专利名称：一种提高花粉变应原疫苗效价的方法
技术领域：
本发明属于生物制药技术领域，涉及一种变应原疫苗，特别是花粉变应原疫苗的提取方法。
现有技术的花粉变应原疫苗的提取，一般采用康氏振荡提取法。即是将脱脂花粉按一定比例加入碱性盐水提取液，在6～8℃冰箱内浸泡提取72小时。提取过种中每24小时用康氏振荡器振荡2小时，这种提取方法由于振荡幅度大振荡时间长，花粉浸液在提取器内因温度升高而受热，提取液水温达18～20℃，花粉有效成份散失部分生物活性物质失活，抗原效价降低。
本发明的任务是提供一种有效成份不易散失，生物利用率，及抗原效价高的花粉变应原疫苗的提取方法，以弥补现有技术的不足。
本发明的任务是这样实现的将脱脂花粉按一定比例加入碱性盐水提取液，在6～8℃冰箱内浸泡提取72小时，提取过程中每12小时用远红外磁力搅拌器与玻棒交替搅拌1小时，每隔15～20分钟交替一次。使提取液水温控制在10±0.5℃。
本发明花粉变应原疫苗的基本组方如下1、早春脱脂花粉取杨树、柳树、榆树、柏树花粉等重量，按重量体积比加入1∶20碳酸氢盐—盐水提取液；
2、晚春脱脂花粉取桑树、臭椿、菠菜、核桃、桦树、松树、苔草花粉等重量，3、夏秋脱脂花粉取葎草、玉米、菠菜、核桃、桦树、松树、苔草花粉等重量，按重量体积比加入1∶20碳酸氢盐——盐水提取液；4、蒿取脱脂花粉取黄蒿、青蒿花粉等重量，按重量体积比1∶25碳酸氢盐—盐水提取液。
本发明的花粉变应原疫苗提取方法简单可行，疫苗效价高。将康氏振荡提取法改为远红外磁力搅拌加玻璃棒交替搅拌提取，避免了康氏振荡提取法的振荡时间过长，致使提取液因温度升高而降低了花粉变应原疫苗的效价，减弱了其生物活性，影响了脱敏治疗效果。
下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。
实施例1称取已脱脂的杨树、柳树、榆树、柏树早春花粉各2.5g，按1∶20比例(1克花粉加入20毫升提取液)加入碳酸氢盐——盐水提取液置于6～8℃冰箱提取72小时，本提取过程中，每隔12小时用YJS-5型远红外磁力搅拌器与玻璃棒交替搅拌1小时，每隔15～20分钟交替搅拌一次，控制提取液水温达10±0.5℃。随后过滤所期望的产物并除菌纯化。
实施例2花粉取桑树、臭椿、菠菜、核桃、桦树、松树、苔草晚春花粉各3g，其他同实施例1。
实施例3花粉取葎草、玉米、蓖麻、苍耳、向日葵、大麻夏秋花粉各3.5g，其他同实施例1。
实施例4花粉取黄蒿，青蒿蒿属花粉各5g，按1∶25比例加入碳酸氢盐—盐水提取液，其他同实施例1。
本发明人曾选择2000例18～55岁过敏病人其中试验组1000人、对照组1000人，试验组注射本发明实施例1早春花粉变应原疫苗，对照组注射现有技术方法制备的早春花粉变应原疫苗皮内注射0.01～0.02ml浓度为1∶100，15分钟后，根据皮试引起的风团直径和红晕强度，测其风团几何面积，见表1、表2、表3表1受试者风团直径比较皮试液分类风团直径(cm) 皮试人数(例) 占实验人数的％＜0.5 29914.950.5～1.022111.05传统方法 1.0～1.527813.90(对照组) ＞1.5 1015.05＞1.5痒感 64 3.20＞1.5憋气 37 1.85＜0.5 3 0.150.5～1.029 1.45发明方法 1.0～1.544022.00(实验组) ＞1.5 28414.20＞1.5痒感 1939.65＞1.5憋气 51 2.55Ridit分析u＝21.146，p＜0.01，R＝对0.3639，R实＝0.6365表2皮试红晕强度比较皮试液分类 红晕强度 皮试人数(例) 占实验人数的％- 298 14.90± 222 11.10对照组+ 277 13.85++102 5.10+++ 633.15++++ 381.90- 2 0.10± 321.60实验组+ 438 21.90++284 14.20+++ 193 9.65++++ 512.55Ridit分析u＝21.089，p＜0.01，R＝对0.3639，R实＝0.6361表3皮试效应结果判定反应级另 -±+ +++++++++R实验组 056 488 358 89 9 0.6374对照组 260 444 176 7043 7 0.3624Ridit分析u＝9.535，p＜0.01实验表明本发明实验组明显优于对照组，花粉变应原疫苗皮内试验它反映的是过敏原真正的效价强度，任何一种过敏原标化方法都需要与生物效价相比较，以它为依据。
权利要求
1.一种提高花粉变应原疫苗效价的方法，其特征在于脱脂花粉加入碱性盐水在提取过程中每12小时用远红外磁力搅拌器与玻璃棒交替搅拌1小时。
2.根据权利要求1所述的提高花粉变应原疫苗效价的方法，其特征在于所说的远红外磁力搅拌器与玻璃棒交替搅拌，每隔15～20分钟交替一次。
3.根据权利要求1所述的提高花粉变应原疫苗效价的方法，其特征在于所说的脱脂花粉为杨树、柳树、榆树、柏树早春花粉。
4.根据权利要求1所述的提高花粉变应原疫苗效价的方法，其特征在于所说的脱脂花粉为桑树、臭椿、菠菜、核桃、桦树、松树、苔草晚春花粉。
5.根据权利要求1所述的提高花粉变应原疫苗效价的方法，其特征在于所说的脱脂花粉为葎草、玉米、蓖麻、苍耳、向日葵、大麻夏秋花粉。
6.根据权利要求1所述的提高花粉变应疫苗效价的方法，其特征在于所说的脱脂花粉为黄蒿、青蒿蒿属芬粉。
全文摘要
一种提高花粉变应原疫苗效价的方法,主要涉及一种花粉变应原疫苗的提取,将康氏振荡提取法改为远红外磁力搅拌加玻璃棒搅拌交替提取,避免了康氏提取法因温度升高而降低了花粉抗原的效价。本发明方法简单可行,花粉有效成份不易散失,生物利用率高,花粉变应原疫苗效价明显高于传统提取法。
文档编号A61K39/35GK1350871SQ0012983
公开日2002年5月29日 申请日期2000年10月30日 优先权日2000年10月30日
发明者杜振彩, 张培永, 张彩芳, 董明霞, 魏秀芹 申请人:杜振彩, 张培永, 张彩芳, 董明霞, 魏秀芹