP N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.61是APKT N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.62是DPAS N-末端抗原的蛋白质序列。SEQ.ID NO.63是TbRa1的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.64是TbRa10的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.65是TbRa11的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.66是TbRa12的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.67是TbRa13的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.68是TbRa16的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.69是TbRa17的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.70是TbRa18的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.71是TbRa19的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.72是TbRa24的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.73是TbRa26的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.74是TbRa28的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.75是TbRa29的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.76是TbRa2A的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.77是TbRa3的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.78是TbRa32的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.79是TbRa35的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.80是TbRa36的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.81是TbRa4的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.82是TbRa9的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.83是TbRaB的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.84是TbRaC的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.85是TbRaD的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.86是YYWCPG的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.87是TbAAMK的DNA序列。SEQ.ID NO.88是Tb38-1的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.89是TbH-4的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.90是TbH-8的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.91是TbH-9的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.92是TbH-12的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.93是Tb38-1肽1的氨基酸序列。SEQ.ID NO.94是Tb38-1肽2的氨基酸序列。SEQ.ID NO.95是Tb38-1肽3的氨基酸序列。SEQ.ID NO.96是Tb38-1肽4的氨基酸序列。SEQ.ID NO.97是Tb38-1肽5的氨基酸序列。SEQ.ID NO.98是Tb38-1肽6的氨基酸序列。SEQ.ID NO.99是DPAS的DNA序列。SEQ.ID NO.100是DPAS的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.101是DPV的DNA序列。SEQ.ID NO.102是DPV的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.103是ESAT-6的DNA序列。SEQ.ID NO.104是ESAT-6的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.105是TbH-8-2的DNA序列。SEQ.ID NO.106是TbH-9FL的DNA序列。SEQ.ID NO.107是TbH-9FL的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.108是TbH-9-1的DNA序列。SEQ.ID NO.109是TbH-9-1的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.110是TbH-9-4的DNA序列。SEQ.ID NO.111是TbH-9-4的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.112是Tb38-1F2IN的DNA序列。SEQ.ID NO.113是Tb38-2F2RP的DNA序列。SEQ.ID NO.114是Tb37-FL的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.115是Tb38-IN的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.116是Tb38-1F3的DNA序列。SEQ.ID NO.117是Tb38-1F3的推导的氨基酸序列。SEQ.ID NO.118是Tb38-1F5的DNA序列。SEQ.ID NO.119是Tb38-1F6的DNA序列。SEQ.ID NO.120是DPV的推导的N-末端氨基酸序列。SEQ.ID NO.121是AVGS的推导的N-末端氨基酸序列。SEQ.ID NO.122是AAMK的推导的N-末端氨基酸序列。SEQ.ID NO.123是YYWC的推导的N-末端氨基酸序列。SEQ.ID NO.124是DIGS的推导的N-末端氨基酸序列。
SEQ.ID NO.125是AEES的推导的N-末端氨基酸序列。
SEQ.ID NO.126是DPEP的推导的N-末端氨基酸序列。
SEQ.ID NO.127是APKT的推导的N-末端氨基酸序列。
SEQ.ID NO.128是DPAD的推导的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.129是DPPD N-末端抗原的蛋白质序列。
SEQ.ID NO.130-133是四个DPPD溴化氰片段的蛋白质序列。
SEQ.ID NO.134是XDS抗原的N-末端蛋白质序列。
SEQ.ID NO.135是AGD抗原的N-末端蛋白质序列。
SEQ.ID NO.136是APE抗原的N-末端蛋白质序列。
SEQ.ID NO.137是XYI抗原的N-末端蛋白质序列SEQ.ID NO.138是TbH-29的DNA序列。
SEQ.ID NO.139是TbH-30的DNA序列。
SEQ.ID NO.140是TbH-32的DNA序列。
SEQ.ID NO.141是TbH-33的DNA序列。
SEQ.ID NO.142是TbH-29的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.143是TbH-30的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.144是TbH-32的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.145是TbH-33的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.146-151是制备包含TbRa3，38kD和Tb38-1的融合蛋白中使用的PCR引物。
SEQ.ID NO.152是包含TbRa3，38kD和Tb38-1的融合蛋白的DNA序列SEQ.ID NO.153是包含TbRa3，38kD和Tb38-1的融合蛋白的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.154是结核分枝杆菌抗原38kD的DNA序列。
SEQ.ID NO.155是结核分枝杆菌抗原38kD的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.156是XP14的DNA序列。
SEQ.ID NO.157是XP24的DNA序列。
SEQ.ID NO.158是XP31的DNA序列。
SEQ.ID NO.159是XP32的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.160是XP32的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.161是XP14的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.162是XP14的反向互补序列编码的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.163是XP27的DNA序列。
SEQ.ID NO.164是XP36的DNA序列。
SEQ.ID NO.165是XP4的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.166是XP5的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.167是XP17的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.168是XP30的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.169是XP2的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.170是XP2的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.171是XP3的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.172是XP3的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.173是XP6的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.174是XP6的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.175是XP18的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.176是XP18的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.177是XP19的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.178是XP19的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.179是XP22的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.180是XP22的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.181是XP25的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.182是XP25的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.183是TbH4-XP1的全长DNA序列。
SEQ.ID NO.184是TbH4-XP1的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.185是TbH4-XP1的反向互补序列编码的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.186是XP36编码的第一预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.187是XP36编码的第二预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.188是XP36的反向互补序列编码的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.189是RDIF2的DNA序列。
SEQ.ID NO.190是RDIF5的DNA序列。
SEQ.ID NO.191是RDIF8的DNA序列。
SEQ.ID NO.192是RDIF10的DNA序列。
SEQ.ID NO.193是RDIF11的DNA序列。
SEQ.ID NO.194是RDIF2的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.195是RDIF5的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.196是RDIF8的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.197是RDIF10的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.198是RDIF11的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.199是RDIF12的5′DNA序列。
SEQ.ID NO.200是RDIF12的3′DNA序列。
SEQ.ID NO.201是RDIF7的DNA序列。
SEQ.ID NO.202是RDIF7的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.203是DIF2-1的DNA序列。
SEQ.ID NO.204是DIF2-1的预示的氨基酸序列。
SEQ.ID NO.205-212是制备包含TbRa3，38kD，Tb38-1和DPEP的融合蛋白(下文称之为TbF-2)中使用的PCR引物。
SEQ.ID NO.213是融合蛋白TbF-2的DNA序列。
SEQ.ID NO.214是融合蛋白TbF-2的氨基酸序列。
发明的详细说明如上所述，本发明一般涉及预防，治疗和诊断结核病的组合物和方法。本发明组合物含有至少包含一种结核分枝杆菌抗原，或者只是保守性替换和/或修饰不同的这样的抗原的变体的免疫原性部分的多肽。本发明范围内的多肽包括但不限于免疫原性可溶性结核分枝杆菌抗原。“可溶性结核分枝杆菌抗原”是结核分枝杆菌培养物滤液中存在的结核分枝杆菌源的蛋白质。如这里所使用的，术语“多肽”包括其中氨基酸残基通过共价肽键连接的任何长度的氨基酸链，包括全长蛋白质(即抗原)。因此，包含上述抗原之一的免疫原性部分的多肽可以全部由免疫原性部分组成，或者可以包含另外的序列。另外的序列可以来自天然结核分枝杆菌抗原或者可以是异源的，并且这样的序列可以(但是不必须)是免疫原性的。
这里所使用的“免疫原性”指在患者，例如人，和/或在生物样品中诱发免疫应答(例如细胞的)的能力。特别地，是免疫原性的抗原(和这样的抗原的免疫原性部分或其它变体)能在含有一种或多种选自T细胞，NK细胞，B细胞和巨噬细胞的细胞的生物样品中刺激细胞增殖，白细胞介素-12产生和/或干扰素-γ产生，其中细胞来自结核分枝杆菌免疫的个体。至少包含一种或多种结核分枝杆菌抗原的免疫原性部分的多肽一般可以用来检查结核病或者诱发患者抗结核病的保护性免疫性。
本发明组合物和方法还涉及上述多肽的变体。“变体”，如在这里所使用的，是只是保守性替换和/或修饰不同于天然抗原，使得保留多肽诱发免疫应答的能力的多肽。这样的变体一般可以通过修饰上述多肽之一，并且使用例如这里所描述的代表性方法评价修饰的多肽的免疫原性来鉴定。
“保守性替换”是其中氨基酸被另一种具有相似性质的氨基酸替换，使得肽化学领域技术人员能预测多肽的二级结构和亲水性基本上没有变化的替换。一般情况下，下面组的氨基酸代表保守性变化(1)ala，pro，gly，glu，asp，gln，asn，scr，thr；(2)cys，ser，tyr，thr；(3)val，ile，leu，met，ala，phe；(4)lys，arg，his；和(5)phe，tyr，trp，his。
变体也可以(或者)通过例如对多肽的免疫原性，二级结构和亲水性具有极小影响的氨基酸的缺失或加入而修饰。例如，多肽与共翻译或翻译后指导蛋白质转移的蛋白质N-末端的信号(或前导)序列偶联。多肽还可以偶联于易于多肽(例如多-His)的合成，纯化或鉴定，或者增强多肽与固体载体结合的接头或其它序列。例如，多肽可以与免疫球蛋白Fc区偶联。
在相关的方面，公开了组合多肽。“组合多肽”是包含至少一种通过肽键接头一条氨基酸链上的上述免疫原性部分和一种或多种另外的免疫原性结核分枝杆菌序列的多肽。序列可以直接连接(即没有间插氨基酸)或者可以通过不明显减小组成多肽的免疫原性的接头序列(例如Gly-Cys-Gly)连接。
一般情况下，结核分枝杆菌抗原，编码该抗原的DNA序列可以用各种各样的方法制备。例如可溶性抗原可以通过本领域技术人员公知的方法从结核分枝杆菌培养物滤液中分离，包括阴离子-交换和反相色谱。然后用例如这里所描述的代表性方法对纯化的抗原评价其诱出适当的免疫应答(例如细胞的)的能力。然后可以用例如常规的Edman化学技术对免疫原性抗原部分测序。参见Edman和Bcrg，欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)80116-132，1967。
免疫原性抗原也可以用插入到表达载体中并且在适当的宿主中表达的编码该抗原的DNA序列重组产生。编码可溶性抗原的DNA分子可以通过用特异性抗可溶性结核分枝杆菌抗原的抗血清(例如兔)筛选适当的结核分枝杆菌表达文库来分离。编码可能是可溶的或者可能不是可溶的抗原的DNA序列可以通过用从感染结核分枝杆菌的患者获得的血清筛选适当的结核分枝杆菌基因组或者cDNA表达文库来鉴别。这样的筛选一般可以用本领域技术人员公知的技术进行，例如描述于Sambrook等，分子克隆实验室手册，冷泉港实验室，冷泉港，NY，1989的那些方法。
编码可溶性抗原的DNA序列也可以通过对适当的结核分枝杆菌cDNA或基因组DNA文库筛选与来自分离的可溶性抗原的部分氨基酸序列的简并寡核苷酸杂交的DNA序列而获得。可以设计和合成在这样的筛选中使用的简并寡核苷酸序列，筛选可以根据(例如)Sambrook等，分子克隆实验室手册，冷泉港实验室，冷泉港，NY，1989(和其中的引用参考)的描述进行。也可以使用聚合酶链反应(PCR)，使用本领域公知方法中的上述寡核苷酸，来从cDNA或基因组文库分离核酸探针，然后可以用分离的探针进行文库筛选。
或者，可以直接用得自一名或多名结核分枝杆菌免疫个体的外周血单核细胞(PBMCs)或T细胞系或克隆筛选来自结核分枝杆菌的基因组或cDNA文库。一般情况下，在这样的筛选中使用的PBMCs和/或T细胞可以根据下面的描述制备。直接的文库筛选一般可以通过对表达的重组蛋白质的集合液测定在来自结核分枝杆菌免疫个体的T细胞中诱发增殖和/或干扰素-γ产生的能力来进行。或者，如上所述，潜在的T细胞抗原可以以抗体反应性为基础首次筛选。
不考虑制备方法，这里所描述的抗原(和其免疫原性部分)(其可能是可溶的或者可能不是可溶的)具有诱发免疫原性应答的能力。更具体地，抗原具有诱发来自结核分枝杆菌免疫个体的T细胞，NK细胞，B细胞和/或巨噬细胞中的增殖和/或细胞因子产生(例如干扰素-γ和/或白细胞介素-12产生)的能力。对于用于评价对抗原的免疫原性应答的细胞类型的选择当然取决于期望的反应。例如，用含有B细胞和/或巨噬细胞的制剂最适于评价白细胞介素-12产生。结核分枝杆菌免疫个体是认为由于具有安置好的对结核分枝杆菌(即基本上没有疾病症状)的有效的T细胞应答而建立对结核病有抗性的人。这样的个体可以根据对结核病蛋白质(PPD)的强阳性(例如大于大约10mm直径硬结)皮内皮试反应和没有任何结核病信号或症状为基础来鉴定。来自结核分枝杆菌免疫个体的T细胞，NK细胞，B细胞和巨噬细胞可以用本领域技术人员公知的方法制备。例如PBMCs(即外周血单核细胞)的制备物可以不用进一步分离组成细胞就可使用。PBMCs一般可以例如使用通过FicollTM(Winthrop Laboratories，NY)的密度离心来制备。这里所描述的测试中使用的T细胞也可以直接从PBMCs纯化。或者，可以使用对分枝杆菌蛋白质有反应性的富集的T细胞系或者对个体分枝杆菌蛋白质有反应性的T细胞克隆。这样的T细胞克隆可以通过例如将来自结核分枝杆菌免疫个体的PBMCs和分枝杆菌蛋白质培养2-4星期而产生。这使得只有分枝杆菌蛋白质特异性T细胞扩展，产生只有这样的细胞组成的细胞系。然后可以用本领域技术人员公知的方法克隆这些细胞并用个体蛋白质试验，以更精确地定义个体T细胞特异性。一般情况下，用来自结核分枝杆菌免疫个体的T细胞，NK细胞，B细胞和/或巨噬细胞进行的对增殖和/或细胞因子产生(即干扰素-γ和/或白细胞介素-12产生)的试验中测试阳性的抗原被认为是免疫原性的。这样的测试可以例如用下面描述的代表性方法来进行。这样的抗原的免疫原性部分可以用相似的测试鉴定，并且可以存在于这里所描述的多肽中。
多肽(例如免疫原性抗原或其部分，或其其它变体)诱导细胞增殖的能力通过用多肽接触细胞(例如T细胞和/或NK细胞)并且测定细胞的增殖来评价。一般情况下，足以评价大约105个细胞的多肽的量范围是大约10ng/mL至大约100μg/mL，优选是大约10μg/mL。多肽与细胞的温育一般在37℃下进行大约6天。与多肽温育后，对细胞测试增殖反应，这可以通过本领域技术人员公知的方法来评价，例如将细胞暴露给放射标记的胸苷的脉冲并且测定标记进入细胞DNA的掺入。一般情况下，产生增殖至少比背景(即对于没有多肽的细胞培养所发现的增殖)增加三倍的多肽被认为能诱导增殖。
多肽刺激细胞中干扰素-γ和/或白细胞介素-12产生的能力通过用多肽接触细胞并且测定细胞的干扰素-γ和/或白细胞介素-12产生的水平来评价。一般情况下，足以评价大约105个细胞的多肽的量范围是大约10ng/mL至大约100μg/mL，优选是大约10μg/mL。多肽可以，但不是必须，固定在固体载体上，所述载体是例如小球或者生物可降解微球体，例如美国专利Nos.4897268和5075109中描述的那些。多肽与细胞的温育一般在37℃下进行大约6天。与多肽温育后，对细胞分析干扰素-γ和/或白细胞介素-12(或者其一种或多种亚单位)，这可以通过本领域技术人员公知的方法，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)，或者在IL-12P70亚单位情况下，例如测定T细胞增殖的试验生物测试来评价。一般情况下，导致每毫升培养上清液产生至少50pg干扰素-γ(每毫升含有104-105个T细胞)的多肽被认为能刺激干扰素-γ的产生。对于每105巨噬细胞或B细胞(或者每3×105PBMC)刺激产生至少10pg/mL IL-12P70亚单位，和/或至少100pg/mL IL-12P70亚单位的多肽被认为能刺激IL-12的产生。
一般情况下，免疫原性抗原是刺激来自至少大约25％结核分枝杆菌免疫个体的T细胞，NK细胞，B细胞和/或巨噬细胞中增殖和/或细胞因子产生(即干扰素-γ和/或白细胞介素-12产生)的那些抗原。这些免疫原性抗原中，具有优越治疗性能的多肽可以以上述测试中反应的大小为基础和以发现反应的个体的百分比为基础加以区分。另外，具有优越治疗性能的抗原体外不刺激来自多于大约25％的没有结核分枝杆菌免疫的个体的细胞中的增殖和/或细胞因子产生，从而消除了对于结核分枝杆菌应答性细胞不是特异性的应答。在来自结核分枝杆菌免疫个体的高百分比T细胞，NK细胞，B细胞和/或巨噬细胞制剂中诱导应答(带有来自其它个体的制剂中的少量应答)的那些抗原具有优越治疗性能。
具有优越治疗性能的抗原也可以以其在试验动物中，当作为疫苗给予时，减小结核分枝杆菌感染的严重程度的能力为基础来鉴定。对试验动物使用的合适的疫苗制剂在下面详细描述。可以以试验感染后提供至少大约50％细菌数目的减少和/或至少大约40％死亡率的降低的抗原能力为基础测定效力。合适的试验动物包括小鼠，豚鼠和灵长类。
具有优越治疗性能的抗原一般可以以对患有活性结核病的个体进行的皮内皮试中具有，在对没有感染结核分枝杆菌的个体进行的试验中不具有诱发反应的能力为基础来鉴定。皮试一般可以根据下文所述进行，至少5mm硬结的反应认为是阳性的。
这里所描述的抗原的免疫原性部分可以用已知的方法制备和鉴定，例如总结于Paul，基础免疫学(Fundamental Immunology)，第三版，Raven出版，1993，pp.243-247和其中引用的参考文献中的那些技术。这样的技术包括对天然抗原的多肽部分筛选免疫原性性质。这里所描述的代表性增殖和细胞因子产生测定一般可以在这些筛选中使用。多肽的免疫原性部分是在这样的代表性测试中产生基本上类似于全长抗原产生的免疫应答的免疫应答(例如增殖，干扰素-γ和/或白细胞介素-12产生)的部分。换句话说，抗原的免疫原性部分可以产生至少大约20％，优选大约100％的在这里所描述的模型增殖试验中全长抗原诱导的增殖。免疫原性部分也可以，或者，刺激至少大约20％，优选大约100％的在这里所描述的模型试验中全长抗原诱导的干扰素-γ和/或白细胞介素-12产生。
