专利名称：利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法
技术领域：
本发明涉及烟用香料，具体涉及以烟籽为原料通过白地霉发酵制备烟用香料的方法。
背景技术：
香料烟为复合型卷烟的重要原料。风干的香料烟籽呈棕褐色，含油脂33 42%， 含蛋白质19 30%。云南为烟草生产大省，每年产生数十万吨的香料烟籽，是理想的烟用 天然香料原料。但由于其含油脂较多，一般的化学方法处理得到的粗提产物难以直接应用 于烟草加香，所以除少部分的烟籽用于育种外，大部分被作为废物堆放或遗弃，造成极大浪费。许多微生物能够大量产生脂肪降解酶。利用这些微生物降解香料烟籽中存在的大 量油脂，将高级脂肪酸转化为低级脂肪酸或其他小分子有机酸开发新型烟用天然香料，具 有广阔的前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法， 通过筛选出转化香料烟籽油脂的高效微生物，应用最佳的发酵条件，开发以香料烟籽为原 料的新型烟用香料。本发明的技术方案如下
一种利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法，所述发酵制备的步骤如下
1)液体培养将真菌白地霉接入装有30mL液体种子培养基的250mL三角瓶中，种子培 养基为MM培养基，以1%浓度的香料烟种子油作为碳源，pH为6. 0，28°C，200r/min振荡培 养4d ；
2)固体培养将步骤1液体培养获得的菌种按5 10%浓度接入固体培养基，培养基 为细碎香料烟种子100g，W广4g的蔗糖、150mL的蒸馏水，自然pH，培养基厚度为2 3cm， 湿度控制在100%，温度为28 32°C，碳源补充量为2、％，发酵2 8d，发酵结束后进行致香成 分提取；
3)用95%浓度乙醇按液固比3 1提取烟籽2、次，合并提取液，过滤，减压浓缩，待除 去约2/3体积的溶剂后冷冻，除去析出的油脂层，再减压浓缩，得到棕黄色液体提取物。其进一步的技术方案为
所述步骤1中选择白地霉菌株GC4作为发酵菌株。所述步骤2中的菌株发酵时间为5天。所述步骤2中的菌株发酵温度为30°C。所述步骤2中的碳源补充量为5%。本发明的有益技术效果是
1、将白地霉接入香料烟籽，于适宜条件下进行发酵，可使香料烟烟籽中的油脂发生降解，产生多种对卷烟抽吸品质有重要影响的香味物质。2、通过微生物发酵香料烟籽的提取物能与卷烟烟香较好谐调，使主体香气突出， 香气更加圆润，具有良好的醇和烟气、改善吸味的效果。3、采用白地霉发酵香料烟籽是一种有效利用废弃香料烟籽生产烟用香料的新途 径，经济高效且可定向生产。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明做进一步说明。实施例1
1)液体培养以真菌白地霉(Geotrichum candidum)接入装有30mL液体种子培养基 的250mL三角瓶中，种子培养基为MM培养基，以1%浓度的香料烟籽油作为碳源，pH为6. 0， 280C，200r/min 振荡培养 4d。2)固体培养将以上液体培养获得的菌种按5 10%接入固体培养基，培养基为细 碎香料烟种子100g，W广4g的蔗糖、150mL的蒸馏水，自然pH。培养基厚度为2 3cm，湿度 控制在100%，温度为28°C，碳源补充量为2%，发酵时间为2d发酵结束后进行致香成分提取。3)用95%乙醇按液固比3 1提取烟籽2次，合并提取液，过滤，减压浓缩，待除去 约2/3体积的溶剂后冷冻，除去析出的油脂层，再减压浓缩，得到棕黄色液体提取物。实施例2
1)液体培养以真菌白地霉(Geotrichum candidum)接入装有30mL液体种子培养基 的250mL三角瓶中，种子培养基为MM培养基，以1%浓度的香料烟籽油作为碳源，pH为6. 0， 280C，200r/min 振荡培养 4d。2)固体培养将以上液体培养获得的菌种按5 10%接入固体培养基，培养基为细 碎香料烟种子100g，W广4g的蔗糖、150mL的蒸馏水，自然pH。培养基厚度为2 3cm，湿度 控制在100%，温度为30°C，碳源补充量为5%，发酵时间为8d发酵结束后进行致香成分提取。3)用95%乙醇按液固比3 1提取烟籽3次，合并提取液，过滤，减压浓缩，待除去 约2/3体积的溶剂后冷冻，除去析出的油脂层，再减压浓缩，得到棕黄色液体提取物。实施例3
