母猪饲用微生态发酵剂及其制备方法和活性固态发酵饲料的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种母猪饲用微生态发酵剂及其制备方法和活性固态发酵饲料，属于 饲料微生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 随着畜牧养殖业的快速发展，人畜共粮的矛盾日趋突出，研究与开发利用饲料资 源的新途径已成为发展畜牧业的重大课题，其中微生物发酵饲料日益受到重视。微生物发 酵饲料是指在人为可控制的条件下，以植物性农副产品为主要原料，通过微生物的代谢作 用，将植物性、动物性和矿物性物质中的抗营养因子分解、合成，产生更能被畜、禽采食、消 化、吸收养分和无毒害作用的生物饲料或饲料原料。微生态饲料添加剂又称微生态制剂、益 生素、活菌制剂等，添加到饲料中进行适当的发酵即为微生态发酵饲料。它是由许多有益微 生物及其代谢物构成，可与相关动物体内的自然微生态体系相吻合和营养互补；可直接饲 喂动物，并能有效促进动物体调节肠道微生态平衡的一类添加剂。
[0003] 微生态制剂安全、有效、不污染环境、无耐药性，作为抗生素的替代品将在饲料工 业中发挥重要作用。随着社会的发展，人们对食品安全越来越重视，抗生素饲料添加剂的广 泛应用所引起的临床畜禽耐药问题越来越严重，造成的药物残留问题不但影响了动物产品 质量，也危害人们的身体健康，其他如导致动物体内菌群失调、产生抗药性、畜产品适口性 差等问题，尤其是食物链的药物残留也引起普遍关注。因此，开发和研制新型无污染、无残 留绿色微生态饲料添加剂，是生产绿色畜禽产品的需要，已受到人们的重视和认可。
[0004] 目前，微生态饲料分为发酵型和非发酵型；发酵型微生态饲料在发酵类别上归属 于强化微生物混合固态发酵(发酵基质含水量在12 %~80 %之间）。发酵型又可细化为普通 型和活性型。普通型采用"接种-发酵(好氧、厌氧)_干燥-包装-产品"工艺路线;我国早期大 多采用这种工艺方式，影响最大的是CN1024468C中公开的"粗淀粉料混菌固体发酵菌体蛋 白饲料的方法"，率先在生料发酵饲料方面取得突破，在国内外产生较大影响，因工艺复杂 (需干燥环节）、无活性微生物及热敏性活性成分已逐渐被淘汰。活性型则采用"接种-包装-发酵(厌氧)_产品"的技术路线，由于工艺简单并含有活性微生物及其活性成分而具有独特 优势，自本世纪初以来，已成为国内外研究的热点领域。
[0005] 活性发酵型微生态饲料因具有改善饲料适口性、提高饲料营养价值、生产成本较 低和充分利用多种饲料资源等显著特点，研究开发潜力极大，是现在和未来安全饲料发展 的重要方向。微生态饲料在发酵菌种上主要表现在由传统的单一菌种(株）向具有一定功能 组合效应的多菌种(株)发展。目前我国用于饲料强化混合发酵的微生物菌种(菌剂)主要是 与具体的发酵工艺相配套使用的微生物菌种，如CN1024468C使用由黑曲霉和白地霉两种 (株)微生物组成的发酵菌种，CN1857099A中公开的"动物发酵浓缩饲料和配合饲料及其制 作方法和设备"使用的主要由乳酸菌和酵母菌组成的发酵菌种。两种菌株进行混合发酵，提 高了饲料的发酵效果和营养价值，但所产生的酶系仍不够全面，具有一定的局限性。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种母猪饲用微生态发酵剂及其制作方法和活性固态发酵 饲料，通过对具有显著协同作用的多个菌株的筛选和组合，解决现有的微生物发酵制剂存 在的单一性、发酵不全面和发酵效果差的问题，以达到提高产品质量和降低生产成本的目 的。应用本发明生产的饲料饲养畜禽，具有促进动物生长和增强抗病能力效果显著、饲料利 用效率高以及减轻养殖环境污染等特点；饲养而得的畜禽产品，无抗生素、激素等药物残 留，营养丰富且口味纯正天然。
[0007] 本发明的技术方案：
[0008] 本发明提供了一种母猪饲用微生态发酵剂，其特征在于，按照重量份数计如以下 原料配制而成： 米曲霉（As/>ergi//i?〇7z<3e) 2份~4份； 小被抱霉而2份-4份； 酿酒酵母（<Sbcc/?orow_yce? cerevisii/e) 1 份~2份；
[0009] Π 地符1份~2份:. 啊舒多囊霉通1份~2份； 异常威克汉逊酵母(附c/tez如服朋_yces 1份~2份； 泡盛曲霉 61ψβ/;^ι7/??〇Μ·'α??〇Γζ'） 1 份~2份。