结核分枝杆菌抗原的部分和其它变体可以通过合成或重组方法产生。具有少于大约100个氨基酸，并且一般少于大约50个氨基酸的合成的多肽可以用本领域技术人员公知的技术产生。例如这样的多肽可以用任何商业上可得的固相技术，例如其中氨基酸被顺序加入来产生增长的氨基酸链的Merrifield固相合成方法来合成。参见Merrifield，J.Am.Chem.Soc.852149-2146，1963。自动合成多肽的设备从供应商例如Applied BioSystems，Inc.，Foster City，CA可以购得，并且可以根据生产商的说明来操作。天然抗原的变体一般可以用标准诱变技术例如寡核苷酸指导的位点特异性诱变来制备。也可以用允许制备截短的多肽的标准技术去除DNA序列的片段。
包含天然抗原的部分和/或变体的重组多肽可以容易地用本领域技术人员公知的多种技术从编码该肽的DNA序列来制备。例如来自将重组蛋白分泌到培养基中的合适的宿主/载体系统的上清液可以首先用商业可得的过滤器浓缩。浓缩后，可以将浓缩液应用于合适的纯化基质，例如亲和基质或者离子交换树脂。最后，一个或多个反相HPLC步骤可以用来进一步纯化重组蛋白质。
可以使用本领域技术人员公知的任何各种各样的表达载体来表达本发明重组多肽。表达可以在用用包含编码重组多肽的DNA分子的表达载体转化或转染的任何合适的宿主细胞中实现。合适的宿主细胞包括原核细胞，酵母和较高级真核细胞。优选地，使用的宿主细胞是大肠杆菌，酵母或者哺乳动物细胞系例如COS或CHO。以该方法表达的DNA序列可以编码天然存在的抗原，天然存在抗原的部分或者其其它变体。
一般情况下，不考虑制备方法，这里所公开的多肽以基本上纯的方式制备。优选地，多肽至少大约80％纯，更优选至少大约90％纯和最优选至少大约99％纯。在下面所描述的一些优选的实施方案中，基本上纯的多肽掺入到在这里所公开的一种或多种方法中使用的药物组合物或疫苗中。
在一些具体的实施方案中，本发明公开了包含至少具有下面N-末端序列之一的可溶性结核分枝杆菌抗原，或者只有保守性替换和/或修饰不同的其变体的免疫原性部分的多肽(a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu；(SEQ ID No.120)(b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser；(SEQ ID No.121)(c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg；(SEQ ID No.122)(d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro；(SEQ ID No.123)(e) Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val；(SEQ ID No.124)(f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro；(SEQ IDNo.125)(g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser；(SEQ ID No.126)(h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly；(SEQ ID No.127)(i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn；(SEQ ID No.128)(j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser；(SEQ ID No.134)(k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp；(SEQ ID No.135)or(l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly；(SEQ ID No.136)其中Xaa可以是任何氨基酸，优选半胱氨酸残基。编码鉴定为上述(g)的抗原的DNA序列在SEQ ID No.52中提供，SEQ ID No.52编码的多肽在SEQ ID No.53中提供。编码鉴定为上述(a)的抗原的DNA序列在SEQ ID No.101中提供，其推导的氨基酸序列在SEQ ID No.102中提供。相应于上述抗原(d)的DNA序列在SEQ ID No.24中提供，相应于上述抗原(c)的DNA序列在SEQ ID No.25中提供和相应于上述抗原(i)的DNA序列在SEQ ID No.99中提供；其推导的氨基酸序列在SEQ IDNo.100中提供。
在进一步具体的实施方案中，本发明公开了包含至少具有下面N-末端序列之一的结核分枝杆菌抗原，或者只有保守性替换和/或修饰不同的其变体的免疫原性部分的多肽(m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID No 137)or(n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe；(SEQ ID No.129)其中Xaa可以是任何氨基酸，优选半胱氨酸残基。
在其它具体实施方案中，本发明公开了包含至少包括下面序列编码的一个或多个氨基酸序列的可溶性结核分枝杆菌抗原(或者这样的抗原的变体)的免疫原性部分的多肽(a)SEQ ID Nos.1，2，4-10，13-25和52的DNA序列；(b)这样的DNA序列的补体，或者(c)与(a)或(b)中的序列基本上同源的DNA序列。
在又一个具体实施方案中，本发明公开了包含至少包括下面序列编码的一个或多个氨基酸序列的可能是可溶性的或者可能是不可溶性的结核分枝杆菌抗原(或者这样的抗原的变体)的免疫原性部分的多肽(a)SEQ ID Nos.26-51，138，139，163-183和201的DNA序列；(b)这样的DNA序列的互补序列，或者(c)与(a)或(b)中的序列基本上同源的DNA序列。
在上面所讨论的具体的实施方案中，结核分枝杆菌抗原包括基本上与这里所具体引述的一个或多个DNA序列同源的DNA序列编码的变体。“基本上同源”，如在这里所使用的，指在中等严格条件下能杂交的DNA序列。合适的中等严格条件包括在5X SSC，0.5％SDS，1.0mMEDTA(pH8，0)溶液中预先冲洗；在50℃-65℃，5X SSC中杂交过夜，或者在杂交-物种(cross-species)同源情况下在45℃，0.5X SSC；接着每次用含有0.1％SDS的2X，0.5X和0.2X SSC在65℃冲洗20分钟，冲洗两次。这样的杂交DNA序列也在本发明范围内，这是由于编码简并性而编码杂交DNA序列编码的免疫原性多肽的核苷酸序列。
在相关的方面，本发明提供包含第一和第二本发明多肽或者本发明多肽和已知的结核分枝杆菌抗原的融合蛋白质以及这样的融合蛋白的变体，其中所述已知的结核分枝杆菌抗原是例如Andersen和Hansen，Infect.Immun.572481-2488，1989，中描述的38kD抗原，(基因库登记号No.M30046)或ESAT-6(SEQ ID Nos.103和104)。本发明融合蛋白也可以在第一和第二多肽之间包括接头肽。
编码本发明融合蛋白的DNA序列是用已知的重组DNA技术将编码第一和第二多肽的分开的DNA序列装配到合适的表达载体中来构建的。有或者没有肽接头情况下，编码第一多肽的DNA序列的3′末端连接于编码第二多肽的DNA序列的5′末端，使得序列的读框处于允许将两个DNA序列mRNA翻译成保留第一和第二多肽的生物活性的单一的融合蛋白的状态。
肽接头序列可以用来以与保证各个多肽折叠成其二级和三级结构的距离分开第一和第二多肽。这样的肽接头序列用本领域公知的标准技术插入到融合蛋白中。合适的肽接头序列可以以下面因素为基础来选择(1)其采用柔性伸展构象的能力；(2)其不能形成与第一和第二多肽上的功能表位相互作用的二级结构；和(3)没有可能与多肽功能表位反应的疏水的或带电荷的残基。优选的肽接头序列包含Gly，Asn和Ser残基。其它接近中性的氨基酸，例如Thr和Ala，也可以在接头序列中使用。可以有用地用作接头的氨基酸序列包括Maratea等，基因(Gene)4039-46，1985；Murphy等，美国国家科学院院刊(Pro.Natl.Acad.Sci.USA)838258-8262，1986；美国专利号4935233和美国专利号4751180中公开的那些序列。接头序列长度可以是大约1至大约50个氨基酸。当第一和第二多肽具有可以用来分开功能区和防止空间干扰的非基本N-末端氨基酸区时不需要这些肽序列。
连接的DNA序列可以操作连接于合适的转录或翻译调节元件。对DNA表达起作用的调节元件只位于编码第一多肽的DNA序列的5′末端。类似地终止翻译，并且转录终止信号所需终止密码子只是存在于编码第二多肽的DNA序列的3′末端。
另一方面，本发明提供用一种或多种上述多肽或融合蛋白(或者编码这样的多肽的DNA分子)来诱导患者抗结核病的保护免疫性的方法。如这里所使用的，“患者”指所有温血动物，优选人。患者可以是患病的，或者可以是没有可查出的疾病和/或感染。换句话说，可以诱发保护免疫性来预防或治疗结核病。
在该方面，多肽，融合蛋白或DNA分子一般存在于药物组合物和/或疫苗中。药物组合物可以含有一种或多种多肽，这些多肽各自可以包含一种或多种上述序列(或者其变体)，和生理可接受载体。疫苗可以含有一种或多种上述多肽和非特异性免疫应答增强剂，例如佐剂或脂质体(多肽掺入到其中)。这样的药物组合物和疫苗还可以含有其它结核分枝杆菌抗原，或者掺入到组合多肽中或者存在于分开的多肽中。
或者，疫苗可以含有编码如上所述的一种或多种多肽的DNA，使得原位产生多肽。在这样的疫苗中，DNA可以存在于本领域技术人员公知的任何各种各样的送递系统中，包括核酸表达系统，细菌和病毒表达系统。合适的核酸表达系统包含用于在患者中表达的必需的DNA序列(例如合适的启动子和终止信号)。细菌送递系统包括给予在其细胞表面表达多肽的免疫原性部分的细菌(例如Bacillus-Calmette-Guerrin)。在优选的实施方案中，可以用病毒表达系统(例如牛痘或其它痘病毒。反录病毒或腺病毒)引入DNA，其可以包括使用非病原性的(缺损的)，复制病毒。将DNA插入到这样的表达载体中的技术是本领域技术人员公知的。DNA可以是“裸露的”，如例如Ulmer等，科学2591745-1749，1993和Cohen，科学2591691-1692，1993综述中所描述的。通过将DNA包被到充分送递到细胞中的生物可降解珠上可以提高裸露的DNA的摄入。
在相关的方面，上面所描述的DNA疫苗可以与本发明多肽或者已知的结核分枝杆菌抗原例如上述38kD抗原同时给予或依次给予。例如，如上所述，或者“裸露”或者在送递系统中给予编码本发明多肽的DNA，可以之后给予抗原，为了增强疫苗保护性免疫效果。
给予途径和频率以及剂量可以随着个体与个体而不同，并且可以与常规在使用BCG的免疫接种中使用的那些平行使用。一般情况下，药物组合物和疫苗可以通过注射(例如皮内，肌内，静脉内或皮下)，鼻内(例如通过吸入)或者口服给予。可以以1至3剂给予1-36星期周期。优选地，给予3剂，以3-4个月的间隔，并且此后可以周期性给予加强接种。对于各患者改变方案是合适的。当如上所述给予时，合适的剂量是能在免疫的患者中产生足以保护患者至少1-2年不感染结核分枝杆菌的免疫应答的多肽或DNA的量。一般情况下，剂量中存在的多肽的量(或者剂量中通过DNA原位产生的的量)范围是每千克宿主大约1pg至大约100mg，一般是大约10pg至大约1mg，优选自大约100pg至大约1μg。合适的剂量规格将随着患者的体重而不同，但是一般范围是大约0.1mL至大约5mL。
尽管本发明药物组合物中可以使用本领域技术人员公知的任何合适的载体，但是载体类型将取决于给药方式而变化。对于肠胃外给药，例如皮下注射，载体优选含有水，盐水，醇，脂肪，蜡或者缓冲液。对于口服给药，可以使用任何上述载体或固体载体，例如甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，滑石，纤维素，葡萄糖，蔗糖和碳酸镁。生物可降解微球体(例如polylactic galactide)也可以用作本发明药物组合物的载体。合适的生物可降解微球体例如公开于美国专利号4897268和5075109。
本发明疫苗中可以使用任何各种各样的佐剂来非特异性增强免疫应答。大多数佐剂含有设计来保护抗原不快速分解代谢的物质，例如氢氧化铝或者矿物油，和免疫应答的非特异性刺激剂，例如脂质A，Bortadella pertussis，或结核分枝杆菌。合适的佐剂是商业上可购得的，例如弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂(Difco Laboratories)和默克佐剂65(Merk and Company，Inc.，Rahway，NJ)。其它合适的佐剂包括明矾，生物可降解微球体，一磷酰基脂质A和quilA。
另一方面，本发明提供使用上述一种或多种多肽用皮试诊断结核病的方法。如这里所使用的，“皮试”是直接对患者进行的测试，其中皮内注射上述一种或多种多肽之后测定延迟型超敏性(DTH)反应(例如肿胀，变红或皮炎)。这样的注射可以使用足以使多肽与患者皮细胞接触的任何合适的装置例如结核菌素注射器或1mL注射器来实现。优选地，注射后48小时，更优选48-72小时，检查反应。
DTH反应是细胞介导的免疫应答，事先暴露给试验抗原(即使用的多肽的免疫原性部分，或者其变体)的患者，DTH反应较大。反应可以用尺子目测。一般情况下，直径大于大约0.5cm，优选直径大于大约1.0cm的反应是阳性反应，表明有结核病感染，其可以表现为活性的疾病或者不表现为活性疾病。
本发明多肽优选配制成皮试中使用的，含有上述多肽和生理可接受载体的药物组合物。这样的组合物一般在0.1mL体积中含有范围是大约1μg至大约100μg，优选大约10μg至大约50μg量的一种或多种上述多肽。优选地，在这样的药物组合物中使用的载体是有合适的防腐剂例如苯酚和/或Tween80TM的盐溶液。
在优选的实施方案中，皮试中使用的多肽有足够大小，使得在注射点滞留反应周期的时间。一般情况下，长度至少9个氨基酸的多肽是足够的。多肽还优选在注射的小时中被巨噬细胞分解以呈递给T-细胞。这样的多肽可以含有一些重复的一种或多种上述序列和/或其它免疫原性或非免疫原性序列。
通过详细说明提供下面的实施例，但是不是限制本发明。
实施例实施例1来自结核分枝杆菌培养物滤液的多肽的纯化和表征该实施例详细说明从培养物滤液制备结核分枝杆菌可溶性多肽。除非另有说明，下面的实施例中的所有百分比是重量体积比。
结核分枝杆菌(H37Ra，ATCC No.25177，或者H37Rv，ATCCNo.25618之一)在灭菌GAS培养基中在37℃下培养14天。然后通过0.45μ过滤器将培养基真空过滤(去除大块细胞)到灭菌2.5L瓶中。接着通过0.2μ过滤器将培养基过滤到灭菌4L瓶中，并且向培养滤液中加入NaN3至0.04％浓度。然后将瓶置于4℃冷室中。
通过将滤液置于高压灭菌的12L储存器中并且将滤液加入到用乙醇冲洗过并且包含10000kDa MWCO膜的400mL Amicon搅拌池中来浓缩培养滤液。使用氮气将压力保持在60psi。该过程将12L体积减少到大约50mL。
用8000kDa MWCO纤维素酯膜用两种不同的碳酸氢铵溶液，将培养滤液透析到0.1％碳酸氢铵中。然后通过商业上可得的BCA测试(Pierce，Rockford，IL)测定蛋白质浓度。
然后冻干透析的培养滤液，多肽重新悬浮于蒸馏水。多肽对0.01mM1，3-双[三(羟基甲基)-甲基氨基]丙烷，pH 7.5(Bis-Tris丙烷缓冲液)，阴离子交换色谱的初始条件，透析。在0.01mM Bis-Tris丙烷缓冲液pH7.5中平衡的POROS 146 II Q/M阴离子交换柱4.6mm×100mm(Perseptive BioSystems，Framingham，MA)上使用凝胶大量色谱进行分级分离。在上述缓冲系统中用线性0-0.5M NaCl梯度洗脱多肽。在波长220nm下监测柱洗脱液。
用蒸馏水透析从离子交换柱上洗脱出的多肽集合液并冻干。将得到的物质溶解于0.1％三氟乙酸(TFA)pH1.9水溶液中，并在Delta-PakC18柱子(Waters，Milford，MA)300埃孔度，5微米颗粒度(3.9×150mm)上纯化多肽。用线性梯度0-60％稀释缓冲液(0.1％TFA的乙腈溶液)从柱子上洗脱多肽。流速是0.75mL/分钟，并且在214nm监测HPLC洗脱液。收集含有洗脱出的多肽的级分，使各样品的纯度最大。得到大约200纯化的多肽。
然后对纯化的多肽筛选在PBMC制剂中诱导T-细胞增殖的能力。来自已知PPD皮试阳性并且其T-细胞表现出应答PPD而增殖的供者的PBMCs和来自MTB的粗可溶性蛋白质在含有补充有10％集合的人血清和50μg/mL庆大霉素的RPMI 1640培养基中培养。加入双份纯化的多肽，浓度0.5-10μg/mL。在96-孔圆底平板中200μL体积培养6天后，从每个孔中取出50μL培养基测定IFN-γ水平，如下所述。然后用1μ Ci/孔含氚胸苷对平板脉冲又18分钟，收获并且用气体闪烁计数器测定摄取的氚。导致两个重复样品中增殖比在单独培养基中培养的细胞所观察到的增殖大三倍的级分认为是阳性的。
IFN-γ用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定。用PBS中抗人IFN-γ的小鼠单克隆抗体(Pharmingen，San Diego，CA)在室温下包被ELISA板4小时。然后室温下含有5％(W/V)脱脂奶粉的PBS将孔封闭1小时。然后将平板在PBS/0.2％TWEEN-20中冲洗6次，并且ELISA平板中在培养基中稀释1∶2的样品在室温下温育过夜。再次冲洗平板，并且向各孔中加入在PBS/10％正常山羊血清中稀释1∶3000倍的多克隆兔抗人IFN-γ血清。之后，平板在室温下温育2小时，冲洗，并且以在PBS/5％脱脂奶粉中稀释1∶2000倍加入辣根过氧化物酶-偶联的抗-兔IgG(SigmaChemical So.，St.Louis，MO)。室温下又温育2小时后冲洗平板并且加入TMB基质。20分钟后用1N硫酸终止反应。用570nm作为参照波长在450nm测定光密度。两个重复样品给出的OD比来自单独培养基培养的细胞的平均OD大两倍加3标准偏差的级分认为是阳性的。
对于测序，将多肽各个干燥置于BiobreneTM(Perkin Elmer/AppliedBioSystems Division，Foster City，CA)处理过的玻璃纤维过滤器。带有多肽的过滤器载到Perkin Elmer/Applied BioSystems Division Procise 492蛋白质测序仪上。用传统的埃德曼化学对多肽从氨基末端测序。通过比较PTH氨基酸衍生物的滞留时间与合适的PTH衍生物标准对每种多肽测定氨基酸序列。
用上述方法，分离了具有下面N-末端序列的抗原(a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Xaa-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu；(SEQ ID No.54)(b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser；(SEQ ID No.55)(c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg；(SEQ ID No.56)(d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro；(SEQ ID No.57)(e) Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val；(SEQ ID No.58)(f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro；(SEQ IDNo.59)(g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Pro-Ala；(SEQ ID No. 60)和(h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly；(SEQ ID No.61)其中Xaa可以是任何氨基酸。
除上述方法外，用微内径HPLC纯化步骤分离另外的抗原。具体地，20μL含有来自先前描述的色谱纯化步骤的抗原的混合物的级分在Perkin Elmer/Applied BioSystems Division Model 172 HPLC中，7微米孔度，柱子规格1mm×100mm的Aquapore C18柱子(PerkinElmer/Applied BioSystems Division，Foster City，CA)上纯化。用线性梯度的1％/分钟的乙腈(含有0.05％TFA)的水溶液(0.05％TFA)以80μL/分钟流速从柱子上洗脱级分。在250nm监测洗脱液。将源级分分为4个主要峰加其它较小组分，得到多肽，其表现出具有12.054Kd(通过质谱)分子量和下面的N-末端序列(i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Gln-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Asn-Leu-Ala-Asp-Pro-Asp-Val-Ser-Phe-Ala-Asp(SEQ ID No.62).该多肽使用上述测试表现出在PBMC制剂中诱导增殖和IFN-γ产生。
另外的可溶性抗原如下所述从结核分枝杆菌培养滤液分离。如上所述制备结核分枝杆菌培养滤液。对Bis-Tris丙烷缓冲液，pH5.5透析后，用阴离子交换色谱在于Bis-Tris丙烷缓冲液，pH5.5中平衡过的PorosQE柱子4.6×100mm(Perseptive Biosystems)上进行分级分离。用上述缓冲系统中线性0-1.5M NaCl梯度以10mL/分钟的流速洗脱多肽。在214nm波长监测柱洗出液。
集合从离子交换柱洗脱出的级分，并且用Poros R2柱4.6×100mm(Perseptive Biosystems)进行反相色谱。用线性梯度0-100％乙腈(0.1％TFA)以5mL/分钟流速从柱子洗脱多肽。在214nm监测洗脱液。
冻干含有洗出的多肽的级分并重新悬浮于80μ含水的0.1％TFA中，进一步使在Vydac C4柱4.6×150mm(Western Analytical，Temecula，CA)用线性梯度0-100％乙腈(0.1％TFA)以2mL/分钟流速进行反相色谱。在214nm监测洗脱液。
具有生物活性的级分分成一个主峰加其它较小组分。该峰在PVDF膜上的蛋白质印迹给出3个主带，分子量是14Kd，20Kd和26Kd。测定这些多肽，它们分别具有下面的N-末端序列(j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser；(SEQ ID No.134)(k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp；(SEQ ID No.135)和(l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly；(SEQ ID No.136)，其中Xaa可以是任何氨基酸。
用上述测试，这些肽表现出在PBMC制剂中诱导增殖和IFN-γ产生。图1A和B分别给出用来自第一和第二供者的PBMC制剂的这样的测试结果。
通过32P端标记的相应于N-末端序列并且包含结核分枝杆菌密码子偏倚的简并的寡核苷酸筛选基因组结核分枝杆菌文库获得编码上文标示为(a)，(c)，(d)和(g)的抗原的DNA序列。筛选用具有SEQ IDNo.101提供的序列的克隆鉴定的相应于上述抗原(a)的探针进行。SEQID No.102提供了SEQ ID No.101编码的多肽。筛选用具有SEQ ID No.52提供的序列的克隆鉴定的相应于上述抗原(g)的探针进行。SEQ ID No.53提供了SEQ ID No.52编码的多肽。筛选用具有SEQ ID No.24提供的序列的克隆鉴定的相应于上述抗原(d)的探针进行，以及筛选用具有SEQID No.25提供的序列的克隆鉴定的相应于上述抗原(c)的探针进行用DNA STAR系统将上述氨基酸序列与基因库中已知的氨基酸序列相比较。检索的数据库包括173000种蛋白质并且是Swiss，PIR数据库和翻译的蛋白质序列的组合(87版)。没有检查出与抗原(a)-(h)和(l)的氨基酸序列明显同源性的。
发现抗原(i)的氨基酸序列与来自麻疯分枝杆菌(M.leprae)的序列同源。全长麻疯分枝杆菌用从GENEBANK得到的序列从基因组DNA扩增。然后用该序列筛选如下面实施例2所述的结核分枝杆菌文库，并且得到结核分枝杆菌同源物的全长拷贝(SEQ ID No.99)。
发现抗原(j)的氨基酸序列与从DNA序列翻译的已知的结核分枝杆菌蛋白质同源。据发明人所知，先前没有公开过该蛋白质具有T-细胞刺激活性。发现抗原(k)的氨基酸与来自麻疯分枝杆菌的序列相关。
在用3名PPD阳性供者的上述增殖和IFN-γ测试中，表1给出了上面提供的代表性抗原的结果
表1PBMC增殖和IFN-γ测试的结果

在表1中，给出2和4之间的刺激指数(SI)(与单独的培养基中培养的细胞相比)的应答分数为+，浓度是1μg或更小时SI是4-8或2-4分数为++，SI大于8分数为+++。在增殖和IFN-γ测试中，对于一名供者发现序列(i)的抗原具有高SI(+++)，而对于另两名供者给出较低SI(++和+)。这些结果表明这些抗原能诱导增殖和/或干扰素-γ产生。
实施例2用患者血清分离结核分枝杆菌抗原该实施例详细说明通过用来自结核分枝杆菌感染的个体的血清进行筛选来从结核分枝杆菌裂解液中分离抗原。
向2％NP40溶液中加入干燥的结核分枝杆菌H37a(DifcoLaboratories)，并且交替均化和超声三次。得到的悬浮液在微离心试管中以13000rpm离心并且使上清液通过0.2微米针筒式滤器。滤液与Macro Prep DEAE小球(BioRad，Hercules)结合。小球用20mM Tris pH7.5充分冲洗，并且用1M氯化钠洗脱结合的蛋白。用10mM Tris pH7.5将1M氯化钠洗脱液透析过夜。透析的溶液用0.05mg/mLDNase和RNase在室温下处理30分钟，然后用α-D-甘露糖苷酶，0.5U/mg，pH4.5在室温下处理透析的溶液。再回到pH7.5后材料经Bio Scale-Q-20柱子(BioRad)通过FPLC分级分离。级分分为9个集合，在Centriprep10(Amicon，Beverley，MA)中离心后用来自对本发明其它抗原没有免疫反应性的结核分枝杆菌感染的患者的血清集合液通过蛋白质印迹筛选血清学活性。
最具有反应性的级分进行SDS-PAGE。并且转移到PVDF。切下大约85Kd的带，得到下面的序列(m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID No.137)，其中Xaa可以是任何氨基酸。
将该序列与如上所述的基因库中的序列相比较，表明与已知的序列没有明显的同源性。
