专利名称：含有胆碱和琥珀酸用于治疗胰岛素抵抗和糖尿病的协同组成物的制作方法
技术领域：
本发明涉及在治疗哺乳动物的胰岛素抵抗和糖尿病过程中，起协同作用的组成物和方法。更确切地说，本发明所涉及的协同组成物中，含有一定数量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，这两种成分在充足的数量时，对治疗哺乳动物的胰岛素抵抗和糖尿病起协同作用。此外，本发明还涉及对治疗哺乳动物的胰岛素抵抗和糖尿病起协同作用的方法，这些方法包括向所述的哺乳动物逐步或同时供给有效剂量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)。此外，本发明还涉及一种新的胆碱衍生物，更确切地说，涉及一种双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐。这种新的胆碱盐是由胆碱基和琥珀酸按照2∶1的摩尔比配制而成，这种盐可用于药物，特别适用于配制治疗胰岛素抵抗、高脂血、血脂异常和糖尿病等病的药物。
胰岛素抵抗指的是，对外源性胰岛素和内源性胰岛素所呈现的损害的生物反应。通过测试生物反应，可以了解代谢过程，如在糖类、脂类和蛋白质代谢过程中出现的变化，还可以知道促有丝分裂的过程，如生长、分化、DNA合成过程中的变化，以及基因转录的调节。
葡萄糖耐受性不良，使人患上2型糖尿病，体内出现血脂过多和血脂异常，高血压，血内尿酸过多，以及血浆纤溶活性降低等一连串的紊乱，而胰岛素抵抗就是导致葡萄糖耐受性不良的重要原因。[Reaven，GM.Physiol-Rev.75(3)473-86(1995)；“胰岛素抵抗一致发展会议”，糖尿病治疗，21(2)1998。]胰岛素抵抗与许多病状有关，如妊娠期糖尿病，过度肥胖，衰老，动脉粥样硬化，心血管综合症X，艾滋病，癌症，消蚀性疾病/恶病体质，脓毒病，烧伤或烫伤引起的创伤，营养不良，狼疮和其它自身免疫性疾病，内分泌疾病，多囊卵巢综合症，以及运动中出现的并发症，等等。
临床上，胰岛素抵抗表现为，空腹血浆胰岛素水平处于病态升高，可以根据血浆中胰岛素浓度的大小进行诊断。
糖尿病指的是多种病原引起的代谢紊乱，这种疾病的特征是慢性高血糖，由人体内胰岛素分泌不足或胰岛素反应缺陷，或者两者兼有而引起。
临床上，糖尿病表现为，血糖水平处于病态升高，可以根据血液中葡萄糖浓度的大小进行诊断。
在PCT/RU 99/00055的国际申请中，提出了关于使用琥珀酸或其盐类治疗胰岛素抵抗的方法。
日本专利61171417中提出，琥珀酸或其盐类是抗糖尿病的有效药物，用于促进胰岛素的分泌。MacDonald的观点与日本专利61171417提出的观点恰恰相反，他发现，琥珀酸或其盐并不能刺激胰腺分泌胰岛素，同时他指出，琥珀酸酯类才是有效的胰岛素促分泌素。[摘自MacDonald，M.J.和Fahien在1988年发表的论文糖尿病37(7)997-999。]。日本专利6062798中也指出，琥珀酸作为一种人摄取的食物成分时，与醋酸、乳酸和葡糖酸结合的葡萄糖耐量极低。琥珀酸二钠可以作为药物成分，与柠檬酸和醋酸结合，用在患有四氧嘧啶糖尿病的兔子身上时，有效降低血糖浓度。[摘自Dzvonkevich于1974年发表的论文Ukr.Biokhim.Zh.，46(5)547-552。]在本发明之前，没有任何人提出使用胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，在治疗胰岛素抵抗和糖尿病过程中，取得协同作用。
美国专利5,124,061中提到，单胆碱琥珀酸盐，是一种由胆碱基和琥珀酸按照1∶1的摩尔比配制而成的植物抗冻剂药物成分。然而，这种盐不具有可重现性，其特性只能根据胆碱和琥珀酸按1∶1的摩尔比配制的过程来界定。单胆碱琥珀酸盐的酸性和不可再现性，使它不能广泛应用于医药上。
在本发明之前，没有任何人提出在医药上使用双琥珀酸盐(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)，它是一种中性盐，由胆碱基和琥珀酸按照2∶1的摩尔比配制而成，尤其适用于配制治疗胰岛素抵抗、高血脂和糖尿病等病的药物。此处以及后续叙述中，使用双琥珀酸盐(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱succinate)这个化学名称，取代了俗名“二胆碱琥珀酸盐”(dicholine succinate)，俗名“二胆碱琥珀酸盐”(dicholine succinate)过去经常在文献上出现，表示一种含有琥珀酸和胆碱的广为人知的酯类。
