色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出AMY的活力。采用血清淀粉酶试剂盒测定小鼠血清中的淀粉酶活力，图1结果显示α-乳糖能显著降低小鼠急性胰腺炎时血清淀粉酶的水平。
[0025]实施例3 α -乳糖抵抗急性胰腺炎过程中胰腺组织MPO的表达
[0026]中性白细胞中存在髓过氧化酶，每个细胞所含的酶的量是一定的，约占细胞干重的5%，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并测定中性白细胞的数目。其原理如下:
[0027]ΜΡ0+Η202—复合物；复合物+AH 2 (供氢体)一Η20+ΜΡ0+Α产物
[0028]通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄色化合物，在460nm处通过比色测定A产物的生成量，从而推算出MPO的活力及H2O2减少的量和白细胞的数目。采用髓过物氧化酶试剂盒测定小鼠胰腺组织中髓过物氧化酶(MPO)水平，图1结果表明α-乳糖处理组相比炎症模型组MPO表达量显著下降。
[0029]实施例4 α -乳糖缓解小鼠急性胰腺炎胰腺组织水肿和炎症细胞浸润
[0030]用HE染色的方法，将对照组(CON)、急性胰腺炎组(AP)、α -乳糖预防组(Pro)及α-乳糖治疗组(The)的小鼠的胰腺经固定、脱水、染色、脱蜡、透明和封片等主要过程，用于观察胰腺组织的组织完整性、胰腺水肿程度和炎症细胞浸润程度。如图2所示，急性胰腺炎组相比对照组，胰腺腺泡细胞发生严重损伤，组织完整性被破坏，水肿情况严重，炎症细胞发生浸润，而经α-乳糖预防和治疗处理的小鼠胰腺组织相比炎症模型组水肿情况得到缓解，炎症细胞浸润较轻，说明α -乳糖对小鼠急性胰腺炎发挥了保护作用。
[0031]实施例5 α-乳糖减少急性胰腺炎胰腺组织中炎症因子水平
[0032]采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠胰腺组织匀浆上清液MCP-1和TNF-α水平。分别向预先包被了小鼠MCP-1和TNF-α单克隆抗体的酶标孔中加入MCP-1和TNF- α，温育；温育后，加入生物素标记的抗MCP-1和TNF- α抗体，再与联袂亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物Α、Β，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中小鼠MCP-1和TNF-α的浓度呈正相关。图3结果显示，α-乳糖能够显著降低MCP-1和TNF-α在胰腺组织中的表达水平。
[0033]实施例6 α -乳糖降低急性胰腺炎胰腺组织中免疫细胞的浸润
[0034]采用免疫组化(IHC)的方法，将对照组(CON)、急性胰腺炎组(AP)、α -乳糖预防组(Pro)及α -乳糖治疗组(The)的胰腺经固定、脱水、染色、脱蜡、抗原修复、采用抗⑶Ilb和⑶68抗体(中性粒细胞特异性表达⑶11b、巨噬细胞特异性表达⑶68)孵育等主要过程，观察胰腺组织中中性粒细胞、巨噬细胞浸润数目，颜色深浅程度和细胞浸润程度。如图6所示，急性胰腺炎组相比对照组染色强度更大，即阳性信号更强，阳性细胞表达数目更多，炎症状况较严重；而经α-乳糖预防和治疗处理的小鼠胰腺组织相比炎症模型组染色稍轻，阳性细胞表达数目相对较少，炎症得到缓解。
[0035]实施例7 α -乳糖抑制雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞中ERK1/2MAPK及NF- κ B的表达
[0036]从胰腺组织中提取胰腺腺泡细胞，待细胞恢复2h后，分种到六孔板中，未经处理的细胞为CON组，雨蛙素处理的细胞为Cae，用雨蛙素和α -乳糖处理细胞为Cae+lac，单独用α -乳糖处理的细胞为Lac组。处理方式:雨蛙素终浓度10 7M, α -乳糖终浓度为0.2Μ。处理时间:Ih后收集细胞后提取蛋白，用Western Blot方法测定ERK1/2MAPK及NF-κ B的表达。结果显示乳糖能够抑制ERKl/2MAPK及NF-κB的表达。如图4所示，α -乳糖能显著降低雨蛙素诱导ERK1/2MAPK及NF- κ B的信号通路的激活，以及胰腺腺泡细胞中炎症因子MCP-1和TNF-α的释放。说明α -乳糖通过调节ERK1/2MAPK及NF-κ B信号通路实现对小鼠急性胰腺炎的保护作用。
[0037]实施例8
[0038]针对男、女各25人的急性胰腺炎患者，平均年龄42岁，每6h服用10ml含Iga-乳糖的α-乳糖溶液；一周为一个疗程。疗效有效标准:症状明显减轻，实验室及影像学检查结果均明显好转。结果表明20人康复、28人有效、2人无效，说明α-乳糖可用于急性胰腺炎的防治。
[0039]实施例9五谷杂粮营养保健品
[0040]—种防治急性胰腺炎的五谷杂粮营养保健品，由小米粉、玉米淀粉、水解蛋白粉、α-乳糖、蜂蜜、乳清蛋白混合得到，按质量比计，各组分含量为:小米粉20份、玉米淀粉10份、水解蛋白粉12份、α-乳糖2份、蜂蜜I份、乳清蛋白10份。食用时加开水冲泡即可。
[0041]虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
【主权项】
1.一种防治急性胰腺炎的保健食品，其特征在于，有效成分为α -乳糖。2.根据权利要求1所述的保健食品，其特征在于，α-乳糖的质量分数为1-10%。3.根据权利要求1或2所述的保健食品，其特征在于，α-乳糖的质量分数为10%。4.根据权利要求1所述的保健食品，其特征在于，所述保健品是片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂或混悬剂。5.根据权利要求1所述的保健食品，其特征在于，所述保健食品是一种五谷杂粮营养保健食品，由小米粉、玉米淀粉、水解蛋白粉、α -乳糖、蜂蜜、乳清蛋白混合得到，按质量比计，各组分含量为:小米粉20份、玉米淀粉10份、水解蛋白粉12份、α -乳糖2份、蜂蜜I份、乳清蛋白10份。6.α -乳糖在制备防治急性胰腺炎的药物或保健食品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了α-乳糖在制备防治急性胰腺炎的保健食品中的应用，属医药和保健食品领域。α-乳糖能够通过降低急性胰腺炎过程中胰腺组织水肿、血清淀粉酶、胰腺组织髓质过氧化物酶MPO水平从而降低炎症反应；同时，该物质可以降低胰腺组织和胰腺腺泡细胞中炎症介质，如MCP-1和TNF-α水平；此外，该物质具有抑制细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2MAPK)及核因子κB(NF-κB)蛋白信号通路的激活，减少免疫细胞如中性粒细胞、巨噬细胞在胰腺组织中浸润，对急性胰腺炎具有显著的保护作用，该物质可用于制备防治急性胰腺炎的保健食品。
【IPC分类】A23L1/305, A61P1/18, A23L1/09, A61K31/7016, A23L1/10, A23L1/30
【公开号】CN105124349
【申请号】CN201510476929
【发明人】孙嘉, 邓园园, 陈永泉, 何钊, 何月
【申请人】江南大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年8月6日