通过用相应于SEQ ID NO137的标记的简并的寡核苷酸筛选基因组结核分枝杆菌Erdman菌株文库获得编码上文标示为(m)的DNA序列。经鉴定，该克隆具有SEQ ID NO203提供的DNA序列。发现该序列编码SEQ ID NO204提供的氨基酸序列。将这些序列与基因库的序列相比较表明与先前在结核分枝杆菌和牛分枝杆菌(M.bovis)。
实施例3编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列的制备该实施例详细说明通过用从用结核分枝杆菌感染的患者获得的血清，或者用抗可溶性结核分枝杆菌抗原的抗血清筛选结核分枝杆菌表达文库来制备编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列。A.用抗结核分枝杆菌上清液的兔抗血清制备结核分枝杆菌可溶性抗原从结核分枝杆菌菌株H37Ra分离基因组DNA。随机剪切DNA并用来构建使用λZAP表达系统(Stratagene，La Jolla，CA)D表达文库。通过用结核分枝杆菌培养基的浓缩上清液免疫兔而产生抗结核分枝杆菌菌株H37Ra，H37Rv和Erdman的分泌性蛋白的兔抗血清。具体地，用含有10μg胞壁酰二肽(Calbiochem，La Jolla，CA)和1mL弗氏不完全佐剂的共2mL体积中200μg蛋白抗原皮下第一次免疫兔。4星期后，用弗氏不完全佐剂中100μg抗原皮下加强免疫。最后，4星期后用50μg蛋白抗原静脉内免疫。如Sambrook等，分子克隆实验室手册，冷泉港实验室，冷泉港，NY，1989所述用抗血清筛选表达文库。纯化噬菌体噬菌斑表达免疫反应性抗原。从噬菌斑中回收噬菌粒并推断出结核分枝杆菌的核苷酸序列。
纯化32个克隆，25个代表先前没有在人结核分枝杆菌中鉴定的序列。表达重组抗原，并且在如实施例所述的免疫学分析中使用纯化的抗原。蛋白质通过IPTG诱导并通过凝胶洗脱纯化，如Skeiky等，J.Exp.Med.1811527-1537，1995所述。SEQ ID Nos1-25提供了在该筛选中鉴定的DNA分子的代表性序列。相应的预示的氨基酸序列在SEQ IDNos63-87中给出。
用上述数据库将这些序列与基因库中的已知的序列相比较，发现后文中指定为TbRA2A，TbRA16，TbRA18和TbRA29(SEQ ID Nos.76，68，70，75)的克隆表现出与先前在麻疯分枝杆菌中鉴定的但是没有在结核分枝杆菌中鉴定的序列的某种程度上的同源性。TbRA11，TbRA26，TbRA28和TbDPEP(SEQ ID Nos.65，73，74，53)先前在结核分枝杆菌中鉴定。对于TbRA1，TbRA3，TbRA4，TbRA9，TbRA10，TbRA13，TbRA17，TbRa19，TbRA29，TbRA32，TbRA36和重叠克隆TbRA35和TbRA12(SEQ ID Nos.63，77，81，82，64，67，69，71，75，78，80，79，66)没有发现显著的同源性。克隆TbRa24与TbRa29重叠。
使用来自几个不同的结核分枝杆菌免疫的患者的T-细胞制剂对代表性重组抗原进行的PBMC增殖和干扰素-γ测定的结果分别在表2和3中给出。
表2对代表性可溶性抗原的PBMC增殖的结果

＝not tested
表3对于代表性可溶性抗原的OBMC干扰素-γ产生的结果

在表2和3中给出1.2和2(与单独在培养基中培养的细胞相比)之间的刺激指数(SI)的应答评分为±，2-4的SI评分为+，1μg或更小的浓度时4-8或2-4的SI评分为++，大于8的SI评分为+++。另外，附图中说明了浓度对上述抗原中的两种的增殖和干扰素-γ产生的影响。对于增殖和干扰素-γ产生两者，TbRa3评分为++和TbRa9为+。
这些结果表明这些可溶性抗原可以在来自结核分枝杆菌免疫的个体的T-细胞中诱导增殖和/或干扰素-γ产生。B.用来自患有肺或胸膜结核病患者的血清鉴定编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列用来自患有活性结核病的患者的血清的集合液筛选上述基因组DNA文库，和另外的H37Rv文库。为了制备H37Rv文库分离结核分枝杆菌菌株H37Rv基因组DNA，使部分Sau3A消化并用来用λZap表达载体系统(Stratagene，La Jolla，Ca)构建表达文库。表达筛选中使用三份不同的血清集合液，每份含有从三名患有活性肺或胸膜疾病的个体获得的血清。集合液标示为TbL，TbM和TbH，指在ELISA和免疫印迹甲酸盐中与H37Ra裂解液的相关反应性(即TbL＝低反应性，TbM＝中反应性和TbH＝高反应性)。也使用了来自患有活性肺结核的7名患者的第4个血清集合液。所有的血清没有与重组体38kD结核分枝杆菌H37Ra磷酸酶-结合蛋白质的提高的反应性。
所有的集合液用大肠杆菌预吸附，并且用来筛选H37Ra和H37Rv表达文库，如Sambrook等，分子克隆实验室手册.冷泉港实验室，冷泉港，NY，1989所述。纯化噬菌体噬菌斑表达免疫反应性抗原。从噬菌斑回收噬粒，并推导出结核分枝杆菌克隆的核苷酸序列。
纯化32个克隆，其中31个代表先前没有在人结核分枝杆菌中鉴定的序列。鉴定的DNA分子的代表性序列在SEQ ID Nos26-51和105中给出。其中TbH-8-2(SEQ ID No.105)是TbH-8的第二级克隆，TbH-4(SEQ ID No.43)和TbH-4-FWD(SEQ ID No.44)是来自相同克隆的不邻接序列。下文中鉴定为Tb38-1，TbH-4，TbH-8，TbH-9和TbH-12的抗原的氨基酸序列见SEQ ID Nos.88-92。使用上文鉴定的数据库将这些序列与基因库中的已知的序列相比较，表明与TbH-4，TbH-8，TbH-9和TbM-3没有明显的同源性，但是发现与TbH-9有弱的同源性。发现TbH-12是先前在M.paratuberculosis(Acc.No.S28515)鉴定的34kD抗原蛋白质是同系物。发现Tb38-1位于先前在牛分枝杆菌(Acc.No.U34848)和结核分枝杆菌中鉴定的抗原ESAT-6(Sorensen等，Infec.Immun.631710-1717，1995)的可读框的34碱基对上游。
用来自两者都是从H37Ra文库中分离的Tb38-1和TbH-9的探针鉴定H37Rv中的克隆。Tb38-1与Tb38-1F2，Tb38-1F3，Tb38-1F5和Tb38-1F6(SEQ ID Nos112，113，116，118和119)杂交。(SEQ IDNos112和113是来自克隆Tb38-1F2的不邻接序列) Tb38-1F2中推导出两个可读框；一个相应于Tb37FL(SEQ ID No.114)，第二个，部分序列，可能是Tb38-1的同源物，并且称为Tb38-IN(SEQ ID No.115)。Tb38-1F3推导的氨基酸序列在SEQ ID No.117给出。TbH-9探针鉴定H37Rv文库中三个克隆TbH-9-FL(SEQ ID No.106)，其可能是TbH-9的同源物(H37Ra)，TbH-9-1(SEQ ID No.108)，和TbH-9-4(SEQ ID No.110)，所有的都是与TbH-9高度相关的序列。这三个克隆的推导的氨基酸序列在(SEQ ID Nos107，109和111中给出。
如上所述，进一步筛选结核分枝杆菌基因组DNA文库，结果发现10个另外的反应性克隆，代表7个不同的基因。这些基因中的一个鉴定为上面讨论的38kD抗原，测定一个鉴定为先前表明在结核分枝杆菌中存在的14kD α-结晶热震扰蛋白质，测定第三种鉴定为上述抗原TbH-8。测定的剩下的5个克隆的DNA序列(下文称之为TbH-29，TbH-30，TbH-32和TbH-33)分别在SEQ ID NO138-141中提供，相应的预示的氨基酸序列分别在SEQ ID NO142-145中提供。这些抗原的DNA和氨基酸序列与上述基因库的那些相比较。对于TbH-29的5′末端(其包含反应性可读框)没有发现同源性，但是发现TbH-29的3′末端与结核分枝杆菌粘粒Y227相同。发现TbH-32和TbH-33分别与先前鉴定的结核分枝杆菌插入元件IS110和与结核分枝杆菌粘粒Y50相同。发现与TbH-30没有显著的同源性。
如上文Sambrook所述，用来自该附加的筛选的阳性噬菌粒感染大肠杆菌XL-1BlueMRF′。通过加入IPTG进行重组蛋白质的诱导。以双份使诱导的和没有诱导的裂解液流经SDS-PAGE并且转移到硝基纤维素滤器。滤器和与TbH具有反应性的人结核分枝杆菌血清(1∶200稀释度)和与lacZ的N-末端4Kd部分具有反应性的兔血清(1∶200或1∶250稀释度)反应。血清在室温下温育2小时。通过加入125I-标记的蛋白质A并且接着暴露给膜范围为16小时至11天不同的时间来测定结合的抗体。免疫印迹的结果总结在表4中。
表4人M.tb抗-lacZ抗原 血清 血清TbH-2945Kb 45KbTbH-30没有反应性29KbTbH-3212Kb 12KbTbH-3316Kb 16Kb重组人结核分枝杆菌抗原与人结核分枝杆菌血清和抗-lacZ血清两者的阳性反应表明人结核分枝杆菌血清的反应性指向融合蛋白质。抗原与抗-lacZ血清有反应性而与人结核分枝杆菌血清没有反应性可能是人结核分枝杆菌血清识别构象表位的结果，或者抗原-抗体结合动力学可能是如此，使得在免疫印迹中暴露2小时是不够的。
下面表5A，B和6分别给出对Tb38-1，ESAT-6和其它代表性重组抗原进行的T-细胞测试的结果
表5A代表性抗原的PBMC增殖的结果

<p>这些结果表明本发明结核分枝杆菌抗原和ESAT-6两者都诱导来自结核分枝杆菌免疫的个体的T-细胞中的增殖和/或干扰素-γ产生。据发明人所知，先前没有表明过ESAT-6刺激人免疫应答。
用实施例6描述的方法构建覆盖抗原Tb38-1的氨基酸序列的一系列6个重叠肽。这些肽的序列，下文称之为pep-6分别在SEQ IDNos.93-98中提供。使用这些肽的T-细胞测定的结果在表7和8中给出。这些结果证实该存在，并且帮助确定能诱导来自结核分枝杆菌免疫的个体的T-细胞中的增殖和/或干扰素-γ产生的Tb38-1中T-细胞表位的位置。
表7Tb38-1肽的PBMC增殖的结果

表8Tb38-1肽的干扰素-γ增殖的结果

进行研究测定抗原TbH-9和Tb38-1是否代表细胞蛋白质或者分泌到结核分枝杆菌培养基中。在第一项研究中，使用基本上与实施例3A描述的方法相同的方法产生兔血清抗(A)结核分枝杆菌分泌的蛋白质，(B)已知的分泌重组结核分枝杆菌抗原85b，(C)重组Tb38-1和(D)重组TbH-9。在固定在硝基纤维素膜上的变性凝胶上分离总的结核分枝杆菌裂解液，结核分枝杆菌培养基和重组抗原85b，TbH-9和Tb38-1的浓缩上清液，用上述兔血清探测双份印迹。
使用对照血清(I系列)和抗血清(II系列)抗分泌的蛋白质，重组体85b，重组体Tb38-1和重组体TbH-9的该分析的结果分别见图3A-D，其中泳道标示为1)分子量蛋白质标准；2)5μg结核分枝杆菌裂解液；3)5μg分泌的蛋白质；4)50ng重组体Tb38-1；5)50ng重组体TbH-9；和6)50ng重组体85b。用6个末端组氨酸残基人工改造重组体抗原，因此预期以比天然蛋白质大大约1kD的迁移率迁移。在图3D中，重组体TbH-9缺少全长42kD的大约10kD，因此裂解液泳道中免疫反应性天然TbH-9的大小有明显差别(箭头所示)。这些结果证明Tb38-1和TbH-9是分子内抗原并且不是结核分枝杆菌所活性分泌的。
通过测定TbH-9-特异性人T细胞克隆对重组体TbH-9，分泌性结核分枝杆菌蛋白质和PPD的反应性证明TbH-9是分子内抗原的发现。TbH-9-特异性T细胞克隆(标示为131 TbH-9)从健康PPD-阳性供者的PBMC产生。131 TbH-9对分泌的蛋白，重组体TbH-9和对照结核分枝杆菌抗原，TbRa11的增殖应答通过根据实施例1所述测定的氚化胸苷的摄入来测定。如图4A所示，克隆131TbH-9特异性应答于TbH-9，表明TbH-9不是结核分枝杆菌分泌性蛋白的主要成分。图4B说明从来自健康PPD-阳性供者的PBMC制备的第二TbH-9特异性T克隆(标示为PPD800-10)的IFN-γ的产生，接着用分泌性蛋白质，PPD或重组体TbH-9刺激T细胞克隆。这些结果进一步证实TbH-9不是结核分枝杆菌分泌的。C.用来自患有肺外结核病的患者的血清鉴定编码结核分枝杆菌抗原的DNA系列从结核分枝杆菌Erdman菌株分离基因组DNA，随机剪切，并用来用λZAP表达系统(Stratagene，La Jolla，CA)构建表达文库。如上文实施例3B所述，用从患有肺外结核病的个体获得的血清集合液筛选单独的文库，第二抗体是与碱性磷酸酶偶联的山羊抗人IgG+A+M(H+L)。
纯化出18个克隆。发现其中4个克隆(下文称之为XP14，XP24，XP31和XP32)与已知的系列具有一定的相似性。SEQ ID Nos156-158分别提供了XP14，XP24和XP31的测定的DNA序列，XP32的5′和3′DNA序列分别在SEQ ID Nos159和160提供。XP14预示的氨基酸序列在SEQ ID Nos161中提供。发现XP14的反向互补序列编码SEQ IDNos162中提供的氨基酸序列。
将剩余的14个克隆(后文称之为XP1-XP6，XP17-XP19，XP22，XP25，XP27，XP30和XP36)的序列与上述基因库中的序列相比较，表明除了发现与已知的结核分枝杆菌粘粒具有一定的同源性的XP2和XP6的3′末端外都没有同源性。SEQ ID Nos163和164分别提供了XP27和XP34的DNA序列，XP4，XP5，XP17和XP30的5′序列分别在SEQID Nos165-168中给出，XP2，XP3，XP6，XP18，XP19，XP22和XP25的5′和3′序列分别在SEQ ID Nos169和170；173和172；173和174；175和176；177和178；179和180；和181和182中给出。上文公开了发现XP1与TbH4的DNA序列重叠。SEQ ID No.183提供了TbH4-XP1的全长DNA序列。发现该DNA序列包含编码SEQ ID No.184所示氨基酸序列的可读框。发现TbH4-XP1的反向互补序列包含编码SEQ ID No.185所示氨基酸序列的可读框。发现XP36的DNA序列包含编码SEQ ID Nos.186和187所示氨基酸序列的两个可读框，反向互补序列包含编码SEQ ID No.188所示氨基酸序列的可读框。
根据实施例3B所述制备重组体XP2蛋白质，纯化时使用金属离子亲和层析柱。如图8A-B和9A-B详述，使用这里所描述的测定，发现重组体XP1刺激从结核分枝杆菌免疫供者分离的T细胞中细胞增殖和IFN-γ产生。D.用抗结核分枝杆菌分级分离的蛋白质的兔抗-血清制备结核分枝杆菌可溶性抗原根据上文实施例2所述制备结核分枝杆菌裂解液。通过HPLC将得到的材料分级分离，并且用来自表现出极小或者没有与本发明其它抗原的免疫反应性的结核分枝杆菌感染患者的血清集合液通过蛋白质印迹筛选级分的血清学活性。用实施例3A描述的方法产生抗最具有反应性的级分的兔-抗血清。用抗-血清来筛选如上所述制备的结核分枝杆菌Erdman菌株基因组DNA表达文库。纯化表达免疫反应性抗原的噬菌体噬菌斑。从噬斑中回收噬粒，并且测定结核分枝杆菌克隆的核苷酸序列。
纯化10个不同的克隆。其中，发现一个是如上所述的TbRa35，发现一个是先前鉴定的结核分枝杆菌抗原HSP60。剩余的8个克隆中，发现7个(后文称之为RDIF2，RDIF5，RDIF8，RDIF10，RDIF11和RDIF12)具有与先前鉴定的结核分枝杆菌序列一定的相似性。SEQ ID Nos189-193分别提供了RDIF2，RDIF5，RDIF8，RDIF10和RDIF11的测定的DNA序列，相应的预示的氨基酸序列分别在SEQ ID Nos194-198中提供。RDIF12的5′和3′DNA序列分别在SEQ ID Nos199和200中提供。RDIF7的测定的DNA序列和预示的氨基酸序列分别在SEQ ID Nos201和202中提供。分离了另外一个克隆，称之为RDIF6，但是发现与RDIF5相同。
如上所述制备重组体RDIF6，RDIF8，RDIF10和RDIF11。如图8A-B和9A-B所示，发现这些抗原刺激从结核分枝杆菌免疫供者分离的T细胞中细胞增殖和IFN-γ产生。
实施例4来自结核菌素纯化的蛋白质衍生物的多肽的纯化和表征如下从结核菌素纯化的蛋白质衍生物(PPD)分离结核分枝杆菌多肽。
根据所公开的制备带有一些修饰的PPD(Seibert，F.等，结核菌素纯化的蛋白质衍生物，大量标准物的制备和分析，美国结核病综述(TheAmerican Review of Tuberculosis)449-25，1941)。
结核分枝杆菌Rv菌株在滚瓶中合成培养基中在37℃下生长6星期。然后在水蒸气中将含有细菌生长的瓶加热到100℃保持3小时用0.22μ滤器无菌过滤培养基，液相用3kD截留膜浓缩20次。用50％硫酸铵溶液使蛋白质沉淀一次，用用25％硫酸铵溶液沉淀八次。得到的蛋白质(PPD)通过在 Biocad HPLC 系统(Perseptive Biosystems，Framingham，MA)中C18柱(7.8×300mM；Waters，Milford，MA)通过反相液相色谱(RP-HPLC)分级分离。用线性梯度0-100％缓冲液(0.1％TFA乙腈溶液)从柱子中洗脱出级分。流速是10mL/分钟，在214nm和280nm监测洗脱液。
收集6个级分，干燥，并且悬浮于PBS，并且分别在结核分枝杆菌感染的豚鼠中试验诱导延迟型超敏性(DTH)反应。发现一个级分诱导强的DTH反应，接着通过在Perkin Elmer/Applied Biosystems DivisionModel 172HPLC中微内径Vydac C18柱(Cat.No.218TP5115)上的RP-HPLC进一步分级分离。用线性梯度5-100％缓冲液(0.05％TFA乙腈溶液)洗脱出级分。流速是80μL/分钟，在215nm监测洗脱液。收集8个级分，并且测试结核分枝杆菌感染的豚鼠内DTH的诱导作用。发现1个级分诱导大约16mm硬化强的DTH。其它级分没有诱导可监测的DTH。使阳性级分进行SDS-PAGE凝胶电泳，发现包括大约12kD分子量的单一蛋白质泳带。
使用如上所述的Perkin Elmer/Applied Biosystems Division Procise492蛋白质测序仪从氨基末端对后文称之为DPPD的该多肽测序，发现具有SEQ ID No.129所示的N-末端序列。将该序列与上述基因库中的已知的序列相比较表明没有已知的同源性。分离出4个溴化氰片段，发现具有SEQ ID Nos.130-133所示的序列。
根据实施例1所述测定抗原DPPD刺激人PBMC增殖和产生IFN-γ的能力。如图9所示，发现DPPD刺激增殖和诱导大量IFN-γ的产生；比商售PPD诱导的要大。
表9对DPPD的增殖和干扰素-γ测定的结果

实施例5代表性抗原诊断结核病的用途该实施例详细说明皮试中几个代表性多肽诊断结核分枝杆菌感染的有效性。
对个体皮内注射含有0.1μg蛋白质(对于TbH-9和TbRa35)或0.1μg蛋白质(对于TbRa38-1)的100μLPBS或PBS加Tween 20TM。注射后5-7天间测定硬结，5mm或更大的硬结应答认为是阳性的。在试验的20名个体中，2名是PPD是阴性，18名是PPD阳性。在PPD阳性个体中，3名患有活性结核病，3名先前感染过结核病，9名是健康的。在第二项试验中，用如上所述PBS或PBS加Tween 20TM中0.1μg TbRa11对13名PPD阳性个体进行试验。两性研究的结果见表10。
表10用代表性抗原的DTH试验的结果

实施例6合成的多肽的合成在Millipore9050肽合成仪上用FMOC化学用HPTU(六氟磷酸O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基uronium)活化可以合成多肽。Gly-Cys-Gly序列可以与肽的氨基末端连接以提供肽的偶联或标记的方法。可以用下面的裂解混合物进行肽自固相载体上的裂解三氟乙酸∶乙二硫醇∶硫代茴香醚∶水∶苯酚(40∶1∶2∶2∶3)。裂解2小时后，在冷的甲基叔丁基醚中沉淀肽。然后将肽沉积物溶解于含有0.1％三氟乙酸(TFA)的水中，并且在通过C18反相HPLC纯化之前冻干。可以使用梯度水中(含有0.1％TFA)0％-60％乙腈(含有0.1％TFA)来洗脱肽。冻干纯级分后，可以使用电子喷射质谱和通过氨基酸分析来表征肽。
实施例7结核分枝杆菌融合蛋白质的纯化和表征如下制备包含TbRa3，38kD和Tb38-1的融合蛋白。
通过PCR修饰各DNA构建TbRa3，38kD和Tb38-1，以有利于TbRa3-38kD-Tb38-1的融合作用的表达和接下来的融合蛋白。分别使用引物PDM-64和PDM-65(SEQ ID NO146和147)，PDM-57和PDM-58(SEQ ID NO148和149)，和PDM-69和PDM-60(SEQ ID NO150和151)，用TbRa3，38kD和Tb38-1DNA进行PCR。在各种情况下使用10μL10X Pfu缓冲液，2μL 10mMdNTPs，2μL 10μM浓度的各PCR引物，81.5μL水，1.5μL 10X PfuDNA聚合酶(Stratagene，La Jola，CA)和1μL70ng/μL(TbRa3)或者50ng/μL(38kD和Tb38-1)的DNA进行DNA扩增。对于TbRa3，在94℃变性进行2分钟，接着40个周期的96℃15秒和72℃1分钟，和最后72℃4分钟。对于38kD，在96℃变性进行2分钟，接着40个周期的96℃30秒和68℃15秒和72℃3分钟，和最后72℃4分钟。对于Tb38-1，在94℃变性进行2分钟，接着10个周期的96℃30秒，68℃15秒和72℃1.5分钟，30个周期的96℃15秒，64℃15秒和72℃1.5分钟和最后72℃4分钟。
TbRa3PCR片段用NdeI和EcoRI消化，并且使用NdeI和EcoRI位点直接克隆到pT 7∧L2IL1载体。38kDPCR片段用Sse8387I消化，用T4 DNA聚合酶处理制备平端，并且然后用EcoRI消化直接克隆到Stul和EcoRI消化的pT 7∧L2Ra3-1载体。38-1PCR片段用Eco47III和EcoRI消化并且直接亚克隆到用相同的酶消化的pT 7∧L2Ra3/38kD-17。然后用NdeI和EcoRI位点将全部融合物转移到pET28b。通过DNA测序证实融合构建物。
表达构建转化到BLR pLys S E.coli(Novagen，Msdison，WI)，并且在LB肉汤中与卡那霉素(30μg/mL)和氯霉素(34μg/mL)生长过夜。用该培养物(12mL)接种500mL含有相同抗生素的2XYT，并且在0.44OD560用IPGT诱导至1.2mM终浓度。诱导后4小时，收获细菌，并且在20mM Tris(8.0)，100mM氯化钠，0.1％DOC，20μg/mL亮肽素，20mMPMSF中超声，之后于26000Xg离心。得到的吐弃块重新悬浮于8M脲，20mM Tris(8.0)，100mM氯化钠中，并且与结合脯氨酸的镍树脂(Invitrogen，Carlsbad，CA)结合。用上述缓冲液将柱子冲洗几次后用咪唑梯度(50mM，100mM，500mM咪唑加入到8M脲，20mMTris(8.0)，100mM氯化钠中)洗脱。然后含有所感兴趣的蛋白质的洗脱液对10mM Tris(8.0)透析。
得到的融合蛋白的DNA和氨基酸序列分别在SEQ ID NO152和153中提供。
没有铰合部的包含两个抗原TbH-9和Tb38-1的融合蛋白(下文称之为TbH-9-Tb38-1)用类似于上述相似方法制备。TbH-9-Tb38-1融合蛋白的DNA序列在SEQ ID NO156中提供。
应用上述实施例1中描述的方法测定PBMC制剂中融合蛋白TbH-9-Tb38-1诱导T细胞增殖和IFN-γ产生的能力。使用来自三名供者的PBMC一名事先表现出应答TbH-9而不应答Tb38-1(供者131)；一名表现出应答Tb38-1而不应答TbH-9(供者184)；一名表现出应答两种抗原(供者201)。这些研究的结果(图5-7，各自)证明融合蛋白中两种抗原的功能活性。
如下制备包含TbRa3，抗原38kD，Tb38-1和DPEP的融合蛋白。
基本上如上所述通过PCR修饰各DNA构建TbRa3，38kD，Tb38-1，并且克隆到载体中，引物PDM-69(SEQ ID NO150)和PDM-83(SEQ ID NO205)用来扩增Tb38-1A片段。Tb38-1A与Tb38-1的不同在于处于一个编码区的3′末端的DraI位点，所述编码区保持最后的氨基酸完整，同时产生读框中的钝的限制性酶切位点。然后用NdeI和EcoR1位点将TbRa3/38kD/Tb38-1A融合物转移到pET28b。
用引物PDM-84和PDM-85(分别是SEQ ID NO206和207)和1μL 50ng/μL DNA，用DPEP DNA进行PCR。在94℃变性进行2分钟，接着10个周期的96℃15秒，68℃15秒和72℃1.5分钟；30个周期的96℃15秒，64℃15秒和72℃1.5分钟和最后72℃4分钟。用EcoRI和Eco72I消化DPEP PCR片段，并且直接克隆到用DraI和EcoRI消化的pET28Ra3/38kD/38-1A构建。通过DNA测序证明该融合构建是正确的。如上所述制备重组蛋白。SEQ ID NO208和209种分别提供得到的融合蛋白(下文称之为TbF-2)的DNA和氨基酸序列。
用上述方法通过ELISA测定融合蛋白TbF-2与来自结核分枝杆菌感染的患者的血清的反应性。这些研究(表11)的结果证明所有4种抗原功能在融合蛋白中是独立的。
表11TbF-2融合重组体与TB和正常血清的反应性

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本领域技术人员应该理解融合蛋白质中各抗原的顺序可以变化，并且预计有相当的活性，只要每一个表位功能仍然存在。另外，融合蛋白质构建中可以使用包含活性表位的蛋白质的截短形式。
由上述可以理解尽管本发明为了详细说明的目的描述了本发明的具体实施方案，但是不脱离本发明精神和范围可以进行各种各样的修饰。
序列表(1)一般信息(i)申请人Reed，Steven G.
Skeiky，Yasir A.W.
Dillon，Davin C.
Campos-Neto，AntonioHoughton，RaymondVedvick，Thomas S.
Twardzik，Daniel R.
Lodes，Michael J.
(ii)发明题目免疫治疗和诊断结核病的化合物和方法(iii)序列数214(iv)联系地址(A)住址SEED和BERRYLLP(B)街道6300 Columbia Center，701 Fifth Avenue(C)城市Seattle(D)州华盛顿(E)国家美国(F)邮编(ZIP)98104-7092(v)计算机可读形式(A)Floppy盘(B)计算机IBM PC兼容(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软盘Patent In Release#1.0，Version #1.30(vi)当前申请数据(A)申请号(B)申请日01-10-1997(C)分类(viii)代理人/事务所信息(A)名称Maki，David J.