根据本发明，在治疗哺乳动物的胰岛素抵抗和糖尿病过程中，使用一定剂量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，可以取得协同作用。但如果这两种成分分别使用，即使使用的剂量和本发明中的一样，也不会取得协同作用，换句话说，使用胆碱基和琥珀酸合成药物，要比单用胆碱基(或其药用盐)或单用琥珀酸(或其药用盐)，有更好的治疗效果。
“治疗”在这里指的是，对哺乳动物进行一定的处理和护理，治疗疾病、身体不适和基体紊乱，包括使用胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，防止出现病症和并发症，减轻疾病和并发症的症状，或消除疾病、身体不适和体内紊乱。胰岛素抵抗的治疗包括提高哺乳动物体内的胰岛素敏感度，并通过提高胰岛素敏感度来取得其它的一些治疗效果，这些效果包括(但不限于)增加糖类、脂类和蛋白质代谢，生长、分化、DNA合成过程中产生的变化，以及基因转录的调整。
本发明提供了一种在治疗哺乳动物胰岛素抵抗过程中起协同作用的方法，该方法包括向哺乳动物供给有效剂量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)。根据本发明，在治疗胰岛素抵抗过程中达到理想的效果是，使血浆中原来处于病态升高的胰岛素水平降低。哺乳动物的胰岛素抵抗与体内的各种紊乱有关，如糖尿病及其慢性的并发症；妊娠期糖尿病；葡萄糖耐量减低；过度肥胖；衰老；动脉粥样硬化；心血管综合症X；心血管疾病；艾滋病；癌症；消蚀性疾病/恶病体质；脓毒病；烧伤或烫伤引起的创伤；营养不良；狼疮和其它自身免疫性疾病；内分泌疾病；高尿酸血症；高血脂症；多囊卵巢综合症；以及运动中出现的并发症，等等。在很大程度上，胰岛素抵抗和哺乳动物的糖尿病紧密相关。
本发明进一步提供了一种在治疗哺乳动物糖尿病的过程中起协同作用的方法，该方法包括向哺乳动物供给有效剂量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)。根据本发明，在治疗糖尿病过程中达到理想的效果是，使原来处于病态升高的血糖水平降低。
本发明中所使用的胆碱基(或其药用盐)可以是氯化胆碱；琥珀酸(或其药用盐)可以是琥珀酸二钠。
在供给的时间上，可以是逐步供给胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，也可以是两者同时供给。比较起来，两者同时供给的方法更好。
胆碱基(或其药用盐)可以口服、胃肠外投药、局部用药或直肠投药，以胃肠外投药更好。琥珀酸(或其药用盐)可以口服、胃肠外投药、局部用药或直肠投药，以胃肠外投药更好。
胆碱基(或其药用盐)用药期为一天或更长时间，最好是三至七天。琥珀酸(或其药用盐)用药期为一天或更长时间，最好是三至七天。
本发明提供了一种在治疗患有胰岛素抵抗的哺乳动物的过程起协同作用的组成物，它包含有效剂量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，以及医用稀释液或载体。根据本发明，在治疗胰岛素抵抗时所达到的理想效果是，降低病态升高的血液胰岛素水平。
此外，本发明提供了一种在治疗患有糖尿病的哺乳动物的过程中起协同作用的组成物，它包含有效剂量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，以及医用稀释液或载体。根据本发明，在治疗糖尿病时所达到的理想效果是，降低病态升高的血糖水平。
胆碱基的药用盐是通过已知的方法由无毒的有机酸和无机酸配制而成。这些酸包括(但不限于)盐酸、溴酸、柠檬酸、酒石酸和琥珀酸。本发明中的胆碱基(或其药用盐)最好采用氯化胆碱。
琥珀酸的药用盐是通过已知的方法由有机及无机碱配制而成。这些碱包括(但不限于)无毒碱金属和碱土金属，如钙、锂、钠、氢氧化钾、氢氧化氨和无毒有机碱，如三乙胺、丁胺、.二乙醇胺、三乙醇胺、和胆碱基。
本发明中的琥珀酸(或其药用盐)最好采用琥珀酸二钠。
合适的载体和稀释液包括乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、水、甲基、和丙烷氢基安息香酸盐、云母、硬脂酸镁、硬脂酸、和矿物油。本发明组成物还可包括润滑剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂，甜味剂，或香味剂。
本发明组成物可以有多种的配制形式，即它们可以和多种的药用惰性载体结合，配制成药片、胶囊、锭剂、片剂、硬糖、粉末、喷雾剂、溶液、酏剂、糖浆、等等。
根据本发明的方法，胆碱基(或其药用盐)的有效剂量是平均每公斤体重每天用药3至300mg。