1)液体培养以真菌白地霉(Geotrichum candidum)接入装有30mL液体种子培养基 的250mL三角瓶中，种子培养基为MM培养基，以1%浓度的香料烟籽油作为碳源，pH为6. 0， 280C，200r/min 振荡培养 4d。2)固体培养将以上液体培养获得的菌种按5 10%接入固体培养基，培养基为细 碎香料烟种子100g，W广4g的蔗糖、150mL的蒸馏水，自然pH。培养基厚度为2 3cm，湿度 控制在100%，温度为32°C，碳源补充量为8%，发酵时间为8d发酵结束后进行致香成分提取。3)用95%乙醇按液固比3 1提取烟籽4次，合并提取液，过滤，减压浓缩，待除去 约2/3体积的溶剂后冷冻，除去析出的油脂层，再减压浓缩，得到棕黄色液体提取物。评吸
取实施例广3烟丝各100g，分别分成2等份。用乙醇将该提取物稀释10倍，按烟丝 质量的0. 2%将稀释液均勻添加到一份烟丝中，同时在另一份试验烟丝上添加相同量的乙 醇作为对照样，平衡24h，卷制成烟支，评吸。评吸按照卷烟感官技术要求的行业标准进行。评吸工作必须在通风、无异味、安静、不受干扰的环境下进行，评香师采用感官暗评计分。通过8位 评香师的评吸，评吸结果表明未加提取物的空白烟香气平淡，刺激较 大，杂气重，余味有明显涩感。而实施例广3加提取物的卷烟香气量充足，烟气醇和细腻，杂 气轻，略有刺激性，谐调一般，吸味好，具有香料烟型的风味特征。一、小试
按照前面提供的技术方案，先进行实验室小试，优化反应条件，主要是对步骤2中的发 酵时间、温度、碳源补充量等条件进行优化选择。实验如下 1、菌株培养的优化选择
将5颗菌株从保存斜面移接到斜面活化培养基上，28°C培养4d后，转接入装有30mL液
体种子培养基的250mL三角瓶中，28°C，200r/min振荡培养4d，然后按5%的接种量接入装
有IOOmL发酵培养基的500mL三角瓶中，于28°C，200r/min振荡4d。发酵后，测定油脂分
解率，得出的结果如下
表1 菌株优化实验结果____
权利要求
1.一种利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法，所述发酵制备的步骤如下1)液体培养将真菌白地霉接入装有30mL液体种子培养基的250mL三角瓶中，种子培 养基为MM培养基，以1%浓度的香料烟种子油作为碳源，pH为6. 0，，200r/min振荡培 养4d ；2)固体培养将步骤1液体培养获得的菌种按5 10%浓度接入固体培养基，培养基为 细碎香料烟种子100g，W广4g的蔗糖、150mL的蒸馏水，自然pH，培养基厚度为2 3cm，湿度 控制在100%，温度为^ 32°C，碳源补充量为2、％，发酵2 8d，发酵结束后进行致香成分提 取；3)用95%浓度乙醇按液固比31提取烟籽2、次，合并提取液，过滤，减压浓缩，待除 去约2/3体积的溶剂后冷冻，除去析出的油脂层，再减压浓缩，得到棕黄色液体提取物。
2.根据权利要求1所述利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法，其特征在 于所述步骤1中选择白地霉菌株GC4作为发酵菌株。
3.根据权利要求1所述利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法，其特征在 于所述步骤2中的菌株发酵时间为5天。
4.根据权利要求1所述利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法，其特征在 于所述步骤2中的菌株发酵温度为30°C。
5.根据权利要求1所述利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法，其特征在 于所述步骤2中的碳源补充量为5%。
全文摘要
本发明涉及利用真菌白地霉发酵香料烟籽制备烟用香料的方法，旨在筛选出转化香料烟籽油脂的高效微生物，应用最佳的发酵条件，开发以香料烟籽为原料的新型烟用香料。通过测定菌株对油脂的分解率，筛选出了高效率分解香料烟籽油脂的白地霉菌株。运用单因素和正交试验，确定了该菌株固体发酵香料烟籽的最佳生理条件，使油脂分解率达到67.2%。发酵后大分子有机酸等被大量分解为小分子有机酸等致香物质。粗提物添加入卷烟后能增加烟香的丰富性、舒适性及自然烟草甜润，具有很好的卷烟用香料开发价值。
文档编号A24B3/14GK102068032SQ201010577809
公开日2011年5月25日 申请日期2010年12月8日 优先权日2010年12月8日
发明者吴凡, 欧世春 申请人:无锡华海香料有限公司