(B)登记号31392(C)参考/记录号210121.411C7(ix)电讯情报(A)电话(206)622-4900(B)电传(206)682-6031(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)长度766个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO1CGAGGCACCG GTAGTTTGAA CCAAACGCAC AATCGACGGG CAAACGAACG GAAGAACACA 60ACCATGAAGA TGGTGAAATC GATCGCCGCA GGTCTGACCG CCGCCGCTGC AATCGGCGCC 120GCTGCGGCCG GTGTGACTTC GATCATGGCT GGCGGCCCGG TCGTATACCA GATGCAGCCG 180GTCGTCTTCG GCGCGCCACT GCCGTTGGAC CCGGCATCCG CCCCTGACGT CCCGACCGCC 240GCCCAGTTGA CCAGCCTGCT CAACAGCCTC GCCGATCCCA ACGTGTCGTT TGCGAACAAG 300GGCAGTCTGG TCGAGGGCGG CATCGGGGGC ACCGAGGCGC GCATCGCCGA CCACAAGCTG 360AAGAAGGCCG CCGAGCACGG GGATCTGCCG CTGTCGTTCA GCGTGACGAA CATCCAGCCG 420GCGGCCGCCG GTTCGGCCAC CGCCGACGTT TCCGTCTCGG GTCCGAAGCT CTCGTCGCCG 480GTCACGCAGA ACGTCACGTT CGTGAATCAA GGCGGCTGGA TGCTGTCACG CGCATCGGCG 540ATGGAGTTGC TGCAGGCCGC AGGGNAACTG ATTGGCGGGC CGGNTTCAGC CCGCTGTTCA 600GCTACGCCGC CCGCCTGGTG ACGCGTCCAT GTCGAACACT CGCGCGTGTA GCACGGTGCG 660GTNTGCGCAG GGNCGCACGC ACCGCCCGGT GCAAGCCGTC CTCGAGATAG GTGGTGNCTC 720GNCACCAGNG ANCACCCCCN NNTCGNCNNT TCTCGNTGNT GNATGA 766(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列特征(A)长度752个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO2ATGCATCACC ATCACCATCA CGATGAAGTC ACGGTAGAGA CGACCTCCGT CTTCCGCGCA 60GACTTCCTCA GCGAGCTGGA CGCTCCTGCG CAAGCGGGTA CGGAGAGCGC GGTCTCCGGG 120GTGGAAGGGC TCCCGCCGGG CTCGGCGTTG CTGGTAGTCA AACGAGGCCC CAACGCCGGG 180TCCCGGTTCC TACTCGACCA AGCCATCACG TCGGCTGGTC GGCATCCCGA CAGCGACATA 240TTTCTCGACG ACGTGACCGT GAGCCGTCGC CATGCTGAAT TCCGGTTGGA AAACAACGAA 300TTCAATGTCG TCGATGTCGG GAGTCTCAAC GGCACCTACG TCAACCGCGA GCCCGTGGAT 360TCGGCGGTGC TGGCGAACGG CGACGAGGTC CAGATCGGCA AGCTCCGGTT GGTGTTCTTG 420ACCGGACCCA AGCAAGGCGA GGATGACGGG AGTACCGGGG GCCCGTGAGC GCACCCGATA 480GCCCCGCGCT GGCCGGGATG TCGATCGGGG CGGTCCTCCG ACCTGCTACG ACCGGATTTT 540CCCTGATGTC CACCATCTCC AAGATTCGAT TCTTGGGAGG CTTGAGGGTC NGGGTGACCC 600CCCCGCGGGC CTCATTCNGG GGTNTCGGCN GGTTTCACCC CNTACCNACT GCCNCCCGGN 660TTGCNAATTC NTTCTTCNCT GCCCNNAAAG GGACCNTTAN CTTGCCGCTN GAAANGGTNA 720TCCNGGGCCC NTCCTNGAAN CCCCNTCCCC CT752(2)SEQ ID NO3的信息(i)序列特征(A)长度813个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO3CATATGCATC ACCATCACCA TCACACTTCT AACCGCCCAG CGCGTCGGGG GCGTCGAGCA 60CCACGCGACA CCGGGCCCGA TCGATCTGCT AGCTTGAGTC TGGTCAGGCA TCGTCGTCAG 120CAGCGCGATG CCCTATGTTT GTCGTCGACT CAGATATCGC GGCAATCCAA TCTCCCGCCT 180GCGGCCGGCG GTGCTGCAAA CTACTCCCGG AGGAATTTCG ACGTGCGCAT CAAGATCTTC 240ATGCTGGTCA CGGCTGTCGT TTTGCTCTGT TGTTCGGGTG TGGCCACGGC CGCGCCCAAG 300ACCTACTGCG AGGAGTTGAA AGGCACCGAT ACCGGCCAGG CGTGCCAGAT TCAAATGTCC 360GACCCGGCCT ACAACATCAA CATCAGCCTG CCCAGTTACT ACCCCGACCA GAAGTCGCTG 420GAAAATTACA TCGCCCAGAC GCGCGACAAG TTCCTCAGCG CGGCCACATC GTCCACTCCA 480CGCGAAGCCC CCTACGAATT GAATATCACC TCGGCCACAT ACCAGTCCGC GATACCGCCG 540CGTGGTACGC AGGCCGTGGT GCTCAMGGTC TACCACAACG CCGGCGGCAC GCACCCAACG 600ACCACGTACA AGGCCTTCGA TTGGGACCAG GCCTATCGCA AGCCAATCAC CTATGACACG 660CTGTGGCAGG CTGACACCGA TCCGCTGCCA GTCGTCTTCC CCATTGTTGC AAGGTGAACT 720GAGCAACGCA GACCGGGACA ACWGGTATCG ATAGCCGCCN AATGCCGGCT TGGAACCCNG 780TGAAATTATC ACAACTTCGC AGTCACNAAA NAA 813(2)SEQ ID NO4的信息(i)序列特征(A)长度447个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO4CGGTATGAAC ACGGCCGCGT CCGATAACTT CCAGCTGTCC CAGGGTGGGC AGGGATTCGC 60CATTCCGATC GGGCAGGCGA TGGCGATCGC GGGCCAGATC CGATCGGGTG GGGGGTCACC 120CACCGTTCAT ATCGGGCCTA CCGCCTTCCT CGGCTTGGGT GTTGTCGACA ACAACGGCAA 180CGGCGCACGA GTCCAACGCG TGGTCGGGAG CGCTCCGGCG GCAAGTCTCG GCATCTCCAC 240CGGCGACGTG ATCACCGCGG TCGACGGCGC TCCGATCAAC TCGGCCACCG CGATGGCGGA 300CGCGCTTAAC GGGCATCATC CCGGTGACGT CATCTCGGTG AACTGGCAAA CCAAGTCGGG 360CGGCACGCGT ACAGGGAACG TGACATTGGC CGAGGGACCC CCGGCCTGAT TTCGTCGYGG 420ATACCACCCG CCGGCCGGCC AATTGGA 447(2)SEQ ID NO5的信息(i)序列特征(A)长度604个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO5GTCCCACTGC GGTCGCCGAG TATGTCGCCC AGCAAATGTC TGGCAGCCGC CCAACGGAAT 60CCGGTGATCC GACGTCGCAG GTTGTCGAAC CCGCCGCCGC GGAAGTATCG GTCCATGCCT 120AGCCCGGCGA CGGCGAGCGC CGGAATGGCG CGAGTGAGGA GGCGGGCAAT TTGGCGGGGC 180CCGGCGACGG NGAGCGCCGG AATGGCGCGA GTGAGGAGGT GGNCAGTCAT GCCCAGNGTG 240ATCCAATCAA CCTGNATTCG GNCTGNGGGN CCATTTGACA ATCGAGGTAG 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(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO28GCAGCCGGTG GTTCTCGGAC TATCTGCGCA CGGTGACGCA GCGCGACGTG CGCGAGCTGA 60AGCGGATCGA GCAGACGGAT CGCCTGCCGC GGTTCATGCG CTACCTGGCC GCTATCACCG 120CGCAGGAGCT GAACGTGGCC GAAGCGGCGC GGGTCATCGG GGTCGACGCG GGGACGATCC 180GTTCGGATCT GGCGTGGTTC GAGACGGTCT ATCTGGTACA TCGCCTGCCC GCCTGGTCGC 240GGAATCTGAC CGCGAAGATC AAGAAGCGGT CAAAGATCCA CGTCGTCGAC AGTGGCTTCG 300CGGCCTGGTT GCGCGGG317(2)SEQ ID NO29的信息(i)序列特征(A)长度182个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO29GATCGTGGAG CTGTCGATGA ACAGCGTTGC CGGACGCGCG GCGGCCAGCA CGTCGGTGTA 60GCAGCGCCGG ACCACCTCGC CGGTGGGCAG CATGGTGATG ACCACGTCGG CCTCGGCCAC 120CGCTTCGGGC GCGCTACGAA ACACCGCGAC ACCGTGCGCG GCGGCGCCGG ACGCCGCCGT 180GG182(2)SEQ ID NO30的信息(i)序列特征(A)长度308个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO30GATCGCGAAG TTTGGTGAGC AGGTGGTCGA CGCGAAAGTC TGGGCGCCTG CGAAGCGGGT60CGGCGTTCAC GAGGCGAAGA CACGCCTGTC CGAGCTGCTG CGGCTCGTCT ACGGCGGGCA 120GAGGTTGAGA TTGCCCGCCG CGGCGAGCCG GTAGCAAAGC TTGTGCCGCT GCATCCTCAT 180GAGACTCGGC GGTTAGGCAT TGACCATGGC GTGTACCGCG TGCCCGACGA TTTGGACGCT 240CCGTTGTCAG ACGACGTGCT CGAACGCTTT CACCGGTGAA GCGCTACCTC ATCGACACCC 300ACGTTTGG308(2)SEQ ID NO31的信息(i)序列特征(A)长度267个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO31CCGACGACGA GCAACTCACG TGGATGATGG TCGGCAGCGG CATTGAGGAC GGAGAGAATC 60CGGCCGAAGC TGCCGCGCGG CAAGTGCTCA TAGTGACCGG CCGTAGAGGG CTCCCCCGAT 120GGCACCGGAC TATTCTGGTG TGCCGCTGGC CGGTAAGAGC GGGTAAAAGA ATGTGAGGGG 180ACACGATGAG CAATCACACC TACCGAGTGA TCGAGATCGT CGGGACCTCG CCCGACGGCG 240TCGACGCGGC AATCCAGGGC GGTCTGG 267(2)SEQ ID NO32的信息(i)序列特征(A)长度1539个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO32CTCGTGCCGA AAGAATGTGA GGGGACACGA TGAGCAATCA CACCTACCGA GTGATCGAGA 60TCGTCGGGAC CTCGCCCGAC GGCGTCGACG CGGCAATCCA GGGCGGTCTG GCCCGAGCTG 120CGCAGACCAT GCGCGCGCTG GACTGGTTCG AAGTACAGTC AATTCGAGGC CACCTGGTCG 180ACGGAGCGGT CGCGCACTTC CAGGTGACTA TGAAAGTCGG CTTCCGCTGG AGGATTCCTG 240AACCTTCAAG CGCGGCCGAT AACTGAGGTG CATCATTAAG CGACTTTTCC AGAACATCCT 300GACGCGCTCG AAACGCGGTT CAGCCGACGG TGGCTCCGCC GAGGCGCTGC CTCCAAAATC 360CCTGCGACAA TTCGTCGGCG GCGCCTACAA GGAAGTCGGT GCTGAATTCG TCGGGTATCT 420GGTCGACCTG TGTGGGCTGC AGCCGGACGA AGCGGTGCTC GACGTCGGCT GCGGCTCGGG 480GCGGATGGCG TTGCCGCTCA CCGGCTATCT GAACAGCGAG GGACGCTACG CCGGCTTCGA 540TATCTCGCAG AAAGCCATCG CGTGGTGCCA GGAGCACATC ACCTCGGCGC ACCCCAACTT 600CCAGTTCGAG GTCTCCGACA TCTACAACTC GCTGTACAAC CCGAAAGGGA AATACCAGTC 660ACTAGACTTT CGCTTTCCAT ATCCGGATGC GTCGTTCGAT GTGGTGTTTC TTACCTCGGT 720GTTCACCCAC ATGTTTCCGC CGGACGTGGA GCACTATCTG GACGAGATCT CCCGCGTGCT 780GAAGCCCGGC GGACGATGCC TGTGCACGTA CTTCTTGCTC AATGACGAGT CGTTAGCCCA 840CATCGCGGAA GGAAAGAGTG CGCACAACTT CCAGCATGAG GGACCGGGTT ATCGGACAAT 900CCACAAGAAG CGGCCCGAAG AAGCAATCGG CTTGCCGGAG ACCTTCGTCA GGGATGTCTA 960TGGCAAGTTC GGCCTCGCCG TGCACGAACC ATTGCACTAC GGCTCATGCA GTGGCCGGGA1020ACCACGCCTA AGCTTCCAGG ACATCGTCAT CGCGACCAAA ACCGCGAGCT AGGTCGGCAT1080CCGGGAAGCA TCGCGACACC GTGGCGCCGA GCGCCGCTGC CGGCAGGCCG ATTAGGCGGG1140CAGATTAGCC CGCCGCGGCT CCCGGCTCCG AGTACGGCGC CCCGAATGGC GTCACCGGCT1200GGTAACCACG CTTGCGCGCC TGGGCGGCGG CCTGCCGGAT CAGGTGGTAG ATGCCGACAA1260AGCCTGCGTG ATCGGTCATC ACCAACGGTG ACAGCAGCCG GTTGTGCACC AGCGCGAACG1320CCACCCCGGT CTCCGGGTCT GTCCAGCCGA TCGAGCCGCC CAAGCCCACA TGACCAAACC1380CCGGCATCAC GTTGCCGATC GGCATACCGT GATAGCCAAG ATGAAAATTT AAGGGCACCA1440ATAGATTTCG ATCCGGCAGA ACTTGCCGTC GGTTGCGGGT CAGGCCCGTG ACCAGCTCCC1500GCGACAAGAA CCGTATGCCG TCGATCTCGC CTCGTGCCG 1539(2)SEQ ID NO33的信息(i)序列特征(A)长度851个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO33CTGCAGGGTG GCGTGGATGA GCGTCACCGC GGGGCAGGCC GAGCTGACCG CCGCCCAGGT 60CCGGGTTGCT GCGGCGGCCT ACGAGACGGC GTATGGGCTG ACGGTGCCCC CGCCGGTGAT 120CGCCGAGAAC CGTGCTGAAC TGATGATTCT GATAGCGACC AACCTCTTGG GGCAAAACAC 180CCCGGCGATC GCGGTCAACG AGGCCGAATA CGGCGAGATG TGGGCCCAAG ACGCCGCCGC 240GATGTTTGGC TACGCCGCGG CGACGGCGAC GGCGACGGCG ACGTTGCTGC CGTTCGAGGA 300GGCGCCGGAG ATGACCAGCG CGGGTGGGCT CCTCGAGCAG GCCGCCGCGG TCGAGGAGGC 360CTCCCACACC GCCGCGGCGA ACCAGTTGAT GAACAATGTG CCCCAGGCGC TGAAACAGTT 420GGCCCAGCCC ACGCAGGGCA CCACGCCTTC TTCCAAGCTG GGTGGCCTGT GGAAGACGGT 480CTCGCCGCAT CGGTCGCCGA TCAGCAACAT GGTGTCGATG GCCAACAACC ACATGTCGAT 540GACCAACTCG GGTGTGTCGA TGACCAACAC CTTGAGCTCG ATGTTGAAGG GCTTTGCTCC 600GGCGGCGGCC GCCCAGGCCG TGCAAACCGC GGCGCAAAAC GGGGTCCGGG CGATGAGCTC 660GCTGGGCAGC TCGCTGGGTT CTTCGGGTCT GGGCGGTGGG GTGGCCGCCA ACTTGGGTCG 720GGCGGCCTCG GTACGGTATG GTCACCGGGA TGGCGGAAAA TATGCANAGT CTGGTCGGCG 780GAACGGTGGT CCGGCGTAAG GTTTACCCCC GTTTTCTGGA TGCGGTGAAC TTCGTCAACG 840GAAACAGTTA C 851(2)SEQ ID NO34的信息(i)序列特征(A)长度254个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO34GATCGATCGG GCGGAAATTT GGACCAGATT CGCCTCCGGC GATAACCCAA TCAATCGAAC 60CTAGATTTAT TCCGTCCAGG GGCCCGAGTA ATGGCTCGCA GGAGAGGAAC CTTACTGCTG 120CGGGCACCTG TCGTAGGTCC TCGATACGGC GGAAGGCGTC GACATTTTCC ACCGACACCC 180CCATCCAAAC GTTCGAGGGC CACTCCAGCT TGTGAGCGAG GCGACGCAGT CGCAGGCTGC 240GCTTGGTCAA GATC 254(2)SEQ ID NO35的信息(i)序列特征(A)长度1227个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链
(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO35GATCCTGACC GAAGCGGCCG CCGCCAAGGC GAAGTCGCTG TTGGACCAGG AGGGACGGGA60CGATCTGGCG CTGCGGATCG CGGTTCAGCC GGGGGGGTGC GCTGGATTGC GCTATAACCT 120TTTCTTCGAC GACCGGACGC TGGATGGTGA CCAAACCGCG GAGTTCGGTG GTGTCAGGTT 180GATCGTGGAC CGGATGAGCG CGCCGTATGT GGAAGGCGCG TCGATCGATT TCGTCGACAC 240TATTGAGAAG CAAGGTTCAC CATCGACAAT CCCAACGCCA CCGGCTCCTG CGCGTGCGGG 300GATTCGTTCA ACTGATAAAA CGCTAGTACG ACCCCGCGGT GCCCAACACG TACGAGCACA 360CCAAGACCTG ACCGCGCTGG AAAAGCAACT GAGCGATGCC TTGCACCTGA CCGCGTGGCG 420GGCCGCCGGC GGCAGGTGTC ACCTGCATGG TGAACAGCAC CTGGGCCTGA TATTGCGACC 480AGTACACGAT TTTGTCGATC GAGGTCACTT CGACCTGGGA GAACTGCTTG CGGAACGCGT 540CGCTGCTCAG CTTGGCCAAG GCCTGATCGG AGCGCTTGTC GCGCACGCCG TCGTGGATAC 600CGCACAGCGC ATTGCGAACG ATGGTGTCCA CATCGCGGTT CTCCAGCGCG TTGAGGTATC 660CCTGAATCGC GGTTTTGGCC GGTCCCTCCG AGAATGTGCC TGCCGTGTTG GCTCCGTTGG 720TGCGGACCCC GTATATGATC GCCGCCGTCA TAGCCGACAC CAGCGCGAGG GCTACCACAA 780TGCCGATCAG CAGCCGCTTG TGCCGTCGCT TCGGGTAGGA CACCTGCGGC GGCACGCCGG 840GATATGCGGC GGGCGGCAGC GCCGCGTCGT CTGCCGGTCC CGGGGCGAAG GCCGGTTCGG 900CGGCGCCGAG GTCGTGGGGG TAGTCCAGGG CTTGGGGTTC GTGGGATGAG GGCTCGGGGT 960ACGGCGCCGG TCCGTTGGTG CCGACACCGG GGTTCGGCGA GTGGGGACCG GGCATTGTGG 1020TTCTCCTAGG GTGGTGGACG GGACCAGCTG CTAGGGCGAC AACCGCCCGT CGCGTCAGCC 1080GGCAGCATCG GCAATCAGGT GAGCTCCCTA GGCAGGCTAG CGCAACAGCT GCCGTCAGCT 1140CTCAACGCGA CGGGGCGGGC CGCGGCGCCG ATAATGTTGA AAGACTAGGC AACCTTAGGA 1200ACGAAGGACG GAGATTTTGT GACGATC 1227(2)SEQ ID NO36的信息(i)序列特征(A)长度181个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO36GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGGGCCGGC GGGGCCGGCG 60GGACCGGCGC TAACGGTGGT GCCGGCGGCA ACGCCTGGTT GTTCGGGGCC GGCGGGTCCG120GCGGNGCCGG CACCAATGGT GGNGTCGGCG GGTCCGGCGG ATTTGTCTAC GGCAACGGCG180G181(2)SEQ ID NO37的信息(i)序列特征(A)长度290个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO37GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGTGTCGGC GGCCGGGGCG 60GCGACGGCGT CTTTGCCGGT GCCGGCGGCC AGGGCGGCCT CGGTGGGCAG GGCGGCAATG120GCGGCGGCTC CACCGGCGGC AACGGCGGTC TTGGCGGCGC GGGCGGTGGC GGAGGCAACG180CCCCGGAGGG CGGCTTCGGT GGCAACGGCG GTAAGGGTGG CCAGGGCGGN ATTGGCGGCG240GCACTCAGAG CGCGACCGGC CTCGGNGGTG ACGGCGGTGA CGGCGGTGAC 290(2)SEQ ID NO38的信息(i)序列特征(A)长度34个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO38GATCCAGTGG CATGGNGGGT GTCAGTGGAA GCAT 34(2)SEQ ID NO39的信息
(i)序列特征(A)长度155个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO39GATCGCTGCT CGTCCCCCCC TTGCCGCCGA CGCCACCGGT CCCACCGTTA CCGAACAAGC60TGGCGTGGTC GCCAGCACCC CCGGCACCGC CGACGCCGGA GTCGAACAAT GGCACCGTCG 120TATCCCCACC ATTGCCGCCG GNCCCACCGG CACCG 155(2)SEQ ID NO40的信息(i)序列特征(A)长度53个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO40ATGGCGTTCA CGGGGCGCCG GGGACCGGGC AGCCCGGNGG GGCCGGGGGG TGG 53(2)SEQ ID NO41的信息(i)序列特征(A)长度132个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO41GATCCACCGC GGGTGCAGAC GGTGCCCGCG GCGCCACCCC GACCAGCGGC GGCAACGGCG60GCACCGGCGG CAACGGCGCG AACGCCACCG TCGTCGGNGG GGCCGGCGGG GCCGGCGGCA 120AGGGCGGCAA CG 132(2)SEQ ID NO42的信息(i)序列特征(A)长度132个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO42GATCGGCGGC CGGNACGGNC GGGGACGGCG GCAAGGGCGG NAACGGGGGC GCCGNAGCCA60CCNGCCAAGA ATCCTCCGNG TCCNCCAATG GCGCGAATGG CGGACAGGGC GGCAACGGCG 120GCANCGGCGG CA 132(2)SEQ ID NO43的信息(i)序列特征(A)长度702个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO43CGGCACGAGG ATCGGTACCC CGCGGCATCG GCAGCTGCCG ATTCGCCGGG TTTCCCCACC60CGAGGAAAGC CGCTACCAGA TGGCGCTGCC GAAGTAGGGC GATCCGTTCG CGATGCCGGC 120ATGAACGGGC GGCATCAAAT TAGTGCAGGA ACCTTTCAGT TTAGCGACGA TAATGGCTAT 180AGCACTAAGG AGGATGATCC GATATGACGC AGTCGCAGAC CGTGACGGTG GATCAGCAAG 240AGATTTTGAA CAGGGCCAAC GAGGTGGAGG CCCCGATGGC GGACCCACCG ACTGATGTCC 300CCATCACACC GTGCGAACTC ACGGNGGNTA AAAACGCCGC CCAACAGNTG GTNTTGTCCG 360CCGACAACAT GCGGGAATAC CTGGCGGCCG GTGCCAAAGA GCGGCAGCGT CTGGCGACCT 420CGCTGCGCAA CGCGGCCAAG GNGTATGGCG AGGTTGATGA GGAGGCTGCG ACCGCGCTGG 480ACAACGACGG CGAAGGAACT GTGCAGGCAG AATCGGCCGG GGCCGTCGGA GGGGACAGTT 540CGGCCGAACT AACCGATACG CCGAGGGTGG CCACGGCCGG TGAACCCAAC TTCATGGATC 600TCAAAGAAGC GGCAAGGAAG CTCGAAACGG GCGACCAAGG CGCATCGCTC GCGCACTGNG 660GGGATGGGTG GAACACTTNC ACCCTGACGC TGCAAGGCGA CG 702(2)SEQ ID NO44的信息(i)序列特征(A)长度298个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO44GAAGCCGCAG CGCTGTCGGG CGACGTGGCG CTCAAAGCGG CATCGCTCGG TGGCGGTGGA 60GGCGGCGGGG TGCCGTCGGC GCCGTTGGGA TCCGCGATCG GGGGCGCCGA ATCGGTGCGG120CCCGCTGGCG CTGGTGACAT TGCCGGCTTA GGCCAGGGAA GGGCCGGCGG CGGCGCCGCG180CTGGGCGGCG GTGGCATGGG AATGCCGATG GGTGCCGCGC ATCAGGGACA AGGGGGCGCC240AAGTCCAAGG GTTCTCAGCA GGAAGACGAG GCGCTCTACA CCGAGGATCC TCGTGCCG 298(2)SEQ ID NO45的信息(i)序列特征(A)长度1058个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO45CGGCACGAGG ATCGAATCGC GTCGCCGGGA GCACAGCGTC GCACTGCACC AGTGGAGGAG 60CCATGACCTA CTCGCCGGGT AACCCCGGAT ACCCGCAAGC GCAGCCCGCA GGCTCCTACG120GAGGCGTCAC ACCCTCGTTC GCCCACGCCG ATGAGGGTGC GAGCAAGCTA CCGATGTACC180TGAACATCGC GGTGGCAGTG CTCGGTCTGG CTGCGTACTT CGCCAGCTTC GGCCCAATGT240TCACCCTCAG TACCGAACTC GGGGGGGGTG ATGGCGCAGT GTCCGGTGAC ACTGGGCTGC300CGGTCGGGGT GGCTCTGCTG GCTGCGCTGC TTGCCGGGGT GGTTCTGGTG CCTAAGGCCA360AGAGCCATGT GACGGTAGTT GCGGTGCTCG GGGTACTCGG CGTATTTCTG ATGGTCTCGG420CGACGTTTAA CAAGCCCAGC GCCTATTCGA CCGGTTGGGC ATTGTGGGTT GTGTTGGCTT480TCATCGTGTT CCAGGCGGTT GCGGCAGTCC TGGCGCTCTT GGTGGAGACC GGCGCTATCA540CCGCGCCGGC GCCGCGGCCC AAGTTCGACC CGTATGGACA GTACGGGCGG TACGGGCAGT600ACGGGCAGTA CGGGGTGCAG CCGGGTGGGT ACTACGGTCA GCAGGGTGCT CAGCAGGCCG660CGGGACTGCA GTCGCCCGGC CCGCAGCAGT CTCCGCAGCC TCCCGGATAT GGGTCGCAGT720ACGGCGGCTA TTCGTCCAGT CCGAGCCAAT CGGGCAGTGG ATACACTGCT CAGCCCCCGG780CCCAGCCGCC GGCGCAGTCC GGGTCGCAAC AATCGCACCA GGGCCCATCC ACGCCACCTA840CCGGCTTTCC GAGCTTCAGC CCACCACCAC CGGTCAGTGC CGGGACGGGG TCGCAGGCTG900GTTCGGCTCC AGTCAACTAT TCAAACCCCA GCGGGGGCGA GCAGTCGTCG TCCCCCGGGG960GGGCGCCGGT CTAACCGGGC GTTCCCGCGT CCGGTCGCGC GTGTGCGCGA AGAGTGAACA 1020GGGTGTCAGC AAGCGCGGAC GATCCTCGTG CCGAATTC 1058(2)SEQ ID NO46的信息(i)序列特征(A)长度327个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO46CGGCACGAGA GACCGATGCC GCTACCCTCG CGCAGGAGGC AGGTAATTTC GAGCGGATCT 60CCGGCGACCT GAAAACCCAG ATCGACCAGG TGGAGTCGAC GGCAGGTTCG TTGCAGGGCC120AGTGGCGCGG CGCGGCGGGG ACGGCGGCCC AGGCCGCGGT GGTGCGCTTC CAAGAAGCAG180CCAATAAGCA GAAGCAGGAA CTCGACGAGA TCTCGACGAA TATTCGTCAG GCCGGCGTCC240AATACTCGAG GGCCGACGAG GAGCAGCAGC AGGCGCTGTC CTCGCAAATG GGCTTCTGAC300CCGCTAATAC GAAAAGAAAC GGAGCAA327(2)SEQ ID NO47的信息(i)序列特征(A)长度170个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO47CGGTCGCGAT GATGGCGTTG TCGAACGTGA CCGATTCTGT ACCGCCGTCG TTGAGATCAA 60CCAACAACGT GTTGGCGTCG GCAAATGTGC CGNACCCGTG GATCTCGGTG ATCTTGTTCT120TCTTCATCAG GAAGTGCACA CCGGCCACCC TGCCCTCGGN TACCTTTCGG 170(2)SEQ ID NO48的信息(i)序列特征(A)长度127个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO48GATCCGGCGG CACGGGGGGT GCCGGCGGCA GCACCGCTGG CGCTGGCGGC AACGGCGGGG 60CCGGGGGTGG CGGCGGAACC GGTGGGTTGC TCTTCGGCAA CGGCGGTGCC GGCGGGCACG120GGGCCGT 127(2)SEQ ID NO49的信息(i)序列特征(A)长度81个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO49CGGCGGCAAG GGCGGCACCG CCGGCAACGG GAGCGGCGCG GCCGGCGGCA ACGGCGGCAA 60CGGCGGCTCC GGCCTCAACG G 81(2)SEQ ID NO50的信息(i)序列特征(A)长度149个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链