根据本发明的方法，琥珀酸(或其药用盐)的有效剂量是平均每公斤体重每天用药1至250mg。
本发明提供的双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐，其分子式如下[(CH3)3N+CH2CH2OH]2-OOCCH2CH2COO-本发明提供了一种可生成双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐的工艺，它包含在有水、乙醇或其混合物存在的条件下让胆碱基与琥珀酸发生反应。通过胆碱基与琥珀酸的反应来生成双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐时，胆碱基与加入的琥珀酸的摩尔比大约为2∶1，但不低于1.9∶1，也不高于2.1∶1。反应在环境温度下进行，而且反应是定量的。制取的理想产物为白色晶体状粉末，具有可重现的特性。
本发明还提出了双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐在医药上的应用，它特别适于制造一种药剂，可治疗哺乳动物所患的胰岛素抵抗、高脂血症、脂质异常血症以及糖尿病。本发明治疗胰岛素抵抗时取得的理想疗效在于它能够降低病理性升高的血浆胰岛素水平。本发明治疗高脂血症时取得的理想疗效在于它能够降低病理性升高的三酸甘油酯及胆固醇水平。本发明治疗脂质异常血症时取得的理想疗效在于它能够降低低密度脂蛋白胆固醇水平并提高高密度脂蛋白胆固醇水平。本发明治疗糖尿病时取得的理想疗效在于它能够降低病理性升高的血糖水平。
下面以具体实例说明本发明。但本发明的保护范围并不局限于这些实例。
实例1本实例显示了通过有效剂量的氯化胆碱和琥珀酸二钠的联合给药来治疗糖尿病老鼠的胰岛素抵抗和糖尿病所收到的协同作用。
测定使用一件具有老鼠胰岛素标准(丹麦Bagsvard Novo研究所)的工具Dako(荷兰制造)来测定血浆胰岛素浓度。使用一件工具Agat(俄国制造)来测定血糖浓度。用德国制“DiaSys”FS试剂来测定血浆三酸甘油酯及胆固醇浓度。用波兰制“Cormay”试剂来测定HDL胆固醇；用德国制“Boehringer Mannheim”试剂来测定LDL胆固醇。
动物使用出生后8-10周、体重210-230克的雄性威斯达(Wistar)老鼠。在18±21℃温度下以12小时光亮-黑暗周期关养老鼠。给老鼠喂以畜类实验室食物(59％碳水化合物；17％蛋白质；3％脂肪；21％矿物质、水和纤维素)并任由喝水。通过间隔48小时两次静脉注射四氧嘧啶(每千克体重40毫克)使威斯达雄性老鼠患上糖尿病。在首次注射四氧嘧啶之后第6天将老鼠用于实验。表1中列出了这些动物的空腹血糖、胰岛素、总胆固醇(Ch)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和三酸甘油酯(TG)值(均值±标准差)与正常对照组的对比。通过此法预备的老鼠具有胰岛素抵抗、高胰岛素血症、高血糖症、高脂血症、脂质异常血症这些症状。
表1首次注射四氧嘧啶之后第6天的老鼠空腹血浆参数。
*与正常对照组差异甚大(P＜0.01)治疗糖尿病老鼠分为四组一个糖尿病对照组(n＝10)和三个糖尿病组，糖尿病组的老鼠每日给以静脉注射氯化胆碱(240毫克/千克体重，n＝10)、琥珀酸二钠(70毫克/千克体重，n＝10)或者联合注射氯化胆碱(240毫克/千克体重)和琥珀酸二钠(70毫克/千克体重，n＝10)，共注射5天。
治疗开始后第6天测量空腹血糖。数据见于表2。在糖尿病对照组，葡萄糖的平均水平为12.5毫摩尔/升。Δ葡萄糖为对照组和治疗组老鼠之间空腹血糖平均值的差，通过这一方程来计算Δ葡萄糖＝12.5-平均值(毫摩尔/升)。
联合用药的效果是空腹血糖水平相对于对照组降低了7.8毫摩尔/升。氯化胆碱和琥珀酸二钠单独给药的总体效果是空腹血糖水平相对于对照组降低了2.8毫摩尔/升(-1.1+3.9＝2.8)。既然联合用药降低葡萄糖的效果好于氯化胆碱和琥珀酸二钠单独给药降低葡萄糖的总体效果，则该药物联合使用对于降低病理性升高的血糖水平具有协同作用。
表2治疗开始之后第6天的空腹血糖
*与联合用药组差异甚大(P＜0.01)t与对照组差异甚大(P＜0.01)治疗开始之后第6天测量空腹血浆胰岛素。数据见于表3。在糖尿病对照组，胰岛素的平均水平为5.7μU(微原子质量)/升。Δ胰岛素为对照组和治疗组老鼠之间空腹血浆胰岛素平均值之差，通过这一方程来计算Δ胰岛素＝5.7-平均值(μU(微原子质量)/升)。联合用药的效果是空腹血浆胰岛素水平较对照组降低了4.1μU(微原子质量)/升。氯化胆碱和琥珀酸二钠单独给药的总体效果是空腹血浆胰岛素水平较对照组降低了2.1μU(微原子质量)/升(0.9+1.2＝2.1)。既然联合用药降低胰岛素的效果好于氯化胆碱和琥珀酸二钠单独给药降低胰岛素的总体效果，则联合给药对于降低病理性升高的血浆胰岛素水平具有协同作用。表3治疗开始之后第6天的空腹血浆胰岛素