[0010] 上述母猪饲用微生态发酵剂的制备方法，其步骤如下：
[0011] 1、一级培养
[0012] (1)配制PDA固体培养基
[0013] A1、取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml;80°C浸泡lh，用纱布过滤，然后补 足失水至1000ml; IOOPa灭菌20min，即得20%马铃薯浸汁，贮存备用；
[0014] A2、按每100mL马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后按每100mL马铃薯浸汁加入 2g琼脂，继续加热融化并补足失水；
[0015] A3、分装、加塞、包扎；
[0016] A4、高压蒸汽灭菌，IOOPa灭菌20min;
[0017] A5、卧斜，待冷却后30°C恒温培养24h，排除冷凝水，观察试管培养基表面光滑无菌 则可以进行接菌；
[0018] (2)斜面接种
[0019] 将各菌种分别斜面接种，30°C恒温培养24~72h;
[0020] 2、二级培养
[00211 (1)三角瓶的制作工艺
[0022] B1、装料:按照重量比，麸皮:水=1:1的比例将两者进行拌料，每千克混合料加入 2ml浓硫酸；
[0023] B2、装入三角瓶内高度为20~25cm，装料为50g/瓶；
[0024] B3、棉塞堵塞封口，再用16层无菌纱布封口；
[0025] Ek、高压蒸汽灭菌，IOOPa灭菌20min。自然冷却；
[0026] B5、接菌:接菌量每Ig斜面接种25g物料；
[0027] B6、28~32°C恒温培养，培养过程中每两个小时摇三角瓶一次，摊平；至24小时后 扣瓶，培养6小时后扣瓶，全程36小时，得到种曲，粉碎后过60目筛，并测定样品酶活力； [0028]其中，酶活力定义如下：
[0029]木聚糖酶活力:在37°C和pH5.5条件下，每分钟从浓度为5mg/ml的木聚糖溶液中降 解释放Imio 1还原糖所需要的酶量为1个酶活单位u;
[0030]果胶酶活力:在37°C和PH5.5条件下，每分钟从浓度为4mg/ml的聚半乳糖醛酸溶液 中降解释放Iymol还原糖所需要的酶量为1个酶活单位u;
[0031 ]纤维素酶活力:在37°C和PH5.5条件下，每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠 溶液中降解释放Iymol还原糖所需要的酶量为1个酶活单位u;
[0032]淀粉酶活力：在37°C、pH6.8的条件下，每分钟水解淀粉生成Img还原糖所需的酶 量；
[0033]所得二级发酵产物要求细菌总数2 108cfu/g，总酶活2 500u/g，低于此标准不在 用于进行三级接种培养；
[0034] 3、三级培养
[0035] (1)筐式培养基的制作
[0036] B1、装料：按照重量比将麸皮：水=5 : 3的比例进行拌料，每公斤混合料加入2ml浓 硫酸和硫酸铵IOg;
[0037] 132、高压灭菌100?&，2〇111；[11。自然冷却；
[0038] B3、装入筐中高度2~3cm的培养基；
[0039 ] B5、按筐式培养基物料重量的10 %进行接菌；
[0040] (2)培养
[00411 B1、室温培养，控制室内相对湿度50~85%，培养过程中，堆积培养，每6小时翻拌 一次，至18小时，待其连饼后将其划碎，36小时候扣筐继续培养至72小时，得固态发酵产物， 将其粉碎后过60目筛，并测定样品酶活力;所得三级发酵产物要求细菌总数2 108cfu/g，总 酶活2 500u/g，低于此标准不再用于进行四级接种培养；
[0042] 4、四级培养
[0043]将三级培养的各菌株用石膏粉作为载体按照重量比，三级培养产物:石膏粉=1: 10进行混合，进行四级培养，四级培养培养基按重量组成为麸皮:玉米面=1:1，加入水和浓 硫酸，水占麸皮玉米面混合物料总重量的50 %~70 %，硫酸占麸皮玉米面混合物料总重量 的1%。
[0044]利用上述母猪饲用微生态发酵剂制得的活性固态发酵饲料，按照重量百分比由如 下原料制备而成： 玉米 60~70% 麦款 5~.15 % 稻米糠 5； - 10% 豆粕 5-~15%
[0045] 磷酸氢钙 ?