(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO50GATCAGGGCT GGCCGGCTCC GGCCAGAAGG GCGGTAACGG AGGAGCTGCC GGATTGTTTG 60GCAACGGCGG GGCCGGNGGT GCCGGCGCGT CCAACCAAGC CGGTAACGGC GGNGCCGGCG120GAAACGGTGG TGCCGGTGGG CTGATCTGG 149(2)SEQ ID NO51的信息(i)序列特征(A)长度355个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO51CGGCACGAGA TCACACCTAC CGAGTGATCG AGATCGTCGG GACCTCGCCC GACGGTGTCG 60ACGCGGNAAT CCAGGGCGGT CTGCCCCGAG CTGCGCAGAC CATGCGCGCG CTGGACTGGT120TCGAAGTACA GTCAATTCGA GGCCACCTGG TCGACGGAGC GGTCGCGCAC TTCCAGGTGA180CTATGAAAGT CGGCTTCCGC CTGGAGGATT CCTGAACCTT CAAGCGCGGC CGATAACTGA240GGTGCATCAT TAAGCGACTT TTCCAGAACA TCCTGACGCG CTCGAAACGC GGTTCAGCCG300ACGGTGGCTC CGCCGAGGCG CTGCCTCCAA AATCCCTGCG ACAATTCGTC GGCGG 355(2)SEQ ID NO52的信息(i)序列特征(A)长度999个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO52ATGCATCACC ATCACCATCA CATGCATCAG GTGGACCCCA ACTTGACACG TCGCAAGGGA 60CGATTGGCGG CACTGGCTAT CGCGGCGATG GCCAGCGCCA GCCTGGTGAC CGTTGCGGTG120CCCGCGACCG CCAACGCCGA TCCGGAGCCA GCGCCCCCGG TACCCACAAC GGCCGCCTCG 180CCGCCGTCGA CCGCTGCAGC GCCACCCGCA CCGGCGACAC CTGTTGCCCC CCCACCACCG 240GCCGCCGCCA ACACGCCGAA TGCCCAGCCG GGCGATCCCA ACGCAGCACC TCCGCCGGCC 300GACCCGAACG CACCGCCGCC ACCTGTCATT GCCCCAAACG CACCCCAACC TGTCCGGATC 360GACAACCCGG TTGGAGGATT CAGCTTCGCG CTGCCTGCTG GCTGGGTGGA GTCTGACGCC 420GCCCACTTCG ACTACGGTTC AGCACTCCTC AGCAAAACCA CCGGGGACCC GCCATTTCCC 480GGACAGCCGC CGCCGGTGGC CAATGACACC CGTATCGTGC TCGGCCGGCT AGACCAAAAG 540CTTTACGCCA GCGCCGAAGC CACCGACTCC AAGGCCGCGG CCCGGTTGGG CTCGGACATG 600GGTGAGTTCT ATATGCCCTA CCCGGGCACC CGGATCAACC AGGAAACCGT CTCGCTCGAC 660GCCAACGGGG TGTCTGGAAG CGCGTCGTAT TACGAAGTCA AGTTCAGCGA TCCGAGTAAG 720CCGAACGGCC AGATCTGGAC GGGCGTAATC GGCTCGCCCG CGGCGAACGC ACCGGACGCC 780GGGCCCCCTC AGCGCTGGTT TGTGGTATGG CTCGGGACCG CCAACAACCC GGTGGACAAG 840GGCGCGGCCA ACGCGCTGGC CGAATCGATC CGGCCTTTGG TCGCCCCGCC GCCGGCGCCG 900GCACCGGCTC CTGCAGAGCC CGCTCCGGCG CCGGCGCCGG CCGGGGAAGT CGCTCCTACC 960CCGACGACAC CGACACCGCA GCGGACCTTA CCGGCCTGA999(2)SEQ ID NO53的信息(i)序列特征(A)长度332个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO53Met His His His His His His Met His Gln Val Asp Pro Asn Leu Thr1 510 15Arg Arg Lys Gly Arg Leu Ala Ala Leu Ala Ile Ala Ala Met Ala Ser20 25 30Ala Ser Leu Val Thr Val Ala Val Pro Ala Thr Ala Asn Ala Asp Pro35 40 45Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro Ser Thr50 55 60Ala Ala Ala Pro Pro Ala Pro Ala Thr Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro65 70 75 80Ala Ala Ala Asn Thr Pro Asn Ala Gln Pro Gly Asp Pro Asn Ala Ala85 90 95Pro Pro Pro Ala Asp Pro Asn Ala Pro Pro Pro Pro Val Ile Ala Pro100 105 110Asn Ala Pro Gln Pro Val Arg Ile Asp Asn Pro Val Gly Gly Phe Ser115 120 125Phe Ala Leu Pro Ala Gly Trp Val Glu Ser Asp Ala Ala His Phe Asp130 135 140Tyr Gly Ser Ala Leu Leu Ser Lys Thr Thr Gly Asp Pro Pro Phe Pro145 150 155 160Gly Gln Pro Pro Pro Val Ala Asn Asp Thr Arg Ile Vel Leu Gly Arg165 170 175Leu Asp Gln Lys Leu Tyr Ala Ser Ala Glu Ala Thr Asp Ser Lys Ala180 185 190Ala Ala Arg Leu Gly Ser Asp Met Gly Glu Phe Tyr Met Pro Tyr Pro195 200 205Gly Thr Arg Ile Asn Gln Glu Thr Val Ser Leu Asp Ala Asn Gly Val210 215 220Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Tyr Glu Val Lys Phe Ser Asp Pro Ser Lys225 230 235 240Pro Asn Gly Gln Ile Trp Thr Gly Val Ile Gly Ser Pro Ala Ala Asn245 250 255Ala Pro Asp Ala Gly Pro Pro Gln Arg Trp Phe Val Val Trp Leu Gly260 265 270Thr Ala Asn Asn Pro Val Asp Lys Gly Ala Ala Lys Ala Leu Ala Glu275 280 285Ser Ile Arg Pro Leu Val Ala Pro Pro Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro290 295 300Ala Glu Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Gly Glu Val Ala Pro Thr305 310 315 320Pro Thr Thr Pro Thr Pro Gln Arg Thr Leu Pro Ala325 330(2)SEQ ID NO54的信息(i)序列特征(A)长度20个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO54Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Xaa Asn Tyr Gly Gln Val1 5 10 15Val Ala Ala Leu20(2)SEQ ID NO55的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO55Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO56的信息(i)序列特征(A)长度19个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO56Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys1 5 10 15Glu Gly Arg(2)SEQ ID NO57的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO57Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gln Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro1 5 10 15(2)SEQ ID NO58的信息(i)序列特征(A)长度14个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO58Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gln Gln Xaa Ala Val1 5 10(2)SEQ ID NO59的信息(i)序列特征(A)长度13个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO59Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro1 5 10(2)SEQ ID NO60的信息(i)序列特征(A)长度17个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO60Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro1 5 10 15Ala(2)SEQ ID NO61的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO61Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO62的信息(i)序列特征(A)长度30个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO62Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln Gln Thr Ser1 5 10 15Leu Leu Asn Asn Leu Ala Asp Pro Asp Val Ser Phe Ala Asp20 25 30(2)SEQ ID NO63的信息(i)序列特征(A)长度187个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO63Thr Gly Ser Leu Asn Gln Thr His Asn Arg Arg Ala Asn Glu Arg Lys1 5 10 15Asn Thr Thr Met Lys Met Val Lys Ser Ile Ala Ala Gly Leu Thr Ala20 25 30Ala Ala Ala Ile Gly Ala Ala Ala Ala Gly Val Thr Ser Ile Met Ala35 40 45Gly Gly Pro Val Val Tyr Gln Met Gln Pro Val Val Phe Gly Ala Pro50 55 60Leu Pro Leu Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln65 70 75 80Leu Thr Ser Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala85 90 95Asn Lys Gly Ser Leu Val Glu Gly Gly Ile Gly Gly Thr Glu Ala Arg100 105 110Ile Ala Asp His Lys Leu Lys Lys Ala Ala Glu His Gly Asp Leu Pro115 120 125Leu Ser Phe Ser Val Thr Asn Ile Gln Pro Ala Ala Ala Gly Ser Ala130 135 140Thr Ala Asp Val Ser Val Ser Gly Pro Lys Leu Ser Ser Pro Val Thr145 150 155 160Gln Asn Val Thr Phe Val Asn Gln Gly Gly Trp Met Leu Ser Arg Ala165 170 175Ser Ala Met Glu Leu Leu Gln Ala Ala Gly Xaa180 185(2)SEQ ID NO64的信息(i)序列特征(A)长度148个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO64Asp Glu Val Thr Val Glu Thr Thr 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NO68的信息(i)序列特征(A)长度163个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO68Met Thr Asp Asp Ile Leu Leu Ile Asp Thr Asp Glu Arg Val Arg Thr1 5 10 15Leu Thr Leu Asn Arg Pro Gln Ser Arg Asn Ala Leu Ser Ala Ala Leu20 25 30Arg Asp Arg Phe Phe Ala Xaa Leu Xaa Asp Ala Glu Xaa Asp Asp Asp35 40 45Ile Asp Val Val Ile Leu Thr Gly Ala Asp Pro Val Phe Cys Ala Gly50 55 60Leu Asp Leu Lys Val Ala Gly Arg Ala Asp Arg Ala Ala Gly His Leu65 70 75 80Thr Ala Val Gly Gly His Asp Gln Ala Gly Asp Arg Arg Asp Gln Arg85 90 95Arg Arg Gly His Arg Arg Ala Arg Thr Gly Ala Val Leu Arg His Pro100 105 110Asp Arg Leu Arg Ala Arg Pro Leu Arg Arg His Pro Arg Pro Gly Gly115 120 125Ala Ala Ala His Leu Gly Thr Gln Cys Val Leu Ala Ala Lys Gly Arg130 135 140His Arg Xaa Gly Pro Val Asp Glu Pro Asp Arg Arg Leu Pro Val Arg145 150 155 160Asp Arg Arg(2)SEQ ID NO69的信息(i)序列特征(A)长度344个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO69Met Lys Phe Val Asn His Ile Glu Pro Val Ala Pro Arg Arg Ala Gly1 5 10 15Gly Ala Val Ala Glu Val Tyr Ala Glu Ala 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(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO81Gly Asp Ser Phe Trp Ala Ala Ala Asp Gln Met Ala Arg Gly Phe Val1 5 10 15Leu Gly Ala Thr Ala Gly Arg Thr Thr Ieu Thr Gly Glu Gly Leu Gln20 25 30His Ala Asp Gly His Ser Leu Leu Leu Asp Ala Thr Asn Pro Ala Val35 40 45Val Ala Tyr Asp Pro Ala Phe Ala Tyr Glu Ile Gly Tyr Ile Xaa Glu50 55 60Ser Gly Leu Ala Arg Met Cys Gly Glu Asn Pro Glu Asn Ile Phe Phe65 70 75 80Tyr Ile Thr Val Tyr Asn Glu Pro Tyr Val Gln Pro Pro Glu Pro Glu85 90 95Asn Phe Asp Pro Glu Gly Val Leu Gly Gly Ile Tyr Arg Tyr His Ala100 105 110Ala Thr Glu Gln Arg Thr Asn Lys Xaa Gln Ile Leu Ala Ser Gly Val115 120 125Ala Met Pro Ala Ala Leu Arg Ala Ala Gln Met Leu Ala Ala Glu Trp130 135 140Asp Val Ala Ala Asp Val Trp Ser Val Thr Ser Trp Gly Glu Leu Asn145 150 155 160Arg Asp Gly Val Val Ile Glu Thr Glu Lys Leu Arg His Pro Asp Arg165 170 175Pro Ala Gly Val Pro Tyr Val Thr Arg Ala Leu Glu Asn Ala Arg Gly180 185 190Pro Val Ile Ala Val Ser Asp Trp Met Arg Ala Val Pro Glu Gln Ile195 200 205Arg Pro Trp Val Pro Gly Thr Tyr Leu Thr Leu Gly Thr Asp Gly Phe210 215 220Gly Phe Ser Asp Thr Arg Pro Ala Gly Arg Arg Tyr Phe Asn Thr Asp225 230 235 240Ala Glu Ser Gln Val Gly Arg Gly Phe Gly Arg Gly Trp Pro Gly Arg245 250 255Arg Val Asn Ile Asp Pro Phe Gly Ala Gly Arg Gly Pro Pro Ala Gln260 265 270Leu Pro Gly Phe Asp Glu Gly Gly Gly Leu Arg Pro Xaa Lys275 280 285(2)SEQ ID NO82的信息
(i)序列特征(A)长度173个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO82Thr Lys Phe His Ala Leu Met Gln Glu Gln Ile His Asn Glu Phe Thr1 5 10 15Ala Ala Gln Gln Tyr Val Ala Ile Ala Val Tyr Phe Asp Ser Glu Asp20 25 30Leu Pro Gln Leu Ala Lys His Phe Tyr Ser Gln Ala Val Glu Glu Arg35 40 45Asn His Ala Met Met Leu Val Gln His Leu Leu Asp Arg Asp Leu Arg50 55 60Val Glu Ile Pro Gly Val Asp Thr Val Arg Asn Gln Phe Asp Arg Pro65 70 75 80Arg Glu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Asp Gln Glu Arg Thr Val Thr Asp85 90 95Gln Val Gly Arg Leu Thr Ala Val Ala Arg Asp Glu Gly Asp Phe Leu100 105 110Gly Glu Gln Phe Met Gln Trp Phe Leu Gln Glu Gln Ile Glu Glu Val115 120 125Ala Leu Met Ala Thr Leu Val Arg Val Ala Asp Arg Ala Gly Ala Asn130 135 140Leu Phe Glu Leu Glu Asn Phe Val Ala Arg Glu Val Asp Val Ala Pro145 150 155 160Ala Ala Ser Gly Ala Pro His Ala Ala Gly Gly Arg Leu165 170(2)SEQ ID NO83的信息(i)序列特征(A)长度107个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO83Arg Ala Asp Glu Arg Lys Asn Thr Thr Met Lys Met Val Lys Ser Ile1 5 10 15Ala Ala Gly Leu Thr Ala Ala Ala Ala Ile Gly Ala Ala Ala Ala Gly20 25 30Val Thr Ser Ile Met Ala Gly Gly Pro Val Val Tyr Gln Met Gln Pro35 40 45Val Val Phe Gly Ala Pro Leu Pro Leu Asp Pro Xaa Ser Ala Pro Xaa50 55 60Val Pro Thr Ala Ala Gln Trp Thr Xaa Leu Leu Asn Xaa Leu Xaa Asp65 70 75 80Pro Asn Val Ser Phe Xaa Asn Lys Gly Ser Leu Val Clu Gly Gly Ile85 90 95Gly Gly Xaa Glu Gly Xaa Xaa Arg Arg Xaa Gln100 105(2)SEQ ID NO84的信息(i)序列特征(A)长度125个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO84Val Leu Ser Val Pro Val Gly Asp Gly Phe Trp Xaa Arg Val Val Asn1 5 10 15Pro Leu Gly Gln Pro Ile Asp Gly Arg Gly Asp Val Asp Ser Asp Thr20 25 30Arg Arg Ala Leu Glu Leu Gln Ala Pro Ser Val Val Xaa Arg Gln Gly35 40 45Val Lys Glu Pro Leu Xaa Thr Gly Ile Lys Ala Ile Asp Ala Met Thr50 55 60Pro Ile Gly Arg Gly Gln Arg Gln Leu Ile Ile Gly Asp Arg Lys Thr65 70 75 80Gly Lys Asn Arg Arg Leu Cys Arg Thr Pro Ser Ser Asn Gln Arg Glu85 90 95Glu Leu Gly Val Arg Trp Ile Pro Arg Ser Arg Cys Ala Cys Val Tyr100 105 110Val Gly His Arg Ala Arg Arg Gly Thr Tyr His Arg Arg115 120 125(2)SEQ ID NO85的信息(i)序列特征
(A)长度117个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO85Cys Asp Ala Val Met Gly Phe Leu Gly Gly Ala Gly Pro Leu Ala Val1 5 10 15Val Asp Gln Gln Leu Val Thr Arg Val Pro Gln Gly Trp Ser Phe Ala20 25 30Gln Ala Ala Ala Val Pro Val Val Phe Leu Thr Ala Trp Tyr Gly Leu35 40 45Ala Asp Leu Ala Glu Ile Lys Ala Gly Glu Ser Val Leu Ile His Ala50 55 60Gly Thr Gly Gly Val Gly Met Ala Ala Val Gln Leu Ala Arg Gln Trp65 70 75 80Gly Val Glu Val Phe Val Thr Ala Ser Arg Gly Lys Trp Asp Thr Leu85 90 95Arg Ala Xaa Xaa Phe Asp Asp Xaa Pro Tyr Arg Xaa Phe Pro His Xaa100 105 110Arg Ser Ser Xaa Gly115(2)SEQ ID NO86的信息(i)序列特征(A)长度103个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO86Met Tyr Arg Phe Ala Cys Arg Thr Leu Met Leu Ala Ala Cys Ile Leu1 5 10 15Ala Thr Gly Val Ala Gly Leu Gly Val Gly Ala Gln Ser Ala Ala Gln20 25 30Thr Ala Pro Val Pro Asp Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gln Pro Phe Asp35 40 45Pro Ala Trp Gly Pro Asn Trp Asp Pro Tyr Thr Cys His Asp Asp Phe50 55 60lis Arg Asp Ser Asp Gly Pro Asp His Ser Arg Asp Tyr Pro 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NO94的信息(i)序列特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO94Asp Gln Val Glu Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO95的信息(i)序列特征(A)长度27个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO95Gly Cys Gly Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg Gly Ala1 5 10 15ALa Gly Thr Ala Ala Gln Ala Ala Val Val Arg20 25(2)SEQ ID NO96的信息(i)序列特征(A)长度27个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO96Gly Cys Gly Gly Thr Ala Ala Gln Ala Ala Val Val Arg Phe Gln Glu1 5 10 15Ala Ala Ash Lys Gln Lys Gln Glu Leu Asp Glu20 25(2)SEQ ID NO97的信息(i)序列特征(A)长度27个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO97Gly Cys Gly Ala Asn Lys Gln Lys Gln Glu Leu Asp Glu Ile Ser Thr1 5 10 15Asn Ile Arg Gln Ala Gly Val Gln Tyr Ser Arg20 25(2)SEQ ID NO98的信息(i)序列特征(A)长度28个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO98Gly Cys Gly Ile Arg Gln Ala Gly Val Gln Tyr Ser Arg Ala Asp Glu1 5 10 15Glu Gln Gln Gln Ala Leu Ser Ser Gln Met Gly Phe20 25(2)SEQ ID NO99的信息(i)序列特征(A)长度507个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO99ATGAAGATGG TGAAATCGAT CGCCGCAGGT CTGACCGCCG CGGCTGCAAT CGGCGCCGCT 60GCGGCCGGTG TGACTTCGAT CATGGCTGGC GGCCCGGTCG TATACCAGAT GCAGCCGGTC120GTCTTCGGCG CGCCACTGCC GTTGGACCCG GCATCCGCCC CTGACGTCCC GACCGCCGCC180CAGTTGACCA GCCTGCTCAA CAGCCTCGCC GATCCCAACG TGTCGTTTGC GAACAAGGGC240AGTCTGGTCG AGGGCGGCAT CGGGGGCACC GAGGCGCGCA TCGCCGACCA CAAGCTGAAG300AAGGCCGCCG AGCACGGGGA TCTGCCGCTG TCGTTCAGCG TGACGAACAT CCAGCCGGCG360GCCGCCGGTT CGGCCACCGC CGACGTTTCC GTCTCGGGTC CGAAGCTCTC GTCGCCGGTC420ACGCAGAACG TCACGTTCGT GAATCAAGGC GGCTGGATGC TGTCACGCGC ATCGGCGATG480GAGTTGCTGC AGGCCGCAGG GAACTGA507(2)SEQ ID NO100的信息(i)序列特征(A)长度168个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO100Met Lys Met Val Lys Ser Ile Ala Ala Gly Leu Thr Ala Ala Ala Ala1 5 10 15Ile Gly Ala Ala Ala Ala Gly Val Thr Ser Ile Met Ala Gly Gly Pro20 25 30Val Val Tyr Gln Met Gln Pro Val Val Phe Gly Ala Pro Leu Pro Leu35 40 45Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln Leu Thr Ser50 55 60Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala Asn Lys Gly65 70 75 80Ser Leu Val Glu Gly Gly Ile Gly Gly Thr Glu Ala Arg Ile Ala Asp85 90 95His Lys Leu Lys Lys Ala Ala Glu His Gly Asp Leu Pro Leu Ser Phe100 105 110Ser Val Thr Asn Ile Gln Pro Ala Ala Ala Gly Ser Ala Thr Ala Asp115 120 125Val Ser Val Ser Gly Pro Lys Leu Ser Ser Pro Val Thr Gln Asn Val130 135 140Thr Phe Val Asn Gln Gly Gly Trp Met Leu Ser Arg Ala Ser Ala Met145 150 155 160Glu Leu Leu Gln Ala Ala Gly Asn165(2)SEQ ID NO101的信息(i)序列特征(A)长度500个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO101CGTGGCAATG TCGTTGACCG TCGGGGCCGG GGTCGCCTCC GCAGATCCCG TGGACGCGGT 60CATTAACACC ACCTGCAATT ACGGGCAGGT AGTAGCTGCG CTCAACGCGA CGGATCCGGG 120GGCTGCCGCA CAGTTCAACG CCTCACCGGT GGCGCAGTCC TATTTGCGCA ATTTCCTCGC 180CGCACCGCCA CCTCAGCGCG CTGCCATGGC CGCGCAATTG CAAGCTGTGC CGGGGGCGGC 240ACAGTACATC GGCCTTGTCG AGTCGGTTGC CGGCTCCTGC AACAACTATT AAGCCCATGC 300GGGCCCCATC CCGCGACCCG GCATCGTCGC CGGGGCTAGG CCAGATTGCC CCGCTCCTCA 360ACGGGCCGCA TCCCGCGACC CGGCATCGTC GCCGGGGCTA GGCCAGATTG CCCCGCTCCT 420CAACGGGCCG CATCTCGTGC CGAATTCCTG CAGCCCGGGG GATCCACTAG TTCTAGAGCG 480GCCGCCACCG CGGTGGAGCT 500(2)SEQ ID NO102的信息(i)序列特征(A)长度96个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO102Val Ala Met Ser Leu Thr Val Gly Ala Gly Val Ala Ser Ala Asp Pro1 5 10 15Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gln Val Val Ala20 25 30Ala Leu Asn Ala Thr Asp Pro Gly Ala Ala Ala Gln Phe Asn Ala Ser35 40 45Pro Val Ala Gln Ser Tyr Leu Arg Asn Phe Leu Ala Ala Pro Pro Pro50 55 60Gln Arg Ala Ala Met Ala Ala Gln Leu Gln Ala Val Pro Gly Ala Ala65 70 75 80Gln Tyr Ile Gly Leu Val Glu Ser Val Ala Gly Ser Cys Asn Asn Tyr85 90 95(2)SEQ ID NO103的信息(i)序列特征(A)长度154个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO103ATGACAGAGC AGCAGTGGAA TTTCGCGGGT ATCGAGGCCG CGGCAAGCGC AATCCAGGGA 60AATGTCACGT CCATTCATTC CCTCCTTGAC GAGGGGAAGC AGTCCCTGAC CAAGCTCGCA120GCGGCCTGGG GCGGTAGCGG TTCGGAAGCG TACC154(2)SEQ ID NO104的信息(i)序列特征(A)长度51个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链