*与联合用药组差异甚大(P＜0.01)t与对照组差异甚大(P＜0.01)
实例2双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐对于治疗糖尿病老鼠所患的胰岛素抵抗、高脂血症、脂质异常血症以及糖尿病是有效的。
动物按实例1备好糖尿病老鼠。
治疗该动物分为两组一个糖尿病对照组(n＝10)和一个糖尿病治疗组，治疗组的老鼠每日给以静脉注射双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐(120毫克/千克体重，n＝10)，共注射3天。治疗开始之后第7天测量了空腹血糖、胰岛素、总胆固醇(Ch)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和三酸甘油酯(TG)的水平(均值±标准差)，见于表4。表4治疗开始之后第7天的空腹血浆参数。
*与对照组有差异(P＜0.05)**与对照组差异甚大(P＜0.01)
实例3制备双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐的方法。
向含121克(1摩尔)胆碱基的甲醇溶液加入59克(0.5摩尔)琥珀酸。在环境温度下搅拌反应混合物20分钟，并在温度为40-50℃的真空状态下浓缩干燥。可得到约100％的固体白色晶体状物质其mp(熔点)为135-137℃(从叔丁醇)；NMR1H(D2O)δ2.24(s，4H)，3.07(s，18H)，3.38(m，4H)，3.93(m，4H)；NMR13C(D2O)δ34.5，54.2，56.0，67.8，182.6；分析、计算C14H32N2O6C，51.83；H，9.94。发现C，51.66；H，9.86。
权利要求
1.一种在患有胰岛素抵抗的哺乳动物的治疗过程中取得协同作用的方法，包含向该哺乳动物施与有效剂量的下列物质(a)胆碱基或胆碱基药用盐；以及(b)琥珀酸或琥珀酸药用盐)，其中同样剂量(a)和同样剂量的(b)单独用药不足以取得疗效；而且同样剂量的(a)和(b)联合用药的疗效优于(a)和(b)单独用药可取得的疗效之和。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的疗效包含降低血浆胰岛素水平。
3.一种在患有糖尿病的哺乳动物的治疗过程中取得协同作用的方法，包含向该哺乳动物施与有效剂量的下列物质(c)胆碱基或胆碱基药用盐；以及(d)琥珀酸或琥珀酸药用盐)，其中同样剂量(a)和同样剂量的(b)单独用药不足以取得疗效；而且同样剂量的(a)和(b)联合用药的疗效优于(a)和(b)单独用药可取得的疗效之和。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述的疗效包含降低血糖水平。
5.根据权利要求1至4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述一定剂量的胆碱基或其药用盐以及琥珀酸或其药用盐同时向所述哺乳动物供给。
6.根据权利要求1至5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述胆碱基药用盐为氯化胆碱。
7.根据权利要求1至6中任意一项所述的方法，其特征在于，所述琥珀酸药用盐为琥珀酸二钠。
8.根据权利要求1至7中任意一项所述的方法，其特征在于，所述胆碱基或其药用盐的有效剂量为每千克哺乳动物体重每日3至300毫克。
9.根据权利要求1至8中任意一项所述的方法，其特征在于，所述琥珀酸或其药用盐的有效剂量为每千克哺乳动物体重每日1至250毫克。
10.根据权利要求1至9中任意一项所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的胆碱基或其药用盐的投药方式可以分别为口服、胃肠外投药、局部用药和直肠投药。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的胆碱基或其药用盐是胃肠外投药的。
12.根据权利要求1至11中任意一项所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的琥珀酸或其药用盐可以分别是口服、胃肠外、局部和直肠投药的。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的琥珀酸或其药用盐是胃肠外投药的。