(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID N0104Met Thr Glu Gln Gln Trp Asn Phe Ala Gly Ile Glu Ala Ala Ala Ser1 5 10 15Ala Ile Gln Gly Asn Val Thr Ser Ile His Ser Leu Leu Asp Glu Gly20 25 30Lys Gln Ser Leu Thr Lys Leu Ala Ala Ala Trp Gly Gly Ser Gly Ser35 40 45Glu Ala Tyr50(2)SEQ ID NO105的信息(i)序列特征(A)长度282个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO105CGGTCGCGCA CTTCCAGGTG ACTATGAAAG TCGGCTTCCG NCTGGAGGAT TCCTGAACCT 60TCAAGCGCGG CCGATAACTG AGGTGCATCA TTAAGCGACT TTTCCAGAAC ATCCTGACGC 120GCTCGAAACG CGGCACAGCC GACGGTGGCT CCGNCGAGGC GCTGNCTCCA AAATCCCTGA 180GACAATTCGN CGGGGGCGCC TACAAGGAAG TCGGTGCTGA ATTCGNCGNG TATCTGGTCG 240ACCTGTGTGG TCTGNAGCCG GACGAAGCGG TGCTCGACGT CG282(2)SEQ ID NO106的信息(i)序列特征(A)长度3058个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO106GATCGTACCC GTGCGAGTGC TCGGGCCGTT TGAGGATGGA GTGCACGTGT CTTTCGTGAT 60GGCATACCCA GAGATGTTGG CGGCGGCGGC TGACACCCTG CAGAGCATCG GTGCTACCAC120TGTGGCTAGC AATGCCGCTG CGGCGGCCCC GACGACTGGG GTGGTGCCCC CCGCTGCCGA180TGAGGTGTCG GCGCTGACTG CGGCGCACTT CGCCGCACAT GCGGCGATGT 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NO110的信息(i)序列特征(A)长度3027个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO110AGTTCAGTCG AGAATGATAC TGACGGGCTG TATCCACGAT GGCTGAGACA ACCGAACCAC 60CGTCGGACGC GGGGACATCG CAAGCCGACG CGATGGCGTT GGCCGCCGAA GCCGAAGCCG120CCGAAGCCGA AGCGCTGGCC GCCGCGGCGC GGGCCCGTGC CCGTGCCGCC CGGTTGAAGC180GTGAGGCGCT GGCGATGGCC CCAGCCGAGG ACGAGAACGT CCCCGAGGAT ATGCAGACTG240GGAAGACGCC GAAGACTATG ACGACTATGA CGACTATGAG GCCGCAGACC AGGAGGCCGC300ACGGTCGGCA TCCTGGCGAC GGCGGTTGCG GGTGCGGTTA CCAAGACTGT CCACGATTGC360CATGGCGGCC GCAGTCGTCA TCATCTGCGG CTTCACCGGG CTCAGCGGAT ACATTGTGTG420GCAACACCAT GAGGCCACCG AACGCCAGCA GCGCGCCGCG GCGTTCGCCG CCGGAGCCAA480GCAAGGTGTC ATCAACATGA CCTCGCTGGA CTTCAACAAG GCCAAAGAAG ACGTCGCGCG540TGTGATCGAC AGCTCCACCG GCGAATTCAG GGATGACTTC CAGCAGCGGG CAGCCGATTT 600CACCAAGGTT GTCGAACAGT CCAAAGTGGT CACCGAAGGC ACGGTGAACG CGACAGCCGT 660CGAATCCATG AACGAGCATT CCGCCGTGGT GCTCGTCGCG GCGACTTCAC GGGTCACCAA 720TTCCGCTGGG GCGAAAGACG AACCACGTGC GTGGCGGCTC AAAGTGACCG TGACCGAAGA 780GGGGGGACAG TACAAGATGT CGAAAGTTGA 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(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO113CTAGTGGATG GGACCATGGC CATTTTCTGC AGTCTCACTG CCTTCTGTGT TGACATTTTG 60GCACGCCGGC GGAAACGAAG CACTGGGGTC GAAGAACGGC TGCGCTGCCA TATCGTCCGG 120AGCTTCCATA CCTTCGTGCG GCCGGAAGAG CTTGTCGTAG TCGGCCGCCA TGACAACCTC 180TCAGAGTGCG CTCAAACGTA TAAACACGAG AAAGGGCGAG ACCGACGGAA GGTCGAACTC 240GCCCGATCCC GTGTTTCGCT ATTCTACGCG AACTCGGCGT TGCCCTATGC GAACATCCCA 300GTGACGTTGC CTTCGGTCGA AGCCATTGCC TGACCGGCTT CGCTGATCGT CCGCGCCAGG 360TTCTGCAGCG CGTTGTTCAG CTCGGTAGCC GTGGCGTCCC ATTTTTGCTG GACACCCTGG 420TACGCCTCCG AA 432(2)SEQ ID NO114的信息(i)序列特征(A)长度368个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO114Met Leu Trp His Ala Met Pro Pro Glu Xaa Asn Thr Ala Arg Leu Met1 5 10 15Ala Gly Ala Gly Pro Ala Pro Met Leu Ala Ala Ala Ala Gly Trp Gln20 25 30Thr Leu Ser Ala Ala Leu Asp Ala Gln Ala Val Glu Leu Thr Ala Arg35 40 45Leu Asn Ser Leu Gly Glu Ala Trp Thr Gly Gly Gly Ser Asp Lys Ala50 55 60Leu Ala Ala Ala Thr Pro Met Val Val Trp Leu Gln Thr Ala Ser Thr65 70 75 80Gln Ala Lys Thr Arg Ala Met Gln Ala Thr Ala Gln Ala Ala Ala Tyr85 90 95Thr Gln Ala Met Ala Thr Thr Pro Ser Leu Pro Glu Ile Ala Ala Asn100 105 110His Ile Thr Gln Ala Val Leu Thr Ala Thr Asn Phe Phe Gly Ile Asn115 120 125Thr Ile Pro Ile Ala Leu Thr Glu Met Asp Tyr Phe Ile Arg Met Trp130 135 140Asn Gln Ala Ala Leu Ala Met Glu Val Tyr Gln Ala Glu Thr Ala Val145 150 155 160Asn Thr Leu Phe Glu Lys Leu Glu Pro Met Ala Ser Ile Leu Asp Pro165 170 175Gly Ala Ser Gln Ser Thr Thr Asn Pro Ile Phe Gly Met Pro Ser Pro180 185 190Gly Ser Ser Thr Pro Val Gly Gln Leu Pro Pro Ala Ala Thr Gln Thr195 200 205Leu Gly Gln Leu Gly Glu Met Ser Gly Pro Met Gln Gln Leu Thr Gln210 215 220Pro Leu Gln Gln Val Thr Ser Leu Phe Ser Gln Val Gly Gly Thr Gly225 230 235 240Gly Gly Asn Pro Ala Asp Glu Glu Ala Ala Gln Met Gly Leu Leu Gly245 250 255Thr Ser Pro Leu Ser Asn His Pro Leu Ala Gly Gly Ser Gly Pro Ser260 265 270Ala Gly Ala Gly Leu Leu Arg Ala Glu Ser Leu Pro Gly Ala Gly Gly275 280 285Ser Leu Thr Arg Thr Pro Leu Met Ser Gln Leu Ile Glu Lys Pro Val290 295 300Ala Pro Ser Val Met Pro Ala Ala Ala Ala Gly Ser Ser Ala Thr Gly305 310 315 320Gly Ala Ala Pro Val Gly Ala Gly Ala Met Gly Gln Gly Ala Gln Ser325 330 335Gly Gly Ser Thr Arg Pro Gly Leu Val Ala Pro Ala Pro Leu Ala Gln340 345 350Glu Arg Glu Glu Asp Asp Glu Asp Asp Trp Asp Glu Glu Asp Asp Trp355 360 365(2)SEQ ID NO115的信息(i)序列特征(A)长度100个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO115Met Ala Glu Met Lys Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala Gln Glu Ala Gly1 5 10 15Asn Phe Glu Arg Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gln Ile Asp Gln Val20 25 30Glu Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg Gly Ala Ala Gly35 40 45Thr Ala Ala Gln Ala Ala Val Val Arg Phe Gln Glu Ala Ala Asn Lys50 55 60Gln Lys Gln Glu Leu Asp Glu Ile Ser Thr Asn Ile Arg Gln Ala Gly65 70 75 80Val Gln Tyr Ser Arg Ala Asp Glu Glu Gln Gln Gln Ala Leu Ser Ser85 90 95Gln Met Gly Phe100(2)SEQ ID NO116的信息(i)序列特征(A)长度396个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO116GATCTCCGGC GACCTGAAAA CCCAGATCGA CCAGGTGGAG TCGACGGCAG GTTCGTTGCA 60GGGCCAGTGG CGCGGCGCGG CGGGGACGGC CGCCCAGGCC GCGGTGGTGC GCTTCCAAGA 120AGCAGCCAAT AAGCAGAAGC AGGAACTCGA CGAGATCTCG ACGAATATTC GTCAGGCCGG 180CGTCCAATAC TCGAGGGCCG ACGAGGAGCA GCAGCAGGCG CTGTCCTCGC AAATGGGCTT 240CTGACCCGCT AATACGAAAA GAAACGGAGC AAAAACATGA CAGAGCAGCA GTGGAATTTC 300GCGGGTATCG AGGCCGCGGC AAGCGCAATC CAGGGAAATG TCACGTCCAT TCATTCCCTC 360CTTGACGAGG GGAAGCAGTC CCTGACCAAG CTCGCA 396(2)SEQ ID NO117的信息(i)序列特征(A)长度80个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO117Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gln Ile Asp Gln Val Glu Ser Thr Ala1 5 10 15Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gln20 25 30Ala Ala Val Val Arg Phe Gln Glu Ala Ala Asn Lys Gln Lys Gln Glu35 40 45Leu Asp Glu Ile Ser Thr Asn Ile Arg Gln Ala Gly Val Gln Tyr Ser50 55 60Arg Ala Asp Glu Glu Gln Gln Gln Ala Leu Ser Ser Gln Met Gly Phe65 70 75 80(2)SEQ ID NO118的信息(i)序列特征(A)长度387个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO118GTGGATCCCG ATCCCGTGTT TCGCTATTCT ACGCGAACTC GGCGTTGCCC TATGCGAACA 60TCCCAGTGAC GTTGCCTTCG GTCGAAGCCA TTGCCTGACC GGCTTCGCTG ATCGTCCGCG 120CCAGGTTCTG CAGCGCGTTG TTCAGCTCGG TAGCCGTGGC GTCCCATTTT TGCTGGACAC 180CCTGGTACGC CTCCGAACCG CTACCGCCCC AGGCCGCTGC GAGCTTGGTC AGGGACTGCT 240TCCCCTCGTC AAGGAGGGAA TGAATGGACG TGACATTTCC CTGGATTGCG CTTGCCGCGG 300CCTCGATACC CGCGAAATTC CACTGCTGCT CTGTCATGTT TTTGCTCCGT TTCTTTTCGT 360ATTAGCGGGT CAGAAGCCCA TTTGCGA 387(2)SEQ ID NO119的信息(i)序列特征(A)长度272个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链
(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO119CGGCACGAGG ATCTCGGTTG GCCCAACGGC GCTGGCGAGG GCTCCGTTCC GGGGGCGAGC 60TGCGCGCCGG ATGCTTCCTC TGCCCGCAGC CGCGCCTGGA TGGATGGACC AGTTGCTACC120TTCCCGACGT TTCGTTCGGT GTCTGTGCGA TAGCGGTGAC CCCGGCGCGC ACGTCGGGAG180TGTTGGGGGG CAGGCCGGGT CGGTGGTTCG GCCGGGGACG CAGACGGTCT GGACGGAACG240GGCGGGGGTT CGCCGATTGG CATCTTTGCC CA 272(2)SEQ ID NO120的信息(i)序列特征(A)长度20个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO120Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gln Val1 5 10 15Val Ala Ala Leu20(2)SEQ ID NO121的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO121Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO122的信息(i)序列特征(A)长度19个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO122Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys1 5 10 15Glu Gly Arg(2)SEQ ID NO123的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO123Tyr Tyr Tro Cys Pro Gly Gln Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro1 5 10 15(2)SEQ ID NO124的信息(i)序列特征(A)长度14个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO124Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gln Gln Xaa Ala Val1 5 10(2)SEQ ID NO125的信息(i)序列特征(A)长度13个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO125Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro1 5 10(2)SEQ ID NO126的信息(i)序列特征(A)长度17个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO126Aso Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser pro Pro1 5 10 15Ser(2)SEQ ID NO127的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO127Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO128的信息(i)序列特征(A)长度30个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO128Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln Leu Thr Ser1 5 10 15Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala Asn20 25 30(2)SEQ ID NO129的信息(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO129Asp Pro Pro Asp Pro His Gln Xaa Asp Met Thr Lys Gly Tyr Tyr Pro1 5 10 15Gly Gly Arg Arg Xaa Phe20(2)SEQ ID NO130的信息(i)序列特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO130Asp Pro Gly Tyr Thr Pro Gly1 5(2)SEQ ID NO131的信息(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(ix)特征(D)其它信息/注＝＂第二个残基可以是Pro或Thr＂(xi)序列描述SEQ ID NO131Xaa Xaa Gly Phe Thr Gly Pro Gln Phe Tyr1 5 10(2)SEQ ID NO132的信息(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(ix)特征(D)其它信息/注＝＂第二个残基可以是Gln或Leu＂(xi)序列描述SEQ ID NO132Xaa Pro Xaa Val Thr Ala Tyr Ala Gly1 5(2)SEQ ID NO133的信息
(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO133Xaa Xaa Xaa Glu Lys Pro Phe Leu Arg1 5(2)SEQ ID NO134的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO134Xaa Asp Ser Glu Lys Ser Ala Thr Ile Lys Val Thr Asp Ala Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO135的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO135Ala Gly Asp Thr Xaa Ile Tyr Ile Val Gly Asn Leu Thr Ala Asp1 5 10 15(2)SEQ ID NO136的信息(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO136Ala Pro Glu Ser Gly Ala Gly Leu Gly Gly Thr Val Gln Ala Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO137的信息(i)序列特征(A)长度21个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO137Xaa Tyr Ile Ala Tyr Xaa Thr Thr Ala Gly Ile Val Pro Gly Lys Ile1 5 10 15Asn Val His Leu Val20(2)SEQ ID NO138的信息(i)序列特征(A)长度882个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(xi)序列描述SEQ ID NO138GCAACGCTGT CGTGGCCTTT GCGGTGATCG GTTTCGCCTC GCTGGCGGTG GCGGTGGCGG 60TCACCATCCG ACCGACCGCG GCCTCAAAAC CGGTAGAGGG ACACCAAAAC GCCCAGCCAG 120GGAAGTTCAT GCCGTTGTTG CCGACGCAAC AGCAGGCGCC GGTCCCGCCG CCTCCGCCCG 180ATGATCCCAC CGCTGGATTC CAGGGCGGCA CCATTCCGGC TGTACAGAAC GTGGTGCCGC 240GGCCGGGTAC CTCACCCGGG GTGGGTGGGA CGCCGGCTTC GCCTGCGCCG GAAGCGCCGG 300CCGTGCCCGG TGTTGTGCCT GCCCCGGTGC CAATCCCGGT CCCGATCATC ATTCCCCCGT 360TCCCGGGTTG GCAGCCTGGA ATGCCGACCA TCCCCACCGC ACCGCCGACG ACGCCGGTGA 420CCACGTCGGC GACGACGCCG CCGACCACGC CGCCGACCAC GCCGGTGACC ACGCCGCCAA 480CGACGCCGCC GACCACGCCG GTGACCACGC CGCCAACGAC GCCGCCGACC ACGCCGGTGA 540CCACGCCACC AACGACCGTC GCCCCGACGA CCGTCGCCCC GACGACGGTC GCTCCGACCA 600CCGTCGCCCC GACCACGGTC GCTCCAGCCA CCGCCACGCC GACGACCGTC GCTCCGCAGC 660CGACGCAGCA GCCCACGCAA CAACCAACCC AACAGATGCC AACCCAGCAG CAGACCGTGG 720CCCCGCAGAC GGTGGCGCCG GCTCCGCAGC CGCCGTCCGG TGGCCGCAAC GGCAGCGGCG 780GGGGCGACTT ATTCGGCGGG TTCTGATCAC GGTCGCGGCT TCACTACGGT CGGAGGACAT 840GGCCGGTGAT GCGGTGACGG TGGTGCTGCC CTGTCTCAAC GA 882(2)SEQ ID NO139的信息(i)序列特征(A)长度815个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(xi)序列描述SEQ ID NO139CCATCAACCA ACCGCTCGCG CCGCCCGCGC CGCCGGATCC GCCGTCGCCG CCACGCCCGC60CGGTGCCTCC GGTGCCCCCG TTGCCGCCGT CGCCGCCGTC GCCGCCGACC GGCTGGGTGC 120CTAGGGCGCT GTTACCGCCC TGGTTGGCGG GGACGCCGCC GGCACCACCG GTACCGCCGA 180TGGCGCCGTT GCCGCCGGCG GCACCGTTGC CACCGTTGCC ACCGTTGCCA CCGTTGCCGA 240CCAGCCACCC GCCGCGACCA CCGGCACCGC CGGCGCCGCC CGCACCGCCG GCGTGCCCGT 300TCGTGCCCGT ACCGCCGGCA CCGCCGTTGC CGCCGTCACC GCCGACGGAA CTACCGGCGG 360ACGCGGCCTG CCCGCCGGCG CCGCCCGCAC CGCCATTGGC ACCGCCGTCA CCGCCGGCTG 420GGAGTGCCGC GATTAGGGCA CTGACCGGCG CAACCAGCGC AAGTACTCTC GGTCACCGAG 480CACTTCCAGA CGACACCACA GCACGGGGTT GTCGGCGGAC TGGGTGAAAT GGCAGCCGAT 540AGCGGCTAGC TGTCGGCTGC GGTCAACCTC GATCATGATG TCGAGGTGAC CGTGACCGCG 600CCCCCCGAAG GAGGCGCTGA ACTCGGCGTT GAGCCGATCG GCGATCGGTT GGGGCAGTGC 660CCAGGCCAAT ACGGGGATAC CGGGTGTCNA AGCCGCCGCG AGCGCAGCTT CGGTTGCGCG 720ACNGTGGTCG GGGTGGCCTG TTACGCCGTT GTCNTCGAAC ACGAGTAGCA GGTCTGCTCC 780GGCGAGGGCA TCCACCACGC GTTGCGTCAG CTCGT 815(2)SEQ ID NO140的信息(i)序列特征(A)长度1152个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(xi)序列描述SEQ ID NO140ACCAGCCGCC GGCTGAGGTC TCAGATCAGA GAGTCTCCGG ACTCACCGGG GCGGTTCAGC60CTTCTCCCAG AACAACTGCT GAAGATCCTC GCCCGCGAAA CAGGCGCTGA TTTGACGCTC 120TATGACCGGT TGAACGACGA GATCATCCGG CAGATTGATA TGGCACCGCT GGGCTAACAG 180GTGCGCAAGA TGGTGCAGCT GTATGTCTCG GACTCCGTGT CGCGGATCAG CTTTGCCGAC 240GGCCGGGTGA TCGTGTGGAG CGAGGAGCTC GGCGAGAGCC AGTATCCGAT CGAGACGCTG 300GACGGCATCA CGCTGTTTGG GCGGCCGACG ATGACAACGC CCTTCATCGT TGAGATGCTC 360AAGCGTGAGC GCGACATCCA GCTCTTCACG ACCGACGGCC ACTACCAGGG CCGGATCTCA 420ACACCCGACG TGTCATACGC GCCGCGGCTC CGTCAGCAAG TTCACCGCAC CGACGATCCT 480GCGTTCTGCC TGTCGTTAAG CAAGCGGATC GTGTCGAGGA AGATCCTGAA TCAGCAGGCC 540TTGATTCGGG CACACACGTC GGGGCAAGAC GTTGCTGAGA GCATCCGCAC GATGAAGCAC 600TCGCTGGCCT GGGTCGATCG ATCGGGCTCC CTGGCGGAGT TGAACGGGTT CGAGGGAAAT 660GCCGCAAAGG CATACTTCAC CGCGCTGGGG CATCTCGTCC CGCAGGAGTT CGCATTCCAG 720GGCCGCTCGA CTCGGCCGCC GTTGGACGCC TTCAACTCGA TGGTCAGCCT CGGCTATTCG 780CTGCTGTACA AGAACATCAT AGGGGCGATC GAGCGTCACA GCCTGAACGC GTATATCGGT 840TTCCTACACC AGGATTCACG AGGGCACGCA ACGTCTCGTG CCGAATTCGG CACGAGCTCC 900GCTGAAACCG CTGGCCGGCT GCTCAGTGCC CGTACGTAAT CCGCTGCGCC CAGGCCGGCC960CGCCGGCCGA ATACCAGCAG ATCGGACAGC GAATTGCCGC CCAGCCGGTT GGAGCCGTGC 1020ATACCGCCGG CACACTCACC GGCAGCGAAC AGGCCTGGCA CCGTGGCGGC GCCGGTGTCC 1080GCGTCTACTT CGACACCGCC CATCACGTAG TGACACGTCG GCCCGACTTC CATTGCCTGC 1140GTTCGGCACG AG 1152(2)SEQ ID NO141的信息(i)序列特征(A)长度655个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(xi)序列描述SEQ ID NO141CTCGTGCCGA TTCGGCAGGG TGTACTTGCC GGTGGTGTAN GCCGCATGAG TGCCGACGAC 60CAGCAATGCG GCAACAGCAC GGATCCCGGT CAACGACGCC ACCCGGTCCA CGTGGGCGAT120CCGCTCGAGT CCGCCCTGGG CGGCTCTTTC CTTGGGCAGG GTCATCCGAC GTGTTTCCGC180CGTGGTTTGC CGCCATTATG CCGGCGCGCC GCGTCGGGCG GCCGGTATGG CCGAANGTCG240ATCAGCACAC CCGAGATACG GGTCTGTGCA AGCTTTTTGA GCGTCGCGCG GGGCAGCTTC300GCCGGCAATT CTACTAGCGA GAAGTCTGGC CCGATACGGA TCTGACCGAA GTCGCTGCGG360TGCAGCCCAC CCTCATTGGC GATGGCGCCG ACGATGGCGC CTGGACCGAT CTTGTGCCGC420TTGCCGACGG CGACGCGGTA GGTGGTCAAG TCCGGTCTAC GCTTGGGCCT TTGCGGACGG480TCCCGACGCT GGTCGCGGTT GCGCCGCGAA AGCGGCGGGT CGGGTGCCAT CAGGAATGCC540TCACCGCCGC GGCACTGCAC GGCCAGTGCC GCGGCGATGT CAGCCATCGG GACATCATGC600TCGCGTTCAT ACTCCTCGAC CAGTCGGCGG AACAGCTCGA TTCCCGGACC GCCCA 655(2)SEQ ID NO142的信息(i)序列特征(A)长度267个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性