14.根据权利要求1至13中任意一项所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的琥珀酸或其药用盐的用药周期不少于1天。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的琥珀酸或其药用盐的用药周期为3至7天。
16.根据权利要求1至15中任意一项所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的胆碱基或其药用盐的用药周期不少于1天。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述有效剂量的胆碱基或其药用盐的用药周期为3至7天。
18.一种在患有胰岛素抵抗的哺乳动物的治疗过程中取得协同作用的组成物，包含有效剂量的下列物质(a)胆碱基或胆碱基药用盐；以及(b)琥珀酸或琥珀酸药用盐，其中同样剂量(a)和同样剂量的(b)单独用药不足以取得疗效；而且同样剂量的(a)和(b)联合用药的疗效优于(a)和(b)单独用药可取得的疗效之和；所述的取得协同作用的组成物还包括药用稀释剂或者载体。
19.根据权利要求18所述的组成物，其特征在于，所述的疗效包含降低血浆胰岛素水平。
20.一种在患有糖尿病的哺乳动物的治疗过程中取得协同作用的组成物，包含有效剂量的下列物质(a)胆碱基或胆碱基药用盐；以及(b)琥珀酸或琥珀酸药用盐，其中同样剂量(a)和同样剂量的(b)单独用药不足以取得疗效；而且同样剂量的(a)和(b)联合用药的疗效优于(a)和(b)单独用药可取得的疗效之和；所述的取得协同作用的组成物还包括药用稀释剂或者载体。
21.根据权利要求20所述的组成物，其特征在于，所述的疗效包含降低血糖水平。
22.根据权利要求18至21中任意一项所述的组成物，其特征在于，所述胆碱药用盐为氯化胆碱。
23.根据权利要求18至22中任意一项所述的组成物，其特征在于，所述琥珀酸药用盐为琥珀酸二钠。
24.根据权利要求18至23中任意一项所述的组成物，其特征在于，所述胆碱基或其药用盐的有效剂量为每千克哺乳动物体重每日3至300毫克。
25.根据权利要求18至24中任意一项所述的组成物，其特征在于，所述琥珀酸或其药用盐的有效剂量为每千克哺乳动物体重每日1至250毫克。
26.双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐。
27.双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐在医药上的用途。
28.根据权利要求27所述的用途，其特征在于，所述在医药上的用途是指制造一种治疗哺乳动物所患的胰岛素抵抗的药剂。
29.根据权利要求27所述的用途，其特征在于，所述在医药上的用途是指制造一种治疗哺乳动物所患的糖尿病的药剂。
30.根据权利要求27所述的用途，其特征在于，所述在医药上的用途是指制造一种治疗哺乳动物所患的高脂血症或者脂质异常血症的药剂。
31.一种生产双(2-羟基-N，N，N-三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐的方法，包含让胆碱基与琥珀酸进行反应。
32.根据权利要求31所述的方法，其特征在于，所述胆碱基与琥珀酸的摩尔比大约为为2∶1，但不低于1.9∶1，并且不高于2.1∶1。
全文摘要
本发明涉及在治疗哺乳动物的胰岛素抵抗和糖尿病过程中，起协同作用的组成物和方法。更确切地说，本发明涉及的起协同作用的组成物中，含有一定数量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)，这两种化学成分在充足的数量时，对治疗哺乳动物的胰岛素抵抗和糖尿病起协同作用。本发明还涉及对治疗哺乳动物的胰岛素抵抗和糖尿病起协同作用的方法，该方法包括逐步或同时使用一定剂量的胆碱基(或其药用盐)和琥珀酸(或其药用盐)。此外，本发明还提出了一种新的胆碱衍生物，准确地说是双(2－羟基－N，N，N－三甲基乙酰胆碱)琥珀酸盐，这种新的胆碱盐是由胆碱基和琥珀酸按照2∶1的摩尔比配制而成，可以在医药上使用，特别适用于配制治疗胰岛素抵抗、高脂血、血脂异常和糖尿病等病的药物。
文档编号A61K31/14GK1452482SQ00819413
公开日2003年10月29日 申请日期2000年4月10日 优先权日2000年4月10日
发明者帕密特金·伊戈尔·阿那托列维奇, 卡列索瓦·奥尔加·伊夫吉涅芙娜, 马卡诺娃·塔奇亚娜·裘列娜 申请人:维尔吉列斯基·巴维尔·瓦西列维奇, 帕密特金·伊戈尔·阿那托列维奇