(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO142Asn Ala Val Val Ala Phe Ala Val Ile Gly Phe Ala Ser Leu Ala Val1 5 10 15Ala Val Ala Val Thr Ile Arg Pro Thr Ala Ala Ser Lys Pro Val Glu20 25 30Gly His Gln Asn Ala Gln Pro Gly Lys Phe Met Pro Leu Leu Pro Thr35 40 45Gln Gln Gln Ala Pro Val Pro Pro Pro Pro Pro Asp Asp Pro Thr Ala50 55 60Gly Phe Gln Gly Gly Thr Ile Pro Ala Val Gln Asn Val Val Pro Arg65 70 75 80Pro Gly Thr Ser Pro Gly Val Gly Gly Thr Pro Ala Ser Pro Ala Pro85 90 95Glu Ala Pro Ala Val Pro Gly Val Val Pro Ala Pro Val Pro Ile Pro100 105 110Val Pro Ile Ile Ile Pro Pro Phe Pro Gly Trp Gln Pro Gly Met Pro115 120 125Thr Ile Pro Thr Ala Pro Pro Thr Thr Pro Val Thr Thr Ser Ala Thr130 135 140Thr Pro Pro Thr Thr Pro Pro Thr Thr Pro Val Thr Thr Pro Pro Thr145 150 155 160Thr Pro Pro Thr Thr Pro Val Thr Thr Pro Pro Thr Thr Pro Pro Thr165 170 175Thr Pro Val Thr Thr Pro Pro Thr Thr Val Ala Pro Thr Thr Val Ala180 185 190Pro Thr Thr Val Ala Pro Thr Thr Val Ala Pro Thr Thr Val Ala Pro195 200 205Ala Thr Ala Thr Pro Thr Thr Val Ala Pro Gln Pro Thr Gln Gln Pro210 215 220Thr Gln Gln Pro Thr Gln Gln Met Pro Thr Gln Gln Gln Thr Val Ala225 230 235 240Pro Gln Thr Val Ala Pro Ala Pro Gln Pro Pro Ser Gly Gly Arg Asn245 250 255Gly Ser Gly Gly Gly Asp Leu Phe Gly Gly Phe260 265(2)SEQ ID NO143的信息(i)序列特征(A)长度174个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO143Ile Asn Gln Pro Leu Ala Pro Pro Ala Pro Pro Asp Pro Pro Ser Pro1 5 10 15Pro Arg Pro Pro Val Pro Pro Val Pro Pro Leu Pro Pro Ser Pro Pro20 25 30Ser Pro Pro Thr Gly Trp Val Pro Arg Ala Leu Leu Pro Pro Trp Leu35 40 45Ala Gly Thr Pro Pro Ala Pro Pro Val Pro Pro Met Ala Pro Leu Pro50 55 60Pro Ala Ala Pro Leu Pro Pro Leu Pro Pro Leu Pro Pro Leu Pro Thr65 70 75 80Ser His Pro Pro Arg Pro Pro Ala Pro Pro Ala Pro Pro Ala Pro Pro85 90 95Ala Cys Pro Phe Val Pro Val Pro Pro Ala Pro Pro Leu Pro Pro Ser100 105 110Pro Pro Thr Glu Leu Pro Ala Asp Ala Ala Cys Pro Pro Ala Pro Pro115 120 125Ala Pro Pro Leu Ala Pro Pro Ser Pro Pro Ala Gly Ser Ala Ala Ile130 135 140Arg Ala Leu Thr Gly Ala Thr Ser Ala Ser Thr Leu Gly His Arg Ala145 150 155 160Leu Pro Asp Asp Thr Thr Ala Arg Gly Cys Arg Arg Thr Gly165 170(2)SEQ ID NO144的信息(i)序列特征(A)长度35个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO144Gln Pro Pro Ala Glu Val Ser Asp Gln Arg Val Ser Gly Leu Thr Gly1 5 10 15Ala Val Gln Pro Ser Pro Arg Thr Thr Ala Glu Asp Pro Arg Pro Arg20 25 30Asn Arg Arg35(2)SEQ ID NO145的信息(i)序列特征(A)长度104个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO145Arg Ala Asp Ser Ala Gly Cys Thr Cys Arg Trp Cys Xaa Pro His Glu1 5 10 15Cys Arg Arg Pro Ala Met Arg Gln Gln His Gly Ser Arg Ser Thr Thr20 25 30Pro Pro Gly Pro Arg Gly Arg Ser Ala Arg Val Arg Pro Gly Arg Leu35 40 45Phe Pro Trp Ala Gly Ser Ser Asp Val Phe Pro Pro Trp Phe Ala Ala50 55 60Ile Met Pro Ala Arg Arg Val Gly Arg Pro Val Trp Pro Xaa Val Asp65 70 75 80Gln His Thr Arg Asp Thr Gly Leu Cys Lys Leu Phe Glu Arg Arg Ala85 90 95Gly Gln Leu Arg Arg Gln Phe Tyr100(2)SEQ ID NO146的信息(i)序列特征(A)长度53个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链
(D)拓扑学线性(ii)分子类型其它核酸(A)说明/desc＝＂PCR引物＂(vi)来源(A)微生物结核分枝杆菌(xi)序列描述SEQ ID NO146GGATCCATAT GGGCCATCAT CATCATCATC ACGTGATCGA CATCATCGGG ACC53(2)SEQ ID NO147的信息(i)序列特征(A)长度42个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型其它核酸(A)说明/desc＝＂PCR引物＂(vi)来源(A)微生物结核分枝杆菌(xi)序列描述SEQ ID NO147CCTGAATTCA GGCCTCGGTT GCGCCGGCCT CATCTTGAAC GA42(2)SEQ ID NO148的信息(i)序列特征(A)长度31个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型其它核酸(A)说明/desc＝＂PCR引物＂(vi)来源(A)微生物结核分枝杆菌(xi)序列描述SEQ ID NO148GGATCCTGCA GGCTCGAAAC CACCGAGCGG T 31(2)SEQ ID NO149的信息(i)序列特征(A)长度31个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型其它核酸(A)说明/desc＝＂PCR引物＂(vi)来源(A)微生物结核分枝杆菌(xi)序列描述SEQ ID NO149CTCTGAATTC AGCGCTGGAA ATCGTCGCGA T 31(2)SEQ ID NO150的信息(i)序列特征(A)长度33个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型其它核酸(A)说明/desc＝＂PCR引物＂(vi)来源(A)微生物结核分枝杆菌(xi)序列描述SEQ ID NO150GGATCCAGCG CTGAGATGAA GACCGATGCC GCT 33(2)SEQ ID NO151的信息(i)序列特征(A)长度33个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型其它核酸(A)说明/desc＝＂PCR引物＂(vi)来源(A)微生物结核分枝杆菌(xi)序列描述SEQ ID NO151GAGAGAATTC TCAGAAGCCC ATTTGCGAGG ACA 33(2)SEQ ID NO152的信息(i)序列特征(A)长度1993个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(A)说明/desc＝＂PCR引物＂(vi)来源(A)微生物结核分枝杆菌(ix)特征(A)名称/关键词CDS(B)位置152..1273(xi)序列描述SEQ ID NO152TGTTCTTCGA CGGCAGGCTG GTGGAGGAAG GGCCCACCGA ACAGCTGTTC TCCTCGCCGA 60AGCATGCGGA AACCGCCCGA TACGTCGCCG GACTGTCGGG GGACGTCAAG GACGCCAAGC120GCGGAAATTG AAGAGCACAG AAAGGTATGG C GTG AAA ATT CGT TTG CAT ACG 172Val Lys Ile Arg Leu His Thr1 5CTG TTG GCC GTG TTG ACC GCT GCG CCG CTG CTG CTA GCA GCG GCG GGC 220Leu Leu Ala Val Leu Thr Ala Ala Pro Leu Leu Leu Ala Ala Ala Gly10 15 20TGT GGC TCG AAA CCA CCG AGC GGT TCG CCT GAA ACG GGC GCC GGC GCC 268Cys Gly Ser Lys Pro Pro Ser Gly Ser Pro Glu Thr Gly Ala Gly Ala25 30 35GGT ACT GTC GCG ACT ACC CCC GCG TCG TCG CCG GTG ACG TTG GCG GAG 316Gly Thr Val Ala Thr Thr Pro Ala Ser Ser Pro Val Thr Leu Ala Glu40 45 50 55ACC GGT AGC ACG CTG CTC TAC CCG CTG TTC AAC CTG TGG GGT CCG GCC 364Thr Gly Ser Thr Leu Leu Tyr Pro Leu Phe Asn Leu Trp Gly Pro Ala60 65 70TTT CAC GAG AGG TAT CCG AAC GTC ACG ATC ACC GCT CAG GGC ACC 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Ser Asp Gly Ser Gly Asp Thr Phe Leu Phe Thr Gln Tyr Leu185 190 195TCC AAG CAA GAT CCC GAG GGC TGG GGC AAG TCG CCC GGC TTC GGC ACC 796Ser Lys Gln Asp Pro Glu Gly Trp Gly Lys Ser Pro Gly Phe Gly Thr200 205 210 215ACC GTC GAC TTC CCG GCG GTG CCG GGT GCG CTG GGT GAG AAC GGC AAC 844Thr Val Asp Phe Pro Ala Val Pro Gly Ala Leu Gly Glu Asn Gly Asn220 225 230GGC GGC ATG GTG ACC GGT TGC GCC GAG ACA CCG GGC TGC GTG GCC TAT 892Gly Gly Met Val Thr Gly Cys Ala Glu Thr Pro Gly Cys Val Ala Tyr235 240 245ATC GGC ATC AGC TTC CTC GAC CAG GCC AGT CAA CGG GGA CTC GGC GAG940Ile Gly Ile Ser Phe Leu Asp Gln Ala Ser Gln Arg Gly Leu Gly Glu250 255 260GCC CAA CTA GGC AAT AGC TCT GGC AAT TTC TTG TTG CCC GAC GCG CAA988Ala Gln Leu Gly Asn Ser Ser Gly Asn Phe Leu Leu Pro Asp Ala Gln265 270 275AGC ATT CAG GCC GCG GCG GCT GGC TTC GCA TCG AAA ACC CCG GCG AAC 1036Ser Ile Gln Ala Ala Ala Ala Gly Phe Ala Ser Lys Thr Pro Ala Asn280 285 290 295CAG GCG ATT TCG ATG ATC GAC GGG CCC GCC CCG GAC GGC TAC CCG ATC 1084Gln Ala Ile Ser Met Ile Asp Gly Pro Ala Pro Asp Gly Tyr Pro Ile300 305 310ATC AAC TAC GAG TAC GCC ATC GTC AAC AAC CGG CAA AAG GAC GCC GCC 1132Ile Asn Tyr Glu Tyr Ala Ile Val Asn Asn Arg Gln Lys Asp Ala Ala315 320 325ACC GCG CAG ACC TTG CAG GCA TTT CTG CAC TGG GCG ATC ACC GAC GGC 1180Thr Ala Gln Thr Leu Gln Ala Phe Leu His Trp Ala Ile Thr Asp Gly330 335 340AAC AAG GCC TCG TTC CTC GAC CAG GTT CAT TTC CAG CCG CTG CCG CCC 1228Asn Lys Ala Ser Phe Leu Asp Gln Val His Phe Gln Pro Leu Pro Pro345 350 355GCG GTG GTG AAG TTG TCT GAC GCG TTG ATC GCG ACG ATT TCC AGC 1273Ala Val Val Lys Leu Ser Asp Ala Leu Ile Ala Thr Ile Ser Ser360 365 370TAGCCTCGTT GACCACCACG CGACAGCAAC CTCCGTCGGG CCATCGGGCT GCTTTGCGGA 1333GCATGCTGGC CCGTGCCGGT GAAGTCGGCC GCGCTGGCCC GGCCATCCGG TGGTTGGGTG 1393GGATAGGTGC GGTGATCCCG CTGCTTGCGC TGGTCTTGGT GCTGGTGGTG CTGGTCATCG 1453AGGCGATGGG TGCGATCAGG CTCAACGGGT TGCATTTCTT CACCGCCACC GAATGGAATC 1513CAGGCAACAC CTACGGCGAA ACCGTTGTCA CCGACGCGTC GCCCATCCGG TCGGCGCCTA 1573CTACGGGGCG TTGCCGCTGA 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Asn Ile Gly Ala Ser Asp Ala Tyr Leu Ser Glu Gly100 105 110Asp Met Ala Ala His Lys Gly Leu Met Asn Ile Ala Leu Ala Ile Ser115 120 125Ala Gln Gln Val Asn Tyr Asn Leu Pro Gly Val Ser Glu His Leu Lys130 135 140Leu Asn Gly Lys Val Leu Ala Ala Met Tyr Gln Gly Thr Ile Lys Thr145 150 155 160Trp Asp Asp Pro Gln Ile Ala Ala Leu Asn Pro Gly Val Asn Leu Pro165 170 175Gly Thr Ala Val Val Pro Leu His Arg Ser Asp Gly Ser Gly Asp Thr180 185 190Phe Leu Phe Thr Gln Tyr Leu Ser Lys Gln Asp Pro Glu Gly Trp Gly195 200 205Lys Ser Pro Gly Phe Gly Thr Thr Val Asp Phe Pro Ala Val Pro Gly210 215 220Ala Leu Gly Glu Asn Gly Asn Gly Gly Met Val Thr Gly Cys Ala Glu225 230 235 240Thr Pro Gly Cys Val Ala Tyr Ile Gly Ile Ser Phe Leu Asp Gln Ala245 250 255Ser Gln Arg Gly Leu Gly Glu Ala Gln Leu Gly Asn Ser Ser Gly Asn260 265 270Phe Leu Leu Pro Asp Ala Gln Ser Ile Gln Ala Ala Ala Ala Gly Phe275 280 285Ala Ser Lys Thr Pro Ala Asn Gln Ala Ile Ser Met Ile Asp Gly Pro290 295 300Ala Pro Asp Gly Tyr Pro Ile Ile Asn Tyr Glu 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260265 270Pro Arg Arg Ile Gly275(2)SEQ ID NO186的信息(i)序列特征(A)长度192个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO186Arg Val Ala Ala Ser Phe Ile Asp Trp Leu Asp Ser Pro Asp Ser Pro1 5 10 15Leu Asp Pro Ser Leu Val Ser Ser Leu Leu Asn Ala Val Ser Cys Gly20 25 30Ala Glu Ser Ser Ala Ser Ser Ser Ala Arg Ser Gly Asn Gly Ser Arg35 40 45Trp Thr Ser Met Pro Ser Gly Thr Arg Pro Gly Pro Arg Arg Ala Thr50 55 60Ser Arg Asp Asp Arg Arg Ser Ala Thr Ser Val Ile Pro Ser Arg Arg65 70 75 80Ser Val Ala Pro Arg Ala Glu Phe Gly Thr Arg Leu Ala Ser His Arg85 90 95Ala Ser Pro Ser Asn Ala Cys Pro Val Arg Ile Val Thr Ser Ala Ser100 105 110Gly Arg Pro Ile Ser Ser Pro Pro Ile Val Arg Ser Arg Ser Cys Val115 120 125Asp Lys Asn Gly Arg Arg Cys Ala Ser Gly Tyr Arg Arg Leu Asn Arg130 135 140Ala Arg Ser Ser Ser Ile Ala Ala Arg Cys Arg Thr Ile Gly Thr Phe145 150 155 160Arg Arg Ser Arg Tyr Ser Ala Ser Met Arg Val Ser Thr Asn Ser Pro165 170 175His Val Thr His Gly Val Ala Pro Gly Val Thr Arg Arg Ile Gly Gly180 185 190(2)SEQ ID NO187的信息(i)序列特征(A)长度196个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO187Gln Glu Arg Pro Gln Met Cys Gln Arg Val Ser Glu Ile Glu Pro Arg1 5 10 15Thr Gln Phe Phe Asn Arg Cys Ala Leu Pro His Tyr Trp His Phe Pro20 25 30Ala Val Ala Val Phe Ser Lys His Ala Ser Leu Asp Glu Leu Ala Pro35 40 45Arg Asn Pro Arg Arg Ser Ser Arg Arg Asp Ala Glu Asp Arg Arg Val50 55 60Ile Phe Ala Ala Thr Leu Val Ala Val Asp Pro Pro Leu Arg Gly Ala5 70 75 80Gly Gly Glu Ala Asp Gln Leu Ile Asp Leu Gly Val Cys Arg Arg Gln85 90 95Ala Gly Arg Val Arg Arg Gly Gln Glu Leu His His Arg His Arg His100 105 110Gln Gly Ala Ala Pro Asp Leu Arg Arg Arg Arg Arg His Arg Arg Val115 120 125Gln Gln His Arg Arg Leu Gln Arg Val Arg Gln Leu Arg Arg Tyr Val130 135 140Gln Thr Ala His His Arg Arg Phe Ala Arg Thr Asp Arg Val Arg His145 150 155 160His Val Arg Gly Pro Ser Asn His Arg Arg Arg Arg Val Tyr Arg Gly165 170 175Arg His Ser Gly Ala Gly Gly Cys Pro Ala Gly Gly Ala Gly Ser Val180 185 190Gly Gly Ser Ala195(2)SEQ ID NO188的信息(i)序列特征(A)长度311个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO188Val Arg Cys Gly Thr Leu Val Pro Val Pro Met Val Glu Phe Leu Thr15 10 15Ser Thr Asn Ala Pro Ser Leu Pro Ser Ala Tyr Ala Glu Val Asp Lys20 25 30Leu Ile Gly Leu Pro Ala Gly Thr Ala Lys Arg Trp Ile Asn Gly Tyr35 40 45Glu Arg Gly Gly Lys Asp His Pro Pro Ile Leu Arg Val Thr Pro Gly50 55 60Ala Thr Pro Trp Val Thr Trp Gly Glu Phe Val Glu Thr Arg Met Leu65 70 75 80Ala Glu Tyr Arg Asp Arg Arg Lys Val Pro Ile Val Arg Gln Arg Ala85 90 95Ala Ile Glu Glu Leu Arg Ala Arg Phe Asn Leu Arg Tyr Pro Leu Ala100 105 110His Leu Arg Pro Phe Leu Ser Thr His Glu Arg Asp Leu Thr Met Gly115 120 125Gly Glu Glu Ile Gly Leu Pro Asp Ala Glu Val Thr Ile Arg Thr Gly130 135 140Gln Ala Leu Leu Gly Asp Ala Arg Trp Leu Ala Ser Leu Val Pro Asn145 150 155 160Ser Ala Arg Gly Ala Thr Leu Arg Arg Leu Gly Ile Thr Asp Val Ala165 170 175Asp Leu Arg Ser Ser Arg Glu Val Ala Arg Arg Gly Pro Gly Arg Val180 185 190Pro Asp Gly Ile Asp Val His Leu Leu Pro Phe Pro Asp Leu Ala Asp195 200 205Asp Asp Ala Asp Asp Ser Ala Pro His Glu Thr Ala Phe Lys Arg Leu210 215 220Leu Thr Asn Asp Gly Ser Asn Gly Glu Ser Gly Glu Ser Ser Gln Ser225 230 235 240Ile Asn Asp Ala Ala Thr Arg Tyr Met Thr Asp Glu Tyr Arg Gln Phe245 250 255Pro Thr Arg Asn Gly Ala Gln Arg Ala Leu His Arg Val Val Thr Leu260 265 270Leu Ala Ala Gly Arg Pro Val Leu Thr His Cys Phe Ala Gly Lys Asp275 280 285Arg Thr Gly Phe Val Val Ala Leu Val Leu Glu Ala Val Gly Leu Asp290 295 300Arg Asp Val Ile Val Ala Asp305 310(2)SEQ ID NO189的信息(i)序列特征(A)长度2072个碱基对(B)类型核酸
(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO189CTCGTGCCGA TTCGGCACGA GCTGAGCAGC CCAAGGGGCC GTTCGGCGAA GTCATCGAGG 60CATTCGCCGA CGGGCTGGCC GGCAAGGGTA AGCAAATCAA CACCACGCTG AACAGCCTGT 120CGCAGGCGTT GAACGCCTTG AATGAGGGCC GCGGCGACTT CTTCGCGGTG GTACGCAGCC 180TGGCGCTATT CGTCAACGCG CTACATCAGG ACGACCAACA GTTCGTCGCG TTGAACAAGA 240ACCTTGCGGA GTTCACCGAC AGGTTGACCC ACTCCGATGC GGACCTGTCG AACGCCATCC 300AGCAATTCGA CAGCTTGCTC GCCGTCGCGC GCCCGTTCTT CGCCAAGAAC CGCGAGGTGC 360TGACGCATGA CGTCAATAAT CTCGCGACCG TGACCACCAC GTTGCTGCAG CCCGATCCGT 420TGGATGGGTT GGAGACCGTC CTGCACATCT TCCCGACGCT GGCGGCGAAC ATTAACCAGC 480TTTACCATCC GACACACGGT GGCGTGGTGT CGCTTTCCGC GTTCACGAAT TTCGCCAACC 540CGATGGAGTT CATCTGCAGC TCGATTCAGG CGGGTAGCCG GCTCGGTTAT CAAGAGTCGG 600CCGAACTCTG TGCGCAGTAT CTGGCGCCAG TCCTCGATGC GATCAAGTTC AACTACTTTC 660CGTTCGGCCT GAACGTGGCC AGCACCGCCT CGACACTGCC TAAAGAGATC GCGTACTCCG 720AGCCCCGCTT GCAGCCGCCC AACGGGTACA AGGACACCAC GGTGCCCGGC ATCTGGGTGC 780CGGATACGCC GTTGTCACAC CGCAACACGC AGCCCGGTTG GGTGGTGGCA CCCGGGATGC 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(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO208CTCTGAATTC AGCGCTGGAA ATCGTCGCGA T 31(2)SEQ ID NO209的信息(i)序列特征(A)长度33个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO209GGATCCAGCG CTGAGATGAA GACCGATGCC GCT33(2)SEQ ID NO210的信息(i)序列特征(A)长度38个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO210GGATATCTGC AGAATTCAGG TTTAAAGCCC ATTTGCGA 38(2)SEQ ID NO211的信息(i)序列特征(A)长度30个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO211CCGCATGCGA GCCACGTGCC CACAACGGCC30(2)SEQ ID NO212的信息(i)序列特征(A)长度37个碱基对(B)类型核酸
(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO212CTTCATGGAATTCTCAGGCC GGTAAGGTCC GCTGCGG 37(2)SEQ ID NO213的信息(i)序列特征(A)长度7676个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO213TGGCGAATGG GACGCGCCCT GTAGCGGCGC ATTAAGCGCG GCGGGTGTGG TGGTTACGCG 60CAGCGTGACC GCTACACTTG CCAGCGCCCT AGCGCCCGCT CCTTTCGCTT TCTTCCCTTC 120CTTTCTCGCC ACGTTCGCCG GCTTTCCCCG TCAAGCTCTA AATCGGGGGC TCCCTTTAGG 180GTTCCGATTT AGTGCTTTAC GGCACCTCGA CCCCAAAAAA CTTGATTAGG GTGATGGTTC 240ACGTAGTGGG CCATCGCCCT GATAGACGGT TTTTCGCCCT TTGACGTTGG AGTCCACGTT 300CTTTAATAGT GGACTCTTGT TCCAAACTGG AACAACACTC AACCCTATCT CGGTCTATTC 360TTTTGATTTA TAAGGGATTT TGCCGATTTC GGCCTATTGG TTAAAAAATG AGCTGATTTA 420ACAAAAATTT AACGCGAATT TTAACAAAAT ATTAACGTTT ACAATTTCAG GTGGCACTTT 480TCGGGGAAAT GTGCGCGGAA CCCCTATTTG TTTATTTTTC TAAATACATT CAAATATGTA 540TCCGCTCATG AATTAATTCT TAGAAAAACT CATCGAGCAT CAAATGAAAC TGCAATTTAT 600TCATATCAGG ATTATCAATA CCATATTTTT GAAAAAGCCG TTTCTGTAAT GAAGGAGAAA 660ACTCACCGAG GCAGTTCCAT AGGATGGCAA GATCCTGGTA TCGGTCTGCG ATTCCGACTC 720GTCCAACATC AATACAACCT ATTAATTTCC CCTCGTCAAA AATAAGGTTA TCAAGTGAGA 780AATCACCATG AGTGACGACT GAATCCGGTG AGAATGGCAA AAGTTTATGC ATTTCTTTCC 840AGACTTGTTC AACAGGCCAG CCATTACGCT CGTCATCAAA ATCACTCGCA TCAACCAAAC 900CGTTATTCAT TCGTGATTGC GCCTGAGCGA GACGAAATAC GCGATCGCTG TTAAAAGGAC 960AATTACAAAC AGGAATCGAA TGCAACCGGC GCAGGAACAC TGCCAGCGCA TCAACAATAT1020TTTCACCTGA ATCAGGATAT TCTTCTAATA CCTGGAATGC TGTTTTCCCG GGGATCGCAG1080TGGTGAGTAA CCATGCATCA TCAGGAGTAC GGATAAAATG CTTGATGGTC GGAAGAGGCA1140TAAATTCCGT CAGCCAGTTT AGTCTGACCA TCTCATCTGT AACATCATTG GCAACGCTAC1200CTTTGCCATG TTTCAGAAAC AACTCTGGCG CATCGGGCTT CCCATACAAT CGATAGATTG1260TCGCACCTGA TTGCCCGACA TTATCGCGAG CCCATTTATA CCCATATAAA TCAGCATCCA1320TGTTGGAATT TAATCGCGGC CTAGAGCAAG ACGTTTCCCG TTGAATATGG CTCATAACAC1380CCCTTGTATT ACTGTTTATG TAAGCAGACA GTTTTATTGT TCATGACCAA AATCCCTTAA1440CGTGAGTTTT CGTTCCACTG AGCGTCAGAC CCCGTAGAAA AGATCAAAGG ATCTTCTTGA1500GATCCTTTTT TTCTGCGCGT AATCTGCTGC TTGCAAACAA AAAAACCACC GCTACCAGCG1560GTGGTTTGTT TGCCGGATCA AGAGCTACCA ACTCTTTTTC CGAAGGTAAC TGGCTTCAGC1620AGAGCGCAGA TACCAAATAC TGTCCTTCTA GTGTAGCCGT AGTTAGGCCA CCACTTCAAG1680AACTCTGTAG CACCGCCTAC ATACCTCGCT CTGCTAATCC TGTTACCAGT GGCTGCTGCC1740AGTGGCGATA AGTCGTGTCT TACCGGGTTG GACTCAAGAC GATAGTTACC GGATAAGGCG1800CAGCGGTCGG GCTGAACGGG GGGTTCGTGC ACACAGCCCA GCTTGGAGCG AACGACCTAC1860ACCGAACTGA GATACCTACA GCGTGAGCTA TGAGAAAGCG CCACGCTTCC CGAAGGGAGA1920AAGGCGGACA GGTATCCGGT AAGCGGCAGG GTCGGAACAG GAGAGCGCAC GAGGGAGCTT1980CCAGGGGGAA ACGCCTGGTA TCTTTATAGT CCTGTCGGGT TTCGCCACCT CTGACTTGAG2040CGTCGATTTT TGTGATGCTC GTCAGGGGGG CGGAGCCTAT GGAAAAACGC CAGCAACGCG2100GCCTTTTTAC GGTTCCTGGC CTTTTGCTGG CCTTTTGCTC ACATGTTCTT TCCTGCGTTA2160TCCCCTGATT CTGTGGATAA CCGTATTACC GCCTTTGAGT GAGCTGATAC CGCTCGCCGC2220AGCCGAACGA CCGAGCGCAG CGAGTCAGTG AGCGAGGAAG CGGAAGAGCG CCTGATGCGG2280TATTTTCTCC TTACGCATCT GTGCGGTATT TCACACCGCA TATATGGTGC ACTCTCAGTA2340CAATCTGCTC TGATGCCGCA TAGTTAAGCC AGTATACACT CCGCTATCGC TACGTGACTG2400GGTCATGGCT GCGCCCCGAC ACCCGCCAAC ACCCGCTGAC GCGCCCTGAC GGGCTTGTCT2460GCTCCCGGCA TCCGCTTACA GACAAGCTGT GACCGTCTCC GGGAGCTGCA TGTGTCAGAG2520GTTTTCACCG TCATCACCGA AACGCGCGAG GCAGCTGCGG TAAAGCTCAT CAGCGTGGTC2580GTGAAGCGAT TCACAGATGT CTGCCTGTTC ATCCGCGTCC AGCTCGTTGA GTTTCTCCAG2640AAGCGTTAAT GTCTGGCTTC TGATAAAGCG GGCCATGTTA AGGGCGGTTT TTTCCTGTTT2700GGTCACTGAT GCCTCCGTGT AAGGGGGATT TCTGTTCATG GGGGTAATGA TACCGATGAA2760ACGAGAGAGG ATGCTCACGA TACGGGTTAC TGATGATGAA CATGCCCGGT TACTGGAACG2820TTGTGAGGGT AAACAACTGG CGGTATGGAT GCGGCGGGAC CAGAGAAAAA TCACTCAGGG2880TCAATGCCAG CGCTTCGTTA ATACAGATGT AGGTGTTCCA CAGGGTAGCC AGCAGCATCC2940TGCGATGCAG ATCCGGAACA TAATGGTGCA GGGCGCTGAC TTCCGCGTTT CCAGACTTTA3000CGAAACACGG AAACCGAAGA CCATTCATGT TGTTGCTCAG GTCGCAGACG TTTTGCAGCA3060GCAGTCGCTT CACGTTCGCT CGCGTATCGG TGATTCATTC TGCTAACCAG TAAGGCAACC3120CCGCCAGCCT AGCCGGGTCC TCAACGACAG GAGCACGATC ATGCGCACCC GTGGGGCCGC3180CATGCCGGCG ATAATGGCCT GCTTCTCGCC GAAACGTTTG GTGGCGGGAC CAGTGACGAA3240GGCTTGAGCG AGGGCGTGCA AGATTCCGAA TACCGCAAGC GACAGGCCGA TCATCGTCGC3300GCTCCAGCGA AAGCGGTCCT CGCCGAAAAT GACCCAGAGC GCTGCCGGCA CCTGTCCTAC3360GAGTTGCATG ATAAAGAAGA CAGTCATAAG TGCGGCGACG ATAGTCATGC CCCGCGCCCA3420CCGGAAGGAG CTGACTGGGT TGAAGGCTCT CAAGGGCATC GGTCGAGATC CCGGTGCCTA3480ATGAGTGAGC TAACTTACAT TAATTGCGTT GCGCTCACTG CCCGCTTTCC AGTCGGGAAA3540CCTGTCGTGC CAGCTGCATT AATGAATCGG CCAACGCGCG GGGAGAGGCG GTTTGCGTAT3600TGGGCGCCAG GGTGGTTTTT CTTTTCACCA GTGAGAGGGG CAACAGCTGA TTGCCCTTCA3660CCGCCTGGCC CTGAGAGAGT TGCAGCAAGC GGTCCACGCT GGTTTGCCCC AGCAGGCGAA3720AATCCTGTTT GATGGTGGTT AACGGCGGGA TATAACATGA GCTGTCTTCG GTATCGTCGT3780ATCCCACTAC CGAGATATCC GCACCAACGC GCAGCCCGGA CTCGGTAATG GCGCGCATTG3840CGCCCAGCGC CATCTGATCG TTGGCAACCA GCATCGCAGT GGGAACGATG CCCTCATTCA3900GCATTTGCAT GGTTTGTTGA AAACCGGACA TGGCACTCCA GTCGCCTTCC CGTTCCGCTA3960TCGGCTGAAT TTGATTGCGA GTGAGATATT TATGCCAGCC AGCCAGACGC AGACGCGCCG4020AGACAGAACT TAATGGGCCC GCTAACAGCG CGATTTGCTG GTGACCCAAT GCGACCAGAT4080GCTCCACGCC CAGTCGCGTA CCGTCTTCAT GGGAGAAAAT AATACTGTTG ATGGGTGTCT4140GGTCAGAGAC ATCAAGAAAT AACGCCGGAA CATTAGTGCA GGCAGCTTCC ACAGCAATGG4200CATCCTGGTC ATCCAGCGGA TAGTTAATGA TCAGCCCACT GACGCGTTGC GCGAGAAGAT4260TGTGCACCGC CGCTTTACAG GCTTCGACGC CGCTTCGTTC TACCATCGAC ACCACCACGC4320TGGCACCCAG TTGATCGGCG CGAGATTTAA TCGCCGCGAC AATTTGCGAC GGCGCGTGCA4380GGGCCAGACT GGAGGTGGCA ACGCCAATCA GCAACGACTG TTTGCCCGCC AGTTGTTGTG4440CCACGCGGTT GGGAATGTAA TTCAGCTCCG CCATCGCCGC TTCCACTTTT TCCCGCGTTT4500TCGCAGAAAC GTGGCTGGCC TGGTTCACCA CGCGGGAAAC GGTCTGATAA GAGACACCGG4560CATACTCTGC GACATCGTAT AACGTTACTG GTTTCACATT CACCACCCTG AATTGACTCT4620CTTCCGGGCG CTATCATGCC ATACCGCGAA AGGTTTTGCG CCATTCGATG GTGTCCGGGA4680TCTCGACGCT CTCCCTTATG CGACTCCTGC ATTAGGAAGC AGCCCAGTAG TAGGTTGAGG4740CCGTTGAGCA CCGCCGCCGC AAGGAATGGT GCATGCAAGG AGATGGCGCC CAACAGTCCC4800CCGGCCACGG GGCCTGCCAC CATACCCACG CCGAAACAAG CGCTCATGAG CCCGAAGTGG4860CGAGCCCGAT CTTCCCCATC GGTGATGTCG GCGATATAGG CGCCAGCAAC CGCACCTGTG 4920GCGCCGGTGA TGCCGGCCAC GATGCGTCCG GCGTAGAGGA TCGAGATCTC GATCCCGCGA 4980AATTAATACG ACTCACTATA GGGGAATTGT GAGCGGATAA CAATTCCCCT CTAGAAATAA 5040TTTTGTTTAA CTTTAAGAAG GAGATATACA TATGGGCCAT CATCATCATC ATCACGTGAT 5100CGACATCATC GGGACCAGCC CCACATCCTG GGAACAGGCG GCGGCGGAGG CGGTCCAGCG 5160GGCGCGGGAT AGCGTCGATG ACATCCGCGT CGCTCGGGTC ATTGAGCAGG ACATGGCCGT 5220GGACAGCGCC GGCAAGATCA CCTACCGCAT CAAGCTCGAA GTGTCGTTCA AGATGAGGCC 5280GGCGCAACCG AGGGGCTCGA AACCACCGAG CGGTTCGCCT GAAACGGGCG CCGGCGCCGG 5340TACTGTCGCG ACTACCCCCG CGTCGTCGCC GGTGACGTTG GCGGAGACCG GTAGCACGCT 5400GCTCTACCCG CTGTTCAACC TGTGGGGTCC GGCCTTTCAC GAGAGGTATC CGAACGTCAC 5460GATCACCGCT CAGGGCACCG GTTCTGGTGC CGGGATCGCG CAGGCCGCCG CCGGGACGGT 5520CAACATTGGG GCCTCCGACG CCTATCTGTC GGAAGGTGAT ATGGCCGCGC ACAAGGGGCT 5580GATGAACATC GCGCTAGCCA TCTCCGCTCA GCAGGTCAAC TACAACCTGC CCGGAGTGAG 5640CGAGCACCTC AAGCTGAACG GAAAAGTCCT GGCGGCCATG TACCAGGGCA CCATCAAAAC 5700CTGGGACGAC CCGCAGATCG CTGCGCTCAA CCCCGGCGTG AACCTGCCCG GCACCGCGGT 5760AGTTCCGCTG CACCGCTCCG ACGGGTCCGG TGACACCTTC TTGTTCACCC AGTACCTGTC 5820CAAGCAAGAT CCCGAGGGCT GGGGCAAGTC GCCCGGCTTC GGCACCACCG TCGACTTCCC 5880GGCGGTGCCG GGTGCGCTGG GTGAGAACGG CAACGGCGGC ATGGTGACCG GTTGCGCCGA 5940GACACCGGGC TGCGTGGCCT ATATCGGCAT CAGCTTCCTC GACCAGGCCA GTCAACGGGG 6000ACTCGGCGAG GCCCAACTAG GCAATAGCTC TGGCAATTTC TTGTTGCCCG ACGCGCAAAG 6060CATTCAGGCC GCGGCGGCTG GCTTCGCATC GAAAACCCCG GCGAACCAGG CGATTTCGAT 6120GATCGACGGG CCCGCCCCGG ACGGCTACCC GATCATCAAC TACGAGTACG CCATCGTCAA 6180CAACCGGCAA AAGGACGCCG CCACCGCGCA GACCTTGCAG GCATTTCTGC ACTGGGCGAT 6240CACCGACGGC AACAAGGCCT CGTTCCTCGA CCAGGTTCAT TTCCAGCCGC TGCCGCCCGC 6300GGTGGTGAAG TTGTCTGACG CGTTGATCGC GACGATTTCC AGCGCTGAGA TGAAGACCGA 6360TGCCGCTACC CTCGCGCAGG AGGCAGGTAA TTTCGAGCGG ATCTCCGGCG ACCTGAAAAC 6420CCAGATCGAC CAGGTGGAGT CGACGGCAGG TTCGTTGCAG GGCCAGTGGC GCGGCGCGGC 6480GGGGACGGCC GCCCAGGCCG CGGTGGTGCG CTTCCAAGAA GCAGCCAATA AGCAGAAGCA 6540GGAACTCGAC GAGATCTCGA CGAATATTCG TCAGGCCGGC GTCCAATACT CGAGGGCCGA 6600CGAGGAGCAG CAGCAGGCGC TGTCCTCGCA AATGGGCTTT GTGCCCACAA CGGCCGCCTC 6660GCCGCCGTCG ACCGCTGCAG CGCCACCCGC ACCGGCGACA CCTGTTGCCC CCCCACCACC 6720GGCCGCCGCC AACACGCCGA ATGCCCAGCC GGGCGATCCC AACGCAGCAC CTCCGCCGGC6780CGACCCGAAC GCACCGCCGC CACCTGTCAT TGCCCCAAAC GCACCCCAAC CTGTCCGGAT6840CGACAACCCG GTTGGAGGAT TCAGCTTCGC GCTGCCTGCT GGCTGGGTGG AGTCTGACGC6900CGCCCACTTC GACTACGGTT CAGCACTCCT CAGCAAAACC ACCGGGGACC CGCCATTTCC6960CGGACAGCCG CCGCCGGTGG CCAATGACAC CCGTATCGTG CTCGGCCGGC TAGACCAAAA7020GCTTTACGCC AGCGCCGAAG CCACCGACTC CAAGGCCGCG GCCCGGTTGG GCTCGGACAT7080GGGTGAGTTC TATATGCCCT ACCCGGGCAC CCGGATCAAC CAGGAAACCG TCTCGCTTGA7140CGCCAACGGG GTGTCTGGAA GCGCGTCGTA TTACGAAGTC AAGTTCAGCG ATCCGAGTAA7200GCCGAACGGC CAGATCTGGA CGGGCGTAAT CGGCTCGCCC GCGGCGAACG CACCGGACGC7260CGGGCCCCCT CAGCGCTGGT TTGTGGTATG GCTCGGGACC GCCAACAACC CGGTGGACAA7320GGGCGCGGCC AAGGCGCTGG CCGAATCGAT CCGGCCTTTG GTCGCCCCGC CGCCGGCGCC7380GGCACCGGCT CCTGCAGAGC CCGCTCCGGC GCCGGCGCCG GCCGGGGAAG TCGCTCCTAC7440CCCGACGACA CCGACACCGC AGCGGACCTT ACCGGCCTGA GAATTCTGCA GATATCCATC7500ACACTGGCGG CCGCTCGAGC ACCACCACCA CCACCACTGA GATCCGGCTG CTAACAAAGC7560CCGAAAGGAA GCTGAGTTGG CTGCTGCCAC CGCTGAGCAA TAACTAGCAT AACCCCTTGG7620GGCCTCTAAA CGGGTCTTGA GGGGTTTTTT GCTGAAAGGA GGAACTATAT CCGGAT7676(2)SEQ ID NO214的信息(i)序列特征(A)长度802个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数单链(D)拓扑学线性(xi)序列描述SEQ ID NO214Met Gly His His His His His His Val Ile Asp Ile Ile Gly Thr Ser1 5 10 15Pro Thr Ser Trp Glu Gln Ala Ala Ala Glu Ala Val Gln Arg Ala Arg20 25 30Asp Ser Val Asp Asp Ile Arg Val Ala Arg Val Ile Glu Gln Asp Met35 40 45Ala Val Asp Ser Ala Gly Lys Ile Thr Tyr Arg Ile Lys Leu Glu Val50 55 60Ser Phe Lys Met Arg Pro Ala Gln Pro Arg Gly Ser Lys Pro Pro Ser65 70 75 80Gly Ser Pro Glu Thr Gly Ala Gly Ala Gly Thr Val Ala Thr Thr Pro85 90 95Ala Ser Ser Pro Val Thr Leu Ala Glu Thr Gly Ser Thr Leu Leu Tyr100 105 110Pro Leu Phe Asn Leu Trp Gly Pro Ala Phe His Glu Arg Tyr Pro Asn115 120 125Val Thr Ile Thr Ala Gln Gly Thr Gly Ser Gly Ala Gly Ile Ala Gln130 135 140Ala Ala Ala Gly Thr Val Asn Ile Gly Ala Ser Asp Ala Tyr Leu Ser145 150 155 160Glu Gly Asp Met Ala Ala His Lys Gly Leu Met Asn Ile Ala Leu Ala165 170 175Ile Ser Ala Gln Gln Val Asn Tyr Asn Leu Pro Gly Val Ser Glu His180 185 190Leu Lys Leu Asn Gly Lys Val Leu Ala Ala Met Tyr Gln Gly Thr Ile195 200 205Lys Thr Trp Asp Asp Pro Gln Ile Ala Ala Leu Asn Pro Gly Val Asn210 215 220Leu Pro Gly Thr Ala Val Val Pro Leu His Arg Ser Asp Gly Ser Gly225 230 235 240Asp Thr Phe Leu Phe Thr Gln Tyr Leu Ser Lys Gln Asp Pro Glu Gly245 250 255Trp Gly Lys Ser Pro Gly Phe Gly Thr Thr Val Asp Phe Pro Ala Val260 265 270Pro Gly Ala Leu Gly Glu Asn Gly Asn Gly Gly Met Val Thr Gly Cys275 280 285Ala Glu Thr Pro Gly Cys Val Ala Tyr Ile Gly Ile Ser Phe Leu Asp290 295 300Gln Ala Ser Gln Arg Gly Leu Gly Glu Ala Gln Leu Gly Asn Ser Ser305 310 315 320Gly Asn Phe Leu Leu Pro Asp Ala Gln Ser Ile Gln Ala Ala Ala Ala325 330 335Gly Phe Ala Ser Lys Thr Pro Ala Asn Gln Ala Ile Ser Met Ile Asp340 345 350Gly Pro Ala Pro Asp Gly Tyr Pro Ile Ile Asn Tyr Glu Tyr Ala Ile355 360 365Val Asn Asn Arg Gln Lys Asp Ala Ala Thr Ala Gln Thr Leu Gln Ala370 375 380Phe Leu His Trp Ala Ile Thr Asp Gly Asn Lys Ala Ser Phe Leu Asp385 390 395 400Cln Val His Phe Gln Pro Leu Pro Pro Ala Val Val Lys Leu Ser Asp405 410 415Ala Leu Ile Ala Thr lle Ser Ser Ala Glu Met Lys Thr Asp Ala Ala420 425 430Thr Leu Ala Gln Glu Ala Gly Asn Phe Glu Arg Ile Ser Gly Asp Leu435 440 445Lys Thr Gln Ile Asp Gln Val Glu Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gln Gly450 455 460Gln Trp Arg Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gln Ala Ala Val Val Arg465 470 475 480Phe Gln Glu Ala Ala Asn Lys Gln Lys Gln Glu Leu Asp Glu Ile Ser485 490 495Thr Asn Ile Arg Gln Ala Gly Val Gln Tyr Ser Arg Ala Asp Glu Glu500 505 510Gln Gln Gln Ala Leu Ser Ser Gln Met Gly Phe Val Pro Thr Thr Ala515 520 525Ala Ser Pro Pro Ser Thr Ala Ala Ala Pro Pro Ala Pro Ala Thr Pro530 535 540Val Ala Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ala Asn Thr Pro Asn Ala Gln Pro545 550 555 560Gly Asp Pro Asn Ala Ala Pro Pro Pro Ala Asp Pro Asn Ala Pro Pro565 570 575Pro Pro Val Ile Ala Pro Asn Ala Pro Gln Pro Val Arg Ile Asp Asn580 585 590Pro Val Gly Gly Phe Ser Phe Ala Leu Pro Ala Gly Trp Val Glu Ser595 600 605Asp Ala Ala His Phe Asp Tyr Gly Ser Ala Leu Leu Ser Lys Thr Thr610 615 620Gly Asp Pro Pro Phe Pro Gly Gln Pro Pro Pro Val Ala Asn Asp Thr625 630 635 640Arg Ile Val Leu Gly Arg Leu Asp Gln Lys Leu Tyr Ala Ser Ala Glu645 650 655Ala Thr Asp Ser Lys Ala Ala Ala Arg Leu Gly Ser Asp Met Gly Glu660 665 670Phe Tyr Met Pro Tyr Pro Gly Thr Arg Ile Asn Gln Glu Thr Val Ser675 680 685Leu Asp Ala Asn Gly Val Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Tyr Glu Val Lys690 695 700Phe Ser Asp Pro Ser Lys Pro Asn Gly Gln Ile Trp Thr Gly Val Ile705 710 715 720Gly Ser Pro Ala Ala Asn Ala Pro Asp Ala Gly Pro Pro Gln Arg Trp725 730 735Phe Val Val Trp Leu Gly Thr Ala Asn Asn Pro Val Asp Lys Gly Ala
740 745 750Ala Lys Ala Leu Ala Glu Ser Ile Arg Pro Leu Val Ala Pro Pro Pro755 760 765Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Glu Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala770 775 780Gly Glu Val Ala Pro Thr Pro Thr Thr Pro Thr Pro Gln Arg Thr Leu785 790 795 800Pro Ala
权利要求
1.包含可溶性结核分枝杆菌抗原或者只是在保守性替换和/或修饰上不同的这样的抗原的变体的免疫原性部分的多肽，其中所述抗原具有选自下面的N-末端序列(a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu；(SEQ ID No.120)(b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser；(SEQ ID No.121)(c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg；(SEQ ID No.122)(d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro；(SEQ ID No.123)(e) Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val；(SEQID No.124)(f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro；(SEQ ID No.125)(g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser；(SEQ ID No.126)(h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly；(SEQ ID No.127)(i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn；(SEQID No.128)和(j) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly；(SEQ ID No.136)其中Xaa可以是任何氨基酸。
2.包含结核分枝杆菌抗原或者只是在保守性替换和/或修饰上不同的这样的抗原的变体的免疫原性部分的多肽，其中所述抗原具有选自下面的N-末端序列(a)Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe；(SEQ ID No.129)和(b)Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID No.137)，其中Xaa可以是任何氨基酸。
3.包含可溶性结核分枝杆菌抗原或者只是在保守性替换和/或修饰上不同的所述抗原的变体的免疫原性部分的多肽，其中所述抗原包含选自SEQ ID Nos.1，2，4-10，13-25，52，99和101列出的序列，所述序列的互补序列和在中等严格条件下与SEQ ID Nos.1，2，4-10，13-25，52，99和101列出的序列杂交的DNA序列或其互补序列的DNA序列编码的氨基酸序列。
4.包含结核分枝杆菌抗原或者只是在保守性替换和/或修饰上不同的所述抗原的变体的免疫原性部分的多肽，其中所述抗原包含选自SEQID Nos.26-51，138，139，163-183和201列出的序列，所述序列的互补序列和在中等严格条件下与SEQ ID Nos.26-51，138，139，163-183和201列出的序列杂交的DNA序列或其互补序列的DNA序列编码的氨基酸序列。
5.包含编码权利要求1-4任一项的多肽的核苷酸序列的DNA分子。
6.包含权利要求5的DNA分子的表达载体。
7.用权利要求6的表达载体转化的宿主细胞。
8.权利要求7的宿主细胞，其中宿主细胞选自大肠杆菌，酵母和哺乳动物细胞。
9.含有一种或多种权利要求1-4任一项的多肽和生理可接受载体的药物组合物。
10.含有一种或多种权利要求5的DNA分子和生理可接受载体的药物组合物。
11.含有一种或多种SEQ ID Nos3，11，12，140和141的DNA序列；和生理可接受载体的药物组合物。
12.含有一种或多种权利要求1-4任一项的多肽和非特异性免疫应答增强剂(enhancer)的疫苗。
13.一种疫苗，其含有具有选自SEQ ID No.134和135列出的序列的N-末端序列的多肽；和非特异性免疫应答增强剂。
14.一种疫苗，其含有一种或多种选自SEQ ID Nos.3，11，12，140和141列出的序列，所述序列的互补序列和与SEQ ID Nos.3，11，12，140和141列出的序列杂交的DNA序列的DNA序列编码的多肽；和非特异性免疫应答增强剂。
15.权利要求12-14的疫苗，其中非特异性免疫应答增强剂是佐剂。
16.含有一种或多种权利要求5的DNA分子和非特异性免疫应答增强剂的疫苗。
17.含有一种或多种SEQ ID Nos3，11，12，140和141的DNA序列；和非特异性免疫应答增强剂的疫苗。
18.权利要求16或17的疫苗，其中非特异性免疫应答增强剂是佐剂。
19.权利要求9-11任一项的药物组合物，用于制备诱导患者保护性免疫性的药物。
20.权利要求12-18任一项的疫苗，用于制备诱导患者保护性免疫性的药物。
21.包含两种或多种权利要求1-4任一项的多肽的融合蛋白质。
22.包含一种或多种权利要求1-4任一项的多肽和ESAT-6的融合蛋白质。
23.包含一种或多种权利要求1-4任一项的多肽和结核分枝杆菌抗原38kD(SEQ ID NO155)的融合蛋白质。
24.含有权利要求21-23任一项的融合蛋白质和药学可接受载体的药物组合物。
25.含有权利要求21-23任一项的融合蛋白质和非特异性免疫应答增强剂的疫苗。
26.权利要求25的疫苗，其中非特异性免疫应答增强剂是佐剂。
27.权利要求24的药物组合物，用于制备诱导患者保护性免疫性的药物。
28.权利要求25或26的疫苗，用于制备诱导患者保护性免疫性的药物。
29.诊断患者结核病的方法，包括(a)用一种或多种权利要求1-4任一项的多肽接触患者的皮细胞；和(b)检查对患者皮肤的免疫应答，从而诊断患者结核病。
30.诊断患者结核病的方法，包括(a)用具有选自SEQ ID NO134和135所示序列的N-末端序列的多肽接触患者的皮细胞；和(b)检查对患者皮肤的免疫应答，从而诊断患者结核病。
31.诊断患者结核病的方法，包括(a)用选自SEQ ID Nos.3，11，12，140，141，156-160，189-193，199，200和203的序列，所述序列的互补序列和与SEQ ID Nos.3，11，12，140，141，156-160，189-193，199，200和203列出的序列杂交的DNA序列的DNA序列编码的一种或多种多肽接触患者的皮细胞；和(b)检查对患者皮肤的免疫应答，从而诊断患者结核病。
32.权利要求29-31任一项的方法，其中免疫应答是硬结。
33.诊断药盒，包括(a)权利要求1-4任一项的多肽；和(b)足以使所述多肽与患者皮细胞接触的装置。
34.诊断药盒，包括(a)具有选自SEQ ID NO134和135所示序列的N-末端序列的多肽；和(b)足以使所述多肽与患者皮细胞接触的装置。
35.诊断药盒，包括(a)选自SEQ ID Nos.3，11，12，140，141，156-160，189-193，199，200和203的序列，所述序列的互补序列和与SEQ ID Nos.3，11，12，140，141，156-160，189-193，199，200和203列出的序列杂交的DNA序列的DNA序列编码的多肽；和(b)足以使所述多肽与患者皮细胞接触的装置。
36.诊断药盒，包括(a)权利要求21-23任一项的融合蛋白质；和(b)足以使所述融合蛋白质与患者皮细胞接触的装置。
37.权利要求23的融合蛋白质，包含选自SEQ ID NO153和209所列序列的氨基酸序列。
全文摘要
本发明公开了诱导抗结核病的保护性免疫性的化合物和方法。提供的化合物包括包含一种或多种结核分枝杆菌蛋白质的至少一免疫原性部分的多肽和编码该多肽的DNA分子。这样的化合物可以配制成用于抗结核分枝杆菌感染的免疫接种的组合物,或者可以用于结核病的诊断。
文档编号C12N15/62GK1241212SQ9718050
公开日2000年1月12日 申请日期1997年10月7日 优先权日1997年10月7日 公开号97180501.发明者S·G·雷德, Y·A·W·斯凯基, D·C·迪龙, A·卡姆波斯－内托, R·霍顿, T·S·维德维克, D·R·特瓦德兹克, M·J·罗德斯 申请人:科里克萨公司 被以下专利引用 (3),